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人源化抗Siglec-9抗体Fab片段的制备及鉴定 被引量:1
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作者 褚萨萨 尤娜 +3 位作者 张馨 杨志国 朱进 汪茂荣 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期877-881,共5页
目的:构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达质粒,表达、纯化此抗体以及特性分析,并初步探讨此抗体的生物学功能。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)分别获得抗体轻链和重链的可变区及恒定区,经重叠延伸PCR连接,酶切后与原核表达载体p ETDU... 目的:构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达质粒,表达、纯化此抗体以及特性分析,并初步探讨此抗体的生物学功能。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)分别获得抗体轻链和重链的可变区及恒定区,经重叠延伸PCR连接,酶切后与原核表达载体p ETDUET-1重组,转入表达感受态Escherichia coli BL21中,通过蛋白纯化系统AKTA和His-trap Lambda Fab纯化。使用SDS-PAGE、ELISA以及Western blot鉴定和分析。采用实时荧光定量PCR初步检测抗Siglec-9抗体Fab段对炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的mRNA表达量的影响。结果:成功获得抗体轻链和重链,构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达系统,经SDS-PAGE、Western blot、ELISA检测证实抗Siglec-9抗体Fab段与Siglec-9抗原特异性结合。抗Siglec-9抗体Fab段可抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的mRNA表达量。结论:人源化抗Siglec-9抗体Fab段进行了原核系统表达、纯化和鉴定,并初步验证可抑制炎性细胞因子的mRNA表达量,为进一步研究该抗体的生物学特性及应用奠定基础。 展开更多
关键词 siglec-9 FAB片段 siglec-9抗体 THP-1细胞 炎性细胞因子
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抗Siglec-9抗体Fab段对LPS诱导的小鼠巨噬细胞炎症反应的作用研究 被引量:1
2
作者 褚萨萨 高峰 +5 位作者 张东辉 付美丽 刘兴 徐成 张乃春 汪茂荣 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期563-567,573,共6页
目的初步探讨抗Siglec-9抗体Fab段在小鼠巨噬细胞上对LPS诱导的炎症反应的作用及其机制。方法将小鼠巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS+Ab组、Ab组,采用实时荧光定量PCR技术检测TNF-α、IFN-β、IL-1、IL-6等炎性细胞因子的mRNA水平;采用E... 目的初步探讨抗Siglec-9抗体Fab段在小鼠巨噬细胞上对LPS诱导的炎症反应的作用及其机制。方法将小鼠巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS+Ab组、Ab组,采用实时荧光定量PCR技术检测TNF-α、IFN-β、IL-1、IL-6等炎性细胞因子的mRNA水平;采用ELISA检测炎性细胞因子的蛋白水平;通过Western blot初步探讨抗Siglec-9抗体Fab段影响炎性细胞因子表达量的作用机制。结果与LPS组相比,抗Siglec-9抗体Fab段抑制炎性细胞因子的mRNA和蛋白水平,降低TLR4信号通路磷酸化水平。结论抗Siglec-9抗体Fab段通过阻断TLR4信号传导通路抑制炎性细胞因子的m RNA和蛋白水平,在感染性疾病中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 siglec-9 siglec-9抗体Fab段 巨噬细胞 炎性细胞因子
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Siglec-9对肿瘤发展的影响及在肿瘤靶向治疗和影像诊断中的应用 被引量:1
3
作者 彭燕 唐奇(综述) 冯振卿(审校) 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2021年第4期429-433,共5页
Siglec-9是免疫抑制性唾液酸结合受体,通常表达于免疫细胞膜表面。在肿瘤微环境中的免疫细胞膜表面以及自身性免疫疾病和感染性疾病免疫细胞膜表面,Siglec-9的表达显著增加,与相应配体结合,调控肿瘤生长和炎症反应,这一特性可使Siglec-... Siglec-9是免疫抑制性唾液酸结合受体,通常表达于免疫细胞膜表面。在肿瘤微环境中的免疫细胞膜表面以及自身性免疫疾病和感染性疾病免疫细胞膜表面,Siglec-9的表达显著增加,与相应配体结合,调控肿瘤生长和炎症反应,这一特性可使Siglec-9成为肿瘤靶向治疗的靶点。文章就Siglec-9的结构和生物学特点以及在肿瘤发展、靶向治疗还有影像诊断中的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 siglec-9 唾液酸 肿瘤微环境 免疫逃逸
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Siglec-9 V型结构域原核表达载体的构建、鉴定和初步表达
4
作者 俞杨 杜同信 +2 位作者 王自正 邬兰 焦杰 《国际检验医学杂志》 CAS 2013年第3期269-270,273,共3页
目的构建重组Siglec-9 V型结构域(Siglec-9-V)原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达,初步摸索其可溶性表达的条件,为进一步研究其生物学意义奠定基础。方法合成Siglec-9-V的cDNA序列;通过PCR和TA克隆,构建重组表达载体pET-His6-SUMO-Sig... 目的构建重组Siglec-9 V型结构域(Siglec-9-V)原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达,初步摸索其可溶性表达的条件,为进一步研究其生物学意义奠定基础。方法合成Siglec-9-V的cDNA序列;通过PCR和TA克隆,构建重组表达载体pET-His6-SUMO-Siglec-9-V,利用酶切和DNA测序鉴定插入序列;将重组细菌用IPTG诱导表达,利用His6标签蛋白特异性染料鉴定蛋白质;通过尝试不同的诱导表达温度,摸索Siglec-9-V可溶性表达的条件。结果证实重组表达载体pET-His6-SUMO-Siglec-9-V构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约为29×103,证实为目的蛋白,在24℃时经IPTG诱导,能够实现可溶性表达。结论成功构建了重组表达载体pET-His6-SUMO-Siglec-9-V,实现Siglec-9-V的可溶性表达。 展开更多
关键词 蛋白表达 siglec-9 V型结构域 重组载体
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18种中药多糖与Siglec-9的亲和力测试及其抗炎作用研究 被引量:6
5
作者 刘瑶瑶 刘娟娟 +3 位作者 秦怡玉 李瑾 刘红梅 贾乙 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期410-418,共9页
目的比较18种中药多糖与唾液酸特异性Ig样凝集素-9(sialic-acid-binding immunoglobulin-like lectin,Siglec-9)的亲和力以及抗炎能力,探讨中药多糖发挥抗炎作用的新机制。方法选择18种不同药性的中药用水提醇沉法提取多糖,苯酚硫酸法... 目的比较18种中药多糖与唾液酸特异性Ig样凝集素-9(sialic-acid-binding immunoglobulin-like lectin,Siglec-9)的亲和力以及抗炎能力,探讨中药多糖发挥抗炎作用的新机制。方法选择18种不同药性的中药用水提醇沉法提取多糖,苯酚硫酸法检测多糖含量,高效液相色谱法检测多糖的单糖组成,红外光谱法检测中药多糖结构。通过竞争性ELISA法检测多糖与Siglec-9的亲和力,并研究中药多糖对LPS诱导巨噬细胞炎症反应以及R848诱导中性粒细胞NETosis的影响,利用髓系细胞特异性敲除Siglec-E(Lyz2-cre:Siglec-E flox/flox)小鼠来源的原代巨噬细胞和腹腔中性粒细胞进一步明确多糖结合Siglec-9产生抗炎作用的机制。结果中药多糖的糖含量均在55%以上,主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等组成,但单糖构成比各不相同。红外光谱检测4种代表性中药多糖均有典型的多糖吸收峰,柴胡和蒲公英多糖具有葡萄糖醛酸结构。枸杞和黄芪多糖与Siglec-9的亲和力,对LPS诱导的巨噬细胞炎症反应和R848诱导的中性粒细胞NETosis反应无显著抑制作用。柴胡和蒲公英多糖与Siglec-9亲和力较强(P<0.01),能够显著抑制上述炎症反应,但其抗炎作用在髓系细胞特异性敲除Siglec-E基因小鼠来源的巨噬细胞和中性粒细胞中消失。结论中药多糖与Siglec-9的亲和力有潜力成为研究中药抗炎作用的新的现代药理学机制。 展开更多
关键词 中药多糖 siglec-9 抗炎 NETosis
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缺氧下调血小板表面Siglec-9聚糖配体导致血小板功能异常活化 被引量:2
6
作者 摄渊婷 曾东风 +2 位作者 刘红梅 吴妮婷 贾乙 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期541-548,共8页
目的探讨血小板表面Siglec-9聚糖配体表达水平在缺氧条件下的变化及其对血小板活化功能的影响。方法鉴定血小板表面表达的Siglec-9/E聚糖配体,并加入唾液酸酶处理血小板,分为对照组和唾液酸酶组;对24只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠和血小板... 目的探讨血小板表面Siglec-9聚糖配体表达水平在缺氧条件下的变化及其对血小板活化功能的影响。方法鉴定血小板表面表达的Siglec-9/E聚糖配体,并加入唾液酸酶处理血小板,分为对照组和唾液酸酶组;对24只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠和血小板进行缺氧处理,分为对照3 d组、缺氧3 d组、对照7 d组和缺氧7 d组(n=6);将健康志愿者全血分离提取血小板放置于缺氧箱,分为对照组、缺氧48 h组、唾液酸神经节甘脂(Ganglioside GT1b,GT1b)组和奥司他韦组(n=3)。采用流式细胞术检测血小板上Siglec-9/E配体、神经氨酸酶1(Neuraminidase-1)等表达,以及二磷酸腺苷(ADP)、胶原和凝血酶刺激后血小板活化标记物CD62p的表达水平;利用髓系细胞条件性6只6~8周龄雄性Siglec-E基因敲除小鼠(Lyz2-cre:Siglec-E^(flox/flox))血小板验证Siglec-E对血小板活化的抑制作用。结果相对分子质量约为130×10^(3)的Siglec-9/E配体在血小板表面广泛表达且具有唾液酸末端的聚糖结构;与对照7 d组相比,缺氧7 d组小鼠外周血血小板上该配体表达显著降低18.03%(P<0.05),CD62p表达在ADP、胶原和凝血酶刺激下显著增高(P<0.01),缺氧48 h组培养的血小板上该聚糖配体出现了相同改变(P<0.01);与野生型比较,敲基因小鼠血小板在ADP、胶原和凝血酶刺激下CD62p水平显著增高(P<0.01);Siglec-9/E特异性配体GT1b处理能够逆转缺氧导致的血小板异常活化(P<0.05);神经氨酸酶抑制剂能够阻断缺氧导致的Siglec-9配体表达降低(P<0.05)。结论缺氧激活NEU1降低Siglec-9/E聚糖配体表达,减弱了Siglec-9/E途径抑制血小板活化的能力,导致血小板功能异常活化。 展开更多
关键词 缺氧 血小板 siglec-9 聚糖配体 神经氨酸酶-1
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负性免疫分子Siglec-9在肺结核中的变化特点
7
作者 何月月 朱玥洁 +6 位作者 殷郑伟 史娟 商凯钰 田婷婷 史绘东 丁剑冰 张峰波 《免疫学杂志》 CAS CSCD 2024年第6期526-532,共7页
目的初步了解新型负性分子Siglec-9在肺结核中的变化特点和作用。方法利用R语言对GSE83456芯片数据进行生物信息学分析。纳入确诊肺结核(PTB)患者48例,健康对照组46例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外周血单个核细胞(PBMC)Siglec-9 ... 目的初步了解新型负性分子Siglec-9在肺结核中的变化特点和作用。方法利用R语言对GSE83456芯片数据进行生物信息学分析。纳入确诊肺结核(PTB)患者48例,健康对照组46例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外周血单个核细胞(PBMC)Siglec-9 mRNA表达量;采用流式细胞术检测Siglec-9^(+)CD4^(+)T细胞比例;采用CBA法检测TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-4水平;分析Siglec-9^(+)CD4^(+)T细胞比例与TNF-α等细胞因子水平相关性。结果生物信息学分析显示Siglec-9在PTB患者中明显升高(P<0.001),与TNF-α/NF-κB、IL-6/JAK/STATA3、PI3K/AKT/mTOR信号通路相关;实验结果显示Siglec-9^(+)CD4^(+)T细胞比例在PTB患者中明显升高(P<0.001)且与TNF-α等细胞因子水平均呈负相关。结论在PTB患者中,Siglec-9mRNA和Siglec-9^(+)CD4^(+)T细胞水平升高,可能介导对CD4^(+)T细胞的抑制作用,参与PTB的发生和发展。 展开更多
关键词 siglec-9 肺结核 CD4^(+)T细胞 生物信息学 负性免疫调控
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调节NK细胞抗肿瘤能力的新靶点:Siglec-7和Siglec-9 被引量:2
8
作者 朱武 刘香 王芙艳 《肿瘤药学》 CAS 2022年第4期447-454,共8页
自然杀伤(NK)细胞是重要的固有免疫细胞,能直接杀伤病原体感染的靶细胞和肿瘤细胞。逃避NK细胞介导的免疫监视对于肿瘤细胞的生存和转移至关重要。唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素(Siglec)是参与肿瘤免疫逃逸的新型免疫检查点分子,而NK细... 自然杀伤(NK)细胞是重要的固有免疫细胞,能直接杀伤病原体感染的靶细胞和肿瘤细胞。逃避NK细胞介导的免疫监视对于肿瘤细胞的生存和转移至关重要。唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素(Siglec)是参与肿瘤免疫逃逸的新型免疫检查点分子,而NK细胞可表达两种Siglecs,即Siglec-7和Siglec-9。肿瘤细胞表面丰富的唾液酸与NK细胞表面的Siglec-7和Siglec-9相互作用,向NK细胞传导抑制信号来抑制NK细胞的激活,从而逃避NK细胞的杀伤作用。因此,靶向Siglec-7和Siglec-9受体可能是一种促进NK细胞杀伤肿瘤细胞的新型治疗方法。本文综述了Siglec-7和Siglec-9调控NK细胞抗肿瘤能力的研究进展。 展开更多
关键词 NK细胞 siglec-7 siglec-9 免疫检查点 肿瘤
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半乳糖上调内皮细胞Siglec-9聚糖配体水平抑制巨噬细胞活性
9
作者 吴妮婷 摄渊婷 +2 位作者 刘红梅 李瑾 贾乙 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第13期1502-1511,共10页
目的探究半乳糖对人原代肺动脉内皮细胞上唾液酸特异性Ig样凝集素-9(sialic-acid-binding immunoglobulin-like lectin 9,Siglec-9)聚糖配体表达的影响及作用机制。方法采用流式细胞术确定内皮细胞表面Siglec-9聚糖配体的表达并鉴定该... 目的探究半乳糖对人原代肺动脉内皮细胞上唾液酸特异性Ig样凝集素-9(sialic-acid-binding immunoglobulin-like lectin 9,Siglec-9)聚糖配体表达的影响及作用机制。方法采用流式细胞术确定内皮细胞表面Siglec-9聚糖配体的表达并鉴定该聚糖配体末端糖苷键类型;分别用左旋葡萄糖、葡萄糖、N-乙酰基葡萄糖、甘露糖、N-乙酰基甘露糖、半乳糖、唾液酸、蔗糖处理内皮细胞48 h,采用流式细胞术检测内皮细胞Siglec-9聚糖配体的表达;将内皮细胞分为对照组和半乳糖组(n=3),Western blot、流式细胞术、免疫荧光分析半乳糖对内皮细胞Siglec-9聚糖配体表达的影响;α2-3,6,8唾液酸酶处理内皮细胞后,Western blot检测半乳糖对内皮细胞Siglec-9聚糖配体恢复时间的影响;半乳糖处理内皮细胞后,Western blot检测分析细胞内唾液酸合成关键酶(GNE、NANS、NANP、CMAS、NPL以及ST3Gals)表达水平,并用RT-qPCR验证相关蛋白的mRNA表达;siRNA敲低NANP、CMAS及ST3Gal-Ⅲ,Western blot检测内皮细胞Siglec-9聚糖配体水平变化;巨噬细胞与内皮细胞共培养实验分析Siglec-9聚糖配体的增加对巨噬细胞的凋亡与吞噬能力的影响。结果内皮细胞上表达有Siglec-9聚糖配体且该配体为末端结构为α2-3连接的唾液酸糖蛋白;与对照组比较,半乳糖组内皮细胞上该聚糖配体表达水平显著增加(P<0.01),但半乳糖的添加对该配体的自我恢复时间无影响;与对照组比较,半乳糖处理的内皮细胞中NANP、CMAS、ST3Gal-Ⅲ表达水平升高(P<0.05,P<0.01),且RT-qPCR验证结果与其一致;抑制内皮细胞中NANP、CMAS、ST3Gal-Ⅲ的表达后,内皮细胞Siglec-9聚糖配体水平下降(P<0.01)。共培养实验中,与未处理组比较,半乳糖处理的内皮细胞促进巨噬细胞凋亡增加(P<0.01),并导致其吞噬能力减弱(P<0.05)。结论半乳糖通过NANP-CMAS-ST3Gal-Ⅲ通路上调内皮细胞上Siglec-9聚糖配体水平,从而抑制巨噬细胞活性。 展开更多
关键词 半乳糖 内皮细胞 唾液酸特异性Ig样凝集素-9聚糖配体 唾液酸合成关键酶 巨噬细胞
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泛癌Siglec-9表达的预后意义及其与肿瘤微环境关系的可视化分析
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作者 王汉宇 谭玉林 +1 位作者 邱美琪 廖斐 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2022年第6期940-946,共7页
目的:探讨Siglec⁃9在泛癌中的表达、预后价值、免疫功能及肿瘤进展中扮演的角色。方法:本研究从多个数据库收集转录组、预后及免疫相关信息,可视化分析Siglec⁃9与预后、肿瘤突变负荷(TMB)、微卫星不稳定性(MSI)及肿瘤微环境(TME)的相关... 目的:探讨Siglec⁃9在泛癌中的表达、预后价值、免疫功能及肿瘤进展中扮演的角色。方法:本研究从多个数据库收集转录组、预后及免疫相关信息,可视化分析Siglec⁃9与预后、肿瘤突变负荷(TMB)、微卫星不稳定性(MSI)及肿瘤微环境(TME)的相关性,并进行免疫基因共表达和基因富集分析。结果:Siglec⁃9在大多数肿瘤和癌旁正常组织间有显著的差异表达,并与多种癌症的预后相关。此外,Siglec⁃9还与多种肿瘤的TMB、MSI、TME评分及肿瘤浸润免疫细胞(TIIC)显著相关。基因共表达分析表明Siglec⁃9与多种常见的免疫基因相关,进一步的基因富集分析揭示了Siglec⁃9参与多种免疫相关通路。结论:Siglec⁃9可影响多种癌症的TMB、MSI、TME和TIIC,可作为潜在的癌症预后指标。 展开更多
关键词 Siglec⁃9 泛癌 预后 肿瘤微环境 免疫浸润 可视化分析
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肿瘤固有免疫的新靶点:唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素(Siglec)-7/9 被引量:1
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作者 陈子 柏芳芳 +2 位作者 黄茂 朱进 周林福 《中华临床医师杂志(电子版)》 CAS 2016年第9期103-107,共5页
固有免疫参与形成抗肿瘤的第一道防线,并在肿瘤免疫过程中发挥重要作用。但是,固有免疫非但不能清除肿瘤细胞,反而会引起抑癌作用下降,甚至转变成促进肿瘤生长的帮凶,具体机制尚无定论。近年来研究发现,唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素(... 固有免疫参与形成抗肿瘤的第一道防线,并在肿瘤免疫过程中发挥重要作用。但是,固有免疫非但不能清除肿瘤细胞,反而会引起抑癌作用下降,甚至转变成促进肿瘤生长的帮凶,具体机制尚无定论。近年来研究发现,唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin,Siglec)-7/9参与调节肿瘤固有免疫,可能是未来肿瘤患者免疫治疗的新靶点。本文将就肿瘤免疫编辑学说、固有免疫细胞与肿瘤免疫的联系以及Siglec-7/9在肿瘤免疫中的作用作一综述。 展开更多
关键词 肿瘤免疫编辑 siglec-7/9 杀伤细胞 天然 吞噬细胞
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Sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin 9 as a potential therapeutic target for chronic obstructive pulmonary disease 被引量:6
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作者 Zi Chen Shuang-Lan Xu +4 位作者 Lin-Yang Ge Jin Zhu Tao Zheng Zhou Zhu Linfu Zhou 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2021年第7期757-764,共8页
Chronic obstructive pulmonary disease(COPD)has become the third-leading cause of death worldwide,which is a severe economic burden to the healthcare system.Chronic bronchitis is the most common condition that contribu... Chronic obstructive pulmonary disease(COPD)has become the third-leading cause of death worldwide,which is a severe economic burden to the healthcare system.Chronic bronchitis is the most common condition that contributes to COPD,both locally and systemically.Neutrophilic inflammation predominates in the COPD airway wall and lumen.Logically,repression of neutrophilia is an essential fashion to COPD treatment.However,currently available anti-neutrophilic therapies provide little benefit in COPD patients and may have serious side effects.Thus,there is an urgent need to explore an effective and safe anti-neutrophilic approach that might delay progression of the disease.Sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin(Siglec)-9 is a member of the Siglec cell surface immunoglobulin family.It is noteworthy that Siglec-9 is highly expressed on human neutrophils and monocytes.Ligation of Siglec-9 by chemical compounds or synthetic ligands induced apoptosis and autophagic-like cell death in human neutrophils.Furthermore,administration of antibody to Siglec-E,mouse functional ortholog of Siglec-9,restrained recruitment and activation of neutrophils in mouse models of airway inflammation in vivo.Given the critical role that neutrophils play in chronic bronchitis and emphysema,targeting Siglec-9 could be beneficial for the treatment of COPD,asthma,fibrosis,and related chronic inflammatory lung diseases. 展开更多
关键词 Sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin-9(siglec-9) siglec-E Neutrophils Chronic obstructive pulmonary disease
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