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STX1B基因杂合缺失致全面性癫痫伴热性惊厥附加症一家系遗传及临床分析
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作者 姜燕丽 邵新华 +4 位作者 邬振飞 闫露露 解敏 庄丹燕 李海波 《临床儿科杂志》 北大核心 2025年第8期628-634,共7页
目的 探讨全面性癫痫伴热性惊厥附加症一家系的遗传学特点,并进行遗传及临床分析。方法 收集1例2022年2月在我院神经内科就诊的热性惊厥患儿及其家庭成员的临床资料,提取患儿及其姐姐、父母的外周血DNA,通过外显子组测序(WES)技术筛选... 目的 探讨全面性癫痫伴热性惊厥附加症一家系的遗传学特点,并进行遗传及临床分析。方法 收集1例2022年2月在我院神经内科就诊的热性惊厥患儿及其家庭成员的临床资料,提取患儿及其姐姐、父母的外周血DNA,通过外显子组测序(WES)技术筛选出疑似致病基因变异,针对可疑变异进行实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)验证及致病性分析。并对相关文献进行总结。结果 先证者及其姐姐均携带STX1B基因第8~9号外显子的缺失及部分第10号外显子的缺失(STX1B exon 8-9 del,exon 10 partial del),变异遗传自母亲。先证者为2岁6个月男童,因发热伴抽搐就诊,抽搐表现为全面性强直-阵挛发作,未治疗,随访过程中再次发作1次,发作表现相似;患儿姐姐表现为癫痫,幼时也有热性惊厥史,先后服用丙戊酸钠、左乙拉西坦治疗5年,发作得到控制,无智力运动异常;患儿母亲表现为幼时热性惊厥和癫痫,曾口服抗癫痫药3年后未再发作。文献检索发现共有65例STX1B基因相关癫痫患者,涉及变异位点34个,以错义变异多见,癫痫发作类型有临床异质性,不同变异位点预后不同。结论 本研究发现此家系的基因变异为STX1B基因第8~9号外显子及部分第10号外显子的杂合缺失,该变异既往未见报道。随访结果提示此次新发现的变异所致的癫痫对抗癫痫药物治疗有效,虽出现了热性惊厥的发作,但智力发育正常,无神经功能损害。 展开更多
关键词 stx1B基因 热性惊厥 癫痫 基因变异 遗传学
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丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157 Stx毒素表达的影响 被引量:4
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作者 夏炉明 孙建和 严亚贤 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期2454-2459,共6页
【目的】确定丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157中Stx前噬菌体和Stx毒素的诱导作用。【方法】利用丝裂霉素C作诱导剂对8株溶原性大肠杆菌O157进行噬菌体诱导,以MC1061作指示菌采用双层琼脂平板法观察诱导前后的噬菌斑,并采用PCR方法对噬菌... 【目的】确定丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157中Stx前噬菌体和Stx毒素的诱导作用。【方法】利用丝裂霉素C作诱导剂对8株溶原性大肠杆菌O157进行噬菌体诱导,以MC1061作指示菌采用双层琼脂平板法观察诱导前后的噬菌斑,并采用PCR方法对噬菌体进行鉴定。同时测定8株溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉素C诱导前以及诱导8、12、16h这4个阶段滤液中Stx毒素的表达量,毒素表达量采用WST-1细胞毒性检测试剂盒检测Vero细胞存活率。【结果】溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉素C诱导后释放大量的Stx噬菌体颗粒。同时诱导后Stx毒素的表达量也显著增加,且随着诱导时间的延长毒素的表达量继续增加,但增加的幅度逐渐减缓。【结论】本研究确定了丝裂霉素C可以诱导溶原性大肠杆菌O157释放Stx噬菌体,同时也增加了Stx毒素的表达,从而增强细菌的毒力。 展开更多
关键词 大肠杆菌015 7 stx噬菌体 stx毒素 丝裂霉素C VERO细胞
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PCR Detection of Virulence Genes Colv,Stxs and HlyE of Escherichia coli 被引量:3
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作者 史秋梅 张艳英 +5 位作者 高桂生 高光平 刘玉芹 房海 陈翠珍 沈庆鹏 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第10期2044-2047,共4页
[Objective] This study aimed to explore the presence of three causative genes Colv,Stxs and HlyE of the pathogenic E.coli from chickens,pigs and food.[Method] By using 44 E.coli strains from chickens,24 from pigs and ... [Objective] This study aimed to explore the presence of three causative genes Colv,Stxs and HlyE of the pathogenic E.coli from chickens,pigs and food.[Method] By using 44 E.coli strains from chickens,24 from pigs and 26 from food as the experimental materials,virulence genes Colv,Stxs(stx2,stx2e) and HlyE were detected with polymerase chain reaction(PCR) method.[Result] Among all the E.coli strains,the detection rate of Colv was 25% from chickens,4.2% from pigs,and 0 from food;the detection rate of Stx2(Stx2e) from all E.coli strains was 0;the detection rate of HlyE was 2.27% from chickens,0 from pigs,and 11.5% from food.[Conclusion] Virulence gene Colv shows relatively high carrying rate in E.coli from chickens and pigs;HlyE also shows a certain degree of presence in E.coli from chickens and food. 展开更多
关键词 Escherichia coli Virulence gene Colv stx2 stx2e HlyE PCR
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志贺毒素2型噬菌体ΦMin27的stx2基因突变株构建及其感染特性 被引量:3
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作者 苏良科 严亚贤 陆承平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1227-1233,共7页
【目的】通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体,来观察它对不同血清型大肠杆菌的感染特性。【方法】利用λ噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7Min27株的stx2基因中,获得O157:H7Min27的突变菌株Min... 【目的】通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体,来观察它对不同血清型大肠杆菌的感染特性。【方法】利用λ噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7Min27株的stx2基因中,获得O157:H7Min27的突变菌株Min27(△stx∷cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导,结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的志贺毒素2型噬菌体,命名为ΦMin27(△stx∷cat)。采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选的方法,观察ΦMin27(△stx∷cat)感染21株不同血清型大肠杆菌后的裂解和溶原转换情况。【结果】2株血清型分别为O60和O138的大肠杆菌可以被ΦMin27(△stx∷cat)溶原感染,表现出对氯霉素的抗性,但没有形成噬菌斑,而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后,能释放出感染性的ΦMin27(△stx∷cat)颗粒,并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑。【结论】ΦMin27(△stx∷cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌,且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体,显示出ΦMin27噬菌体具有携带外源基因在若干不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力,为进一步研究Stx噬菌体的感染机理和志贺毒素表达调控奠定了基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 stx2噬菌体 ΦMin27(△stx∷cat) 感染特性
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动物源E.coli O157:H7 stx基因的检测与系统进化分析 被引量:2
5
作者 程海卫 杨霞 +7 位作者 赵军 陈陆 王新卫 常洪涛 张龙现 刘红英 姚慧霞 王川庆 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期173-180,共8页
为了解2009-2010年间在河南、甘肃地区分离鉴定的5株大肠埃希菌O157(E.coli O157)携带stx的情况及不同分离株间stx分子进化与变迁的情况,本研究利用PCR方法对分离株进行了stx基因检测,并完成了序列测定与系统演化分析。结果表明,5株不... 为了解2009-2010年间在河南、甘肃地区分离鉴定的5株大肠埃希菌O157(E.coli O157)携带stx的情况及不同分离株间stx分子进化与变迁的情况,本研究利用PCR方法对分离株进行了stx基因检测,并完成了序列测定与系统演化分析。结果表明,5株不同动物源的分离株均含有stx1及stx2基因。序列分析结果显示5株分离株间stx1、stx2的核苷酸及氨基酸同源性均较高;stx1基因均与参考株中的山羊源和食品源E.coli O157菌株的同源性较高,进化树中遗传距离最近;分离株的stx2基因与多株牛源及少数人源参考株也具有较高的同源性,进化树中虽然5株分离菌均在一个大主干分支中,但分离株27与其他各分离株及参照株遗传距离最远,独自处于一次级分支中;分离株L37与W、12与50分别分布于牛源、人源E.coli O157小次级分支中;由此可推测,分离株所携带的stx1很有可能是经食品源或羊源E.coli O157传递而来;分离株L37与W、分离株12与50的stx2可能是由牛源、人源E.coli O157菌株传递而来,分离株27的stx2来源不清楚。研究结果表明,5株E.coli O157分离株均含有stx1、stx2基因,但两个基因的起源存在差异。 展开更多
关键词 E COLI O157 stx1 stx2 检测 进化分析
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微创术后卡莫司汀联合替莫唑胺对GBM患者的疗效、STX8表达水平的影响及其预后的Logistics分析
6
作者 刘常权 高凯 +1 位作者 杜蓓 屈波 《中南医学科学杂志》 2024年第6期984-987,共4页
目的观察微创术后卡莫司汀联合替莫唑胺对胶质母细胞瘤(GBM)患者的疗效、STX8表达水平的影响及其预后的Logistics分析。方法回顾性分析本院收治的100例GBM患者的临床资料,将其均分为替莫唑胺组(术后单纯替莫唑胺治疗)和联合组(术后卡莫... 目的观察微创术后卡莫司汀联合替莫唑胺对胶质母细胞瘤(GBM)患者的疗效、STX8表达水平的影响及其预后的Logistics分析。方法回顾性分析本院收治的100例GBM患者的临床资料,将其均分为替莫唑胺组(术后单纯替莫唑胺治疗)和联合组(术后卡莫司汀联合替莫唑胺治疗)。比较两组患者疗效、STX8水平、不良反应及生存情况。采用单因素和多因素Logistics回归分析两组患者预后的影响因素。结果联合组患者客观缓解率、总生存期、无进展生存期高于替莫唑胺组(P<0.05),而STX8水平低于替莫唑胺组(P<0.05)。两组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。单因素Logistics回归分析显示,年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小、肿瘤分级、手术方式、化疗方案和STX8水平与GBM预后有关(P<0.05)。多因素Logistics回归分析显示,化疗方案和STX8水平是影响GBM预后的独立危险因素(P<0.05)。结论微创术后卡莫司汀联合替莫唑胺治疗能够提高GBM患者的客观缓解率,降低STX8水平,延长生存期,且不增加不良反应。化疗方案和STX8水平是影响GBM预后的独立危险因素。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 微创术 卡莫司汀 替莫唑胺 stx8 Logistics回归分析
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双重实时荧光PCR检测肠出血型大肠埃希菌stx1和stx2基因方法的建立 被引量:1
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作者 陈应坚 刘渠 +2 位作者 甘莉萍 金玉娟 杨慧 《热带医学杂志》 CAS 2012年第3期298-301,310,共5页
目的建立一种检测肠出血型大肠埃希菌(EHEC)产毒基因stx1和stx2的TaqMan双重实时荧光PCR法。方法根据GenBank公布的EHECstx1和stx2基因序列进行比对后设计相应的PCR引物和TaqMan探针,探针报告基团分别使用FAM和HEX标记,淬灭基团使用BHQ... 目的建立一种检测肠出血型大肠埃希菌(EHEC)产毒基因stx1和stx2的TaqMan双重实时荧光PCR法。方法根据GenBank公布的EHECstx1和stx2基因序列进行比对后设计相应的PCR引物和TaqMan探针,探针报告基团分别使用FAM和HEX标记,淬灭基团使用BHQ1标记。建立双重实时荧光PCR反应体系并对反应条件进行优化,对方法的灵敏度、特异性及其重复性进行分析。结果建立了EHEC双重实时荧光PCR检测方法。菌液浓度为102~108cuf/ml时,均可观察到扩增曲线,且扩增曲线平滑;检测30份模拟临床样品,均检测到stx1和stx2基因,且均培养出EHEC,该方法灵敏度为100%;3次重复测定108、105、102cfu/ml3个高、中、低浓度的菌液DNA模板,得到其扩增曲线,计算各浓度的Ct值标准差及变异系数,均小于5%,在误差允许范围内。结论建立的双重实时荧光PCR法可快速、灵敏、特异、有效地检出EHEC。 展开更多
关键词 肠出血型大肠埃希菌 实时荧光PCR TaqMan法 stx1 stx2
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EHEC O157 △ler/stx (pBR322::stx1/2B::eae)对小鼠免疫保护作用的实验研究
8
作者 陈萍 冯书章 +2 位作者 刘军 孙洋 祝令伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期601-604,共4页
通过粘膜免疫途径对基因工程菌EHEC O157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)进行小鼠免疫保护作用实验研究。结果表明,用EHEC O157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)灌胃免疫小鼠能够诱导小鼠产生抗EHEC O157特异性免疫应答,两次免疫后7d,... 通过粘膜免疫途径对基因工程菌EHEC O157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)进行小鼠免疫保护作用实验研究。结果表明,用EHEC O157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)灌胃免疫小鼠能够诱导小鼠产生抗EHEC O157特异性免疫应答,两次免疫后7d,免疫组血清IgG抗体显著高于对照组,14 d检测IgG抗体达到最高峰,粪便中检测到高水平的抗EHEC O157特异性IgA抗体,表明该工程菌可以诱导肠道粘膜免疫应答和系统免疫应答。EHEC O157强毒株经胃肠道途径攻毒后,一次免疫组和两次免疫组小鼠存活率(67%和78%)均高于未免疫组(50%);免疫小鼠强毒菌排菌时间大大缩短,两次免疫组攻毒后第5 d检测不到强毒菌,未免疫组排菌达10 d以上;攻毒后免疫组小鼠体重较快恢复正常水平。 展开更多
关键词 出血性大肠杆菌 EHEC O157 △ler/stx (pBR322::stx1/2B::eae) 小鼠 免疫
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双重荧光定量PCR检测志贺毒素stx1和stx2基因 被引量:2
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作者 陆芸 王若南 +3 位作者 谢国良 余斐 郑书发 陈晓 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2017年第5期591-593,597,共4页
目的建立一种双重荧光定量PCR检测志贺毒素stx1和stx2基因的方法。方法根据不同细菌来源的stx1和stx2序列,设计PCR引物和TaqMan探针,建立双重实时荧光定量PCR检测体系,进行灵敏度、特异性和重复性评价,并对腹泻患者粪便样本进行检测分... 目的建立一种双重荧光定量PCR检测志贺毒素stx1和stx2基因的方法。方法根据不同细菌来源的stx1和stx2序列,设计PCR引物和TaqMan探针,建立双重实时荧光定量PCR检测体系,进行灵敏度、特异性和重复性评价,并对腹泻患者粪便样本进行检测分析。结果双重实时荧光定量PCR检测含志贺毒素基因重组质粒的最低检测下限为102 copies/mL;该法对12种常见肠道病原菌均无特异性扩增,对不同浓度的标准质粒检测重复性高,Ct值变异系数均小于10%;对急性腹泻粪便标本的检测阳性率高于细菌分离培养。结论建立的双重实时荧光定量PCR可作为不同细菌来源的志贺毒素基因的快速鉴定方法,亦可用于人感染性腹泻标本的快速筛查。 展开更多
关键词 志贺毒素 stx1 stx2 实时荧光定量PCR
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EHEC O157Δler/stx(pBR322∷stx 1/2B∷eae)的构建与生物学特性分析 被引量:2
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作者 陈萍 冯书章 +3 位作者 刘军 祝令伟 周博 孙洋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期631-635,共5页
为了获得安全性好,对出血性大肠杆菌具有良好免疫保护作用的疫苗株,本实验以构建的O157△ler/stx基因缺失突变株为载体,将决定特异性粘附的eae全基因插入到质粒pBR322∷stx 1/2B中,构建了基因工程菌O157△ler/six(pBR322∷stx 1... 为了获得安全性好,对出血性大肠杆菌具有良好免疫保护作用的疫苗株,本实验以构建的O157△ler/stx基因缺失突变株为载体,将决定特异性粘附的eae全基因插入到质粒pBR322∷stx 1/2B中,构建了基因工程菌O157△ler/six(pBR322∷stx 1/2B∷eae),对该基因工程菌进行生物学特性分析,实验结果表明,该菌正常培养可表达eae;具有粘附HEp-2细胞的特性;该菌培养上清对Vero细胞没有毒性作用;给小鼠口服接种该工程菌后可在肠道中定居至少10d;14日龄小鼠口服活菌量为5×10^9CFU/只,小鼠生长正常,没有出现任何临床症状;该菌通过口服免疫小鼠可以诱导肠道粘膜免疫应答和体液免疫应答。这些结果表明,该工程菌安全性好,免疫原性强,是有价值的预防EHEC O157感染的基因工程疫苗候选株。 展开更多
关键词 出血性大肠杆菌O157 疫苗 EAE stx 1/2B
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蒙古马突触融合蛋白17(STX17)基因多态性及在不同毛色皮肤组织中的表达分析 被引量:12
11
作者 李蓓 何小龙 芒来 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1632-1637,共6页
为研究突触融合蛋白17(STX17)基因与蒙古马毛色之间的相关性及其作用机制。本研究利用半巢式PCR技术及实时荧光定量PCR技术对蒙古马STX17基因第6内含子的多态性以及不同毛色蒙古马皮肤组织中STX17基因的相对表达量进行了检测。巢式PCR... 为研究突触融合蛋白17(STX17)基因与蒙古马毛色之间的相关性及其作用机制。本研究利用半巢式PCR技术及实时荧光定量PCR技术对蒙古马STX17基因第6内含子的多态性以及不同毛色蒙古马皮肤组织中STX17基因的相对表达量进行了检测。巢式PCR结果显示:STX17基因在青毛蒙古马第6内含子处存在4.6kb的重复片段,在其它毛色中不存在该重复片段;荧光定量PCR结果显示:STX17基因在蒙古马青毛皮肤组织中表达量最高,在骝毛皮肤组织中的表达量最低。结果证明蒙古马STX17基因与其青毛表型具有典型的相关性。 展开更多
关键词 蒙古马 stx17基因 多态性 基因表达量
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stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒3种方法检测产志贺毒素大肠埃希菌的评估 被引量:5
12
作者 白莉 胡豫杰 +7 位作者 王佳慧 吴青 赫英英 王伟 甘辛 韩春卉 李凤琴 徐进 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期797-804,共8页
目的评价stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒3种方法在检测产志贺毒素大肠埃希菌的特异性和敏感性的差异。方法运用stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒分别对29株大肠埃希菌参考菌株和45株食品分离大肠埃希菌... 目的评价stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒3种方法在检测产志贺毒素大肠埃希菌的特异性和敏感性的差异。方法运用stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒分别对29株大肠埃希菌参考菌株和45株食品分离大肠埃希菌株进行检测。结果 stx-PCR方法可以判定50株菌携带stx基因,同时Vero细胞毒性试验可以判定这些菌株具有细胞毒性,两者的一致性为100%;酶联免疫试剂盒能判定其中38株菌具有志贺毒素。结论 3种方法都具有很好的特异性。stx-PCR方法和Vero细胞毒性试验较酶联免疫试剂盒具有更高的敏感性,试剂盒适用于食源性疾病暴发事件中产志贺毒素大肠埃希菌的快速筛选,stxPCR方法推荐作为实验室常规快速检测方法,Vero细胞毒性试验是检测产志贺毒素大肠埃希菌是否具有志贺毒素生物学活性的金标准方法。 展开更多
关键词 产志贺毒素大肠埃希菌 志贺毒素 stx-PCR Vero细胞毒性试验 酶联免疫试剂盒
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EspA-Stx2A1融合蛋白的表达、纯化及其免疫学活性 被引量:3
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作者 程琰 罗萍 +3 位作者 张卫军 顾江 邹全明 毛旭虎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第12期1033-1038,共6页
目的在原核表达系统中表达肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHECO157∶H7)Ⅲ型分泌蛋白EspA与Stx2毒素A1亚单位(Stx2A1)的融合蛋白,并对表达蛋白进行纯化及免疫学活性检测。方法PCR扩增espA和stx2A1全长基因,利用重叠延伸PCR技术获得espA-stx... 目的在原核表达系统中表达肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHECO157∶H7)Ⅲ型分泌蛋白EspA与Stx2毒素A1亚单位(Stx2A1)的融合蛋白,并对表达蛋白进行纯化及免疫学活性检测。方法PCR扩增espA和stx2A1全长基因,利用重叠延伸PCR技术获得espA-stx2A1融合基因,T-A克隆后插入表达载体pET-28a(+),构建原核表达质粒pET-28a(+)-espA-stx2A1,转化大肠杆菌BL21(DE3),分别在37℃和25℃用IPTG诱导表达。以EspA单克隆抗体亲和层析柱纯化目的蛋白,免疫小鼠,检测其免疫原性及抗血清的反应原性,并以天然Stx2毒素攻击,观察保护效果。通过细胞毒试验检测免疫小鼠抗血清的体外中和作用。结果重叠延伸PCR方法扩增出1319bp的融合基因片段,重组表达质粒构建正确;目的蛋白在25℃时的表达量明显高于37℃,约占菌体总蛋白的40%。两种温度下,目的蛋白均主要以包涵体形式存在;纯化后蛋白纯度可达90%。Western blot结果证实,融合蛋白与EspA单克隆抗体和Stx2A1单克隆抗体均发生特异性反应。融合蛋白免疫小鼠制备的抗血清能分别与O157∶H7的EspA、Stx2A发生特异性免疫反应。融合蛋白免疫小鼠能够抵御致死剂量天然Stx2毒素的攻击,保护率达95%。免疫小鼠血清可以中和天然Stx2毒素对HeLa细胞的毒性作用。结论已成功表达了EspA-Stx2A1融合蛋白,纯化的蛋白显示出较好的免疫保护效果,为研制EHECO157∶H7基因工程多亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌 O157:H7 EspA stx2A1 融合蛋白 免疫学活性
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EHECO157∶H7stx基因缺失突变株的构建及其特性 被引量:1
14
作者 孙洋 刘军 +3 位作者 郭学军 常国权 尹铁勇 冯书章 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期166-169,共4页
针对肠出血性大肠杆菌 (EHEC) O1 5 7∶H7的 stx基因 ,通过 PCR扩增出缺失了 1 83bp的 stx基因片段 ,将其克隆到自杀性载体 p CVD4 4 2中 ,然后通过接合性转导将重组自杀性质粒 p CVD4 4 2∷Δstx从大肠杆菌 SM1 0转到 O1 5 7∶ H7中 ,... 针对肠出血性大肠杆菌 (EHEC) O1 5 7∶H7的 stx基因 ,通过 PCR扩增出缺失了 1 83bp的 stx基因片段 ,将其克隆到自杀性载体 p CVD4 4 2中 ,然后通过接合性转导将重组自杀性质粒 p CVD4 4 2∷Δstx从大肠杆菌 SM1 0转到 O1 5 7∶ H7中 ,利用抗性标记和 PCR方法筛选出 O1 5 7∶ H7stx基因缺失突变菌株。Vero细胞毒性试验证实 ,该突变株不能产生完整的 Stx。动物试验表明 ,与强毒株相比该突变株的致病性明显降低。该突变株的构建为研究志贺毒素在 EHEC O1 5 7感染中所起的作用和研制 O1 5 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌 stx基因 基因缺失突变 致病性 自杀载体技术 表型
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中国人群STX4基因多态性对华法林应用剂量的影响 被引量:2
15
作者 梁欣 乔彦 +3 位作者 张亚同 胡欣 李可欣 杨莉萍 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期691-694,共4页
目的以中国北京地区使用华法林进行长期抗凝治疗的汉族人群作为研究对象,结合非遗传因素的影响,明确STX4基因位点的多态性与华法林用药剂量个体间差异的相关性。方法运用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增-连接酶检测... 目的以中国北京地区使用华法林进行长期抗凝治疗的汉族人群作为研究对象,结合非遗传因素的影响,明确STX4基因位点的多态性与华法林用药剂量个体间差异的相关性。方法运用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增-连接酶检测反应(ligase detection reaction,LDR)方法,对STX4单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点进行基因分型检测。研究用国际标准化比值(INR)作为临床治疗监测指标,最后运用SPSS17.0软件对数据进行分析。结果 207例样品中,STX4基因突变率为93.96%,其中杂合子分型为10.14%,且达到遗传平衡。不同基因分型组间的华法林剂量有显著差异,所对应的INR值分布无显著差异。结论 STX4基因多态性对华法林稳定剂量有显著影响,测定基因位点可以为个体化治疗提供指导。 展开更多
关键词 华法林 扩增-连接酶检测反应 stx4 国际标准化比值 基因多态性
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肠出血性大肠杆菌O157:H7△hly△stx△toxB基因缺失株的构建 被引量:1
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作者 张雪寒 何孔旺 +11 位作者 赵攀登 栾晓婷 叶青 温立斌 倪艳秀 周俊明 李彬 王小敏 郭容利 俞正玉 茅爱华 吕立新 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期76-82,共7页
肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌。志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子。选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自... 肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌。志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子。选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,借助于sm10宿主菌获得O157:H7杂交菌株,通过同源重组,依次获得O157:H7(△hly△stx△toxB)基因缺失株,△hly△stx△toxB接种HEp-2细胞和感染链霉素处理的Balb/c小鼠,明确缺失株粘附定植的能力。经PCR鉴定,hly、stx和toxB基因分别被壮观霉素(Spc+)、庆大霉素(Gm+)和卡那霉素(Kan+)基因表达盒所代替,Western blot鉴定结果显示,O157:H7(△hly△stx△toxB)检测不到相应的Stx、Hly和ToxB蛋白。O157:H7(△hly△stx△toxB)生长特性与亲本株无明显差异。对于HEp-2细胞的粘附能力明显降低。Balb/c小鼠排菌时间和排菌量明显减少和降低。本研究成功获得O157:H7(△hly△stx△toxB),并且明确Stx、Hly和ToxB的缺失导致了O157:H7对HEp-2细胞和Balb/c小鼠的粘附和定植能力降低。本研究旨在为研制EHEC O157:H7基因缺失疫苗奠定物质基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157:H7 hly stx toxB 缺失株 小鼠 粘附
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大肠杆菌毒素stx2eB-LTB-ST融合基因的构建与表达 被引量:2
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作者 齐翀 刘军 +2 位作者 祝令伟 郭学军 冯书章 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期341-345,共5页
利用PCR技术,从病原性大肠杆菌中扩增Stx2e及LT毒素B亚基的基因并扩增ST基因,用复式PCR技术获得了这三段基因的两种融合结构,一种是三段基因直接相连,另一种是在这三段基因之间加入适当的Linker序列。在这两种融合基因两端加入适当的酶... 利用PCR技术,从病原性大肠杆菌中扩增Stx2e及LT毒素B亚基的基因并扩增ST基因,用复式PCR技术获得了这三段基因的两种融合结构,一种是三段基因直接相连,另一种是在这三段基因之间加入适当的Linker序列。在这两种融合基因两端加入适当的酶切位点并分别与pMD18-T载体相连,酶切后以正确的阅读框插入pET28a载体的多克隆位点中,转入受体菌BL21(DE3)进行表达,得到两种约28 Ku的蛋白,表达的融合蛋白均以包涵体的方式存在,约占全菌蛋白表达量的30%,将包涵体初步提纯,为下游工作奠定了基础。 展开更多
关键词 stx2e 热不稳定肠毒素 热稳定肠毒素 融合基因
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产志贺毒素大肠杆菌流行病学和stx基因研究进展 被引量:8
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作者 周勇 陈守义 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1130-1134,共5页
感染产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-pro-ducing Escherichia coli,STEC)能引起人严重的疾病,包括:出血性肠炎(Hemorrhagic coltis,HC)、血栓性血小板紫癜(TTP)和溶血性尿毒综合症(He-molyticuremicsyndrome,HUS)甚至死亡。
关键词 产志贺毒素大肠杆菌 stx基因 流行病学 产志贺毒素大肠埃希菌 出血性肠炎 尿毒综合症 溶血性 血小板
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重组大肠杆菌LTB-Stx2B蛋白的表达及其诱导小鼠体液免疫的研究 被引量:3
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作者 李丹丹 赵姝静 +6 位作者 朱颖 韩林林 孟相秋 李金萍 杜元策 吕广玲 师东方 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第5期13-20,共8页
为了筛选大肠杆菌疫苗的有效抗原,本研究表达了重组蛋白Stx2B和重组蛋白LTB-Stx2B,并分别用重组蛋白Stx2B、表达了重组蛋白LTB-Stx2B的灭活菌液和灭活菌裂解液免疫昆明鼠,比较了不同抗原诱导小鼠的体液免疫应答能力;体内体外实验对免疫... 为了筛选大肠杆菌疫苗的有效抗原,本研究表达了重组蛋白Stx2B和重组蛋白LTB-Stx2B,并分别用重组蛋白Stx2B、表达了重组蛋白LTB-Stx2B的灭活菌液和灭活菌裂解液免疫昆明鼠,比较了不同抗原诱导小鼠的体液免疫应答能力;体内体外实验对免疫血清的毒素中和作用进行了检测。结果显示,重组蛋白LTB-Stx2B能诱导小鼠更高水平的体液免疫应答,其血清抗体可以通过乳汁传递给新生仔鼠;小鼠二免后的血清不仅能中和LT和Stx2对小鼠的毒性作用,而且能中和Stx2对Vero细胞的毒性,其中和效价为1:52,高于其他免疫原组血清。该研究为大肠杆菌疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌 重组蛋白LTB—stx2B 体液免疫
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λ-Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157:H7细胞毒素stx2基因 被引量:2
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作者 刘变芳 殷先华 +2 位作者 吕欣 魏新元 郭蔼光 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期926-930,935,共6页
采用PCR法合成了stx2基因上游和下游的2个同源臂序列分别为1635,1655bp。2个同源臂序列被克隆到载体pCR2.1-TOPO上,两臂中间插入庆大霉素抗性基因Gm(855bp),构建了stx2基因敲除盒子pCR2.1-B-Gm-A。将含2个同源臂和Gm抗性基因片段的扩增... 采用PCR法合成了stx2基因上游和下游的2个同源臂序列分别为1635,1655bp。2个同源臂序列被克隆到载体pCR2.1-TOPO上,两臂中间插入庆大霉素抗性基因Gm(855bp),构建了stx2基因敲除盒子pCR2.1-B-Gm-A。将含2个同源臂和Gm抗性基因片段的扩增子电转化到含质粒pKM208的感受态细胞EHECO157:H7中,通过λ-Red重组系统产生了stx2基因敲除突变菌株。用Verocell试验检测了突变株的产毒能力并进行了细胞黏附试验。结果表明,合成同源臂利用λ-Red重组系统可以有效的敲除EHEC毒素基因,stx2基因敲除后的突变株不产stx2毒素,对真核细胞CaCo-2和Hep-2的黏附能力明显降低。 展开更多
关键词 λ-Red重组系统 肠出血性大肠杆菌 stx2毒素基因 基因敲除
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