期刊文献+
共找到1,070篇文章
< 1 2 54 >
每页显示 20 50 100
羊痘病毒实时荧光定量TaqMan PCR检测方法的建立 被引量:25
1
作者 康文玉 徐自忠 +5 位作者 花群义 杨云庆 周晓黎 董俊 尹尚莲 高洪 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期529-533,共5页
参照羊痘病毒(CaPV)P32的基因序列,设计合成了2套引物和1条探针,建立了实时荧光定量PCR技术,对细胞培养物、皮肤丘疹、痂皮等组织病料中的GPV进行了特异性检测和敏感性试验。结果显示,用300 nmol/L引物浓度和200 nmol/L探针浓度,获得... 参照羊痘病毒(CaPV)P32的基因序列,设计合成了2套引物和1条探针,建立了实时荧光定量PCR技术,对细胞培养物、皮肤丘疹、痂皮等组织病料中的GPV进行了特异性检测和敏感性试验。结果显示,用300 nmol/L引物浓度和200 nmol/L探针浓度,获得的Cr值较小,而△Rn最大;可检测到相当于0.1 TCID50的病毒DNA;制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽,相关系数为0.999 5以上;组内和组间试验重复性的变异系数分别为2.3%和3.4%;与常规的PCR相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量,可同时检测大量样品等优点。表明。荧光TaqMan PCR是一种检测CaPV的良好方法,可对组织病料中低含量的CaPV或持续带毒宿主进行准确检测。 展开更多
关键词 羊痘病毒 荧光定量taqman pcr 检测
在线阅读 下载PDF
阪崎肠杆菌实时荧光双重TaqMan PCR快速检测体系的建立 被引量:10
2
作者 孟双 李娟 +2 位作者 王艳 白雪梅 叶长芸 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期857-860,共4页
目的建立针对阪崎肠杆菌的高灵敏、高特异的实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应(PCR)快速检测体系。方法根据阪崎肠杆菌基因组16SrRNA~23SrRNA的内部转录间隔区(ITS)基因和外膜蛋白A(OmpA)基因的特异性序列设计引物及TaqMan探针,利用高... 目的建立针对阪崎肠杆菌的高灵敏、高特异的实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应(PCR)快速检测体系。方法根据阪崎肠杆菌基因组16SrRNA~23SrRNA的内部转录间隔区(ITS)基因和外膜蛋白A(OmpA)基因的特异性序列设计引物及TaqMan探针,利用高通量实时荧光PCR检测平台探讨该检测体系的灵敏度;用50种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌评价该检测体系的特异性。结果实时荧光双重TaqMan PCR快速检测体系对阪崎肠杆菌重组质粒的检测灵敏度为1×102拷贝/反应体系;对阪崎肠杆菌基因组的检测灵敏度为4×10-1pg/反应体系;该检测体系在检测50种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现特异性扩增,整个反应在2h内完成。结论本研究建立的实时荧光双重TaqMan PCR检测体系可作为阪崎肠杆菌灵敏、特异、快速的检测方法,并同时检测阪崎肠杆菌的致病力。 展开更多
关键词 阪崎肠杆菌 实时荧光taqman pcr 外膜蛋白A 内部转录间隔区
暂未订购
嗜水气单胞菌实时荧光三重TaqMan PCR快速检测体系的建立 被引量:9
3
作者 孟双 白雪梅 +1 位作者 王艳 叶长芸 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期217-222,共6页
目的建立针对嗜水气单胞菌的高灵敏、高特异的实时荧光三重TaqMan聚合酶链式反应(PCR)快速检测体系。方法根据嗜水气单胞菌的16SrDNA、气溶素基因(aerA)和丝氨酸蛋白酶基因(ahp)的特异性序列设计引物及TaqMan探针,利用高通量实时荧光PC... 目的建立针对嗜水气单胞菌的高灵敏、高特异的实时荧光三重TaqMan聚合酶链式反应(PCR)快速检测体系。方法根据嗜水气单胞菌的16SrDNA、气溶素基因(aerA)和丝氨酸蛋白酶基因(ahp)的特异性序列设计引物及TaqMan探针,利用高通量实时荧光PCR检测平台探讨该检测体系的灵敏度;用29种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌评价该检测体系的特异性。结果实时荧光三重TaqMan PCR快速检测体系对嗜水气单胞菌重组质粒的检测灵敏度为1×102拷贝/反应体系;对嗜水气单胞菌基因组的检测灵敏度为5×10-2pg/反应体系;该体系的特异性引物探针在检测29种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现假阳性,整个反应在2h内完成。结论本研究建立的实时荧光三重TaqManPCR检测体系可作为嗜水气单胞菌灵敏、特异、快速的检测方法,并同时评价嗜水气单胞菌的致病潜力。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 实时荧光taqman pcr 气溶素基因 丝氨酸蛋白酶基因
暂未订购
区别伪狂犬病病毒野毒株和gE-疫苗株的gE-MGB-TaqMan PCR方法的建立 被引量:7
4
作者 陈世界 李璟 +1 位作者 张焕容 郭万柱 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期550-554,568,共6页
本实验通过设计针对伪狂犬病病毒gE基因的引物和MGB(Minor groove binder oligodeoxynucleotide conjugate,MGB-ODN)TaqMan探针,结合ABI PE7700荧光定量PCR仪器系统,建立了一种能区别伪狂犬病病毒野毒株和gE-疫苗株的快速检测方法gE-M... 本实验通过设计针对伪狂犬病病毒gE基因的引物和MGB(Minor groove binder oligodeoxynucleotide conjugate,MGB-ODN)TaqMan探针,结合ABI PE7700荧光定量PCR仪器系统,建立了一种能区别伪狂犬病病毒野毒株和gE-疫苗株的快速检测方法gE-MGB-TaqMan PCR.实验表明,该方法可检测出最低43拷贝的gE基因和104倍稀释的伪狂犬病病毒Fa株DNA,与微量血清中和结合MTT比色法相比,灵敏度和特异性一致,检测时间仅为后者的1/10,操作比后者更为简单.特异性和重复性试验表明:gE-MGB-TaqMan PCR特异性和重复性好.该方法以闭管的模式操作,减少了各步骤污染的可能性,整个检测少于3 h. 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gE gE-MGB—taqman pcr
在线阅读 下载PDF
阪崎肠杆菌实时荧光TaqMan PCR检测方法的研究 被引量:4
5
作者 孟双 李娟 +2 位作者 白雪梅 王艳 叶长芸 《疾病监测》 CAS 2011年第9期746-748,752,共4页
目的建立阪崎肠杆菌的TaqMan PCR检测方法。方法将阪崎肠杆菌的菌悬液连续10倍稀释后与健康人新鲜粪便混匀,制备成1.2×100~1.2×108 cfu/ml梯度浓度的粪便模拟标本并提取DNA,用以评价阪崎肠杆菌实时荧光TaqMan PCR法对临床模... 目的建立阪崎肠杆菌的TaqMan PCR检测方法。方法将阪崎肠杆菌的菌悬液连续10倍稀释后与健康人新鲜粪便混匀,制备成1.2×100~1.2×108 cfu/ml梯度浓度的粪便模拟标本并提取DNA,用以评价阪崎肠杆菌实时荧光TaqMan PCR法对临床模拟标本检测的灵敏度、特异性和稳定性。结果实时荧光TaqMan PCR法对阪崎肠杆菌粪便模拟标本的检测灵敏度为1.2×103 cfu/ml;其线性检测范围为:1.2×103~1.2×108 cfu/ml;在稳定性评价中,对含菌量为1.2×108、1.2×106和1.2×104 cfu/ml的粪便模拟标本进行实时荧光TaqMan PCR法重复检测10次,结果显示扩增反应Ct值的变异系数(CV)为0.65%~1.47%;在特异性评价中,除了阳性对照其余样本均未见特异性扩增曲线。结论本研究建立了阪崎肠杆菌实时荧光TaqMan PCR法。 展开更多
关键词 阪崎肠杆菌 实时荧光taqman pcr 外膜蛋白A
原文传递
类志贺邻单胞菌实时荧光TaqMan PCR快速检测体系的建立 被引量:3
6
作者 孟双 王艳 +3 位作者 白雪梅 纪少博 李爱华 叶长芸 《疾病监测》 CAS 2011年第11期906-910,共5页
目的建立针对类志贺邻单胞菌的高灵敏、高特异的实时荧光TaqMan聚合酶链式反应(PCR)快速检测体系。方法根据类志贺邻单胞菌23S rRNA基因的一段特异性序列设计引物及TaqMan探针,利用实时荧光PCR检测平台探讨该检测体系的灵敏度;用30种其... 目的建立针对类志贺邻单胞菌的高灵敏、高特异的实时荧光TaqMan聚合酶链式反应(PCR)快速检测体系。方法根据类志贺邻单胞菌23S rRNA基因的一段特异性序列设计引物及TaqMan探针,利用实时荧光PCR检测平台探讨该检测体系的灵敏度;用30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌评价该检测体系的特异性。结果实时荧光TaqMan PCR快速检测体系对类志贺邻单胞菌重组质粒的检测灵敏度为1×102拷贝/反应体系;对类志贺邻单胞菌基因组的检测灵敏度为3×10-2pg/反应体系;该检测体系在检测30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现特异性扩增,整个反应在2 h内完成。结论本研究建立的实时荧光TaqMan PCR检测体系可作为类志贺邻单胞菌灵敏、特异、快速的检测方法。 展开更多
关键词 类志贺邻单胞菌 实时荧光taqman pcr 23S RRNA
原文传递
森林脑炎病毒(TBEV)实时定量TaqMan PCR检测方法的建立 被引量:7
7
作者 胡玉洋 杨银辉 +4 位作者 刘洪 康晓平 朱晓光 司炳银 祝庆余 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期745-748,共4页
目的建立快速检测TBEV的实时定量TaqMan PCR方法。方法根据GenBank发表的TBEV全基因组序列资料,在其C基因和NS5基因区段设计TBEV的特异探针和引物,在E基因区段设计普通PCR引物。以MDJ01株作为待检毒株,黄病毒属的另外7株病毒用来评... 目的建立快速检测TBEV的实时定量TaqMan PCR方法。方法根据GenBank发表的TBEV全基因组序列资料,在其C基因和NS5基因区段设计TBEV的特异探针和引物,在E基因区段设计普通PCR引物。以MDJ01株作为待检毒株,黄病毒属的另外7株病毒用来评价检测体系的特异性。测定病毒的TCID50值并制备病毒拷贝数标准品,分别用于制作病毒滴度和拷贝数标准曲线。与常规PCR方法进行了灵敏度比较,并建立了病毒感染小鼠的检测模型。结果该检测方法的灵敏度可达到100拷贝/反应或0.1TCID50,是常规PCR方法的十倍。作为对照的黄热病毒疫苗株17D、登革1~4型病毒、日本脑炎病毒、西尼罗病毒Chin-01株结果均为阴性,证明该体系具有良好的特异性。经过多批次、不同浓度样品的重复检测,批内和批间变异系数均小于5%,表明该体系具有较好的稳定性和重复性。结论建立了一种灵敏、特异、简便易行的TBEV的TaqMan实时定量PCR检测方法,为TBEV的预防控制和诊断提供了一种技术手段。 展开更多
关键词 脑炎病毒亚组 蜱传 实时定量pcr taqman
暂未订购
TaqMan PCR检测乙型脑炎病毒方法的建立及应用 被引量:6
8
作者 阳帆 刘建军 +3 位作者 何建凡 杨洪 张海龙 冼慧霞 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第10期1962-1964,共3页
目的:利用TaqMan PCR技术,建立乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)实时荧光PCR检测方法,探讨其用于临床诊断的可行性。方法:根据GenBank发表的JEV全基因组序列资料分析结果,在其3′端非编码区(UTR)设计JEV特异的引物与探针... 目的:利用TaqMan PCR技术,建立乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)实时荧光PCR检测方法,探讨其用于临床诊断的可行性。方法:根据GenBank发表的JEV全基因组序列资料分析结果,在其3′端非编码区(UTR)设计JEV特异的引物与探针,验证检测体系的特异性、灵敏性和稳定性,并用于临床乙脑病人样本的检测。结果:引物、探针具有良好的特异性,用该TaqMan PCR法检测JEV减毒株SA14-14-2灵敏度可达1 TCID50/ml。稳定性分析表明,同一样本重复检测5次,Ct值变异系数均小于5%。在此基础上,实时荧光PCR检测了10份临床上确诊为乙脑患者的标本(特异性IgM阳性),6份阳性,阳性率为60%。在7份特异性IgM阴性、临床上疑似乙脑的患者中,2份TaqMan PCR结果为阳性,阳性率为28.6%。此方法从RNA提取到检测结果仅需1.5 h。结论:本研究建立了一种灵敏、特异、简便易行的JEV TaqMan PCR检测方法,为乙型脑炎的鉴别诊断提供了一种技术手段。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 实时荧光pcr
暂未订购
甲肝病毒TaqMan PCR检测方法的建立 被引量:7
9
作者 徐德顺 卢亦愚 +1 位作者 严菊英 徐昌平 《中国预防医学杂志》 CAS 2007年第3期229-232,共4页
目的建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,对甲肝病毒核酸进行检测。方法根据GenBank发表的HAV全基因组序列资料分析结果,在其保守区段设计HAV特异性引物和探针,优化引物、探针浓度,与最佳退火温度,并考察检测体系的... 目的建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,对甲肝病毒核酸进行检测。方法根据GenBank发表的HAV全基因组序列资料分析结果,在其保守区段设计HAV特异性引物和探针,优化引物、探针浓度,与最佳退火温度,并考察检测体系的特异性、敏感性与重复性。结果本研究体系的引物和探针浓度为0.8μmol/L和0.6μmol/L,退火温度为52℃时,具有良好的特异性与敏感性,检测灵敏度可达0.1TCID50。同一样品重复检测3次,Ct值的变异系数均小于5%。结论本研究建立的HAV TaqMan RT-PCR方法特异、敏感、快速且有效减少交叉污染的概率,为临床及水产品中的甲肝病毒的早期快速检测提供了一种新方法。 展开更多
关键词 荧光定量pcr taqman探针 甲肝病毒
暂未订购
Taqman PCR检测人博卡病毒的阳性率 被引量:1
10
作者 邓幼平 刘颖娟 +4 位作者 王笑臣 张一卉 刘媛媛 杨占秋 赵东赤 《海南医学院学报》 CAS 2014年第3期289-292,共4页
目的:建立核酸特异、快速、敏感的Taqman探针实时定量PCR检测方法筛选疑似人博卡病毒(HBoV)感染者鼻咽拭子临床样本中的阳性样本。方法:比对编码HBoV-sh9的基因序列,选取保守区序列设计引物和探针,建立Taqman PCR检测人博卡病毒的阳性... 目的:建立核酸特异、快速、敏感的Taqman探针实时定量PCR检测方法筛选疑似人博卡病毒(HBoV)感染者鼻咽拭子临床样本中的阳性样本。方法:比对编码HBoV-sh9的基因序列,选取保守区序列设计引物和探针,建立Taqman PCR检测人博卡病毒的阳性率的方法,进行特异性实验,检测214例临床样本。结果:所建立的Taqman PCR方法可以用于检测人博卡病毒的阳性率,对所收集得到的214例急性上呼吸道感染者的咽拭子标本进行检测,结果显示,荧光定量PCR检测出8例阳性,其阳性率为3.74%。结论:建立了HBoV TaqMan探针实时定量PCR检测方法,可以快速灵敏的检测出阳性人博卡病毒,为临床治疗提供快速可靠的诊断依据。 展开更多
关键词 Faqman pcr 人博卡病毒 阳性率
暂未订购
使用Taqman PCR技术建立人类血小板抗原-1~5、15分型体系 被引量:1
11
作者 沈彤 赵玉林 +1 位作者 刘熔增 刘达庄 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期936-938,共3页
目的了解上海地区单采血小板献血人群HPA-1~5、15多态性分布,分析评估新的分型技术。方法利用TaqMan PCR技术对500份上海地区单采血小板供者标本进行HPA-1~5、15抗原系统等位基因分型,并随机抽取100份标本使用PCR-SSP技术进行比对。结... 目的了解上海地区单采血小板献血人群HPA-1~5、15多态性分布,分析评估新的分型技术。方法利用TaqMan PCR技术对500份上海地区单采血小板供者标本进行HPA-1~5、15抗原系统等位基因分型,并随机抽取100份标本使用PCR-SSP技术进行比对。结果 HPA各等位基因频率分别为HPA-1a:0.999,HPA-1b:0.001,HPA-2a:0.953,HPA-2b:0.047,HPA-3a:0.582,HPA-3b:0.418,HPA-4a:0.999,HPA-4b:0.001,HPA-5a:0.988,HPA-5b:0.012,HPA-15a:0.524,HPA-15b:0.476;有1份标本HPA-5等位基因与SSP检测结果产生差异。结论上海地区HPA各等位基因频率与国内各地区人群分布无明显差异,与中国汉族人群HPA分布情况基本吻合,实验数据经验证符合Hardy-Weinberg平衡定律,实验结果准确可靠;HPA-5差异经测序验证判断可能由PCR-SSP非特异扩增所致;TaqMan技术在HPA抗原系统分型应用中特异性高,反应时间短,具有良好的应用前景,是现有技术方法的一种重要补充。 展开更多
关键词 HPA taqman pcr 基因频率 多态性
原文传递
人GABRA1实时荧光定量TaqMan PCR检测方法的建立 被引量:2
12
作者 李宁 何进宇 +5 位作者 刀筱芳 伍学英 龚玉来 冯文 高利民 徐亚欧 《西南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2008年第1期94-97,共4页
根据GenBank上人GABRA1基因的序列,设计并合成特异性的引物及探针,采用TaqMan探针法建立了荧光定量PCR法,以常规PCR产物为标准品,建立标准曲线.结果表明,标准曲线Ct值检测范围为12.07-32.72,相关系数为0.999,扩增效率为96.4%.建立的GABR... 根据GenBank上人GABRA1基因的序列,设计并合成特异性的引物及探针,采用TaqMan探针法建立了荧光定量PCR法,以常规PCR产物为标准品,建立标准曲线.结果表明,标准曲线Ct值检测范围为12.07-32.72,相关系数为0.999,扩增效率为96.4%.建立的GABRA1TaqMan探针实时荧光定量方法具有线性范围广、扩增效率高、检测时间短、敏感性高等特点. 展开更多
关键词 GABRA1 taqman探针 实时荧光定量pcr
在线阅读 下载PDF
Taqman PCR-based Methods for Rapid Detection of Salmonella in Pet Food 被引量:1
13
作者 JIA Jun-tao CUI He +3 位作者 MA Yun ZENG Jing JIANG Ying-hui LI Zheng-yi 《Chinese Food Science》 2012年第3期32-34,共3页
[ Objective] To establish a Taqman real-time PCR for detection of Salmonella in pet food. [Method] A pair of primers and a probe were designed based on published nucleotide sequence of invA gene encoding the invasion ... [ Objective] To establish a Taqman real-time PCR for detection of Salmonella in pet food. [Method] A pair of primers and a probe were designed based on published nucleotide sequence of invA gene encoding the invasion protein of Salmonella enterica. [ Result] The assay detects Salmonella specifically. The detection limit of the real-time PCR was 17 CFU/test (25 uL/test) for the positive strain. This method was effective to detect artificially contaminated pet food. [ Conclusion] The results showed that Taqman PCR assay was rapid and accurate for detection of Salmonella from infected pet food. 展开更多
关键词 Fluorescence quantitative pcr SALMONELLA taqman probe DETECTION China
在线阅读 下载PDF
布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
14
作者 彭海涛 高阳 +6 位作者 刘雨欣 顾德媛 张东 张如 许会会 陈思 杨艳玲 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第1期369-377,共9页
旨在建立一种经济高效的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法,用于布鲁菌感染的动物及动物产品的快速检测并区分牛种布鲁菌和其他种布鲁菌感染的动物,为临床常的疫苗和研发的新型疫苗提供科学有效的鉴别诊断方法。本研究根据GenBan... 旨在建立一种经济高效的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法,用于布鲁菌感染的动物及动物产品的快速检测并区分牛种布鲁菌和其他种布鲁菌感染的动物,为临床常的疫苗和研发的新型疫苗提供科学有效的鉴别诊断方法。本研究根据GenBank公布的galU和Omp31的序列设计检测引物和探针,构建重组质粒,对方法特异性、灵敏性及重复性评价,检测实验室制备和临床动物布病血清及组织样品。结果表明,成功建立了布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法,该方法最低检测限为1.93×10^(0) copies·μL^(-1),与其他革兰阴性菌无交叉反应,批内及批间变异系数均小于2%。利用本研究建立的方法检测实验室制备样品和临床采集样品共156份,与BCSP31-PCR相比,两者阳性符合率为69.75%;与PCR和虎红凝集试验相比,灵敏性更高,双重TaqMan荧光定量PCR的敏感性为100%,PCR的敏感性为69.75%,虎红凝集试验的敏感性为58.65%。本研究建立的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法,为布鲁菌临床鉴别检测、流行病学调查及净化提供技术支持。 展开更多
关键词 布鲁菌 双重Taq Man荧光定量pcr 检测方法 鉴别诊断
在线阅读 下载PDF
禽白血病病毒A/J和B/K亚群双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
15
作者 檀子卿 蒋艳妹 +5 位作者 张亚婷 张瑞函 李梦婷 熊树德 刘永相 范春艳 《中国家禽》 北大核心 2026年第2期71-78,共8页
研究旨在建立一种同时检测禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)A、J亚群和B、K亚群的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。试验通过比对GenBank中ALV各亚群全基因组序列,设计针对A/J(LTR区)与B/K(env基因区)亚群的特异性引物和探针,构... 研究旨在建立一种同时检测禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)A、J亚群和B、K亚群的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。试验通过比对GenBank中ALV各亚群全基因组序列,设计针对A/J(LTR区)与B/K(env基因区)亚群的特异性引物和探针,构建重组质粒标准品建立双重TaqMan荧光定量PCR检测方法,并与常规PCR比较临床样本的检测效果。结果显示:建立的方法对A/J和B/K亚群的检测限分别为10 copies/μL和10^(2) copies/μL,灵敏度分别比常规PCR提高10倍和100倍;标准曲线相关性良好(R^(2)≥0.998),扩增效率为93.6%与96.2%;该方法仅对A、B、J、K亚群ALV产生扩增信号,不与其他常见禽类病原发生交叉反应;批内和批间变异系数(CV)均低于1%,表明建立的方法重复性良好;该方法检测100份临床样本共检出A/J阳性样本20份、B/K阳性样本2份,阳性检出率高于常规PCR,且与ELSIA检测结果符合率达100%。综上所述,研究建立的方法具有高灵敏度、高特异性和良好的稳定性,适用于临床样本的快速、精准检测,可为ALV的种群净化和流行病学监测提供可靠的技术支持。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 双重荧光定量pcr taqman探针 AJ/BK亚群
原文传递
鹅星状病毒通用型TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:1
16
作者 陈立功 穆英丽 +5 位作者 张诚 潘保革 范乐乐 魏忠华 王学静 刘聚祥 《中国家禽》 北大核心 2025年第2期53-59,共7页
为建立用于鹅星状病毒1(GAstV 1)和鹅星状病毒2(GAstV 2)感染快速检测的实时荧光定量RT-PCR方法,试验根据部分GAstV ORF2基因和部分3′非编码区序列设计合成特异性引物和探针,采用矩阵法获得引物和探针的最优浓度,在优化退火温度的基础... 为建立用于鹅星状病毒1(GAstV 1)和鹅星状病毒2(GAstV 2)感染快速检测的实时荧光定量RT-PCR方法,试验根据部分GAstV ORF2基因和部分3′非编码区序列设计合成特异性引物和探针,采用矩阵法获得引物和探针的最优浓度,在优化退火温度的基础上,分别建立扩增GAstV 1和GAstV 2的标准曲线,进一步验证该方法的特异性、敏感性和重复性,建立的方法用于临床样品的检测,并与文献报道的常规RT-PCR方法进行比较。结果显示:优化后的反应体系中最优上、下游引物浓度均为0.40(或0.50)μmol/L,探针浓度均为0.50μmol/L,扩增线性范围分别为3.26×10^(3)~3.26×10^(8)拷贝/μL和7.09×10^(3)~7.09×10^(8)拷贝/μL,相关系数均为0.998;该方法可特异性检出两种GAstV,但对新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒、鹅细小病毒和血清4型禽腺病毒6种鹅病相关病毒的核酸均无扩增信号;其检测限分别为3.26×10^(2)拷贝/μL和7.09×10^(1)拷贝/μL;组内变异系数和组间变异系数均低于3%。建立的实时荧光定量RT-PCR方法对临床样品的检测结果显示,GAstV阳性率为90.57%(96/106);而文献报道的常规RT-PCR方法对GAstV 1和GAstV 2的混合阳性率为62.26%。研究表明,建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法为同时检测GAstV 1和GAstV 2提供了快速、敏感、特异且能满足临床样本需求的检测方法。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 荧光定量RT-pcr taqman探针
原文传递
睡眠嗜组织菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用
17
作者 李富祥 高华峰 +1 位作者 赵文华 宋建领 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期706-712,共7页
睡眠嗜组织菌(H.somni)是牛、绵羊和山羊的重要致病菌。目前,国内尚无H.somni荧光定量PCR(qPCR)检测方法,为建立H.somni TaqMan qPCR检测方法,本研究根据H.somni 16S rRNA基因序列设计1对引物和1条TaqMan探针,通过反应体系和反应条件的... 睡眠嗜组织菌(H.somni)是牛、绵羊和山羊的重要致病菌。目前,国内尚无H.somni荧光定量PCR(qPCR)检测方法,为建立H.somni TaqMan qPCR检测方法,本研究根据H.somni 16S rRNA基因序列设计1对引物和1条TaqMan探针,通过反应体系和反应条件的优化,初步建立了H.somni TaqMan qPCR方法。利用建立的方法检测39种牛、绵羊和山羊源的不同细菌,结果显示该方法仅能检测到H.somni,而与溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌和海藻百伯史坦菌等38种细菌均无交叉反应,特异性较强。利用建立的方法检测6.3×10^(5)拷贝/μL~6.3×10^(-1)拷贝/μL的重组质粒标准品pMD-16S,结果显示该方法对其的检测限为6.3拷贝/μL,敏感性较高。以6.3×10^(5)拷贝/μL~6.3×10^(3)拷贝/μL的重组质粒标准品pMD-16S为模板,利用建立的方法进行批内和批间重复性试验,结果显示批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%,重复性较好。利用建立的TaqMan qPCR和文献报道的普通PCR方法同时检测124份患呼吸道疾病牛、山羊和绵羊的肺脏样品和鼻拭子样品,结果显示二者对H.somni的检出率分别为11.29%(14/124)和10.48%(13/124),TaqMan qPCR方法与普通PCR方法的总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为99.19%(123/124)、100%(13/13)和99.10%(110/111),表明该TaqMan qPCR方法的准确性较高。本研究首次在国内建立检测H.somni的qPCR方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性和准确性好,为牛、绵羊和山羊H.somni高通量的快速检测提供新的技术支撑。 展开更多
关键词 睡眠嗜组织菌 taqman荧光定量pcr 绵羊 山羊
在线阅读 下载PDF
兔出血症病毒RHDV1和RHDV2一步法双重TaqMan探针荧光定量RT-PCR体系的建立和应用
18
作者 陈萌萌 王冠萱 +8 位作者 仇汝龙 范志宇 胡波 宋艳华 魏后军 徐为中 葛雷 李一鸣 王芳 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第5期937-942,共6页
兔出血症病毒(RHDV)引起的兔出血症是一种急性、高度致死性传染病,对养兔业造成严重危害。本研究基于RHDV衣壳蛋白(VP60)基因序列设计引物和TaqMan探针,建立可同时检测RHDV1和RHDV2两种毒株的双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测体系。反应体... 兔出血症病毒(RHDV)引起的兔出血症是一种急性、高度致死性传染病,对养兔业造成严重危害。本研究基于RHDV衣壳蛋白(VP60)基因序列设计引物和TaqMan探针,建立可同时检测RHDV1和RHDV2两种毒株的双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测体系。反应体系:2×One Step RT-PCR BufferⅢ10.0μL,上下游引物(10μmol/L)各0.6μL,ROX Reference DyeⅡ(50×)0.4μL,两种荧光探针(10μmol/L)各0.8μL,待测样本2.0μL,ddH_(2)O 4.8μL。反应程序:42℃5 min,95℃10 s,95℃5 s,60℃30 s,40个循环。试验结果表明,该体系特异性强,与轮状病毒、兔多杀性巴氏杆菌、兔支气管败血波氏菌、绿脓杆菌、沙门氏菌无交叉反应;灵敏度高,最低检测限为1μL 100拷贝。通过组内重复和组间重复进行重复性分析,Ct值变异系数为0.2%~2.9%,表明该体系稳定性较好。使用该体系对112份临床样本(60份肝脏组织、52份鼻肛拭子)进行检测,RHDV总检出率为69%,而常规RT-PCR体系的检出率仅为51%。本研究建立的双重荧光定量RT-PCR方法具有高灵敏度、强特异性和良好的重复性,可为RHDV的临床快速诊断及定量分析提供可靠技术支持。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 荧光定量RT-pcr taqman探针
在线阅读 下载PDF
羊肠道病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用
19
作者 马雪青 张雨星 +6 位作者 李平花 王松泰 魏达礼 赵志荀 朵红 卢曾军 孙普 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第6期757-763,共7页
为建立一种灵敏、特异、准确的羊肠道病毒(CEV)实时荧光定量RT-PCR检测方法,本研究基于CEV基因序列的保守区设计特异性引物和探针,并制备标准品,通过优化反应体系和反应条件,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法,同时对其敏感性、... 为建立一种灵敏、特异、准确的羊肠道病毒(CEV)实时荧光定量RT-PCR检测方法,本研究基于CEV基因序列的保守区设计特异性引物和探针,并制备标准品,通过优化反应体系和反应条件,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法,同时对其敏感性、特异性和重复性进行评估,并与常规RT-PCR比较检测临床样品。结果显示,所建方法的标准曲线R2为0.995,拷贝数与Ct值有良好的线性关系;该方法特异性强,与口蹄疫病毒(FMDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊痘病毒(SPV)、羊口疮病毒(ORFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)无交叉反应;敏感性最低检测限为23 copies/μL;组内与组间变异系数均小于2.5%,重复性好。使用本方法检测了598份羊的临床样品,阳性检出率(83/598)高于常规RT-PCR (30/598)。上述结果表明,本研究建立了一种灵敏、特异的CEV TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法,并建议采用羊的粪便或肛拭子即可进行CEV的流调工作,这为CEV的诊断、流行病学调查提供了重要的技术支持。 展开更多
关键词 羊肠道病毒 taqman实时荧光定量RT-pcr 诊断
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 54 下一页 到第
使用帮助 返回顶部