STX1B基因杂合缺失致全面性癫痫伴热性惊厥附加症一家系遗传及临床分析

1

作者 姜燕丽 邵新华 +4 位作者 邬振飞 闫露露 解敏 庄丹燕 李海波 《临床儿科杂志》 北大核心 2025年第8期628-634,共7页

目的 探讨全面性癫痫伴热性惊厥附加症一家系的遗传学特点,并进行遗传及临床分析。方法 收集1例2022年2月在我院神经内科就诊的热性惊厥患儿及其家庭成员的临床资料,提取患儿及其姐姐、父母的外周血DNA,通过外显子组测序(WES)技术筛选... 目的 探讨全面性癫痫伴热性惊厥附加症一家系的遗传学特点,并进行遗传及临床分析。方法 收集1例2022年2月在我院神经内科就诊的热性惊厥患儿及其家庭成员的临床资料,提取患儿及其姐姐、父母的外周血DNA,通过外显子组测序(WES)技术筛选出疑似致病基因变异,针对可疑变异进行实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)验证及致病性分析。并对相关文献进行总结。结果 先证者及其姐姐均携带STX1B基因第8~9号外显子的缺失及部分第10号外显子的缺失(STX1B exon 8-9 del,exon 10 partial del),变异遗传自母亲。先证者为2岁6个月男童,因发热伴抽搐就诊,抽搐表现为全面性强直-阵挛发作,未治疗,随访过程中再次发作1次,发作表现相似;患儿姐姐表现为癫痫,幼时也有热性惊厥史,先后服用丙戊酸钠、左乙拉西坦治疗5年,发作得到控制,无智力运动异常;患儿母亲表现为幼时热性惊厥和癫痫,曾口服抗癫痫药3年后未再发作。文献检索发现共有65例STX1B基因相关癫痫患者,涉及变异位点34个,以错义变异多见,癫痫发作类型有临床异质性,不同变异位点预后不同。结论 本研究发现此家系的基因变异为STX1B基因第8~9号外显子及部分第10号外显子的杂合缺失,该变异既往未见报道。随访结果提示此次新发现的变异所致的癫痫对抗癫痫药物治疗有效,虽出现了热性惊厥的发作,但智力发育正常,无神经功能损害。 展开更多

关键词 stx1B基因 热性惊厥 癫痫 基因变异 遗传学

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双重实时荧光PCR检测肠出血型大肠埃希菌stx1和stx2基因方法的建立 被引量：1

2

作者 陈应坚 刘渠 +2 位作者 甘莉萍 金玉娟 杨慧 《热带医学杂志》 CAS 2012年第3期298-301,310,共5页

目的建立一种检测肠出血型大肠埃希菌(EHEC)产毒基因stx1和stx2的TaqMan双重实时荧光PCR法。方法根据GenBank公布的EHECstx1和stx2基因序列进行比对后设计相应的PCR引物和TaqMan探针,探针报告基团分别使用FAM和HEX标记,淬灭基团使用BHQ... 目的建立一种检测肠出血型大肠埃希菌(EHEC)产毒基因stx1和stx2的TaqMan双重实时荧光PCR法。方法根据GenBank公布的EHECstx1和stx2基因序列进行比对后设计相应的PCR引物和TaqMan探针,探针报告基团分别使用FAM和HEX标记,淬灭基团使用BHQ1标记。建立双重实时荧光PCR反应体系并对反应条件进行优化,对方法的灵敏度、特异性及其重复性进行分析。结果建立了EHEC双重实时荧光PCR检测方法。菌液浓度为102～108cuf/ml时,均可观察到扩增曲线,且扩增曲线平滑;检测30份模拟临床样品,均检测到stx1和stx2基因,且均培养出EHEC,该方法灵敏度为100%;3次重复测定108、105、102cfu/ml3个高、中、低浓度的菌液DNA模板,得到其扩增曲线,计算各浓度的Ct值标准差及变异系数,均小于5%,在误差允许范围内。结论建立的双重实时荧光PCR法可快速、灵敏、特异、有效地检出EHEC。 展开更多

关键词 肠出血型大肠埃希菌 实时荧光PCR TaqMan法 stx1 stx2

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出血性大肠杆菌O157 Eae-Stx1/2B融合蛋白的免疫学特性

3

作者 陈萍 冯书章 +3 位作者 孙洋 郭学军 周博 尹铁勇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期838-841,共4页

为了研究重构融合蛋白Eae-Stx1/2B免疫特性及对出血性大肠杆菌感染的免疫保护作用,进行了细胞粘附抑制试验和免疫保护试验。结果证明Eae-Stx1/2B融合蛋白免疫血清在体外能降低出血性大肠杆菌对HEp-2细胞的粘附作用,这一特性在出血性大... 为了研究重构融合蛋白Eae-Stx1/2B免疫特性及对出血性大肠杆菌感染的免疫保护作用,进行了细胞粘附抑制试验和免疫保护试验。结果证明Eae-Stx1/2B融合蛋白免疫血清在体外能降低出血性大肠杆菌对HEp-2细胞的粘附作用,这一特性在出血性大肠杆菌疫苗设计中具有重要价值。以纯化的融合蛋白Eae-Stx1/2B为抗原对小鼠进行腹腔注射免疫和滴鼻免疫,ELISA检测结果显示,2次免疫后7 d,免疫组抗Eae-Stx1/2B融合蛋白和抗出血性大肠杆菌O157血清IgG抗体显著高于未免疫组;用出血性大肠杆菌O157强毒株EDL933攻击免疫小鼠,免疫组小鼠排菌时间显著缩短,免疫组小鼠存活率均高于未免疫组,免疫组小鼠体质量恢复增长较快。上述试验结果表明,Eae-Stx1/2B融合蛋白对出血性大肠杆菌感染有保护作用。 展开更多

关键词 出血性大肠杆菌 Eae—stx1/2B融合蛋白 免疫学特性

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EHEC O157 △ler/stx (pBR322::stx1/2B::eae)对小鼠免疫保护作用的实验研究

4

作者 陈萍 冯书章 +2 位作者 刘军 孙洋 祝令伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期601-604,共4页

通过粘膜免疫途径对基因工程菌EHEC O157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)进行小鼠免疫保护作用实验研究。结果表明,用EHEC O157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)灌胃免疫小鼠能够诱导小鼠产生抗EHEC O157特异性免疫应答,两次免疫后7d,... 通过粘膜免疫途径对基因工程菌EHEC O157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)进行小鼠免疫保护作用实验研究。结果表明,用EHEC O157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)灌胃免疫小鼠能够诱导小鼠产生抗EHEC O157特异性免疫应答,两次免疫后7d,免疫组血清IgG抗体显著高于对照组,14 d检测IgG抗体达到最高峰,粪便中检测到高水平的抗EHEC O157特异性IgA抗体,表明该工程菌可以诱导肠道粘膜免疫应答和系统免疫应答。EHEC O157强毒株经胃肠道途径攻毒后,一次免疫组和两次免疫组小鼠存活率(67%和78%)均高于未免疫组(50%);免疫小鼠强毒菌排菌时间大大缩短,两次免疫组攻毒后第5 d检测不到强毒菌,未免疫组排菌达10 d以上;攻毒后免疫组小鼠体重较快恢复正常水平。 展开更多

关键词 出血性大肠杆菌 EHEC O157 △ler/stx (pBR322::stx1/2B::eae) 小鼠 免疫

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补益脾胃元气方药对SAMP8小鼠海马突触活性带蛋白cplx1/2及stx1表达的影响 被引量：9

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作者 雷筱菁 第五永长 +6 位作者 屈夏夏 温晓强 岳涛 陈璐 刘奇 周源 安泰 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期5811-5815,共5页

目的:观察补益脾胃元气方药对SAMP8小鼠空间学习记忆能力、突触功能相关蛋白complexin1/2(cplx1/2)、syntaxin1(stx1)表达的影响,探讨此类方药防治老年性痴呆的作用机制。方法:将3月龄SAMP8小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组、补益脾... 目的:观察补益脾胃元气方药对SAMP8小鼠空间学习记忆能力、突触功能相关蛋白complexin1/2(cplx1/2)、syntaxin1(stx1)表达的影响,探讨此类方药防治老年性痴呆的作用机制。方法:将3月龄SAMP8小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组、补益脾胃元气方药组(人参汤组、洗心汤组、大补元煎组),另以3月龄SAMR1小鼠作为空白对照组,连续灌胃给药10周后进行相关指标检测。采用Morris水迷宫实验观察各组小鼠空间学习记忆能力。免疫组化和Western blot检测小鼠海马区cplx1/2、stx1表达。结果:与模型组比较,治疗组逃避潜伏期显著缩短(P<0.01),穿台次数显著增加(P<0.05),目的象限活动时间显著延长(P<0.01)。免疫组化和Western blot结果表明,补益脾胃元气方药各组小鼠海马cplx1/2、stx1表达较模型组显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:补益脾胃元气方药可明显改善SAMP8小鼠空间学习记忆能力,其机制可能与影响小鼠海马突触功能相关蛋白的表达有关。 展开更多

关键词 老年性痴呆 补益脾胃元气 人参汤 洗心汤 大补元煎 学习记忆 cplx1/2 stx1

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双重荧光定量PCR检测志贺毒素stx1和stx2基因 被引量：2

6

作者 陆芸 王若南 +3 位作者 谢国良 余斐 郑书发 陈晓 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2017年第5期591-593,597,共4页

目的建立一种双重荧光定量PCR检测志贺毒素stx1和stx2基因的方法。方法根据不同细菌来源的stx1和stx2序列,设计PCR引物和TaqMan探针,建立双重实时荧光定量PCR检测体系,进行灵敏度、特异性和重复性评价,并对腹泻患者粪便样本进行检测分... 目的建立一种双重荧光定量PCR检测志贺毒素stx1和stx2基因的方法。方法根据不同细菌来源的stx1和stx2序列,设计PCR引物和TaqMan探针,建立双重实时荧光定量PCR检测体系,进行灵敏度、特异性和重复性评价,并对腹泻患者粪便样本进行检测分析。结果双重实时荧光定量PCR检测含志贺毒素基因重组质粒的最低检测下限为102 copies/mL;该法对12种常见肠道病原菌均无特异性扩增,对不同浓度的标准质粒检测重复性高,Ct值变异系数均小于10%;对急性腹泻粪便标本的检测阳性率高于细菌分离培养。结论建立的双重实时荧光定量PCR可作为不同细菌来源的志贺毒素基因的快速鉴定方法,亦可用于人感染性腹泻标本的快速筛查。 展开更多

关键词 志贺毒素 stx1 stx2 实时荧光定量PCR

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STX1型驮背运输车刚柔耦合仿真及疲劳分析 被引量：1

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作者 魏鸿亮 方吉 +2 位作者 李晓峰 周晓坤 贺茂盛 《大连交通大学学报》 CAS 2020年第6期41-45,74,共6页

为了开展该车线路随机载荷下的车体结构疲劳分析,首先建立刚柔耦合动力学模型进行线路运行仿真,提取车体结构模态振动响应,引入网格不敏感模态结构应力法提出了基于刚柔耦合仿真的车辆焊接结构疲劳寿命分析新技术,为轨道车辆结构的设计... 为了开展该车线路随机载荷下的车体结构疲劳分析,首先建立刚柔耦合动力学模型进行线路运行仿真,提取车体结构模态振动响应,引入网格不敏感模态结构应力法提出了基于刚柔耦合仿真的车辆焊接结构疲劳寿命分析新技术,为轨道车辆结构的设计提供技术支持. 展开更多

关键词 stx1型驮背运输车 刚柔耦合动力学 焊接结构 模态结构应力法 疲劳分析

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香叶木素调控STX17-AS1/miR-383-5p轴对结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响 被引量：5

8

作者 吴远 刘吉宇 张琴 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第17期1642-1649,共8页

目的探讨香叶木素对结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,分析其机制是否与调控STX17-AS1/miR-383-5p轴有关。方法通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、集落形成实验、划痕愈合实验、流式细胞术、实时定量PCR(RT-qPCR)分析香叶木素(10、20、40μ... 目的探讨香叶木素对结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,分析其机制是否与调控STX17-AS1/miR-383-5p轴有关。方法通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、集落形成实验、划痕愈合实验、流式细胞术、实时定量PCR(RT-qPCR)分析香叶木素(10、20、40μmol/L)对结直肠癌细胞HCT116的活力、集落形成数、划痕愈合率、凋亡以及STX17-AS1、miR-383-5p表达的影响。RT-qPCR分析2019年本院29例结直肠癌患者癌组织和对应癌旁组织中STX17-AS1、miR-383-5p相对水平。双荧光素酶报告实验分析STX17-AS1和miR-383-5p的靶向关系。分别转染STX17-AS1的小干扰RNA、miR-383-5p模拟物至HCT116细胞,观察抑制STX17-AS1或过表达miR-383-5p对HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果香叶木素(10、20、40μmol/L)处理显著降低HCT116细胞活力、集落形成数、划痕愈合率(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05),降低STX17-AS1表达水平(P<0.05),增加miR-383-5p表达水平(P<0.05)。结直肠癌组织中STX17-AS1的表达水平较癌旁组织显著升高(P<0.05),miR-383-5p的表达水平较癌旁组织显著降低(P<0.05)。STX17-AS1与miR-383-5p直接结合。抑制STX17-AS1表达显著降低HCT116细胞活力、集落形成数、划痕愈合率(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05),增加miR-383-5p表达水平(P<0.05)。过表达miR-383-5p显著降低HCT116细胞活力、集落形成数、划痕愈合率(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05)。过表达STX17-AS1或抑制miR-383-5p表达显著减弱香叶木素对HCT116细胞活力、集落形成数、划痕愈合率和凋亡率的影响(P<0.05)。结论香叶木素通过下调STX17-AS1/miR-383-5p轴可抑制结直肠癌细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 香叶木素 结直肠癌 stx17-AS1 miR-383-5p 细胞增殖 迁移 凋亡

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干扰STX18-AS1通过靶向miR-204保护心肌细胞

9

作者 郭春棉 廉坤 刘彬 《心脏杂志》 CAS 2023年第2期130-135,140,共7页

目的探讨干扰长链非编码RNA STX18-AS1(long non-coding RNA,LncRNA STX18-AS1)是否通过上调微小RNA-204(miR-204)的表达从而影响心肌细胞缺氧损伤。方法体外培养心肌细胞H9C2,采用二氯化钴(CoCl_(2))处理心肌细胞建立细胞缺氧损伤模型... 目的探讨干扰长链非编码RNA STX18-AS1(long non-coding RNA,LncRNA STX18-AS1)是否通过上调微小RNA-204(miR-204)的表达从而影响心肌细胞缺氧损伤。方法体外培养心肌细胞H9C2,采用二氯化钴(CoCl_(2))处理心肌细胞建立细胞缺氧损伤模型,采用qRT-PCR检测CoCl_(2)处理不同时间点STX18-AS1、miR-204的表达量;实验设置对照组、模型组、si-NC组、si-STX18-AS1组、miR-NC组、miR-204组。采用甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖活性;流式细胞术与TUNEL检测细胞凋亡率;采用生化试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性;双荧光素酶报告实验验证STX18-AS1、miR-204的靶向关系。结果与对照组比较,在CoCl_(2)处理6 h、12 h、18 h、24 h时模型组和si-NC组STX18-AS1表达水平升高(P<0.01),miR-204表达水平降低(P<0.01);与模型组、si-NC组比较,在CoCl_(2)处理6 h、12 h、18 h、24 h时si-STX18-AS1组STX18-AS1的表达水平降低(P<0.01),miR-204的表达水平升高(P<0.01);与对照组比,模型组、si-NC组细胞增殖活性降低(P<0.01),细胞凋亡率及LDH活力、MDA的水平升高(P<0.01),SOD、CAT的活力降低(P<0.01);与模型组、si-NC组比较,si-STX18-AS1组细胞增殖活性升高(P<0.01),细胞凋亡率及LDH活力、MDA的水平降低(P<0.01),SOD、CAT的活力升高(P<0.01);转染miR-204mimics对心肌细胞增殖活性、凋亡及氧化应激的作用与转染si-STX18-AS1的作用相同;双荧光素酶报告实验证实STX18-AS1可靶向结合miR-204。结论干扰STX18-AS1表达可能通过上调miR-204,抑制细胞凋亡、促进增殖,减轻CoCl_(2)诱导的心肌细胞氧化损伤。 展开更多

关键词 LncRNA stx18-AS1 miR-204 心肌细胞 增殖 凋亡 氧化应激

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STX1B 基因突变相关癫痫3例报告 被引量：1

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作者 刘舒蕾 康庆云 +3 位作者 廖彩时 甘思仪 杨赛 吴丽文 《癫痫与神经电生理学杂志》 2023年第5期310-315,共6页

本文回顾分析3例STX1B基因变异相关癫痫患儿的临床资料,进行临床表型分析和基因型分析,并复习相关文献。3例均为男性患儿,起病年龄分别为8月龄、18月龄及28月龄。癫痫发作分别表现为全面性强直阵挛发作、局灶性发作及部分继发强直阵挛... 本文回顾分析3例STX1B基因变异相关癫痫患儿的临床资料,进行临床表型分析和基因型分析,并复习相关文献。3例均为男性患儿,起病年龄分别为8月龄、18月龄及28月龄。癫痫发作分别表现为全面性强直阵挛发作、局灶性发作及部分继发强直阵挛发作。3例患儿经基因检测证实为STX 1B基因变异,分别为c.280+2_280+3delTG(Splice-5)、c.820C>G(p.L274V)及c.845T>C(p.I282T),其中2个位点目前鲜有报道。STX 1B基因变异相关癫痫存在临床异质性,本文报告的3例丰富了目前已知的STX 1B基因突变谱。 展开更多

关键词 STX 1B 基因突变 癫痫 热敏感 发育迟缓 突触传递

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STX1B基因相关癫痫一家系报告并文献复习 被引量：1

11

作者 蓝明平 陈嘉蕾 +2 位作者 刘平 邓佳 胡文广 《中国实用儿科杂志》 CSCD 北大核心 2024年第1期73-76,共4页

收集2020-01-02在成都市妇女儿童中心医院神经内科就诊的1例STX1B基因突变患儿及其家系的临床资料,以“STX1B”或“syntaxin 1B”为关键词检索Pubmed,以“STX1B”或“syntaxin 1B”或“突触融合蛋白1B”为关键词检索维普、中国知网和万... 收集2020-01-02在成都市妇女儿童中心医院神经内科就诊的1例STX1B基因突变患儿及其家系的临床资料,以“STX1B”或“syntaxin 1B”为关键词检索Pubmed,以“STX1B”或“syntaxin 1B”或“突触融合蛋白1B”为关键词检索维普、中国知网和万方数据库并进行文献总结(检索截至2021-05-31),结果发现,该例患儿为2岁男性患儿,以频繁惊厥发作起病,发热可诱发发作,患儿母亲及哥哥幼时均有热性惊厥病史,病初先后加用丙戊酸钠、奥卡西平控制效果不佳,后期逐渐减停奥卡西平并加用托吡酯后未再发作。完善家系全外显子测序提示患儿STX1B基因c.697G>A(p.Glu233Lys)杂合错义变异,突变来源于母亲,患儿哥哥此位点无突变,该位点现有数据库未见报道。检索到中文文献1篇,英文文献12篇。文献报道可有多种癫痫发作类型,包括全面强直阵挛发作、局灶发作、失张力发作、肌阵挛-失张力发作等。现有文献共报道27个突变位点及3例整基因缺失,其中错义突变13个,移码突变8个,无义突变5个,小片段插入1个。由此得出,STX1B基因突变以错义突变、移码突变为主,临床表型存在异质性,该文发现了目前尚未报道的位点,其基因突变相关癫痫可能对托吡酯效果较好。 展开更多

关键词 stx1B 癫痫 基因

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检测食品中大肠杆菌O157的多重荧光PCR方法的建立 被引量：5

12

作者 李睿 刘晓红 +2 位作者 宫本敬久 王芳 熊燕 《中国酿造》 CAS 北大核心 2010年第4期160-163,共4页

针对大肠杆菌O157的志贺毒素编码基因stx1、stx2和O157血清型的标志基因wzy的保守序列,设计特异性的引物和探针,反复优化反应体系和条件,建立了一种新的多重荧光PCR检验方法。结果显示,该方法灵敏度高,stx1、stx2的扩增效率分别为96.4%... 针对大肠杆菌O157的志贺毒素编码基因stx1、stx2和O157血清型的标志基因wzy的保守序列,设计特异性的引物和探针,反复优化反应体系和条件,建立了一种新的多重荧光PCR检验方法。结果显示,该方法灵敏度高,stx1、stx2的扩增效率分别为96.4%和94.6%,实际样品检测时stx1、stx2的最低检出限分别为4.2×102cfu/mL和4.2×103cfu/mL。该方法特异性强,扩增结果与各参考菌株基因型一致,能良好的区分出O157菌株和非O157型大肠杆菌。该方法能用于食品样品的检测和流行病学分离株的快速鉴定。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157 食品检测 多重荧光PCR stx1 stx2 wzy

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动物源E.coli O157:H7 stx基因的检测与系统进化分析 被引量：2

13

作者 程海卫 杨霞 +7 位作者 赵军 陈陆 王新卫 常洪涛 张龙现 刘红英 姚慧霞 王川庆 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期173-180,共8页

为了解2009-2010年间在河南、甘肃地区分离鉴定的5株大肠埃希菌O157(E.coli O157)携带stx的情况及不同分离株间stx分子进化与变迁的情况,本研究利用PCR方法对分离株进行了stx基因检测,并完成了序列测定与系统演化分析。结果表明,5株不... 为了解2009-2010年间在河南、甘肃地区分离鉴定的5株大肠埃希菌O157(E.coli O157)携带stx的情况及不同分离株间stx分子进化与变迁的情况,本研究利用PCR方法对分离株进行了stx基因检测,并完成了序列测定与系统演化分析。结果表明,5株不同动物源的分离株均含有stx1及stx2基因。序列分析结果显示5株分离株间stx1、stx2的核苷酸及氨基酸同源性均较高;stx1基因均与参考株中的山羊源和食品源E.coli O157菌株的同源性较高,进化树中遗传距离最近;分离株的stx2基因与多株牛源及少数人源参考株也具有较高的同源性,进化树中虽然5株分离菌均在一个大主干分支中,但分离株27与其他各分离株及参照株遗传距离最远,独自处于一次级分支中;分离株L37与W、12与50分别分布于牛源、人源E.coli O157小次级分支中;由此可推测,分离株所携带的stx1很有可能是经食品源或羊源E.coli O157传递而来;分离株L37与W、分离株12与50的stx2可能是由牛源、人源E.coli O157菌株传递而来,分离株27的stx2来源不清楚。研究结果表明,5株E.coli O157分离株均含有stx1、stx2基因,但两个基因的起源存在差异。 展开更多

关键词 E COLI O157 stx1 stx2 检测 进化分析

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食品中非O157大肠杆菌志贺毒素基因序列分析 被引量：1

14

作者 李睿 戴诗皎 +2 位作者 戴锴 杜德龙 朱廷恒 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第21期236-238,共3页

对一株从食品中分离的非O157产志贺毒素1型大肠杆菌(EC6)进行研究。将该菌株所产志贺毒素Stx1用PCR扩增stx1基因全长并克隆测序,其stx1基因与GenBank数据库收录的stx1基因最高同源性为99%,表明EC6发生了一定程度的基因突变。采用邻位相... 对一株从食品中分离的非O157产志贺毒素1型大肠杆菌(EC6)进行研究。将该菌株所产志贺毒素Stx1用PCR扩增stx1基因全长并克隆测序,其stx1基因与GenBank数据库收录的stx1基因最高同源性为99%,表明EC6发生了一定程度的基因突变。采用邻位相连法构建进化树,结果表明EC6为stx1基因亚型。 展开更多

关键词 产志贺毒素大肠杆菌 食品 stx1基因 序列分析 非O157血清型

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多重PCR法检测食品中大肠杆菌O157 被引量：1

15

作者 李睿 戴诗皎 +1 位作者 杨敬镜 瞿敏 《武汉工业学院学报》 CAS 2010年第3期1-3,共3页

以大肠杆菌O157的stx1、stx2、wzy基因为靶基因,建立了一种新的多重PCR检测方法。PCR扩增结果与各参考菌株基因型一致。PCR结果表明,wzy基因特异性强,可作为检测O157菌株的标志基因,且为开发大肠杆菌O157的分子检测技术提供新的研究思路。

关键词 大肠杆菌O157 多重PCR stx1 stx2 wzy

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SNARE蛋白及其复合物在突触融合过程中的作用 被引量：5

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作者 梁丽娟 黄薇 《天津药学》 2012年第6期62-66,共5页

SNARE蛋白能够调节所有的细胞内膜融合事件。哺乳动物细胞中有超过30种SNARE家族蛋白,每个蛋白都处在一个独立的亚细胞组分。SNAREs可能编码膜转运特异性的事件,但这些特异性事件实现的机制尚有争议。功能研究证实了SNARE蛋白如何相互作... SNARE蛋白能够调节所有的细胞内膜融合事件。哺乳动物细胞中有超过30种SNARE家族蛋白,每个蛋白都处在一个独立的亚细胞组分。SNAREs可能编码膜转运特异性的事件,但这些特异性事件实现的机制尚有争议。功能研究证实了SNARE蛋白如何相互作用,以便产生驱动力推动脂质双分子层融合。 展开更多

关键词 SNARE蛋白 突触 stx1 SNAP-25 VAMP

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产志贺毒素大肠杆菌的RPA-LF快速检测方法的建立 被引量：2

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作者 田鑫鑫 郭容 +5 位作者 韩先干 王少辉 王权 钟国防 崔立 蒋蔚 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1482-1489,共8页

为建立一种快速检测产志贺毒素大肠杆菌的基于侧流层析的重组酶聚合酶扩增技术(RPA-LF)方法,以志贺毒素stx1和stx2基因序列为靶序列,设计了用于RPA-LF方法的特异性引物及探针,并对RPA-LF反应条件进行优化。结果显示,针对stx1和stx2基因... 为建立一种快速检测产志贺毒素大肠杆菌的基于侧流层析的重组酶聚合酶扩增技术(RPA-LF)方法,以志贺毒素stx1和stx2基因序列为靶序列,设计了用于RPA-LF方法的特异性引物及探针,并对RPA-LF反应条件进行优化。结果显示,针对stx1和stx2基因的最佳反应温度分别为39℃和37℃,最佳反应时间分别为10 min和15 min。最佳反应条件下,stx1和stx2基因的最低检测限分别为1 pg和10 pg,灵敏度较高。该检测方法能够准确识别含stx1和/或stx2基因的大肠杆菌,且不与其他6种非目的病原菌发生交叉反应,表明本方法特异性良好。本研究建立的针对志贺毒素stx1和stx2基因的RPA-LF快速检测方法灵敏度和特异性较好,且检测时间短,结果直观可视。本试验为产志贺毒素大肠杆菌的筛选诊断和现场的快速检测开辟了一个新的途径。 展开更多

关键词 产志贺毒素大肠杆菌 stx1 stx2 重组酶聚合酶扩增技术 侧流层析法

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可视化环介导等温扩增法检测牛奶中产志贺毒素大肠埃希氏菌 被引量：5

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作者 张鹏飞 张萌 +7 位作者 阮傅倩 王婷 徐旭 侯乐乐 白莉 王晔茹 吴倩 王新 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第23期7598-7604,共7页

目的建立可视化环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification,LAMP)法检测牛奶中产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)。方法以stx1/2基因作为检测靶基因,利用羟基萘酚蓝(hydroxy naphthol ... 目的建立可视化环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification,LAMP)法检测牛奶中产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)。方法以stx1/2基因作为检测靶基因,利用羟基萘酚蓝(hydroxy naphthol blue,HNB)指示剂,建立一种可视化检测STEC的LAMP方法。同时,将建立好的LAMP方法与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法相比较,并对人工污染STEC的脱脂乳进行检测。结果建立的可视化LAMP方法在64℃反应50 min后可凭肉眼观察(紫罗兰色到天蓝色)判定结果。该方法特异性良好,与大肠埃希菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等均无交叉反应,可以准确区分STEC与非STEC菌。Stx1-LAMP和stx2-LAMP的检出限分别为3.54×10^(‒4)和3.54×10^(‒5) ng/µL,而常规PCR中stx1和stx2的检出限分别为3.54×10^(‒3)和3.54×10^(‒2) ng/µL,即stx1-LAMP检测方法的灵敏度是stx1-PCR的10倍,stx2-LAMP检测方法的灵敏度是stx2-PCR的1000倍。对人工污染STEC菌牛奶样品进行检测,stx1-LAMP和stx2-LAMP分别可检测到细菌浓度为10^(3)和10^(2) CFU/mL的加标样品。结论本研究为STEC菌株提供了一种特异性强、灵敏度高、成本低,适用于现场和基层检测的可视化LAMP检测方法。 展开更多

关键词 产志贺毒素大肠埃希氏菌 环介导等温扩增 可视化 stx1/2基因

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突变减毒志贺样毒素Ⅰ真核表达载体的构建及其抗卵巢癌的活性 被引量：3

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作者 魏枫 任秀宝 +3 位作者 刘虹 于津浦 付晓达 郝希山 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第6期435-441,共7页

目的构建表达突变减毒的志贺样毒素Ⅰ(Shiga-liketoxin1,Stx1)的真核表达载体,并考察其抗人卵巢癌细胞SKOV3的活性。方法重叠PCR法构建毒性为原毒素毒性1/10和1/100的突变减毒Stx1编码序列,T-A克隆并测序后分别连入真核表达载体pcDNA3.... 目的构建表达突变减毒的志贺样毒素Ⅰ(Shiga-liketoxin1,Stx1)的真核表达载体,并考察其抗人卵巢癌细胞SKOV3的活性。方法重叠PCR法构建毒性为原毒素毒性1/10和1/100的突变减毒Stx1编码序列,T-A克隆并测序后分别连入真核表达载体pcDNA3.1。转染SKOV3细胞,RT-PCR法检测Stx1mRNA在SKOV3细胞中的表达,观察突变减毒Stx1对SKOV3细胞周期的影响和致SKOV3细胞死亡的方式。使用SKOV3荷瘤裸鼠模型,不同毒性突变减毒Stx1真核表达载体经脂质体包裹后肿瘤局部注射给药,评价其体内抑瘤能力。结果突变减毒Stx1真核表达载体经酶切和测序鉴定与预期突变序列一致;RT-PCR证实转染后的SKOV3细胞中存在目的mRNA;体外实验观察到该载体转染可以使人卵巢癌SKOV3细胞的细胞周期阻滞于G2/M期,转染后SKOV3细胞死亡的主要途径是坏死;体内实验显示突变减毒Stx1真核表达载体可以抑制裸鼠体内SKOV3移植瘤的生长。结论通过重叠PCR方法获得2种突变减毒Stx1编码序列,成功构建了相应的真核表达载体,并证实该载体具有明显的抗卵巢癌活性。 展开更多

关键词 志贺样毒素Ⅰ 突变 减毒 真核表达 卵巢癌

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