期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到208篇文章
< 1 2 … 11 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
流行性出血病病毒VP7蛋白的表达及其单克隆抗体制备
1
作者 钟匀汝 张雨 +8 位作者 宋昱庆 户鑫兵 田占成 关贵全 罗建勋 艾军 何俊峰 殷宏 独军政 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第8期1050-1056,共7页
流行性出血病是由流行性出血病病毒(EHDV)经库蠓叮咬传播感染牛、羊、鹿等反刍动物的非接触性传染病,EHDV VP7蛋白是该病诊断的靶标蛋白。本研究参照GenBank中已发表的基因序列经密码子优化后人工合成EHDV VP7基因,将该基因克隆至表达质... 流行性出血病是由流行性出血病病毒(EHDV)经库蠓叮咬传播感染牛、羊、鹿等反刍动物的非接触性传染病,EHDV VP7蛋白是该病诊断的靶标蛋白。本研究参照GenBank中已发表的基因序列经密码子优化后人工合成EHDV VP7基因,将该基因克隆至表达质粒pET-28a,构建重组质粒pET-EHDV VP7,将其转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达且优化表达条件,通过Ni-NTA亲和层析法对表达的VP7蛋白进行纯化并用不同浓度咪唑透析复性,用复性后的VP7蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备抗VP7蛋白单克隆抗体。通过间接酶联免疫吸附试验、免疫印迹和细胞免疫荧光试验验证单克隆抗体的特异性。结果显示,利用大肠杆菌表达系统成功表达重组EHDV VP7蛋白,纯化后制备了2株稳定分泌针对EHDV VP7蛋白的单克隆抗体,分别命名为1D10和3C11,这2株单克隆抗体不仅能与大肠杆菌表达的重组EHDV VP7蛋白反应,而且也能与真核细胞表达的重组EHDV VP7蛋白结合,同时这2株单克隆抗体与重组蓝舌病毒VP7蛋白和重组非洲马瘟病毒VP7蛋白不发生反应。本研究成功表达和纯化出了重组EHDV VP7蛋白,制备了特异性抗VP7蛋白单克隆抗体,这为研究EHDV VP7蛋白的结构功能以及诊断方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 流行性出血病病毒 vp7蛋白 蛋白表达与纯化 单克隆抗体
在线阅读 下载PDF
猪A群轮状病毒VP7蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
2
作者 李东艳 朱梦梦 +2 位作者 姜智文 陈杰 粟硕 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第9期81-86,共6页
旨在建立猪A群轮状病毒(rotavirus A,RVA)抗体的间接ELISA检测方法,以提供一种快速、灵敏且高效的猪RVA抗体检测手段。本研究以原核表达的猪RVA VP7蛋白作为包被抗原,通过对反应条件的系统优化,成功建立针对猪RVA抗体的间接ELISA检测方... 旨在建立猪A群轮状病毒(rotavirus A,RVA)抗体的间接ELISA检测方法,以提供一种快速、灵敏且高效的猪RVA抗体检测手段。本研究以原核表达的猪RVA VP7蛋白作为包被抗原,通过对反应条件的系统优化,成功建立针对猪RVA抗体的间接ELISA检测方法。结果:VP7蛋白以包涵体的形式表达,主要形成2种大小的蛋白条带,分别为37 kDa和35.3 kDa。通过优化,确定间接ELISA反应条件为:蛋白包被量为0.25μg/孔,4℃过夜;封闭液为5%脱脂乳,37℃2 h;一抗(待检血清样本)为1∶100稀释,37℃1 h;二抗(HRP标记羊抗猪IgG)为1∶10000稀释,37℃1 h;显色为15 min。通过检测40份猪阴性血清样本,确定本研究建立的间接ELISA检测方法阳性临界值OD_(450nm)值为0.2747,批内和批间重复变异系数均在10%的范围内,具有较高的特异性和灵敏性。对20份临床血清样本的间接ELISA结果与中和试验结果进行比对,二者的符合率为95%。通过检测其他基因型毒株灭活疫苗免疫后的血清表明,VP7蛋白基因型的差异对ELISA阴阳性判定结果没有显著影响。综上,本研究建立的间接ELISA方法可用于监测猪群轮状病毒感染情况及其疫苗的免疫反应。 展开更多
关键词 猪A群轮状病毒 vp7蛋白 原核表达 间接ELISA
在线阅读 下载PDF
抗牛A群轮状病毒VP7蛋白单链抗体原核表达及活性鉴定
3
作者 许博阳 陈曦 +1 位作者 汤承 岳华 《西南民族大学学报(自然科学版)》 2025年第4期379-384,共6页
旨在制备靶向牛A群轮状病毒(Group A Bovine Rotavirus, BRVA)VP7蛋白的单链抗体(single-chain fragment variable, scFv).以项目组前期实验制备的BRVA VP7蛋白鼠源单克隆抗体C8杂交瘤细胞为模板,通过高通量测序获得其抗体可变区(variab... 旨在制备靶向牛A群轮状病毒(Group A Bovine Rotavirus, BRVA)VP7蛋白的单链抗体(single-chain fragment variable, scFv).以项目组前期实验制备的BRVA VP7蛋白鼠源单克隆抗体C8杂交瘤细胞为模板,通过高通量测序获得其抗体可变区(variable region, V区)基因序列,并使用(Gly_(4)Ser)^(×)3作为linker构建scFv基因片段,并将其克隆至pET28a(+)载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中表达.结果显示,C8-scFv在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,其相对分子质量约为26 kDa.免疫荧光试验结果表明,C8-scFv能够特异性识别BRVA,具有良好的反应活性.研究成功制备了靶向BRVA VP7蛋白的scFv,为开发基于免疫学的BRVA检测技术奠定了基础. 展开更多
关键词 牛A群轮状病毒 单链抗体 vp7蛋白 单克隆抗体 原核表达 活性鉴定
在线阅读 下载PDF
G8型牛轮状病毒VP7基因克隆及生物信息学分析
4
作者 苗书魁 米晓云 +2 位作者 魏婕 魏玉荣 海力且木•买买提依明 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1784-1795,共12页
【目的】克隆G8型牛轮状病毒(Bovine rotavirus, BRV)新疆分离株VP7基因,分析VP7蛋白分子遗传特征,为研究其生物学功能及研发新型疫苗提供理论依据。【方法】从BRV新疆分离株第6代病毒液中提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增VP7基因片段,克隆至... 【目的】克隆G8型牛轮状病毒(Bovine rotavirus, BRV)新疆分离株VP7基因,分析VP7蛋白分子遗传特征,为研究其生物学功能及研发新型疫苗提供理论依据。【方法】从BRV新疆分离株第6代病毒液中提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增VP7基因片段,克隆至pMD19-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取质粒后酶切并测序;采用生物信息学软件分析VP7蛋白理化性质、跨膜结构、亲/疏水性、亚细胞定位和信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三级结构同源建模及B、T细胞抗原表位。【结果】RT-PCR扩增获得大小为1 062 bp的BRV分离株VP7基因全长核苷酸序列,提交NCBI获得GenBank登录号:OR514136.1,该序列与RVA/Cow-wt/TUR/Amasya-1/2015/G8P[5]株(GenBank登录号:KX212865.1)核苷酸序列相似性最高(89.4%),同属A血清型G8基因型。生物信息学分析显示,BRV分离株VP7蛋白为疏水性不稳定蛋白,存在2个跨膜区,无信号肽,亚细胞定位于内质网膜,含有2个N-糖基化位点和132个磷酸化位点,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,分别占36.20%和35.28%。VP7蛋白能与SWISS-MODEL数据库中模板(SMTL ID:8bp8.1)的氨基酸序列同源建模,两者序列相似性为82.82%,符合率较高,模型GMQE、QMEAN和Ramachandran favored值分别为0.75、0.79和95.52%,表明空间构象合理,模型准确可靠。该蛋白存在多个B、T细胞抗原表位,其中表位长度设为16个氨基酸,评分>0.8的B细胞表位数量为12条;表位长度设为9个氨基酸,选择4种等位基因,评分>0.5的CTL表位有6条;表位长度设为12~18个氨基酸,选择4种等位基因,评分>0.8的HTL表位有11条。【结论】本研究首次成功获得G8型BRV新疆分离株VP7基因全长核苷酸序列。VP7蛋白为不稳定蛋白,存在2个跨膜区,无信号肽,亚细胞定位于内质网膜,存在多个B、T细胞抗原表位。试验结果为G8型BRV的流行、诊断、病毒-宿主相互作用和VP7蛋白基因工程疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 牛轮状病毒(BRV) vp7基因 克隆 生物信息学
在线阅读 下载PDF
蓝舌病新疆分离株VP7蛋白编码基因序列分析及一步法RT-PCR方法的建立
5
作者 马晓菁 谷文喜 +5 位作者 叶锋 刘帅 刘丽娅 谢彩云 钟旗 易新萍 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期253-259,共7页
【目的】分析蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列,建立蓝舌病新疆分离株一步法RT-PCR方法,为新疆BTV分子流行病学调查及防控提供技术支持。【方法】采用二代测序技术获得新疆分离株S7基因序列,登陆GenBank对序列进行同源性Blas... 【目的】分析蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列,建立蓝舌病新疆分离株一步法RT-PCR方法,为新疆BTV分子流行病学调查及防控提供技术支持。【方法】采用二代测序技术获得新疆分离株S7基因序列,登陆GenBank对序列进行同源性Blast比对,用软件MEGA 5.0分析序列差异,根据蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列,运用软件Oligo6.0设计引物,对蓝舌病新疆分离株S7基因进行RT-PCR扩增,并验证该方法的特异性及敏感性。【结果】蓝舌病中国新疆分离株编码VP7蛋白S7基因序列与哈尔滨报道BTV分离株S7基因片段相似度较高为89.64%,与中国云南报道BTV-29型分离株、蒙古国BTV分离株S7基因片段相似度分别为87.49%和87.39%;与德国BTV分离株S7基因片段相似度为80.70%,其余均无同源性序列。中国新疆分离株S7基因片段序列与4条同源序列间存在26处核苷酸差异,9处氨基酸差异。【结论】建立的蓝舌病中国新疆分离株S7基因片段一步法RT-PCR方法具有良好的特异性,仅BTV中国新疆分离株扩增获得目的条带,该方法的敏感性为4.0×10^(3)copies/mL。 展开更多
关键词 蓝舌病 vp7蛋白 RT-PCR
在线阅读 下载PDF
贵州省2017年~2023年PEDV和PoRVA流行病学调查及PoRVA VP7、VP4基因的遗传演化分析 被引量：4
6
作者 田红利 柳佳佳 +6 位作者 梁海英 曾智勇 汤德元 王彬 边孟婷 黄书 潘向英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期791-798,共8页
为了解贵州省猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪A群轮状病毒(PoRVA)的流行情况,本研究对2017年~2023年来自贵州省9个地区139个猪场的165份仔猪粪便样品进行Taq Man RT-qPCR检测,并对PoRVA阳性样品VP7、VP4基因进行RT-PCR扩增、测序,遗传进化... 为了解贵州省猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪A群轮状病毒(PoRVA)的流行情况,本研究对2017年~2023年来自贵州省9个地区139个猪场的165份仔猪粪便样品进行Taq Man RT-qPCR检测,并对PoRVA阳性样品VP7、VP4基因进行RT-PCR扩增、测序,遗传进化分析及其编码氨基酸序列的变异分析。结果显示,PEDV、PoRVA和PEDV+PoRVA的感染率分别为67.88%(112/165)、38.79%(64/165)和21.21%(35/165),且在不同年份、不同地区和不同季节均检出三者的感染。PCR结果显示,本实验扩增出27株PoRVA VP7基因和22株VP4基因;遗传进化分析结果显示共鉴定出6种G型和3种P型,其中G9(29.63%)和P[13](68.18%)为优势基因型,G3、G4、G5、G11、G26、P[6]和P[23]分别占7.41%、22.22%、22.22%、3.70%、14.81%、13.64%、18.18%。21份PoRVA样品鉴定出10种G/P组合基因型,G9P[13](19.05%)为优势组合基因型,G4P[13]、G5P[13]、G3P[13]、G4P[6]、G5P[23]、G9P[23]、G11P[13]、G26P[6]、G26P[13]分别占14.29%、14.29%、9.52%、9.52%、9.52%、9.52%、4.76%、4.76%及4.76%。同源性分析结果显示,27株VP7基因和22株VP4基因序列与NX疫苗株相应基因序列之间的同源性分别为75.5%~94.0%和68.5%~75.6%,氨基酸序列的同源性分别为78.3%~96.6%和72.0%~82.5%,部分PoRVA上述基因序列与国外、人源RVA的同源性最高。氨基酸位点变异分析结果显示,与NX疫苗株相比,所测PoRVA VP7和VP4氨基酸序列均存在特征性位点的变异,其中G型PoRVA VP7无氨基酸位点的缺失和插入,G9型PoRVA VP7存在3处(I^(208)T、K^(212)A/V/T、V^(271)I)变异,G3、G4、G5、G11和G26型PoRVA VP7存在17处(S^(28)R/K、A^(29)I/T/M/V、L^(40)I/V、V^(44)L、S^(71)T、Q^(73)G/N/S/E、S^(90)A/Q/K/R、G^(94)N/S/A/K、N^(100)D/E、T^(122)A/S、T^(147)A/G/N/D、Q^(189)S/T、I^(208)L/Q/T、K^(212)T/I/P/N、A^(213)N/T/D、E^(267)D/N、V^(271)I)变异;3株P[6]型PoRVA VP4在aa136缺失T,13株P[13]型PoRVA VP4在aa188~aa189插入E/D~Y/F,P[6]、P[13]和P[23]型PoRVA VP4存在26处(I^(92)V、Q^(94)E、Q^(113)T/P/N、T^(114)N/Q/S/R、T^(115)Q/E、N^(116)S/L/T、P^(148)A/Q/V/S/I、T^(180)E/N/D、P^(162)T、I^(174)V/L、C^(269)Y、R^(281)N、A^(286)L/S、T^(302)N、A^(340)S/V、T^(379)S、T^(403)A、S^(438)P、R^(553)K、A^(569)A、M^(570)L、A^(608)S、E^(660)D、I^(726)F、K^(733)N、S^(739)T)变异。上述结果表明,2017年~2023年贵州省PEDV和PoRVA感染率高且基因型复杂,其中PoRVA存在以G9型、P[13]型为主的流行,优势组合基因型为G9P[13]。本研究丰富了贵州省PEDV和PoRVA的流行病学资料,尤其为PoRVA感染的防控和候选疫苗株的筛选提供了参考数据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪A群轮状病毒 分子流行病学 vp7和VP4基因 遗传演化分析
在线阅读 下载PDF
非洲马瘟病毒VP7蛋白的可溶性表达及抗体阻断ELISA方法的初步建立
7
作者 徐婧 户鑫兵 +7 位作者 宋昱庆 张鸿歌 田占成 关贵全 罗建勋 殷宏 魏衍全 独军政 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1318-1326,共9页
为了实现非洲马瘟病毒(AHSV)VP7蛋白的可溶性表达,制备其特异性单克隆抗体,建立AHSV VP7阻断ELISA抗体检测方法,通过对编码AHSV VP7蛋白的基因序列进行突变设计与密码子优化,以大肠杆菌表达系统表达可溶性VP7蛋白并进行纯化,免疫BALB/c... 为了实现非洲马瘟病毒(AHSV)VP7蛋白的可溶性表达,制备其特异性单克隆抗体,建立AHSV VP7阻断ELISA抗体检测方法,通过对编码AHSV VP7蛋白的基因序列进行突变设计与密码子优化,以大肠杆菌表达系统表达可溶性VP7蛋白并进行纯化,免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得VP7蛋白单克隆抗体。通过细胞免疫荧光和Western-blot鉴定单克隆抗体的特异性,并建立AHSV VP7阻断ELISA方法。结果显示,利用大肠杆菌表达系统成功表达了可溶性重组AHSV VP7蛋白,将纯化的VP7蛋白免疫小鼠筛选制备了2株稳定分泌VP7蛋白单克隆抗体的细胞株,分别为3F7和7H8。经鉴定证明这2株VP7单克隆抗体不仅能与大肠杆菌重组表达的VP7蛋白反应,而且也与BHK-21细胞表达的具有天然构象的重组VP7蛋白反应,具有良好的特异性和反应性。以重组VP7蛋白和单克隆抗体7H8分别为包被抗原和阻断抗体建立了AHSV VP7阻断ELISA方法,检测了277份马血清样本,结果与商品化进口AHSV抗体检测试剂盒测定结果一致。本研究在大肠杆菌表达系统中实现了AHSV VP7蛋白的可溶性表达,制备获得了VP7特异性单克隆抗体,并建立了AHSV VP7阻断ELISA方法,为我国有效防控非洲马瘟的传入提供了技术储备。 展开更多
关键词 非洲马瘟病毒 vp7蛋白 可溶性表达 单克隆抗体 阻断ELISA
在线阅读 下载PDF
蓝舌病病毒VP7抗原在重组杆状病毒表达系统中的表达与鉴定
8
作者 王乃福 刘志玲 +4 位作者 吴冬雪 孙雨 孙航 宋晓晖 张海滨 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第5期31-36,共6页
本试验通过在重组杆状病毒表达系统中制备、纯化与鉴定蓝舌病病毒VP7抗原,为开发蓝舌病病毒免疫学抗体检测方法提供科学依据。利用SignalP与TMHMM在线软件分析VP7序列的信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化... 本试验通过在重组杆状病毒表达系统中制备、纯化与鉴定蓝舌病病毒VP7抗原,为开发蓝舌病病毒免疫学抗体检测方法提供科学依据。利用SignalP与TMHMM在线软件分析VP7序列的信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接至pFastBacHTA载体上,并构建相应的重组杆粒Bacmid-VP7-DH10Bac,转染sf9昆虫细胞后获得重组杆状病毒Bacmid-BTV-VP7株,利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达制备蓝舌病病毒VP7抗原。结果显示,重组杆粒Bacmid-VP7-DH10Bac转染sf9昆虫细胞并连续盲传5代后,成功获得重组杆状病毒Bacmid-BTV-VP7株,并成功表达纯化出VP7蛋白,大小约为43 kDa,蛋白纯度约为94%;VP7重组蛋白与其他疫病抗体无非特异性交叉。综上,重组VP7蛋白能够与BTV阳性血清呈现特异性反应,具有良好的反应原性,蛋白纯度高,并且具有病毒蛋白的生物学活性,将其作为诊断抗原,后期可用于开发系列免疫学抗体诊断检测技术。 展开更多
关键词 蓝舌病 重组vp7抗原 杆状病毒 真核表达 蛋白鉴定
在线阅读 下载PDF
羊轮状病毒GS2023株VP7基因的克隆与序列分析 被引量：1
9
作者 王天宇 赵登率 +7 位作者 张远航 李平 于頔浠 赵孟孟 高寒 覃丽梅 郭利伟 张克山 《现代牧业》 2024年第4期38-47,共10页
为研究羊轮状病毒(Rotavirus,RV)VP7基因的结构特点及功能,本试验扩增RV GS2023株VP7基因,并将其连接到pMD18-T载体上,通过生物信息学软件进行序列分析及功能预测。结果表明VP7基因全长978 bp,该蛋白分子质量为37.11763 ku,理论等电点为... 为研究羊轮状病毒(Rotavirus,RV)VP7基因的结构特点及功能,本试验扩增RV GS2023株VP7基因,并将其连接到pMD18-T载体上,通过生物信息学软件进行序列分析及功能预测。结果表明VP7基因全长978 bp,该蛋白分子质量为37.11763 ku,理论等电点为4.72,偏酸性;不稳定系数为35.29,属于稳定蛋白,不含信号肽。VP7蛋白是一种亲水性蛋白,含有62个糖基化位点和83个磷酸化位点,存在两个跨膜螺旋结构。VP7蛋白最有可能存在于质膜中,高尔基体、过氧物酶体、细胞外基质中也有分布。VP7蛋白的二级结构主要由α螺旋、延伸链、无规则卷曲组成,其中α螺旋占比为33.13%。GS2023株VP7与国内B11-R1株VP7基因相似性最高,为96.6%;GS2023株VP7与同型参考株的VP7氨基酸序列在多个位点有突变,但大部分氨基酸位点是保守的;GS2023株的VP7基因系统发育进化分析结果显示,与同型参考株聚为同一分支,且与B11-R1株亲缘关系最近。 展开更多
关键词 羊轮状病毒 vp7基因 克隆 序列分析 遗传进化分析
在线阅读 下载PDF
一例猪轮状病毒的实验室诊断及VP7基因序列分析 被引量：1
10
作者 唐慧伦 欧阳璐 +1 位作者 李清竹 欧云文 《湖南畜牧兽医》 2024年第2期14-17,共4页
为确定湖南省怀化市某规模化猪场仔猪腹泻原因,采用RT-PCR试验方法对病死仔猪肠道内容物及粪便进行流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、轮状病毒检测,并对RT-PCR产物进行测序分析、同源性比对。结果表明,仔猪腹泻为轮状病毒感染引起,经... 为确定湖南省怀化市某规模化猪场仔猪腹泻原因,采用RT-PCR试验方法对病死仔猪肠道内容物及粪便进行流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、轮状病毒检测,并对RT-PCR产物进行测序分析、同源性比对。结果表明,仔猪腹泻为轮状病毒感染引起,经序列分析发现该毒株与G9亚型毒株位于同一分支上,且同源性最高,为95.8%,因此判断此次引起仔猪发病为G9型猪轮状病毒感染所致,为当前省内流行毒株。 展开更多
关键词 仔猪腹泻 轮状病毒 实验室诊断 vp7基因
在线阅读 下载PDF
复制缺陷型重组腺病毒rvAdG1VP7免疫学效果的研究 被引量：4
11
作者 何金生 王健伟 +5 位作者 姜秀丽 王大燕 温乐英 董京芳 屈建国 洪涛 《安徽医科大学学报》 CAS 2002年第2期86-88,共3页
目的　对 1株可表达A组轮状病毒主要结构抗原VP7的重组腺病毒rvAdG1VP7的体内免疫学效果进行研究。方法　通过灌胃和滴鼻 2种途径对BALB/c小鼠进行免疫 ,并对免疫后小鼠体液和黏膜免疫进行分析。结果　初次免疫后 ,2组小鼠均有应答 ,但... 目的　对 1株可表达A组轮状病毒主要结构抗原VP7的重组腺病毒rvAdG1VP7的体内免疫学效果进行研究。方法　通过灌胃和滴鼻 2种途径对BALB/c小鼠进行免疫 ,并对免疫后小鼠体液和黏膜免疫进行分析。结果　初次免疫后 ,2组小鼠均有应答 ,但血清IgG抗体滴度及阳转率不同。再次免疫后 ,显示出明显的加强效果。除了血清IgG外 ,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA。滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到SIgA ,灌胃组仅在肠道检测到SIgA。滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组。对滴鼻组小鼠肺灌洗液IgG/SIgA的阳转率进行了比较 ,发现IgG的应答水平明显高于SIgA。免疫后小鼠血清中IgG的动态观察表明 ,抗体可长期持续至少半年以上。 结论　重组腺病毒载体rvAdG1VP7所取得的良好免疫学效果 ,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的进一步研制奠定了基础。 展开更多
关键词 缺陷型 重组腺病毒 rvAdG1vp7 免疫学 轮状病毒属 遗传学 vp7基因
暂未订购
用重组腺病毒表达A组轮状病毒主要中和抗原VP7可获得良好的免疫学效果 被引量：18
12
作者 何金生 王健伟 +4 位作者 温乐英 徐倏焱木 屈建国 姜慧英 洪涛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期122-126,共5页
为探索利用重组腺病毒表达轮状病毒的结构抗原以制备轮状病毒基因工程疫苗的可行性 ,构建了一株可表达A组轮状病毒主要中和抗原VP7的重组腺病毒AdEasyCVP7。AdEasyCVP7感染 2 93细胞后 ,RT PCR证明VP7基因有转录 ,Westernblotting试验... 为探索利用重组腺病毒表达轮状病毒的结构抗原以制备轮状病毒基因工程疫苗的可行性 ,构建了一株可表达A组轮状病毒主要中和抗原VP7的重组腺病毒AdEasyCVP7。AdEasyCVP7感染 2 93细胞后 ,RT PCR证明VP7基因有转录 ,Westernblotting试验可检测到VP7的表达。随后 ,用AdEasyCVP7通过灌胃和滴鼻两种不同途径免疫小鼠 ,并对免疫后小鼠的血清抗体和粘膜抗体进行了比较。初次免疫后 ,两组小鼠均有应答 ,但血清抗体滴度及阳转率不同。再次免疫后 ,滴鼻组小鼠显示出明显的加强效果。对肺灌洗液中的sIgA及肺、肠粘膜组织匀浆中的IgA进行检测 ,发现滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组。对血清中和抗体的检测表明 ,初次和再次免疫后 ,两组小鼠血清中均有中和抗体产生。该研究为轮状病毒基因工程疫苗的免疫方案、免疫途径及免疫保护作用等的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 重组腺病毒 基因工程疫苗 轮状病毒 vp7基因 中和抗原
暂未订购
轮状病毒VP7基因在大肠杆菌中的表达及其免疫原性 被引量：13
13
作者 袁力勇 刘勇 +2 位作者 李春宏 孙茂盛 戴长柏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期145-149,共5页
轮状病毒是世界范围内引起婴幼儿病毒性腹泻的主要病原体。VP7是轮状病毒的主要外壳蛋白和中和抗原 ,是发展基因工程疫苗的首选。把包含全部 3个主要抗原性区域的轮状病毒SA11VP7基因片段以谷胱甘肽S 转移酶融合蛋白的形式在大肠杆菌中... 轮状病毒是世界范围内引起婴幼儿病毒性腹泻的主要病原体。VP7是轮状病毒的主要外壳蛋白和中和抗原 ,是发展基因工程疫苗的首选。把包含全部 3个主要抗原性区域的轮状病毒SA11VP7基因片段以谷胱甘肽S 转移酶融合蛋白的形式在大肠杆菌中进行表达 ,表达产物占菌体总蛋白的 30 %左右。经一步GlutathioneSepharose4B亲和纯化 ,重组蛋白纯度超过 90 %。Westernblot实验表明 ,重组蛋白可被抗SA11的多抗特异地识别。动物实验表明 ,重组抗原可在小鼠和家兔体内诱导VP7特异的抗体和一定水平的SA11中和抗体。 展开更多
关键词 轮状病毒 vp7 大肠杆菌 免疫原性 表达
在线阅读 下载PDF
2011年～2012年G9型猪轮状病毒流行病学调查及VP7基因遗传进化分析 被引量：14
14
作者 王璐 时洪艳 +6 位作者 陈建飞 张鑫 史楠 石达 刘随新 张莎 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期276-279,共4页
为分析G9型猪轮状病毒(RV)的遗传变异情况,本研究根据GenBank中VP7序列设计合成一对扩增VP7基因的引物,采用PCR方法对2011年～2012年分离的部分RV VP7基因进行扩增、克隆和序列测定,并进行比对和遗传进化分析。结果表明:531份病料中RV... 为分析G9型猪轮状病毒(RV)的遗传变异情况,本研究根据GenBank中VP7序列设计合成一对扩增VP7基因的引物,采用PCR方法对2011年～2012年分离的部分RV VP7基因进行扩增、克隆和序列测定,并进行比对和遗传进化分析。结果表明:531份病料中RV阳性份数为39,阳性率为7.34%;而在检测的121个猪场中,共有23个猪场显示阳性,猪场阳性率为19%。VP7基因全长1 062 bp,含有一个982 bp的开放阅读框,编码326个氨基酸。与参考病毒株VP7全长基因核苷酸比较,同源性为91.5%～99.3%。在31 nt、56 nt、75 nt、82 nt、191 nt、215 nt等位置均存在点突变,无插入和缺失。核苷酸系统发育进化树表明:黑龙江省哈尔滨市、桦南、绥化,辽宁省大连市、内蒙古自治区采集病料样品的基因间差异较小,与采集自中国广西、浙江、贵州、北京的病料样品基因相比差异性较大,这表明VP7基因存在地域差异。 展开更多
关键词 轮状病毒 vp7基因 G9 遗传变异
在线阅读 下载PDF
大熊猫轮状病毒CH-1株外衣壳蛋白(VP7)基因的克隆和生物信息学分析 被引量：11
15
作者 颜其贵 雷燕 +5 位作者 张志和 王成东 阳爱国 王旭 左兰 肖洋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期705-710,共6页
为研究大熊猫轮状病毒(Giant Panda Rotavirus,GPRV)CH-1株外衣壳蛋白VP7基因的结构及功能,用MA-104细胞(恒河猴胎猴肾细胞)增殖GPRV,提取总RNA,运用RT-PCR扩增VP7基因,并测序,用生物信息学软件预测其功能,并构建系统进化树。结果显示... 为研究大熊猫轮状病毒(Giant Panda Rotavirus,GPRV)CH-1株外衣壳蛋白VP7基因的结构及功能,用MA-104细胞(恒河猴胎猴肾细胞)增殖GPRV,提取总RNA,运用RT-PCR扩增VP7基因,并测序,用生物信息学软件预测其功能,并构建系统进化树。结果显示成功获得了长1042bp的GPRV VP7蛋白基因(GenBank登录号GU188284)。经生物信息学分析,此序列包含1个981bp的完整开放阅读框,编码326个氨基酸;预测GPRV VP7蛋白理论相对分子质量为37354.8u,等电点为4.76,半衰期为30h,不稳定系数为26.71,总平均亲水性为-0.015,疏水性介于-2.344～3.567;1—24位氨基酸可能是信号肽序列;跨膜结构分析表明VP7蛋白有2个跨膜区,其N端和C端都位于病毒膜外区;抗原表位预测显示VP7蛋白有12个抗原决定簇;结构预测显示其可能包含2个N-糖基化作用位点,5个蛋白激酶C磷酸化作用位点、4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点、1个酪氨酸激酶磷酸化作用位点、4个N-豆蔻酰化位点、1个原核膜脂蛋白脂附着点和1个革兰氏阳性球菌表面蛋白‘锚’六肽。系统进化树分析显示GPRV VP7基因与人A组轮状病毒VP7基因的进化距离最近。本研究成功获得了GPRV VP7基因,为今后研究此基因的生物学功能以及建立该病毒的诊断方法奠定基础。 展开更多
关键词 大熊猫轮状病毒 vp7基因 克隆 生物信息学分析
在线阅读 下载PDF
北京地区G1-G4型人轮状病毒地方株VP7编码基因的序列分析 被引量：20
16
作者 李国华 钱渊 +1 位作者 熊朝晖 靖宇 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期126-132,共7页
本文报告了北京地区流行的４个轮状病毒地方株（Ｇ１－Ｇ４）ＶＰ７编码基因的核苷酸序列。４个地方株的该基因核苷酸全长均为１０６２ｂｐ，读码框架和已往的研究一致。地方株和相同血清型的标准株之间ＶＰ７氨基酸序列具有高度同源性... 本文报告了北京地区流行的４个轮状病毒地方株（Ｇ１－Ｇ４）ＶＰ７编码基因的核苷酸序列。４个地方株的该基因核苷酸全长均为１０６２ｂｐ，读码框架和已往的研究一致。地方株和相同血清型的标准株之间ＶＰ７氨基酸序列具有高度同源性（９２％－９４％），而不同血清型间则变异较大（６９％－８０％）。不同血清型间氨基酸序列的变异主要存在于高变区内，高变区以外的区域在不同血清型轮状病毒间保守。这一序列分析结果进一步从分子水平分析了地方流行毒株的血清型别。 展开更多
关键词 轮状病毒 vp7 序列分析
暂未订购
长春地区轮状病毒流行株VP7基因的遗传变异 被引量：11
17
作者 王端可 章青 +5 位作者 孙利炜 王承训 段招军 Xi Jiang Baoming Jiang 方肇寅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期22-27,共6页
A组轮状病毒是引起婴幼儿秋冬季病毒性腹泻的主要病原。目前没有有效的治疗药物,应用安全而有效的疫苗是控制重症腹泻的首要措施。对当地A组轮状病毒流行株的主要中和抗原VP7的编码基因进行遗传变异分析,可以为疫苗的应用和开发提供有... A组轮状病毒是引起婴幼儿秋冬季病毒性腹泻的主要病原。目前没有有效的治疗药物,应用安全而有效的疫苗是控制重症腹泻的首要措施。对当地A组轮状病毒流行株的主要中和抗原VP7的编码基因进行遗传变异分析,可以为疫苗的应用和开发提供有益的指导。利用ELISA方法对长春地区1999～2005年的腹泻患儿标本检测A组轮状病毒,RT-PCR方法对阳性标本进行G血清分型,发现长春地区2001年以后流行的轮状病毒以G3型血清为主。选取1999～2005年的G3型轮状病毒标本31份,对其VP7基因进行扩增、克隆、测序,经过计算机分析比对,31株G3型轮状病毒VP7基因核苷酸序列没有显著差异。同一流行季节的毒株具有较相似的遗传变异特征。在2003年轮状病毒流行季节内,有6株G3型分离株的VP7基因在碱基1038位置上出现一个碱基缺失。毒株发生在A、B、C三个高变区的碱基突变,位点相同或者位置临近。2002年以后毒株的基因突变增加,非高变区的碱基变异增加,这可能有助于维持G3型轮状病毒成为流行株。有规律的变异多发生在高变区,但是非高变区的非连续性变异的增加值得引起注意。 展开更多
关键词 轮状病毒 RT-PCR vp7基因 遗传变异
暂未订购
草鱼呼肠孤病毒VP7基因核酸疫苗的构建及免疫效果 被引量：10
18
作者 徐诗英 刘林 +7 位作者 李婧慧 邹勇 倪金俤 杨鸢劼 贡成良 曹广力 薛仁宇 陈辉 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1694-1700,共7页
将草鱼呼肠孤病毒(GCRV)外衣壳蛋白VP7双基因(约0.9 kb)及团头鲂的β-肌动蛋白启动子(约0.56 kp)经扩增并鉴定正确后,克隆至基因转移载体pFastBacTM Dual中,获得重组质粒pFastBac-β-VP71-VP72,以此研究草鱼免疫实验及免疫效果。重组质... 将草鱼呼肠孤病毒(GCRV)外衣壳蛋白VP7双基因(约0.9 kb)及团头鲂的β-肌动蛋白启动子(约0.56 kp)经扩增并鉴定正确后,克隆至基因转移载体pFastBacTM Dual中,获得重组质粒pFastBac-β-VP71-VP72,以此研究草鱼免疫实验及免疫效果。重组质粒按10、30、60μg分为3组,同时设30μg空载体组及对照组。于免疫后第14、21、28、49天通过RT-PCR检测VP7的转录水平、间接凝集反应测定抗体水平及攻毒试验检测免疫保护效果。结果显示,pFastBac-β-VP71-VP72导入鱼体后,VP7基因在β-肌动蛋白启动子的驱动下持续表达,至第49天仍能检测到目的基因的转录;各免疫组均有抗体产生,抗体效价在免疫后第21天达到最高,攻毒后10、30、60μg核酸疫苗免疫组死亡率分别为0%、0%、5%,而空载体组和对照组分别为30%和100%,表明pFastBac-β-VP71-VP72作为核酸疫苗对草鱼病毒性出血病有较好的免疫保护效果。研究结果为草鱼呼肠孤病毒核酸疫苗的研发与生产应用奠定了基础。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 vp7 核酸疫苗 β-肌动蛋白启动子
在线阅读 下载PDF
人源轮状病毒vp7基因的克隆与转基因植物研究 被引量：10
19
作者 李晋涛 吴玉章 +4 位作者 费蕾 邹丽云 唐艳 牟芝蓉 耿淼 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期11-14,共4页
目的　克隆人源轮状病毒外壳蛋白vp7基因 ,以制备转基因植物疫苗。方法　用RT PCR方法制备vp7基因 ,以植物高效表达质粒PBI12 1为载体 ,构建重组DNA质粒。重组体用载体上的通用引物为测序引物 ,鉴定克隆的正确性。再将鉴定过的重组质粒... 目的　克隆人源轮状病毒外壳蛋白vp7基因 ,以制备转基因植物疫苗。方法　用RT PCR方法制备vp7基因 ,以植物高效表达质粒PBI12 1为载体 ,构建重组DNA质粒。重组体用载体上的通用引物为测序引物 ,鉴定克隆的正确性。再将鉴定过的重组质粒用农杆菌介导法转染马铃薯外植体 ,分别用PCR、Westernblot法鉴定阳性转化植株中vp7基因的表达。结果　成功地将vp7转入马铃薯植株中 ,并且在转化植株中检测出了vp7的表达。结论　成功地构建了重组PBI12 1 hvp7质粒 。 展开更多
关键词 生物医学工程 转基因植物 克隆表达 轮状病毒vp7
暂未订购
蓝舌病病毒重组VP7蛋白单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立 被引量：9
20
作者 耿宏伟 秦永丽 +11 位作者 李俊平 杨涛 孙恩成 刘霓红 白安斌 徐青元 王凌凤 赵晶 覃绍敏 林俊 郭怡璠 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期388-392,共5页
为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与... 为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与茨城病病毒(IBAV)、中山病病毒(CV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛肠道病毒(BEV)、牛呼肠孤病毒(RV)及口蹄疫病毒(FMDV)无交叉反应,表明2株MAb均为BTV群特异性抗体。采用重组表达的VP7蛋白作为包被抗原建立的竞争ELISA方法证明,BTV-4H7 MAb对不同血清型BTV阳性血清具有良好的阻断效果,而对AKAV、IBAV、BRV和FMDV阳性血清无阻断作用。本研究建立的竞争ELISA方法与IDEXX公司的试剂盒检测包括65份已知背景血清和322份采自广西省的山羊血清样品,检测结果符合率分别达100%和98%。该竞争ELISA方法的建立为BTV抗体的监测提供了安全、快速、准确的技术手段。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 重组vp7蛋白 群特异性单克隆抗体 竞争ELISA
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 11 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部