2011年龙岩市流行株柯萨奇病毒A组16型VPl基因特征分析 被引量：5

1

作者 廖亦红 陈前进 +4 位作者 曹春远 何云 张彦锋 李美华 郭贞钻 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第4期327-330,共4页

目的分析2011年龙岩市流行的柯萨奇病毒A组16（CVA16）分离株的分子生物学特征。方法对从龙岩市2011年散发的手足口病（HFMD）患者标本中分离CVA16病毒,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增VPl基因片段全长,并对扩增产物测序。根据VP... 目的分析2011年龙岩市流行的柯萨奇病毒A组16（CVA16）分离株的分子生物学特征。方法对从龙岩市2011年散发的手足口病（HFMD）患者标本中分离CVA16病毒,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增VPl基因片段全长,并对扩增产物测序。根据VPl基因核苷酸序列与国内外其他CVA16毒株序列构建进化树,并进行核苷酸和氨基酸同源性分析。结果 4株龙岩分离株CVA16核苷酸同源性为99%~100%。比较推导的氨基酸序列,VP1不存在位点差异,氨基酸序列完全相同。对分离株病毒进行VP1核苷酸序列两两差异分析,与国内其他分离株VP1基因序列的一致性为87%~100%。确定4株CVA16病毒均属于B1b基因型。结论引起2011年龙岩市HFMD流行的CVA16病毒均为B1b基因型,与目前国内其他地区流行毒株高度同源。 展开更多

关键词 手足口病 柯萨奇病毒A组16型 vpl基因 种系分析

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猪水泡病病毒VP1基因抗原区的原核表达 被引量：3

2

作者 张永国 刘湘涛 +2 位作者 韩雪清 张彦明 谢庆阁 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期342-346,共5页

利用RT PCR和nestedPCR(nPCR)技术扩增出猪水泡病病毒VP1基因的抗原区 ,将其克隆到表达载体pProEX HTb中 ,获得重组质粒 ,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明 ,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确。将重组质粒导入BL2 1 (DE3) ,经IPTG... 利用RT PCR和nestedPCR(nPCR)技术扩增出猪水泡病病毒VP1基因的抗原区 ,将其克隆到表达载体pProEX HTb中 ,获得重组质粒 ,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明 ,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确。将重组质粒导入BL2 1 (DE3) ,经IPTG诱导表达后SDS PAGE检测表明 ,重组菌能表达猪水泡病病毒VP1抗原区蛋白 ;Westernblot检测表明 ,诱导表达的抗原区蛋白能与猪水泡病阳性血清发生特异性反应。 展开更多

关键词 猪 水泡病病毒 vpl基因 抗原区 原核表达

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IL-15基因真核表达质粒的构建及其对CVB3 VP1基因疫苗的免疫增强作用 被引量：4

3

作者 房文亮 王永祥 +2 位作者 金玉怀 金士香 周雪燕 《河北医科大学学报》 CAS 2003年第3期129-132,共4页

目的探讨人白细胞介素 15 (humaninterleukin 15 ,hIL 15 )基因佐剂对柯萨奇B3病毒 (CoxsackievirusB3 ,CVB3 )VP1基因疫苗的免疫增强效果。方法从人胚肺二倍体细胞提取hIL 15的mRNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (reversetranscriptase pol... 目的探讨人白细胞介素 15 (humaninterleukin 15 ,hIL 15 )基因佐剂对柯萨奇B3病毒 (CoxsackievirusB3 ,CVB3 )VP1基因疫苗的免疫增强效果。方法从人胚肺二倍体细胞提取hIL 15的mRNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (reversetranscriptase polymerasechainreaction ,RT PCR)扩增出cDNA ,构建成真核表达克隆 pcDNA3 IL 15。将pcDNA3 VP1、pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15、pcDNA3 IL 15、pcDNA3和盐水分别肌内注射Balb/c小鼠 ,每次免疫后 6天取血清用微量中和试验测CVB3中和抗体 ,3次免疫后用 80 0TCID5 0CVB3感染小鼠 ,观察小鼠的生存率。结果 pcDNA3 IL 15重组质粒的目的基因与hIL 15基因序列相同 ;pcDNA3 VP1和pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15能诱导小鼠产生中和抗体 ,抗体滴度随免疫次数增加而提高 ;pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15组抗体滴度和生存率均高于 pcDNA3 VP1组。结论本研究成功构建了hIL 15重组质粒 ,该质粒对真核表达重组质粒 pcDNA3 展开更多

关键词 IL-15基因 真核表达 质粒 构建 CVB3vpl基因 1基因疫苗 免疫增强效果 柯萨奇病毒B组

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猫细小病毒CC-1株VP1基因克隆与序列分析 被引量：3

4

作者 李爽 袁宝 +4 位作者 肖书奇 任文陟 张嘉保 赵志辉 雍海平 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第8期40-43,共4页

根据GenBank登录的猫细小病毒(CU-4)VP1基因序列,设计了1对引物,用PCR技术对VP1基因进行整体扩增,将扩增产物纯化后克隆入PGM-T载体,通过酶切、PCR和测序进行验证。结果表明,测序拼接得出VP1基因的序列长度约为2306 bp,该基因的ORF总长... 根据GenBank登录的猫细小病毒(CU-4)VP1基因序列,设计了1对引物,用PCR技术对VP1基因进行整体扩增,将扩增产物纯化后克隆入PGM-T载体,通过酶切、PCR和测序进行验证。结果表明,测序拼接得出VP1基因的序列长度约为2306 bp,该基因的ORF总长为2184 bp,编码727个氨基酸,应用DNAStar软件把所测得的序列与国内外代表性毒株的VP1基因编码区全长核苷酸序列和氨基酸序列进行比对分析,发现CC-1株与国内XJ-1株的核苷酸和氨基酸同源性均为99.3%。 展开更多

关键词 猫细小病毒 vpl基因 序列分析

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羊O／P液中AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因3′端序列的分析 被引量：1

5

作者 王建东 卢曾军 +6 位作者 包慧芳 曹轶梅 郭建宏 刘湘涛 何生虎 杨春生 刘在新 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期559-562,共4页

从宁夏中卫AsiaⅠ型口蹄疫疫区的无临床症状羊采集的食道咽部分泌液（OPF）中扩增得到了4个口蹄疫病毒（FMDV）VP1基因3′-端483bp（VP483）片段。核苷酸和氨基酸序列比较结果表明，从4份OPF中扩增出的VP1片段，在细胞受体结合位点处的... 从宁夏中卫AsiaⅠ型口蹄疫疫区的无临床症状羊采集的食道咽部分泌液（OPF）中扩增得到了4个口蹄疫病毒（FMDV）VP1基因3′-端483bp（VP483）片段。核苷酸和氨基酸序列比较结果表明，从4份OPF中扩增出的VP1片段，在细胞受体结合位点处的关键氨基酸与目前公布的FMDVAsiaⅠ型流行毒相比均发生了改变，由RGD变成RDD。4个扩增片段的核苷酸序列与AsiaⅠ／js／WX／05株相比，同源性为96．2％～98、3％，表明与AsiaI／JS／WX／05株高度同源。蛋白结构模拟结果显示，这种改变会导致G—H环柔性减弱，这可能是AsiaⅠ／JS／WX／05FMDV适应羊体，造成持续感染后发生的一种变异。 展开更多

关键词 AsiaⅠ型口蹄疫病毒 羊O/P液 vpl基因 序列分析

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6株O型口蹄疫病毒结构蛋白vp1基因的克隆与序列分析 被引量：1

6

作者 葛淑敏 金宁一 +3 位作者 尹革芬 郑敏 王振国 马鸣潇 《中国病毒学》 CSCD 2004年第3期264-267,共4页

提取6株O型口蹄疫病毒(FMDV)(T1-T6)的RNA,用一对通用引物经RT-PCR方法将6株FMDVVP1基因片段扩增出来。克隆测序,核苷酸序列分析表明,T1-T6六株vp1基因的核苷酸序列同源性在95%～99.8%之间,氨基酸序列同源性在94.8%～100%之间。T1-T6六... 提取6株O型口蹄疫病毒(FMDV)(T1-T6)的RNA,用一对通用引物经RT-PCR方法将6株FMDVVP1基因片段扩增出来。克隆测序,核苷酸序列分析表明,T1-T6六株vp1基因的核苷酸序列同源性在95%～99.8%之间,氨基酸序列同源性在94.8%～100%之间。T1-T6六株病毒vp1基因的核苷酸序列与已经发表的O/HKN/14/82、O/TAW/81/97、O/PHI/7/96、O/HKN/1/99和O/HKN/16/96的同源性较高,核苷酸序列同源性在86.1%～95.8%之间;发现6株毒株的主要中和抗原表位140-160、200-213位的氨基酸序列完全相同,推测它们有相近的中和抗体表位和抗原性。故推断本试验中的6株FMDV株属于同一基因型,即FMDVO型中国拓朴型(Cathaytopotype)。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 vpl基因 克隆 序列分析

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对虾白斑综合征病毒VP19基因的克隆和序列分析 被引量：4

7

作者 许雅香 许梓荣 +1 位作者 杜华华 沈卫德 《科技通报》 北大核心 2003年第6期473-476,共4页

以东海宁波海区收集的甲壳内侧出现白斑为特征的发病中国对虾为材料,从中分离出一株病毒(ZJ2001),经电镜和动物试验鉴定为对虾白斑综合征病毒;用煮沸法一步获得病毒基因组DNA,以此基因组为模板,利用PCR技术,扩增病毒囊膜蛋白VP19的基因... 以东海宁波海区收集的甲壳内侧出现白斑为特征的发病中国对虾为材料,从中分离出一株病毒(ZJ2001),经电镜和动物试验鉴定为对虾白斑综合征病毒;用煮沸法一步获得病毒基因组DNA,以此基因组为模板,利用PCR技术,扩增病毒囊膜蛋白VP19的基因,将扩增得到的基因克隆并测序.用DNATools软件对测得的序列分析表明:VP19基因序列与GeneBank中的比较(AF309029),其核苷酸同源性为99%,氨基酸同源性为98%. 展开更多

关键词 水产保护学 白斑综合征病毒 纯化 vpl9基因 克隆 序列分析

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牛轮状病毒的分离及其RT-PCR鉴定 被引量：7

8

作者 姜向阳 邓小敏 +2 位作者 王晶钰 王学艳 罗艳 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期191-194,共4页

采用MA104细胞从疑似轮状病毒腹泻犊牛粪样中进行轮状病毒分离,盲传4代后接种细胞出现明显细胞病变(CPE),对分离病毒进行核酸聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳条带为4∶2∶3∶2型,具备典型A群轮状病毒特征。依据NCBI等登录的牛轮状病毒的VP1基... 采用MA104细胞从疑似轮状病毒腹泻犊牛粪样中进行轮状病毒分离,盲传4代后接种细胞出现明显细胞病变(CPE),对分离病毒进行核酸聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳条带为4∶2∶3∶2型,具备典型A群轮状病毒特征。依据NCBI等登录的牛轮状病毒的VP1基因序列设计一对引物,对其VP1基因进行克隆及序列分析,结果分离毒与国外牛轮状病毒分离株RF的核苷酸同源性为98.9%,与UK的核苷酸同源性为91.5%,证明分离毒株是一株牛轮状病毒。 展开更多

关键词 轮状病毒 细胞培养 vpl基因 MAl04细胞

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CVB3病毒VP1基因及其真核表达质粒的原子力显微镜图象

9

作者 赵铁强 唐伟 +4 位作者 鲍英华 国立秋 赵清亮 张飞虎 董申 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期387-387,共1页

原子力显微镜(AFM)是一种具有原子级分辨率的超微结构研究工具.与传统的X射线衍射、电镜等方法相比,它具有分辨率高、制样简单、可在接近生理条件下成像等优点.本研究拟用AFM观察柯萨奇B3病毒(CVB3)VP1基因及其真核表达质粒,探讨AFM在... 原子力显微镜(AFM)是一种具有原子级分辨率的超微结构研究工具.与传统的X射线衍射、电镜等方法相比,它具有分辨率高、制样简单、可在接近生理条件下成像等优点.本研究拟用AFM观察柯萨奇B3病毒(CVB3)VP1基因及其真核表达质粒,探讨AFM在观察线性和质粒DNA中的应用. 展开更多

关键词 CVB3病毒 vpl基因 原子力显微镜 真核表达质粒 云母片

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2017年北京市东城区EV-A71和CV-A16分离株VP1基因序列特征分析 被引量：1

10

作者 王联君 李艳宇 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期505-509,共5页

目的通过分析北京市东城区2017年手足口疑似病例样本中肠道病毒A组71（enterovirus71，EV-A71）和柯萨奇病毒A组16型（coxsackievrius A16，CV—A16）毒株VP1基因序列特征，为手足口病的防治提供基础资料。方法利用RT-PCR法对分离得到... 目的通过分析北京市东城区2017年手足口疑似病例样本中肠道病毒A组71（enterovirus71，EV-A71）和柯萨奇病毒A组16型（coxsackievrius A16，CV—A16）毒株VP1基因序列特征，为手足口病的防治提供基础资料。方法利用RT-PCR法对分离得到的EV—A71和CV—A16VP1序列进行扩增和测序，利用DNAstar5．0和MEGA6．0软件对EV-A71和CV—A16的VP1序列进行比对分析并构建系统发育树。结果2017年东城区共检测手足口疑似病例咽拭子95份，肠道病毒阳性46份（占48．42％）；其中EV—A71阳性4份（占4．21％），CV—A16阳性4份（占4．21％），非EV-A71非CV-A16的其他肠道病毒阳性38份（占40．00％）。4株EV-A71分离株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为92．89％-99．15％和97．32％～98．66％；3株CV—A16分离株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93．90％～98．76％和98．32％～100．00％。系统进化树显示4株EV—A71属于C4a基因亚型，3株CV—A16属于B1b基因亚型。结论北京市东城区2017年引起手足口病的病原主要以非EV—A71非CV—A16的其他肠道病毒为主，但是EV—A71和CV—A16仍占一定比例。EV—A71毒株属于C4a基因亚型；CV-A16毒株属于B1b基因亚型；与近年来中国大部分地区毒株的基因分型一致；没有检测到新亚型。 展开更多

关键词 ENTEROVIRUS 71 Coxsackievrius A16 vpl基因 进化分析

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2015年青岛地区手足口病主要病原谱及基因特征分析 被引量：5

11

作者 张凤 史晓燕 +4 位作者 苏志磊 宫金伶 柴青 曲剑英 汪照国 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期903-909,共7页

目的阐明2015年青岛地区手足口病（HFMD）流行特征和病原谱变化及3种主要肠道病毒分离株的基因特征。方法描述性分析2015年青岛地区手足口病病例的年龄、月份分布情况。用荧光RT-PCR法对2015年青岛地区HFMD患者咽拭子标本进行肠道病毒... 目的阐明2015年青岛地区手足口病（HFMD）流行特征和病原谱变化及3种主要肠道病毒分离株的基因特征。方法描述性分析2015年青岛地区手足口病病例的年龄、月份分布情况。用荧光RT-PCR法对2015年青岛地区HFMD患者咽拭子标本进行肠道病毒通用、肠道病毒71型、柯萨奇病毒A16型和柯萨奇病毒A6型，对阳性分离株进行VPl基因全长序列扩增及基因序列测定．以MEGA7．0软件进行系统发育及分子特征分析。结果2015年共检测1176例手足口病病例，其中肠道病毒阳性率为68．4％，主要病原构成为CA6（41．4％）、EV71（31．6％）和CAl6（15．3％）。5岁及以下儿童占总病例数的80．3％。CA6占3岁以下儿童肠道病毒构成的48．9％。其中EV71流行亚型为C4a，CAl6优势流行亚型为Blb。CA6优势流行亚型为A基因组。结论CA6、EV71和CAl6是导致2015年青岛地区手足口病流行的3种主要病原。2015年CA6超过EV71成为第一致病原，主要感染3岁以下儿童。EV71的流行亚型不变。CAl6优势流行亚型为Blb。CA6优势分离株主要是A基因组。并且内部进化为多个小的分支，与A基因组内部的2013年青岛分离株处于不同分支。 展开更多

关键词 手足口病 肠道病毒 系统进化分析 vpl基因

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肠道病毒71疫苗候选株H3-TY的遗传稳定性研究 被引量：2

12

作者 唐彩华 周康凤 +3 位作者 高丽美 朱莲 毛子旭 毛江森 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2011年第4期219-222,共4页

目的了解肠道病毒71（E、，71）疫苗候选株H3-TY的遗传稳定性。方法选取EV71疫苗候选株H3-TY种子库中的6个子代病毒，提取RNA，对其VPl基因进行RT-PCR扩增、克隆、序列测定，然后对所获基因序列进行同源性分析并计算同源率。结果H3．TY... 目的了解肠道病毒71（E、，71）疫苗候选株H3-TY的遗传稳定性。方法选取EV71疫苗候选株H3-TY种子库中的6个子代病毒，提取RNA，对其VPl基因进行RT-PCR扩增、克隆、序列测定，然后对所获基因序列进行同源性分析并计算同源率。结果H3．TY的6个子代病毒VPl基因之间核苷酸同源性介于99．6％～99．8％，氨基酸同源性为100．0％，主要抗原决定簇的氨基酸序列完全一致。结论H3．rIIY种子库中6代病毒的VP1基因之间高度同源，主要抗原决定簇稳定遗传。 展开更多

关键词 疫苗 肠道病毒7l型 vpl基因 遗传稳定性

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