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蓝舌病病毒vp7基因的表达及其产物在c-ELISA中的应用 被引量：2
1
作者 花群义 肖荣海 +4 位作者 徐自忠 杨云庆 董俊 杨晶焰 贾建军 《中国病毒学》 CSCD 2004年第3期237-241,共5页
获得稳定、高效的具有良好抗原性的蓝舌病毒(Bluetonguevirus,BTV)vp7基因重组抗原。将BTV编码群特异性抗原VP7的S7基因片段克隆至pMD18-T质粒载体中,构建S7克隆重组质粒,进行核苷酸序列分析。与已报道的多株BTV编码VP7的基因比较后发现... 获得稳定、高效的具有良好抗原性的蓝舌病毒(Bluetonguevirus,BTV)vp7基因重组抗原。将BTV编码群特异性抗原VP7的S7基因片段克隆至pMD18-T质粒载体中,构建S7克隆重组质粒,进行核苷酸序列分析。与已报道的多株BTV编码VP7的基因比较后发现,所测定毒株的核苷酸序列与BTV10型的S7基因同源性高达98.7%,推测的氨基酸同源性为99.3%,证实为BTV的S7基因。然后亚克隆插入pBAD/ThioTOPO表达载体,转化LGM194细胞,经抗性培养、PCR、限制性内切酶分析、测序鉴定,筛选获得BTVS7基因片段正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了BTV群特异性抗原VP7的重组表达载体。经L-araboinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP7蛋白抗原。SDS-PAGE、ELISA试验表明,表达蛋白为融合蛋白,具有反应原性,分子量约54.5kD,重组蛋白的获得率为1.52mg/g湿菌,其表达产量约占菌体总蛋白的12%左右,相当于93.5mg/L菌液。融合蛋白中含有BTVVP7特异性蛋白抗原,可作为c-ELISA包被抗原,为蓝舌病的免疫血清学诊断试剂的制备和分子生物学研究打下了坚实基础。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 VP7 克隆与表达 c-elisa
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2种小反刍兽疫病毒C-ELISA抗体检测试剂盒的比较分析 被引量：2
2
作者 段博芳 李锡慧 +7 位作者 肖荣海 艾军 赵胜兰 赵珍 相德才 杨子江 孙洪正 张文东 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第1期90-95,共6页
小反刍兽疫YN PPRV C-ELISA抗体检测试剂盒由云南省出入境检验检疫技术中心自主研发,采用这一试剂盒与法国IDVET研制的小反刍兽疫病毒C-ELISA抗体检测试剂盒,分别对田间牛羊的661份血清样本进行对比检测试验,并使用YNPPRV C-ELISA抗体... 小反刍兽疫YN PPRV C-ELISA抗体检测试剂盒由云南省出入境检验检疫技术中心自主研发,采用这一试剂盒与法国IDVET研制的小反刍兽疫病毒C-ELISA抗体检测试剂盒,分别对田间牛羊的661份血清样本进行对比检测试验,并使用YNPPRV C-ELISA抗体检测试剂盒对15份检出的已知背景血清进行批内和批间可重复性试验。结果显示自行研制试剂盒相对国际通用试剂盒ID VET PPRV C-ELISA的特异性、敏感性、符合率分别达到97.96%、97.82%和98.34%,两者一致性用Kappa值表示,Kappa=0.97。批内试验强阳性、弱阳性变异系数为0%～0.05%。结果表明,YN PPRV C-ELISA抗体检测试剂盒的敏感性、特异性、批内和批间重复性均较高,具有高度的可靠性,在小反刍兽疫的诊断检测中具有良好的实用价值。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 c-elisa抗体检测试剂盒 比较
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C-ELISA技术简介
3
作者 韩文瑜 《中国兽医科技》 CSCD 1990年第9期47-48,共2页
C-ELISA(Cloth-ELISA)是加拿大学者Blais,B.W.等1989年建立的一种新型免疫测定技术,可译为布-酶联免疫吸附试验。这种技术是以疏水性聚酯布(Hgdrophobic PolyesterCloth)即涤伦布为固相载体,这种大孔径的疏水布具有吸附样品量大,可为免... C-ELISA(Cloth-ELISA)是加拿大学者Blais,B.W.等1989年建立的一种新型免疫测定技术,可译为布-酶联免疫吸附试验。这种技术是以疏水性聚酯布(Hgdrophobic PolyesterCloth)即涤伦布为固相载体,这种大孔径的疏水布具有吸附样品量大,可为免疫反应提供较大的表面积,提高反应的敏感性,且容易洗涤,不需特殊仪器等优点,为免疫诊断提供了一种简单快速、成本低廉的检测方法。现以对布氏杆菌抗原的检测为例将其简介如下。 展开更多
关键词 c-elisa 免疫测定
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流行性出血病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立 被引量：15
4
作者 朱建波 杨振兴 +6 位作者 肖雷 高林 苗海生 何于雯 孟锦昕 杨恒 李华春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1440-1450,共11页
为能简便、快速地进行流行性出血病病毒(epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)抗体监测,采用纯化的6型EHDV抗原包被ELISA板,以豚鼠抗EHDV-2型多克隆抗体作为竞争抗体,建立了检测EHDV群特异性抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果... 为能简便、快速地进行流行性出血病病毒(epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)抗体监测,采用纯化的6型EHDV抗原包被ELISA板,以豚鼠抗EHDV-2型多克隆抗体作为竞争抗体,建立了检测EHDV群特异性抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果显示:抗原最佳包被浓度为5.12μg·mL-1(1∶10 000),竞争抗体最佳稀释倍数为1∶10 000;通过对各270份阴性和阳性的牛、羊血清检测,确定该检测方法临界值为50%;特异性试验表明该ELISA方法仅能检测出不同血清型EHDV抗体,具有较好的群特异性;对已知抗体效价的阳性血清检测表明,建立的C-ELISA方法敏感性好于血清中和试验(SNT)和琼脂扩散试验(AGID);分别用C-ELISA、SNT、RTPCR和病毒分离试验对监控动物采集的血清和抗凝血样品进行检测,ELISA结果与其他3种方法检测结果对应一致。结果表明本研究建立的C-ELISA为EHDV抗体的检测提供了一种快速、敏感、稳定的方法。 展开更多
关键词 流行性出血病病毒 多克隆抗体 竞争ELISA
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蓝舌病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立和比较研究 被引量：14
5
作者 苗海生 李乐 +2 位作者 廖德芳 杨永钦 李华春 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期58-62,共5页
为建立一种检测成本低、操作简便的蓝舌病血清抗体监测方法,本研究通过制备群特异性的蓝舌病多克隆检测抗体和优化抗原固定技术,建立了蓝舌病多克隆抗体C-ELISA检测方法。通过对150份牛羊已知阴性血清的检测确定该检测方法的cut-off值为... 为建立一种检测成本低、操作简便的蓝舌病血清抗体监测方法,本研究通过制备群特异性的蓝舌病多克隆检测抗体和优化抗原固定技术,建立了蓝舌病多克隆抗体C-ELISA检测方法。通过对150份牛羊已知阴性血清的检测确定该检测方法的cut-off值为40%;对58份已知阳性血清样品同时进行中和实验和C-ELISA检测,检测结果经SPSS软件进行t检测统计分析,Sig.(双侧)=0.651,相关性0.912,相关性显著。对24个BTV血清型阳性血清,2份牛BVD阳性血清,2份羊口蹄疫阳性血清,2份羊痘阳性血清进行检测。结果表明,24个BTV血清型阳性血清为阳性,其他血清全部为阴性。对150份已知阴性血清和55份已知阳性血清用中和试验、美国VMRD公司试剂盒和本方法分别进行检测。结果表明,本检测方法与中和试验检测结果符合率达100%,进口试剂盒符合率为96.7%。 展开更多
关键词 蓝舌病 多克隆抗体 blue-tongue-virus (BTV) competition ELISA (c-elisa)
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MAb-C-ELISA法检测绵羊布氏杆菌抗体
6
作者 朱其太 《畜牧兽医科技信息》 1997年第19期7-7,共1页
法国Debbarh等（1996）应用布氏杆菌BP26（一种胞质蛋白抗原）特异的15株单克隆抗体（MAb）竞争ELISA（C-ELISA）,对自然感染、马岛热布氏杆菌H<sub>38</sub>实验感染以及马岛热布氏杆菌Rev.1疫苗免疫的绵羊检测其抗体。结... 法国Debbarh等（1996）应用布氏杆菌BP26（一种胞质蛋白抗原）特异的15株单克隆抗体（MAb）竞争ELISA（C-ELISA）,对自然感染、马岛热布氏杆菌H<sub>38</sub>实验感染以及马岛热布氏杆菌Rev.1疫苗免疫的绵羊检测其抗体。结果血清学和细菌学阳性绵羊中有90％为C-ELISA阳性。 展开更多
关键词 布氏杆菌 c-elisa 绵羊 细菌学 单克隆抗体 竞争ELISA 血清学阴性 实验感染 疫苗免疫 过敏试验
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用C-ELISA检测鸸鹋的AIV抗体
7
作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 1999年第10期6-6,共1页
最近,加拿大的研究人员用竞争ELISA(C-ELISA)、琼脂凝胶免疫扩散(AGID)和血凝抑制(HI)试验测定了鸸鹋对AIV感染的抗体反应。3组鸸鹋每组4只分别用AIVH5N1、H5N3和H7N7感染,第4组2只鸵鸟用新城疫病毒(NDV)感染。感染后7天,用C-ELISA可以... 最近,加拿大的研究人员用竞争ELISA(C-ELISA)、琼脂凝胶免疫扩散(AGID)和血凝抑制(HI)试验测定了鸸鹋对AIV感染的抗体反应。3组鸸鹋每组4只分别用AIVH5N1、H5N3和H7N7感染,第4组2只鸵鸟用新城疫病毒(NDV)感染。感染后7天,用C-ELISA可以检出抗AIVH5N1、 展开更多
关键词 c-elisa 新城疫病毒 ELISA检测 鸸鹋 竞争ELISA 免疫扩散 琼脂凝胶 抗体反应 血凝抑制 血清学诊断
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牛C-反应蛋白夹心ELISA定量检测方法的建立与应用
8
作者 靳家鑫 杨蕊 +4 位作者 张泽 时文健 张广智 丁家波 鑫婷 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第6期764-769,共6页
制备针对牛C-反应蛋白(CRP)的单克隆抗体,建立牛CRP双抗体夹心ELISA定量检测方法,为牛细胞因子检测以及感染的快速诊断提供有力工具。利用原核表达系统和293F真核表达系统表达牛CRP,采用亲和层析纯化重组蛋白,免疫小鼠后利用淋巴细胞杂... 制备针对牛C-反应蛋白(CRP)的单克隆抗体,建立牛CRP双抗体夹心ELISA定量检测方法,为牛细胞因子检测以及感染的快速诊断提供有力工具。利用原核表达系统和293F真核表达系统表达牛CRP,采用亲和层析纯化重组蛋白,免疫小鼠后利用淋巴细胞杂交瘤技术制备并筛选针对牛CRP的单抗,以棋盘法筛选抗体对并建立夹心ELISA方法,以临床样品验证该方法的可行性。SDS-PAGE结果显示成功纯化到CRP,经3轮亚克隆成功获得5株针对牛CRP的单抗细胞株,其中3H4和2G4-HRP抗体对的检测效果最佳。临床样品检测显示结核菌感染早期的牛血清中CRP质量浓度显著高于健康牛,结果说明制备的牛CRP单抗对可以识别天然牛CRP。检测结核排菌期和非排菌期的牛血浆样品,发现排菌期的结核病牛CRP质量浓度显著高于非排菌期的结核病牛。结果表明,建立的牛CRP夹心ELISA检测方法可用于牛结核病的诊断,为分析牛免疫感染状态及诊断牛感染性疾病奠定了基础。 展开更多
关键词 C-反应蛋白 单克隆抗体 ELISA 牛结核病
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miR-223靶向PARP1促进滋养层细胞凋亡机制
9
作者 杜凤凤 田林 卞欣 《生物技术》 2025年第2期182-186,163,共6页
[目的]探讨miR-223靶向PARP1促进滋养层细胞凋亡的机制。[方法]体外培养HTR-8/Svneo细胞,对HTR-8/Svneo细胞进行转染及双荧光素酶检测。实验分为miR-NC组、miR-223组和miR-223抑制物组,采用RT-qPCR检测HTR-8/Svneo细胞中miR-223及PARP1 ... [目的]探讨miR-223靶向PARP1促进滋养层细胞凋亡的机制。[方法]体外培养HTR-8/Svneo细胞,对HTR-8/Svneo细胞进行转染及双荧光素酶检测。实验分为miR-NC组、miR-223组和miR-223抑制物组,采用RT-qPCR检测HTR-8/Svneo细胞中miR-223及PARP1 mRNA表达量,双荧光素酶报告基因检测miR-223与PARP1的靶基因关系,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞促凋亡蛋白PARP1、Bax、Cl-caspaes-3、Bcl-2蛋白表达水平。[结果]检索www.Targetscan.org发现miR-223对PARP1有潜在的结合位点,荧光素酶报告基因测定结果显示,miR-223直接与PARP1 3′-UTR结合,转染miR-223显著降低了HTR-8/SVneo细胞裂解液中荧光素酶的相对活性。用流式细胞术检测转染48 h后,miR-223组HTR-8/SVneo细胞凋亡率[(8.22±0.35)%vs(4.18±0.16)%、(1.23±0.17)%]显著高于miR-NC组、miR-223抑制物组(P<0.05)。miR-223组HTR-8/SVneo细胞中Bax[(2.95±0.18)vs(1.76±0.23)]、Cl-caspaes-3[(2.35±0.45)vs(1.71±0.18)]蛋白表达水平较miR-NC组增加(P<0.05),PARP1[(0.86±0.13)vs(1.85±0.33)]、Bcl-2[(1.26±0.17)vs(2.28±0.27)]蛋白表达水平较miR-NC组降低(P<0.05);与miR-223组相比,miR-223抑制物组HTR-8/SVneo细胞中PARP1、Bcl-2表达上调,Bax、Cl-caspaes-3蛋白表达水平降低(P<0.05)。[结论]miR-223通过PARP1调控滋养层细胞凋亡,最终引发复发性流产,miR-223可作为RSA的一种潜在诊断标志物和治疗靶点。 展开更多
关键词 miR-223 靶向作用 PARP1 滋养层 自然流产 细胞凋亡 作用机制 治疗靶点
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人源丙型肝炎病毒单克隆抗体制备及应用
10
作者 江梦艺 赵枭阳 +8 位作者 刘嘉臻 李笑颜 董艳娜 李婷 徐延伟 刘雅琳 孙静静 王玉涛 赵巧辉 《生物技术》 2025年第2期159-163,共5页
[目的]旨在筛选并制备出体外诊断试剂用人源丙型肝炎病毒(HCV)特异性单克隆抗体。[方法]从感染丙型肝炎病毒的患者全血中提取总RNA,构建噬菌体文库;通过噬菌体展示技术筛选抗HCV核心抗原抗体,阳性克隆经测序后构建全人源抗体,最后对人源... [目的]旨在筛选并制备出体外诊断试剂用人源丙型肝炎病毒(HCV)特异性单克隆抗体。[方法]从感染丙型肝炎病毒的患者全血中提取总RNA,构建噬菌体文库;通过噬菌体展示技术筛选抗HCV核心抗原抗体,阳性克隆经测序后构建全人源抗体,最后对人源HCV单克隆抗体进行纯化制备及双抗体夹心法检测性能评估。[结果]通过噬菌体展示技术成功筛选出4株针对HCV核心抗原的单克隆抗体;其中优选45#、91#抗体配对检测50份阴性血清样本和50份阳性血清样本,检测灵敏度为96%,特异性为98%。[结论]通过噬菌体展示技术成功获得4株人源丙型肝炎病毒单克隆抗体,在HCV抗原的检测中具有应用的潜力,为丙肝抗原诊断试剂盒原材料的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 单克隆抗体 噬菌体展示 抗体库 多肽表位 酶联免疫吸附试验 灵敏度 特异性
原文传递
荧光素酶免疫吸附法高灵敏检测蓝舌病病毒抗体方法的建立
11
作者 张鸿歌 田占成 +6 位作者 独军政 王琼洁 康棣 户鑫兵 张忠辉 关贵全 殷宏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期881-887,共7页
为了建立一种高效检测动物血清中蓝舌病病毒(BTV)抗体的检测方法,以BTV血清群特异性VP7抗原与荧光素酶蛋白相融合表达的标记蛋白(VP7-NLuc)为检测抗原建立了荧光素酶免疫吸附(VP7-NLuc-LISA)方法,用于检测BTV抗体。结果表明:BTV阳性血... 为了建立一种高效检测动物血清中蓝舌病病毒(BTV)抗体的检测方法,以BTV血清群特异性VP7抗原与荧光素酶蛋白相融合表达的标记蛋白(VP7-NLuc)为检测抗原建立了荧光素酶免疫吸附(VP7-NLuc-LISA)方法,用于检测BTV抗体。结果表明:BTV阳性血清能特异性识别VP7-NLuc融合蛋白;监测BTV-1灭活疫苗免疫绵羊血清中BTV抗体动态结果表明,VP7-NLucLISA方法与商品化竞争性ELISA(c-ELISA)试剂盒的检测结果呈高度相关性(R=0.76,P<0.001);对264份田间血清样本的调查结果表明,建立的VP7-NLuc LISA方法与商品化c-ELISA试剂盒的符合率为98.86%,其相对特异性为99.52%,相对敏感性为96.49%。结论:所建立的VP7-NLuc-LISA方法可作为大规模动物BTV流行病学调查和监测的新方法。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 VP7蛋白 荧光素酶免疫吸附试验 c-elisa 血清学检测
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2018-2022年我国18家省级血液中心献血者HCV检测结果分析
12
作者 李雨薇 黄霞 +17 位作者 周源 刘颖 王林 邹彬彬 刘胡敏 马海莉 许婷婷 唐飞 曹铭静 侯玲华 李玉军 胡文佳 冯惟萍 刘妍妍 段勇 温涛 李明霞 邱艳 《临床输血与检验》 CAS 2024年第5期638-645,共8页
目的分析我国省级血液中心服务区域献血人群丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)检测数据。方法对我国东中西部不同地区的18家省级血液中心,2018—2022年初次献血和重复献血者抗-HCV和HCV RNA检测数据收集整理,分析献血者中抗-HCV ELIS... 目的分析我国省级血液中心服务区域献血人群丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)检测数据。方法对我国东中西部不同地区的18家省级血液中心,2018—2022年初次献血和重复献血者抗-HCV和HCV RNA检测数据收集整理,分析献血者中抗-HCV ELISA和抗-HCV ELISA阴性中HCV RNA检测不合格率与年度、血液中心以及初次献血和重复献血者之间的关系。结果2018年—2022年HCV总不合格率从24.61/万逐年减少至15.17/万(χ^(2)=717.71,P<0.01),西部地区为25.72/万最高,东部11.96/万最低(χ^(2)=2382.54,P<0.01);初次献血者抗-HCV ELISA不合格率(30.50/万)比重复献血者(7.42/万)高(χ^(2)=9694.63,P<0.01);各血液中心抗-HCV ELISA阴性中HCV-RNA单独不合格率范围为0~7.54/万。结论我国18家血液中心服务区域献血者的HCV检测不合格率呈逐年降低趋势;HCV检测不合格率存在明显的地域分布差异;与初次献血者相比,重复献血者为HCV检测不合格低危人群;HCV-RNA检测在血液安全方面发挥重要作用。 展开更多
关键词 献血者 丙型肝炎病毒 不合格率 抗-HCV ELISA HCV RNA检测
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抗水禽呼肠孤病毒σC蛋白抗体间接ELISA方法的建立及鹅群血清学调查 被引量：1
13
作者 陈稼龙 何莉 +3 位作者 郑炜鸿 朱婉君 张济培 陈济铛 《广东畜牧兽医科技》 2024年第6期8-15,共8页
为提供水禽呼肠孤病毒病早期诊断的精准快速检测方法,该试验通过BL21(DE3)原核表达系统稳定表达水禽呼肠孤病毒σC蛋白,并将纯化的重组σC蛋白包被ELISA酶标板,经进一步反应条件优化。结果显示,该试验建立的ELISA检测方法最优反应条件是... 为提供水禽呼肠孤病毒病早期诊断的精准快速检测方法,该试验通过BL21(DE3)原核表达系统稳定表达水禽呼肠孤病毒σC蛋白,并将纯化的重组σC蛋白包被ELISA酶标板,经进一步反应条件优化。结果显示,该试验建立的ELISA检测方法最优反应条件是:抗原包被含量为1μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶50,孵育时间为45 min,酶标二抗最佳稀释度为1∶500,孵育时间为30 min,最佳底物显色时间为20 min,OD_(450)值≥0.3判定为阳性。该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,对水禽呼肠孤病毒基因Ⅰ型和基因Ⅱ型血清具有一定的交叉反应。对105份临床健康鹅群血清样品进行检测,阳性率高达77.33%。该研究提供了一种敏感高效的快速检测水禽呼肠孤病毒中和抗体的方法,为鹅群临床血清大规模检测提供方法,为研发商品化的ELISA检测试剂盒提供基础。 展开更多
关键词 水禽呼肠孤病毒 σC蛋白 间接ELISA方法 血清学调查
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竞争酶联免疫吸附试验检测蓝舌病抗体的研究 被引量：5
14
作者 花群义 徐自忠 +1 位作者 周晓黎 董俊 《动物医学进展》 CSCD 2002年第2期66-69,共4页
用已研制的 BTV-1 1型 VP7单克隆抗体建立了竞争酶联免疫吸附试验 ( C-ELISA)检测蓝舌病抗体的方法 ,并与琼脂免疫扩散试验( AGID)进行了检测比较 ,C-ELISA特异性强 ,不与相关环状病毒发生交叉反应 ,敏感性比AGID高。用研究制备的 C-EL... 用已研制的 BTV-1 1型 VP7单克隆抗体建立了竞争酶联免疫吸附试验 ( C-ELISA)检测蓝舌病抗体的方法 ,并与琼脂免疫扩散试验( AGID)进行了检测比较 ,C-ELISA特异性强 ,不与相关环状病毒发生交叉反应 ,敏感性比AGID高。用研究制备的 C-ELISA诊断试剂盒和美国、澳大利亚制备的诊断试剂盒对 1 3 77份临床样品的检测 ,以及对实验动物人工感染后抗体动态检测。三种诊断试剂盒检测结果一致 ,且重复性好。本研究建立的蓝舌病 C-EL ISA是一种特异性强、敏感性高的蓝舌病抗体检测方法。 展开更多
关键词 c-elisa 免疫检测 蓝舌病抗体
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山西省羊蓝舌病防控技术的研究应用 被引量：4
15
作者 许建民 赵德明 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2005年第4期28-30,共3页
利用分离鉴定的I型蓝舌病 (BIV、I型 )地方毒株和16型毒株研制弱毒疫苗 ,对重点地区实行免疫接种 ,并用c -ELISA进行免疫监测表明 ,抗体阳性率高达70.1 %。适时提出抓种畜检疫 ,净化 ,限制疫点畜群流动 ,大力开展产地检疫 ,搞好季节灭... 利用分离鉴定的I型蓝舌病 (BIV、I型 )地方毒株和16型毒株研制弱毒疫苗 ,对重点地区实行免疫接种 ,并用c -ELISA进行免疫监测表明 ,抗体阳性率高达70.1 %。适时提出抓种畜检疫 ,净化 ,限制疫点畜群流动 ,大力开展产地检疫 ,搞好季节灭蠓 ,加强环境消毒 ,布点放置哨兵羊等 ,建立起一整套动物蓝舌病综合防控技术体系 ,为控制动物蓝舌病奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝舌病 防控技术 c-elisa 环境消毒 研究应用 动物 种畜 抗体阳性率 重点地区 放置
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布鲁菌病血清学检测方法的比较 被引量：8
16
作者 李慧 范伟兴 关平原 《畜牧与饲料科学》 2012年第3期21-22,25,共3页
[目的]比较4种布鲁菌病的血清学检测方法。[方法]分别用虎红平板凝集试验(RBT)、间接酶联免疫吸附试验(i-ELISA)、竞争酶联免疫吸附试验(c-ELISA)、试管凝集试验(SAT)4种方法检测876份奶牛血清。[结果]RBT、i-ELISA、SAT、c-ELISA检出... [目的]比较4种布鲁菌病的血清学检测方法。[方法]分别用虎红平板凝集试验(RBT)、间接酶联免疫吸附试验(i-ELISA)、竞争酶联免疫吸附试验(c-ELISA)、试管凝集试验(SAT)4种方法检测876份奶牛血清。[结果]RBT、i-ELISA、SAT、c-ELISA检出的阳性血清分别为543份、501份、460份、500份,阳性率分别是61.99%、57.19%、52.51%、57.08%。 展开更多
关键词 布鲁菌病 RBT i-ELISA SAT c-elisa
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牛奶中孕酮直接竞争ELISA检测方法的建立 被引量：1
17
作者 高维明 张洪友 +2 位作者 夏成 李徐延 徐闯 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第8期12-14,共3页
采用直接竞争ELISA方法检测牛奶中孕酮含量。采用碳化二亚胺法，应用辣根过氧化物酶（HRP）标记11-α羟基孕酮琥珀酸酯（11α—OH—P4-HS），制备孕酮酶标抗原；酶标抗原与牛奶样品中的孕酮共同竞争结合固相包被的孕酮单克隆抗体，建立... 采用直接竞争ELISA方法检测牛奶中孕酮含量。采用碳化二亚胺法，应用辣根过氧化物酶（HRP）标记11-α羟基孕酮琥珀酸酯（11α—OH—P4-HS），制备孕酮酶标抗原；酶标抗原与牛奶样品中的孕酮共同竞争结合固相包被的孕酮单克隆抗体，建立直接竞争ELISA反应体系。试验结果表明，最佳抗体包被浓度为1：2000，最佳酶标抗原工作浓度为1：16000，建立的标准曲线为y=-2．4598x＋0．999（R^2=0．996），牛奶中孕酮检测范围0．12-40ng／mL，最低检测量为0．12ng／mL，批内和批间变异系数分别为1．63％和2．49％。成功建立了可用于牛乳中孕酮快速检测的直接竞争ELISA方法。 展开更多
关键词 孕酮 酶标抗原 c-elisa
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蓝舌病病毒人工感染绵羊抗体的监测及分型血清的制备
18
作者 信爱国 向文彬 +2 位作者 张富强 王金萍 邹福中 《云南畜牧兽医》 2001年第4期1-2,共2页
用由南非蓝舌病国际研究中心引进的8个不同血清型蓝舌病标准病毒,经vero细胞复壮三代,离心纯化,测定毒价后作为免疫原。取16只健康绵羊,分成8组,每组2只,采用这8种不同血清型的细胞毒分别按静脉3ml/只、肘后皮下2ml/只多点注射,5天后按3... 用由南非蓝舌病国际研究中心引进的8个不同血清型蓝舌病标准病毒,经vero细胞复壮三代,离心纯化,测定毒价后作为免疫原。取16只健康绵羊,分成8组,每组2只,采用这8种不同血清型的细胞毒分别按静脉3ml/只、肘后皮下2ml/只多点注射,5天后按3ml/只自血移植的免疫程序人工感染。采用竞争性酶联免疫吸附试验(C-ELISA)监测感染绵羊的抗体产生水平,制备标准分型血清。监测结果表明,初免后28天,除BTV-19呈弱阳性外,其余7型均呈强阳性,且抗体产生总体呈上升趋势。在此基础上制备出抗BTV的分型血清。 展开更多
关键词 蓝舌病 c-elisa 抗体监测 分型血清 制备 人工感染绵羊
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应用单抗竞争ELISA快速检测肠炎沙门氏菌 被引量：2
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作者 张艳红 杜元钊 +2 位作者 吴延功 黄素珍 彭丽英 《动物医学进展》 CSCD 2001年第4期48-50,共3页
本研究应用抗肠炎沙门氏菌 O9抗原的酶标单抗 3- 4 7- 2 6和肠炎沙门氏菌脂多糖( LPS)建立了快速检测肠炎沙门氏菌的竞争ELISA方法 ,该法通过样品中的肠炎沙门氏菌 L PS与微量板包被的肠炎沙门氏菌 LPS竞争结合酶标抗体 ,以检测样品中... 本研究应用抗肠炎沙门氏菌 O9抗原的酶标单抗 3- 4 7- 2 6和肠炎沙门氏菌脂多糖( LPS)建立了快速检测肠炎沙门氏菌的竞争ELISA方法 ,该法通过样品中的肠炎沙门氏菌 L PS与微量板包被的肠炎沙门氏菌 LPS竞争结合酶标抗体 ,以检测样品中的肠炎沙门氏菌。通过与国标法对样品的比较检测结果表明 ,该法可检测出每克粪便中 5×1 0 4 CFU的肠炎沙门氏菌 ,国标法可检出 4.9× 1 0 1 CFU/g粪便。竞争 EL ISA( C- ELISA)方法的敏感性和特异性分别为 94.4%和 97.7%。 展开更多
关键词 c-elisa 肠炎沙门氏菌 检测 鸡
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蓝舌病病毒NS2蛋白单克隆抗体的制备及其应用 被引量：2
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作者 李占鸿 段莹亮 李乐 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期330-337,共8页
本研究旨在制备针对蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)非结构蛋白NS2的单克隆抗体,进而用于C-ELISA鉴别BTV自然感染动物与BTV灭活疫苗免疫动物。通过原核表达BTV NS2蛋白的高保守多肽(1~228 aa)来制备抗原,并通过免疫BALB/c小鼠制备抗BT... 本研究旨在制备针对蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)非结构蛋白NS2的单克隆抗体,进而用于C-ELISA鉴别BTV自然感染动物与BTV灭活疫苗免疫动物。通过原核表达BTV NS2蛋白的高保守多肽(1~228 aa)来制备抗原,并通过免疫BALB/c小鼠制备抗BTV NS2蛋白的单克隆抗体,结果,获得1株分泌单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞,命名为BTV-2A4。鉴定结果显示,该单克隆抗体的亚类/亚型为IgG1/κ;其抗原表位在NS2蛋白的91~138 aa区间;能特异性地与1~24型BTV的NS2蛋白反应;可应用于Western-blot、间接免疫荧光、间接ELISA及C-ELISA技术。C-ELISA应用的试验数据表明,BTV疫苗免疫动物及未被BTV感染动物的血清中检测不到NS2抗体,而BTV感染动物的血清中大多可被检出NS2抗体。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 NS2 原核表达 单克隆抗体 c-elisa
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