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稳定表达T7RNA聚合酶IBRS-2细胞系的建立以及利用该细胞系对SVDV的体内拯救 被引量:7
1
作者 郑海学 田宏 +4 位作者 靳野 吴锦艳 尚佑军 刘湘涛 谢庆阁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第4期449-456,共8页
利用PCR从!溶原性细菌DE3中扩增出T7RNA聚合酶基因,定向克隆进逆转录病毒载体pBABEpuro,得到阳性重组质粒pT7BABEpuro.把该重组质粒与pVSV-G共感染GP2-293包装细胞系,形成假型病毒.通过polybrene介导假型病毒感染IBRS-2细胞,利用嘌呤霉... 利用PCR从!溶原性细菌DE3中扩增出T7RNA聚合酶基因,定向克隆进逆转录病毒载体pBABEpuro,得到阳性重组质粒pT7BABEpuro.把该重组质粒与pVSV-G共感染GP2-293包装细胞系,形成假型病毒.通过polybrene介导假型病毒感染IBRS-2细胞,利用嘌呤霉素进行传代筛选,形成细胞系IBRST7.对不同代次的IBRST7细胞基因组进行PCR和RT-PCR鉴定,结果表明,T7RNA聚合酶基因在细胞传代过程中能稳定存在,并能表达目的蛋白的mRNA.为了鉴定T7RNA聚合酶在IBRST7细胞内是否具有转录活性,扩增口蹄疫病毒(FMDV)的内部核糖体进入位点(IRES)片段和EGFP基因,定向克隆于原核表达载体pET-43.1a-c(+)中,构建了T7启动子控制下转录的具有非帽依赖性表达的重组质粒pIERS-EGFP-ET,把该质粒转染IBRST7细胞,能够在紫外显微镜下观察到绿色荧光,说明EGFP得到了表达,表明IBRST7细胞系内的T7RNA聚合酶具有转录活性.然后,利用该细胞系成功拯救出具有感染性的猪水泡病病毒(SVDV),并对其生物学功能进行了鉴定.该细胞系的建立为利用T7RNA聚合酶转录系统体内高效拯救病毒提供了基础.该拯救病毒的策略使RNA拯救简化为一步快速的拯救方法,为进一步探索SVDV病毒致病的分子机制及研制新型SVD疫苗奠定了良好的基础. 展开更多
关键词 T7RNA聚合酶 IBRST7细胞系 假型病毒 svdv 病毒拯救 逆转录病毒载体 感染性克隆
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^(35)S—甲硫氨酸标记诱导SVDV蛋白和CB_5蛋白条件的研究 被引量:1
2
作者 薛景山 赵启祖 +2 位作者 何建新 李德珍 李树春 《中国兽医科技》 CSCD 1993年第9期3-4,共2页
本文探讨了应用^(35)S-甲硫氨酸对SVDV和CB_5这两个相关病毒体内标记的条件,并对病毒不同感染时间和不同标记时间进行了对比。结果表明病毒感染时间是标记成功的最重要因素,相比之下标记时间并不重要。病毒感染与标记也可以同时进行。... 本文探讨了应用^(35)S-甲硫氨酸对SVDV和CB_5这两个相关病毒体内标记的条件,并对病毒不同感染时间和不同标记时间进行了对比。结果表明病毒感染时间是标记成功的最重要因素,相比之下标记时间并不重要。病毒感染与标记也可以同时进行。标记液至少可以反复使用3次。 展开更多
关键词 svdv CB5 多肽 甲硫氨酸
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ICP-AES结合SVDV技术应用于饮用水品质检测性能诊断 被引量:1
3
作者 陈华舟 许丽莉 +3 位作者 蔡肯 刘振尧 陈安 梁园媛 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1558-1562,共5页
采用电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)技术,通过轴向、径向、同步垂直双向(SVDV)三个视角配置,快速检测生活饮用水样本中的As,Ba,Mg和Ni等微量元素。ICP-AES光谱仪在三个检测视角均能实现快速预热,预热时间仅需2min,而且,ICP-AES... 采用电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)技术,通过轴向、径向、同步垂直双向(SVDV)三个视角配置,快速检测生活饮用水样本中的As,Ba,Mg和Ni等微量元素。ICP-AES光谱仪在三个检测视角均能实现快速预热,预热时间仅需2min,而且,ICP-AES光谱的短期稳定性和长期稳定性表现良好,其相对标准偏差(RSD)均低于2%。以3份商业瓶装饮用水和2份添加标准物的饮用水为检测的对象,利用ICP-AES技术结合SVDV视角,分别从轴向和SVDV两个视角检测As,Ba,Cr,Cu,Mn,Mo,Ni,V和Zn等元素,利用水微量元素含量的国家标准来验证结果的准确性,这两个视角的检测具有较高的准确度和灵敏度。检测所得结果符合国家环境保护总局发布的饮用水微量元素限制标准,并符合国际卫生组织的标准,满足人类所需饮用水标准要求。 展开更多
关键词 ICP-AES 同步垂直双向观测 水品质分析 性能诊断
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用不同方法检测猪SVDV感染
4
作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 2000年第9期11-11,共1页
波兰研究人员研究了从5头试验感染猪所采临床样品和组织样品中猪水疱病病毒(SVDV)的持续时间。从3头未感染猪取阴性样品。从水疱、鼻拭子、血液、粪便和其他器官收集上皮组织样品检测感染性SVDV颗粒、基因组和抗原。
关键词 不同方法 svdv 病毒RNA 诊断试验 鼻拭子 试验感染 临床样品 感染持续时间 感染性 样品检测
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应用两种新的单克隆抗体ELISA方法检测SVDV抗体
5
作者 朱其太 《畜牧兽医科技信息》 1996年第9期5-5,共1页
1995年意大利学者Brocchi等建立两种新的ELISA方法,来检测猪水泡病病毒(SVDV)抗体。一种是单克隆抗体竞争ELISA(MAC—ELISA),用于检测血清中能中和单克隆抗体(M_cA_b)的特异性抗体;另一种是使用表型特异性M_cA_b的直接捕获ELISA,来检测S... 1995年意大利学者Brocchi等建立两种新的ELISA方法,来检测猪水泡病病毒(SVDV)抗体。一种是单克隆抗体竞争ELISA(MAC—ELISA),用于检测血清中能中和单克隆抗体(M_cA_b)的特异性抗体;另一种是使用表型特异性M_cA_b的直接捕获ELISA,来检测SVDV特异性IgG或IgM。试验共用5671份野外血清来评价MAC—ELISA的敏感性和特异性。 展开更多
关键词 中和单克隆抗体 ELISA方法 竞争ELISA 猪水泡病病毒 svdv 捕获ELISA 敏感性和特异性 特异性IGG 特异性抗体 病毒中和试验
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口蹄疫、塞内卡和猪水疱病病毒三重荧光RT-qPCR检测方法的建立与应用
6
作者 李歌 孙雨 +3 位作者 李琦 孙英健 王睿男 翟新验 《中国兽医卫生》 2025年第4期13-22,共10页
通过分析口蹄疫病毒(FMDV)、塞内卡病毒(SVA)和猪水疱病病毒(SVDV)的基因保守区设计特异性引物与TaqMan探针,系统优化反应体系参数后成功建立三重荧光RT-qPCR检测方法,同时建立标准曲线并对方法的特异性、敏感性及重复性进行综合评价。... 通过分析口蹄疫病毒(FMDV)、塞内卡病毒(SVA)和猪水疱病病毒(SVDV)的基因保守区设计特异性引物与TaqMan探针,系统优化反应体系参数后成功建立三重荧光RT-qPCR检测方法,同时建立标准曲线并对方法的特异性、敏感性及重复性进行综合评价。结果显示:该方法对三种病毒的最低检测限均达1.0×10^(1)copies/μL,仅对目标病毒产生特异性扩增,与其他常见猪病原体无交叉反应;批内和批间变异系数均低于5%,表现出良好的重复性。临床样本验证表明该方法的检测效率与准确性优于常规检测方法,可为猪群中FMDV、SVA和SVDV的鉴别诊断及疫情防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 塞内卡病毒 猪水疱病病毒 三重荧光定量RT-qPCR
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猪水疱病自杀性DNA疫苗的初步研究 被引量:2
7
作者 孙世琪 郭慧琛 +6 位作者 尹双辉 冯霞 尚佑军 代兴国 刘在新 刘湘涛 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1016-1020,共5页
利用RT-PCR技术,用保真酶扩增获得猪水疱病病毒外壳蛋白1BCD基因,克隆于DNA复制子载体pSCA1中,获得重组质粒pSCA/1BCD。将重组质粒转染BHK-21细胞,RT-PCR法和间接免疫荧光法检测显示,猪水疱病病毒外壳蛋白基因在转染细胞中表达。豚鼠免... 利用RT-PCR技术,用保真酶扩增获得猪水疱病病毒外壳蛋白1BCD基因,克隆于DNA复制子载体pSCA1中,获得重组质粒pSCA/1BCD。将重组质粒转染BHK-21细胞,RT-PCR法和间接免疫荧光法检测显示,猪水疱病病毒外壳蛋白基因在转染细胞中表达。豚鼠免疫试验表明,自杀性DNA疫苗pSCA/1BCD可诱导SVDV特异性抗体和T淋巴细胞增殖。 展开更多
关键词 猪水疱病病毒(svdv) 甲病毒复制子载体 自杀性DNA疫苗
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猪水泡病病毒5’和3’非编码区一级和二级结构分析
8
作者 冶贵生 张彦明 +4 位作者 刘湘涛 洪海霞 张永国 张淼涛 胡建和 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期343-346,共4页
应用RT-PCR技术,用特异性引物扩增出SVDV HK’70 5’和3’非编码区,并将目的片段连接于pMD18-T载体,转化JM109感受态细胞。重组质粒经双酶切、PCR鉴定后测序。核苷酸序列比较结果表明,SVDV HK’70 5’非编码区与参考毒株SVDV J1’73、SV... 应用RT-PCR技术,用特异性引物扩增出SVDV HK’70 5’和3’非编码区,并将目的片段连接于pMD18-T载体,转化JM109感受态细胞。重组质粒经双酶切、PCR鉴定后测序。核苷酸序列比较结果表明,SVDV HK’70 5’非编码区与参考毒株SVDV J1’73、SVDV H/3’76核苷酸的差异率分别为1.6%、1.9%;SVDV HK’70 3-NCR与参考毒株SVDV J1’73、SVDV H/3’76核苷酸的差异率分别为1.0%、1.0%。应用计算机软件对3个SVDV毒株非编码区的二级结构进行预测,结果表明,SVDV HK’70 5’非编码IX-"级结构中存在13个结构域,SVDV J1’73 5’非编码区二级结构中存在9个结构域,SVDV H/3’76 5’非编码区二级结构中存在10个结构域;SVDV HK’70 3’非编码区二级结构中存在3个结构域,且与其他的两个毒株SVDV J1’73、SVDV H/3’76基本相同。 展开更多
关键词 svdv HK’70 5’非编码区 3’非编码区 同源性 二级结构
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猪口蹄疫和水泡病病毒免疫鉴别诊断方法的比较研究 被引量:9
9
作者 何永强 杜青云 +2 位作者 盛祖恬 孙理云 何秉耀 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第3期228-230,共3页
通过单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验(McAbDotELISA)和反向间接血凝试验(RIHA)分别对猪口蹄疫病毒(FMDV)和水泡病病毒(SVDV)检测比较。试验表明,McAbDotELISA特异性强,快速简便... 通过单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验(McAbDotELISA)和反向间接血凝试验(RIHA)分别对猪口蹄疫病毒(FMDV)和水泡病病毒(SVDV)检测比较。试验表明,McAbDotELISA特异性强,快速简便,比RIHA更为敏感、稳定、直观。本研究在猪口蹄疫和水泡病单抗联合诊断药盒的研制方面是一个有益的尝试。 展开更多
关键词 猪口蹄疫病毒 水泡病病毒 免疫鉴别 诊断
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多重RT-PCR检测猪口蹄疫病毒、猪水泡病病毒和猪水疱性口炎病毒的研究 被引量:7
10
作者 祁会彩 龚振华 +6 位作者 杨增岐 郑增忍 潘康锁 李葳 黄秀梅 郭福生 蒋正军 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第3期24-26,共3页
建立了一种同时检测猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪水泡病病毒(SVDV)和猪水疱性口炎病毒(VSV)三种病原体的多重RT-PCR方法。参照文献报道的基因序列,设计合成了三对特异性引物;PCR扩增条件进行优化后,用这三对引物对同一样品中的FMDV、SVDV、VS... 建立了一种同时检测猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪水泡病病毒(SVDV)和猪水疱性口炎病毒(VSV)三种病原体的多重RT-PCR方法。参照文献报道的基因序列,设计合成了三对特异性引物;PCR扩增条件进行优化后,用这三对引物对同一样品中的FMDV、SVDV、VSVRNA模板进行扩增,结果同时得到了三条特异性条带,大小与试验设计相符:FMDV(208bp)、SVDV(862bp)、VSV(638bp),且对猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)核酸扩增结果为阴性;三种病毒RNA模板检出的最小量均为10fg。试验证明,此方法经济、快速、敏感、特异,可用于FMDV、SVDV和VSV这三种猪水泡性疾病的鉴别诊断及流行病学调查。 展开更多
关键词 多重PCR 猪口蹄疫病毒 猪水泡病病毒 猪水疱性口炎病毒
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稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立 被引量:2
11
作者 田宏 吴锦艳 +5 位作者 龚真莉 郑海学 孙世琪 尚佑军 刘湘涛 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期478-482,共5页
从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒... 从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性。 展开更多
关键词 猪水疱病病毒P1基因 重组逆转录病毒载体 PK-15细胞 基因表达
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猪水泡病病毒VP2基因抗原区在大肠杆菌中的表达
12
作者 冶贵生 刘湘涛 +4 位作者 张彦明 马玉花 张淼涛 洪海霞 韩雪清 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期593-595,共3页
利用RT_PCR技术 ,以SVDVHK’70为材料 ,扩增出VP2基因抗原区。将目的基因的PCR扩增产物直接进行双酶切 ,然后将酶切产物与酶切后的表达载体pGEX 4T_1进行连接 ,转化BL2 1菌体并提质粒 ,经酶切、PCR鉴定为阳性的重组质粒命名为pGEX_VP2 ... 利用RT_PCR技术 ,以SVDVHK’70为材料 ,扩增出VP2基因抗原区。将目的基因的PCR扩增产物直接进行双酶切 ,然后将酶切产物与酶切后的表达载体pGEX 4T_1进行连接 ,转化BL2 1菌体并提质粒 ,经酶切、PCR鉴定为阳性的重组质粒命名为pGEX_VP2 ,并测序。测序结果表明 ,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确 ,表达载体构建成功。将含有阳性质粒的BL2 1菌液经IPTG诱导后进行SDS_PAGE分析 ,出现预期的目的蛋白条带 ,此目的蛋白经Westernblot检测确定其有免疫活性。 展开更多
关键词 svdv HK’70 VP2基因抗原区 pGEX—VP2 SDS—PAGE WESTERN BLOT
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猪水疱病病毒外壳蛋白的二级结构和抗原表位预测 被引量:1
13
作者 孙世琪 刘湘涛 +4 位作者 郭慧琛 尹双辉 刘在新 马军武 谢庆阁 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期1-6,共6页
以SVDV外壳蛋白基因序列为基础,采用Chou-Fasman法、Garnier-Robson法和KarplusSchulz法预测蛋白质的二级结构。按KyteDoolittle方案、Emini方案和JamesonWolf方案预测SVDV外壳蛋白的B细胞表位。预测结果表明,SVDV外壳蛋白的二级结构较... 以SVDV外壳蛋白基因序列为基础,采用Chou-Fasman法、Garnier-Robson法和KarplusSchulz法预测蛋白质的二级结构。按KyteDoolittle方案、Emini方案和JamesonWolf方案预测SVDV外壳蛋白的B细胞表位。预测结果表明,SVDV外壳蛋白的二级结构较为复杂,含有较多的转角和无规则卷曲等柔性区域以及α螺旋和β折叠区段;SVDV外壳蛋白的VP1、VP2和VP3上均有多个区域为B细胞优势表位,其中VP1蛋白的B细胞表位优势区域比VP2和VP3蛋白的多,与已鉴定的B细胞表位相比较,该方法预测的结果有较高的准确度。为实验确定SVDV外壳蛋白的B细胞表位和反向疫苗学设计提供了理论基础。 展开更多
关键词 猪水疱病病毒 外壳蛋白 二级结构 B细胞表位
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猪水疱病病毒研究进展 被引量:2
14
作者 成连贵 田相军 司有阁 《动物医学进展》 CSCD 2005年第8期30-33,共4页
猪水疱病是猪的一种急性传染病,与口蹄疫和水疱性口炎等水疱类疫病具有同等的重要性,被世界动物卫生组织(OIE)列为A类疾病。文章主要介绍了本病病原近年来在分子生物学方面的研究概况,主要包括RNA基因组的结构和功能的研究、结构蛋白功... 猪水疱病是猪的一种急性传染病,与口蹄疫和水疱性口炎等水疱类疫病具有同等的重要性,被世界动物卫生组织(OIE)列为A类疾病。文章主要介绍了本病病原近年来在分子生物学方面的研究概况,主要包括RNA基因组的结构和功能的研究、结构蛋白功能的新发现、抗原结构的研究、病毒的诊断研究以及与柯萨奇病毒B5的关系等方面的研究现状。 展开更多
关键词 猪水疱病 猪水疱病病毒 结构蛋白 抗原 诊断
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使用Agilent 5100同步垂直双向观测ICP-OES按照US EPA 200.7方法对水中痕量元素进行超快速测定 被引量:1
15
作者 John Cauduro Andrew Ryan 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期593-595,共3页
采用Agilent 5100同步垂直双向观测(SVDV)ICP-OES结合SPS 3自动进样器和SVS 2+高效率切换阀系统,遵循EPA 200.7方法针对饮用水中的26种元素进行检测,可获得低至μg·L-1(ppb)的出色方法检测限,回收率在90%—110%之间,12 h的方法长... 采用Agilent 5100同步垂直双向观测(SVDV)ICP-OES结合SPS 3自动进样器和SVS 2+高效率切换阀系统,遵循EPA 200.7方法针对饮用水中的26种元素进行检测,可获得低至μg·L-1(ppb)的出色方法检测限,回收率在90%—110%之间,12 h的方法长期稳定性低于1.3%RSD,只需一次运行即可分析所有元素,该仪器的样品测定时间降至58 s,每个样品的氩气消耗量降低了50%. 展开更多
关键词 AGILENT 5100 svdv ICP-OES EPA 200.7 饮用水 CRM:标准参考物质
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猪水疱病重组蛋白P1的豚鼠免疫试验
16
作者 田宏 吴锦艳 +4 位作者 尚佑军 郑海学 孙世琪 刘湘涛 谢庆阁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期626-629,共4页
目的:研究重组猪水疱病病毒(SVDV)P1蛋白的免疫活性。方法:将自制的猪水疱病抗原经佐剂乳化免疫豚鼠,并应用T淋巴细胞增殖试验、阻断ELISA及微量细胞中和试验检测了所制备的免疫原免疫豚鼠后在体液免疫和细胞免疫方面进行了全面的评价... 目的:研究重组猪水疱病病毒(SVDV)P1蛋白的免疫活性。方法:将自制的猪水疱病抗原经佐剂乳化免疫豚鼠,并应用T淋巴细胞增殖试验、阻断ELISA及微量细胞中和试验检测了所制备的免疫原免疫豚鼠后在体液免疫和细胞免疫方面进行了全面的评价。结果:前期制备的抗原免疫豚鼠后具有良好的免疫原性。结论:对该亚单位疫苗可做进一步的开发应用。 展开更多
关键词 猪水疱病病毒 亚单位疫苗 豚鼠 免疫试验
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猪水泡病病毒结构蛋白编码区核苷酸的序列测定与分析
17
作者 冶贵生 刘湘涛 +4 位作者 张彦明 马玉花 张淼涛 韩雪清 张永国 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第3期3-8,共6页
以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出P1区的 2个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经重组质粒的双酶切 ,PCR鉴定后测序。序列分析表明 ,HK’70P1区核苷酸组成... 以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出P1区的 2个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经重组质粒的双酶切 ,PCR鉴定后测序。序列分析表明 ,HK’70P1区核苷酸组成中A含量较高 ,G +C含量较低 ,且A G、C T转换率较高。P1序列同源性分析表明 ,SVDVHK’70与J1’73、H/3’76、SVDV(Seechurn等测株 )、NET/1/92的核苷酸序列同源性分别为 97.8%、98.1%、97.6 %和 89.3% ;相应地 ,推导的氨基酸序列同源性分别为 98.8%、98.7%、98.8%和 96 .5 %。 展开更多
关键词 猪水泡病病毒 P1区 序列分析 同源性 结构蛋白编码区 核苷酸
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猪水泡病病毒VP1基因的克隆和表达
18
作者 钟金栋 花群义 +5 位作者 肖荣海 夏雪山 杨云庆 周晓黎 董俊 邓祖洪 《中国病毒学》 CSCD 2006年第4期385-389,共5页
以猪水泡病病毒RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了849bp的VP1基因,通过T-A克隆技术,将VP1基因片段克隆至pMD18-T克隆载体质粒中,构建SVDVVP1基因克隆重组质粒,进行核苷酸序列分析。然后亚克隆插入pBAD/ThioTOPO表... 以猪水泡病病毒RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了849bp的VP1基因,通过T-A克隆技术,将VP1基因片段克隆至pMD18-T克隆载体质粒中,构建SVDVVP1基因克隆重组质粒,进行核苷酸序列分析。然后亚克隆插入pBAD/ThioTOPO表达载体,经测序鉴定,筛选获得VP1基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了猪水泡病病毒VP1基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP1蛋白抗原。SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.002%的L-阿拉伯醛糖进行诱导,5h后表达可达到高峰,表达蛋白为融合蛋白,质量约47.13kDa,表达产量约占菌体总蛋白的16%。Westernblotting检测表明,诱导的蛋白能与猪水泡病阳性血清发生特异性反应。融合蛋白中含有猪水泡病病毒VP1蛋白抗原,为应用该表达蛋白抗原制备SVD免疫血清学诊断试剂和新型疫苗构建奠定基础。 展开更多
关键词 猪水泡病病毒 VP1 克隆 表达
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猪水泡病病毒全基因组核苷酸序列的测定与分析 被引量:8
19
作者 冶贵生 刘湘涛 +5 位作者 张彦明 马玉花 张淼涛 韩雪清 张永国 谢庆阁 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期69-71,共3页
Six overlapping DNA fragments from swine vesicular disease virus (SVDV) RNA were acquired by RT-PCR,nested PCR,and half-nested PCR.These fragments were individually cloned and sequenced.Comparing and analyzing of homo... Six overlapping DNA fragments from swine vesicular disease virus (SVDV) RNA were acquired by RT-PCR,nested PCR,and half-nested PCR.These fragments were individually cloned and sequenced.Comparing and analyzing of homologies of nucleotide and animo acid sequences by computer software,the DNA sequence homologies were 98.4% with SVDV J1′73,98.2% with SVDV H/3′76,98.2% with SVDV(Seechurn.P,et al),91.0% with SVDV NET/1/92;the amino acid sequence homoiogies were 98.9% with SVDV J1′73,98.9% with SVDV H/3′76,99.0% with SVDV (Seechurn P,et al.)96.9% with SVDV NET/1/92. 展开更多
关键词 猪水泡病病毒 全基因组 序列分析 水泡病
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猪水泡病病毒非结构蛋白编码区的克隆与序列分析
20
作者 冶贵生 刘湘涛 +4 位作者 张彦明 马玉花 邓明俊 洪海霞 韩雪清 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第7期13-18,共6页
以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出非结构蛋白编码区的 4个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经对重组质粒双酶切、PCR鉴定、序列分析表明 ,HK’70非结构... 以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出非结构蛋白编码区的 4个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经对重组质粒双酶切、PCR鉴定、序列分析表明 ,HK’70非结构蛋白编码区核苷酸长 4 0 0 2nt ,氨基酸长 1334aa ;与J1’73、H/ 3’76、SVDV(Seechrn等测株 )、NET/ 1/ 92的核苷酸同源性分别为 98.6 %、98.3%、98.3%、91.2 % ,推导氨基酸序列的同源性分别为 98.9%、99.1%、99.2 %和 97.2 %。 展开更多
关键词 猪水泡病病毒 非结构蛋白编码区 序列分析 同源性
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