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基于Touchdown程序的甜菜SRAP核心引物的筛选
1
作者 张程伟 刘佳俊 +2 位作者 阚文亮 宋玥 吴则东 《中国糖料》 2026年第1期40-46,共7页
【目的】旨在筛选出高多态性、高稳定性的SRAP核心引物用于甜菜遗传多样性的鉴定。【方法】利用Touchdown程序对SRAP引物组合进行扩增,用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对扩增条带进行分离,基于扩增结果进行数据分析筛选出符合要求的引... 【目的】旨在筛选出高多态性、高稳定性的SRAP核心引物用于甜菜遗传多样性的鉴定。【方法】利用Touchdown程序对SRAP引物组合进行扩增,用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对扩增条带进行分离,基于扩增结果进行数据分析筛选出符合要求的引物。【结果】从24种上游引物与21种下游引物的504对组合中筛选出43对高多态性、高稳定性的引物组合,其中40对引物组合的多态性信息量(PIC)值大于0.75,24对引物组合PIC值大于0.8,4对引物组合PIC值大于0.9。多态性信息量范围在0.657~0.953,引物对的平均PIC值为0.812。【结论】SRAP核心引物的筛选为甜菜的遗传多样性鉴定以及进一步杂交育种的亲本选择、分子标记辅助育种等提供理论支撑。 展开更多
关键词 甜菜 srap引物 分子标记 核心引物
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基于SRAP分子标记分析贵州芝麻种质资源的遗传多样性
2
作者 潘金卫 杨航 +4 位作者 袁婷婷 向依 李慧琳 奉斌 于二汝 《贵州农业科学》 2026年第3期34-41,共8页
【目的】探明贵州芝麻种质资源的遗传多样性,为保存和利用芝麻种质资源提供参考依据。【方法】以贵州安顺、毕节、黔东南、黔南、铜仁和合肥的70份芝麻种质为材料,利用SRAP引物对植株叶片进行PCR扩增,分析多态位点、Nei’s基因多样性指... 【目的】探明贵州芝麻种质资源的遗传多样性,为保存和利用芝麻种质资源提供参考依据。【方法】以贵州安顺、毕节、黔东南、黔南、铜仁和合肥的70份芝麻种质为材料,利用SRAP引物对植株叶片进行PCR扩增,分析多态位点、Nei’s基因多样性指数(H)、Shannon信息指数(I)等遗传参数。【结果】16对SRAP引物组合对70份芝麻种质共检测到232个位点,其中多态性位点116个。70份芝麻种质的Nei’s基因多样性指数(H)为0.2881,Shannon信息指数(I)为0.4482;遗传相似系数为0.4224~0.8276,均值0.6364。根据地理来源将贵州70份芝麻种质划分为6个组群,Nei’s基因多样性指数(H)为0.1607~0.2966,Shannon信息指数(I)为0.2346~0.4497,遗传一致度为0.8575~0.9980,遗传距离为0.0020~0.1537。UPGMA遗传聚类可在遗传相似系数为0.63处将70份芝麻种质分为5个类群。【结论】贵州芝麻种质资源遗传多样性较丰富;合肥与黔南芝麻的遗传一致度最高,铜仁与安顺芝麻遗传一致度最低;遗传关系聚类结果与地理来源无必然联系。 展开更多
关键词 芝麻 种质资源 srap引物 分子标记 遗传多样性
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山桐子SRAP-PCR反应体系的优化及有效引物筛选
3
作者 严莉 仝铸 +7 位作者 苏春莉 何秀娟 肖翠 王泽琼 周明芹 袁龙义 邱文明 孙中海 《分子植物育种》 北大核心 2025年第16期5388-5394,共7页
为建立适用于山桐子(Idesia polycarpa Maxim.)的SRAP-PCR反应体系,用于山桐子资源分析和鉴定,本研究以山桐子幼嫩叶片DNA为材料,采用L_(16)(4~5)正交试验设计,对影响山桐子SRAP-PCR反应体系的主要影响因素Mg^(2+)、d NTPs和引物浓度以... 为建立适用于山桐子(Idesia polycarpa Maxim.)的SRAP-PCR反应体系,用于山桐子资源分析和鉴定,本研究以山桐子幼嫩叶片DNA为材料,采用L_(16)(4~5)正交试验设计,对影响山桐子SRAP-PCR反应体系的主要影响因素Mg^(2+)、d NTPs和引物浓度以及Taq DNA聚合酶和模板DNA用量进行优化。结果表明:山桐子SRAP-PCR最优反应体系中模板DNA为30ng、Taq DNA聚合酶用量为1.5U、dNTPs浓度为0.25mmol/L、引物浓度为0.5μmol/L、Mg^(2+)浓度为3 mmol/L、1×PCR buffer,总体系20μL。各因素对山桐子SRAP-PCR扩增效果影响从大到小依次为:Taq DNA聚合酶用量、Mg^(2+)浓度、引物浓度、模板DNA浓度、dNTPs浓度。采用优化后的体系对267组SRAP引物进行筛选,其中220对引物组合可扩增出目的条带(引物有效性82.39%);157对引物组合能够扩增出清晰且多态性较高的条带。利用其中6对引物组合对24份山桐子资源进行了遗传分析,聚类结果客观反映了这些资源的地理分布和亲缘关系。以上结果表明本研究优化的山桐子SRAP-PCR反应体系稳定、可靠,可用于山桐子遗传资源研究等应用。 展开更多
关键词 山桐子 srap-PCR 引物筛选 体系优化
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基于SRAP分子标记的石斛兰杂交后代鉴定及其遗传多样性分析
4
作者 林榕燕 陈艺荃 +2 位作者 林觅 伍莉娟 钟海丰 《东南园艺》 2025年第2期162-168,共7页
【目的】构建基于SRAP分子标记技术的石斛兰杂交后代真实性鉴定方法,为石斛兰品种(系)鉴定提供可靠技术支撑。【方法】利用SRAP分子标记技术,对报春石斛、檀香石斛以及以报春石斛为母本、檀香石斛为父本的151个杂交后代进行真实性鉴定... 【目的】构建基于SRAP分子标记技术的石斛兰杂交后代真实性鉴定方法,为石斛兰品种(系)鉴定提供可靠技术支撑。【方法】利用SRAP分子标记技术,对报春石斛、檀香石斛以及以报春石斛为母本、檀香石斛为父本的151个杂交后代进行真实性鉴定及遗传多样性分析。【结果】从90对SRAP引物中筛选7对特异性引物,实现对杂交后代的高效鉴定,效率达100%;多态性分析显示,7对引物的多态性比例为81.03%,揭示了丰富的遗传变异。聚类分析表明,在遗传距离为0.24时,153个样本材料可分为五个类群;82.78%的杂交后代与父本聚为一类,亲缘关系更近;杂交后代株系间的遗传相似系数普遍高于其与双亲的遗传相似系数,父本和母本与杂交后代株系的遗传相似系数接近。【结论】SRAP分子标记可用于石斛兰杂交后代早期鉴定,能够有效辅助石斛兰新品种鉴定和选育。 展开更多
关键词 石斛兰 srap标记 多态性 真实性鉴定 遗传多样性 特异性引物
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美味扇菇SRAP-PCR反应体系优化及菌盖颜色特异性引物筛选
5
作者 张警丹 杨婷 +2 位作者 张慧敏 丁佳瑶 姜婉竹 《食药用菌》 2025年第5期350-356,共7页
以采自吉林省白山市的两个野生美味扇菇菌株(编号M3,M6)为试材,采用单因素试验法,对SRAP-PCR反应的Taq DNA聚合酶用量、Mg^(2+)浓度、dNTPs浓度、引物浓度和模板DNA用量等关键因素进行优化,并对SRAP引物进行特异性条带筛选。结果表明:... 以采自吉林省白山市的两个野生美味扇菇菌株(编号M3,M6)为试材,采用单因素试验法,对SRAP-PCR反应的Taq DNA聚合酶用量、Mg^(2+)浓度、dNTPs浓度、引物浓度和模板DNA用量等关键因素进行优化,并对SRAP引物进行特异性条带筛选。结果表明:美味扇菇SRAP-PCR的最优反应体系为Taq DNA聚合酶1.0 U、Mg^(2+)3.0 mmol/L、dNTPs 0.5 mmol/L、引物0.2μmol/L、模板DNA 40 ng/μL、ddH_(2)O补足至20μL。采用优化后的体系对153对SRAP引物进行筛选,有124对引物可以扩增出目的条带(引物有效性81.05%),其中105对引物组合能扩增出清晰且多态性较高的条带。研究结果可为美味扇菇分子标记开发及遗传多样性分析提供理论依据。 展开更多
关键词 美味扇菇 srap-PCR 体系优化 引物筛选
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白及SRAP-PCR反应体系正交设计优化及引物筛选
6
作者 桂腾琴 李春艳 +2 位作者 韦燕 武忠亮 张思平 《福建农业科技》 2025年第3期18-24,共7页
建立白及Bletilla striata Rchb.f.最佳SRAP-PCR(sequence-related amplified polymorphism polymerase chain reaction,SRAP-PCR)反应体系,为从分子水平开展白及不同地理群体的分子遗传学评价研究提供相关的技术支持。以采自于贵州省... 建立白及Bletilla striata Rchb.f.最佳SRAP-PCR(sequence-related amplified polymorphism polymerase chain reaction,SRAP-PCR)反应体系,为从分子水平开展白及不同地理群体的分子遗传学评价研究提供相关的技术支持。以采自于贵州省安龙县白及嫩叶为材料,应用正交设计L_(9)(3^(4))对反应体系中4个因素(引物、Taq DNA聚合酶、Mg2+和dNTPs)的用量进行优化,正交设计引物组合为(Me1/Em1),探索建立白及最佳SRAP-PCR反应体系并对引物进行筛选,筛选稳定性高、多态性好的引物组合。结果表明:白及的最佳SRAP-PCR反应体系(25μL)为:2.50μL10×Buffer、2.50 mmol·L^(−1)Mg^(2+)、0.30 mmol·L^(−1)dNTPs、0.25μmol·L^(−1)引物、1.50 U Taq DNA聚合酶以及20~80 ng模板DNA。利用21份白及对最佳SRAP-PCR反应体系稳定性检测,该体系稳定性高、重复性好。以白及基因组DNA为模板,选用最佳的SRAP-PCR反应体系对80对引物组合进行筛选,最终获得多态性引物13对,共扩增出182个位点,其中多态性位点152个,多态性位点百分比为83.52%。该体系稳定性高、重复性好,为后续遗传多样性研究提供相关的技术支持。 展开更多
关键词 白及 正交设计 srap-PCR 体系优化 引物筛选
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怀地黄SRAP扩增体系的建立与引物的筛选 被引量：6
7
作者 周春娥 谷凤平 +2 位作者 路淑霞 段红英 周延清 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期256-260,273,共6页
为建立适合怀地黄SRAP-PCR分子标记技术体系,通过单因子实验分别研究了DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度对怀地黄SRAP扩增反应的影响,确立了适合怀地黄SRAP最佳反应体系为:在25μL的反应体系中,模板DNA量... 为建立适合怀地黄SRAP-PCR分子标记技术体系,通过单因子实验分别研究了DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度对怀地黄SRAP扩增反应的影响,确立了适合怀地黄SRAP最佳反应体系为:在25μL的反应体系中,模板DNA量20ng/25μL、2.5mmol/LMg2+、0.32μmol/L的上下游引物、0.30μmol/L的dNTP以及2.5UTaq酶,并利用确定的体系从88个引物组合中筛选出12对适合怀地黄SRAP-PCR反应的引物。 展开更多
关键词 怀地黄 分子标记 扩增体系优化 srap 引物的筛选
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葡萄SRAP反应体系优化及引物筛选 被引量：35
8
作者 郭大龙 张君玉 +2 位作者 李猛 张国海 刘崇怀 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期379-384,共6页
本试验利用L16(45)正交试验设计探寻葡萄SRAP-PCR反应体系中的关键因子,同时结合单因素试验简单、快捷的特点逐个对PCR反应体系的主要成分进行优化。充分利用两种方法的优点并降低试验工作量取得了较好的效果,建立了适于葡萄的SRAP反应... 本试验利用L16(45)正交试验设计探寻葡萄SRAP-PCR反应体系中的关键因子,同时结合单因素试验简单、快捷的特点逐个对PCR反应体系的主要成分进行优化。充分利用两种方法的优点并降低试验工作量取得了较好的效果,建立了适于葡萄的SRAP反应体系。结果表明Mg2+浓度为影响葡萄SRAP-PCR反应的关键因素;优化的20μL SRAP-PCR反应体系中各组分的最适含量为:10×Buffer2.0μL,Mg2+2.5mmol/L,dNTPs0.3mmol/L,引物0.4μmol/L,Taq DNA聚合酶1.0U,模板DNA1.0ng/μL。利用SRAP反应体系,从100对SRAP引物组合中筛选出扩增稳定,条带清晰,多态性好的引物19对。本研究建立的适于葡萄SRAP-PCR扩增的反应体系,将为葡萄种质遗传多样性评价、基因组分析、指纹图谱构建,分子标记辅助育种和遗传改良研究提供基础。 展开更多
关键词 葡萄 srap 体系优化 引物筛选
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大豆种质资源SRAP分子标记中的引物筛选 被引量：9
9
作者 王芳 徐翔 +3 位作者 李领川 聂卉 李晓静 周延清 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期83-87,共5页
以113个大豆栽培品种和20个野生品种为材料,从288对引物组合中筛选出12对多态性丰富、条带清晰、可重复性好的SRAP引物组合。用筛选出的12对引物组合对大豆品种进行PCR扩增,获得了带型丰富和清晰可辨的DNA的PAGE指纹图谱;共扩增出251条... 以113个大豆栽培品种和20个野生品种为材料,从288对引物组合中筛选出12对多态性丰富、条带清晰、可重复性好的SRAP引物组合。用筛选出的12对引物组合对大豆品种进行PCR扩增,获得了带型丰富和清晰可辨的DNA的PAGE指纹图谱;共扩增出251条谱带,其中多态性条带220条,多态性谱带比率为87.6%,平均每个引物扩增出18.3条谱带。结果显示,所筛选出的12对引物组合可以有效的应用于大豆种质资源的SRAP分析。 展开更多
关键词 大豆 srap标记 引物筛选
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扬子鳄SRAP-PCR反应体系的优化及引物筛选 被引量：11
10
作者 田明礼 吴孝兵 《安徽师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2008年第2期163-167,共5页
以扬子鳄总DNA为材料,对影响SRAP-PCR的Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物浓度等因素进行了优化,分析了TaqDNA聚合酶、样本浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度以及引物浓度对SRAP-PCR扩增结果的影响.筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物l3... 以扬子鳄总DNA为材料,对影响SRAP-PCR的Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物浓度等因素进行了优化,分析了TaqDNA聚合酶、样本浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度以及引物浓度对SRAP-PCR扩增结果的影响.筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物l3对,建立了稳定的、可重复的扬子鳄SRAP-PCR最佳反应体系及PCR扩增参数.研究结果表明:在30μlSRAP-PCR反应体系中,样本最适宜为1μl(30ng/μl),Mg2+的最适为2μl(2.5mmol/L),dNTPs最适为2μl(2.5mmol/L),单引物的最适均为1μl(10pmol/μl);聚合酶在30μl反应体系中宜加入1U.SRAP-PCR引物筛选及其反应体系的建立,为今后利用SRAP标记技术开展扬子鳄种群的分子生物学研究提供了一个标准化程序和强有力的工具. 展开更多
关键词 扬子鳄 srap标记 引物 反应体系
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蓝莓SRAP—PCR反应体系的建立优化及引物筛选 被引量：13
11
作者 尹德洁 苏淑钗 +2 位作者 刘肖 侯智霞 陈露 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期35-39,64,共6页
为进一步利用分子标记技术进行蓝莓品种鉴定及种质资源遗传多样性的分析,拟建立蓝莓新型SRAP标记(相关序列扩增多态性)的优化PCR体系并进行引物组合的筛选。运用改良CTAB法所提取的蓝莓幼嫩叶片的DNA,采用单因子试验,分析了模板DNA浓度... 为进一步利用分子标记技术进行蓝莓品种鉴定及种质资源遗传多样性的分析,拟建立蓝莓新型SRAP标记(相关序列扩增多态性)的优化PCR体系并进行引物组合的筛选。运用改良CTAB法所提取的蓝莓幼嫩叶片的DNA,采用单因子试验,分析了模板DNA浓度、引物浓度、退火温度等影响SRAP-PCR的主要参数,建立了适合蓝莓SRAP-PCR的优化体系,20μL的PCR反应体系:模板DNA浓度120 ng、引物浓度0.40μmol/L、2×TaqPCR Master Mix 10μL,剩余体积用去离子水补足;最佳PCR扩增程序的退火温度为50℃。并从80对SRAP引物组合中筛选出条带清晰且多态性丰富的15对引物组合。 展开更多
关键词 蓝莓 分子标记 srap—PCR 体系优化 引物筛选
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降香黄檀SRAP分子标记的引物筛选 被引量：6
12
作者 杨云 孟慧 +2 位作者 吴翼 陈波 甘炳春 《江西农业学报》 CAS 2011年第3期29-31,共3页
采用改良CTAB法提取降香黄檀基因组DNA,选用4个降香黄檀DNA作模板,对256个SRAP引物组合进行筛选。以条带清晰、多态性丰富为引物筛选原则,最后共筛选出25个组合作为降香黄檀SRAP分子标记的核心引物,为后续SRAP分析提供依据。
关键词 降香黄檀 srap标记 多态性引物 筛选
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濒危植物香果树(Emmenopterys henryi)SRAP反应体系的建立与引物筛选 被引量：2
13
作者 牛艳丽 彭焱松 +8 位作者 宋莉 周赛霞 魏宗贤 宋满珍 黄江 张平贤 高浦新 杜娟 虞志军 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期3136-3144,共9页
以珍稀濒危植物香果树(Emmenopterys henryi)基因组DNA为研究对象,对影响SRAP-PCR反应的因素如Mg^(2+)浓度、d NTPs浓度、Taq DNA聚合酶、引物浓度4因素进行优化。确定香果树SRAP反应体系为:20μL PCR反应体系,50 ng模板DNA,1×Buff... 以珍稀濒危植物香果树(Emmenopterys henryi)基因组DNA为研究对象,对影响SRAP-PCR反应的因素如Mg^(2+)浓度、d NTPs浓度、Taq DNA聚合酶、引物浓度4因素进行优化。确定香果树SRAP反应体系为:20μL PCR反应体系,50 ng模板DNA,1×Buffer,2.5 mmol/L Mg^(2+),1 U Taq聚合酶,0.3 mmol/L d NTPs,正向和反向引物各0.3μmol/L;在香果树2份样品中进行引物初筛,利用已发表的SRAP引物,选取8条正向引物和8条反向引物,共计64对引物。从中筛选出10对重复性好,谱带清晰且稳定的引物。并将这些引物在香果树2个野生居群20份样品中进行遗传多样性分析,共得到72条扩增谱带,其中多态性谱带60条,多态性比率83.3%,平均每个引物组合产生6个多态性位点,供试材料间遗传变异相对丰富。 展开更多
关键词 香果树 珍稀濒危植物 srap 引物筛选
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白芨属SRAP引物筛选及反应体系优化 被引量：4
14
作者 朱英 刘永翔 +2 位作者 黄永会 杨琳 刘作易 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2012年第11期1-3,7,共4页
为给白芨种质遗传多样性评价、分子标记辅助育种和遗传改良研究提供基础,建立适于白芨SRAP-PCR扩增的反应体系,利用L16(45)正交试验设计对白芨SRAP-PCR反应体系中的各影响因子进行探索。结果表明:Mg2+浓度为影响白芨SRAP-PCR反应的关键... 为给白芨种质遗传多样性评价、分子标记辅助育种和遗传改良研究提供基础,建立适于白芨SRAP-PCR扩增的反应体系,利用L16(45)正交试验设计对白芨SRAP-PCR反应体系中的各影响因子进行探索。结果表明:Mg2+浓度为影响白芨SRAP-PCR反应的关键因素;在优化的20μL SRAP-PCR反应体系中各组分的最适含量为10×Buffer 2.0μL,Mg2+2.5mmo1/L,dNTPs 0.5mmol/L,引物0.2μmol/L,Taq酶1.0U,模板DNA 2.0ng/μL。利用SRAP反应体系,从72对SRAP引物组合中筛选出条带清晰、扩增稳定、多态性好的引物15对。 展开更多
关键词 白芨 srap 体系优化 引物筛选
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适合甜菜品种鉴定的SRAP核心引物的筛选 被引量：6
15
作者 吴则东 王凤华 +3 位作者 喻丹丹 周利利 倪洪涛 马龙彪 《中国农学通报》 2015年第30期234-238,共5页
为筛选适合甜菜品种纯度鉴定的SRAP核心引物,以12个进口国外甜菜品种为材料,对546对SRAP引物组合进行扩增,利用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离,选择适合甜菜品种纯度鉴定的SRAP核心引物组合。结果从546对SRAP引物组合中筛选出扩... 为筛选适合甜菜品种纯度鉴定的SRAP核心引物,以12个进口国外甜菜品种为材料,对546对SRAP引物组合进行扩增,利用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离,选择适合甜菜品种纯度鉴定的SRAP核心引物组合。结果从546对SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富、重复性好的引物组合23对,这23对引物组合共扩增出177条多态性条带,引物的PIC值均大于0.6。平均每对引物扩增7.7条多态性条带,从理论上讲,这些核心引物完全可以实现对现有甜菜品种的鉴定。 展开更多
关键词 甜菜 srap 核心引物 品种鉴定
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三角梅SRAP-PCR反应体系的建立及引物筛选 被引量：7
16
作者 武晓燕 唐源江 曹雯静 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期335-339,共5页
利用L9(34)正交试验设计,对影响PCR反应的TaqDNA聚合酶量、dNTP浓度、Mg2+浓度和引物浓度4个因素以及模板DNA浓度进行了三角梅SRAP-PCR扩增反应条件优化研究,并对引物进行了全面筛选.三角梅SRAP-PCR优化反应体系结果为:2.5μL 10×P... 利用L9(34)正交试验设计,对影响PCR反应的TaqDNA聚合酶量、dNTP浓度、Mg2+浓度和引物浓度4个因素以及模板DNA浓度进行了三角梅SRAP-PCR扩增反应条件优化研究,并对引物进行了全面筛选.三角梅SRAP-PCR优化反应体系结果为:2.5μL 10×PCR buffer、60ng模板DNA、TaqDNA聚合酶1.0U、dNTP 0.25mmol/L、Mg2+2.5mmol/L、引物0.3μmol/L,总体积25μL.运用该结果从208对引物组合中共筛选出扩增条带清晰,多态性丰富的SRAP引物27对.优化体系的建立及其引物的筛选为今后利用SRAP标记技术进行三角梅遗传分析、图谱构建、基因定位与种质资源鉴定奠定了技术基础. 展开更多
关键词 三角梅 srap标记 体系优化 引物筛选
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白檀SRAP-PCR体系优化及引物筛选 被引量：5
17
作者 安佰义 于慧颖 +3 位作者 吴双 刘晓嘉 孙晓刚 张艳 《北方园艺》 CAS 北大核心 2018年第24期15-20,共6页
以白檀新生嫩叶为试材,通过单因素试验与正交实验,建立并优化白檀SRAP-PCR反应体系,对白檀SRAP反应体系中5个因素进行优化试验,并筛选SRAP引物组合,以期为今后SRAP分子标记在白檀上的应用提供依据。结果表明:各因素对SRAP-PCR扩增结果... 以白檀新生嫩叶为试材,通过单因素试验与正交实验,建立并优化白檀SRAP-PCR反应体系,对白檀SRAP反应体系中5个因素进行优化试验,并筛选SRAP引物组合,以期为今后SRAP分子标记在白檀上的应用提供依据。结果表明:各因素对SRAP-PCR扩增结果影响差异较大,依次为模板DNA>dNTPs>Mg^(2+)>引物>Taq DNA聚合酶。最优反应体系为总体系10μL体系中,Taq DNA聚合酶0.75U、dNTPs 0.1mmol·L^(-1)、Mg^(2+)2mmol·L^(-1)、引物0.4μmol·L^(-1)以及模板DNA 80ng。利用稳定的SRAP-PCR体系,从176对引物组合中筛选出25对多态性好的引物组合。在所建立的最优体系下,不同白檀基因组和不同引物组合均能稳定扩增,表明体系稳定可靠适用于白檀SRAP分子标记研究。 展开更多
关键词 白檀 srap 体系优化 引物筛选
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油茶SRAP-PCR反应体系的建立与引物筛选 被引量：9
18
作者 张婷 吕明治 +1 位作者 董妍玲 范睿 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第17期8882-8885,共4页
[目的]建立油茶SRAP-PCR的反应体系,并筛选合适的引物。[方法]采用CTAB法提取油茶基因组DNA,DNA扩增时采用PCR技术,扩增结果采用电泳法和成像系统进行分离和记录。[结果]在30μl反应体系中,适宜浓度分别是Mg2+1.5 mmol/L、模板DNA90ng... [目的]建立油茶SRAP-PCR的反应体系,并筛选合适的引物。[方法]采用CTAB法提取油茶基因组DNA,DNA扩增时采用PCR技术,扩增结果采用电泳法和成像系统进行分离和记录。[结果]在30μl反应体系中,适宜浓度分别是Mg2+1.5 mmol/L、模板DNA90ng、引物0.21μmol/L、dNTPs 110μmol/L、TaqDNA聚合酶1.5 U;反应程序中第2次最适退火温度为49℃。随后,在36对引物组合中筛选出11对重复性好、多态性高的引物。[结论]优化的SRAP-PCR反应体系及筛选的引物为SRAP分子标记在油茶遗传育种中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 油茶 srap PCR反应体系 引物筛选
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观赏及砧木用苹果品种的SRAP-PCR反应体系优化及其多态性检测 被引量：4
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作者 徐榕雪 汤庚国 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期69-74,共6页
通过建立和优化PCR扩增体系,开展观赏及砧木用苹果品种的SRAP分子标记遗传多样性研究,根据所获得的多态位点探究不同材料间的亲缘关系。研究结果表明SRAP-PCR最佳反应体系为（20μL）：模板DNA30ng,1×Buffer,Mg2＋1.5 mmol/L,dNTP ... 通过建立和优化PCR扩增体系,开展观赏及砧木用苹果品种的SRAP分子标记遗传多样性研究,根据所获得的多态位点探究不同材料间的亲缘关系。研究结果表明SRAP-PCR最佳反应体系为（20μL）：模板DNA30ng,1×Buffer,Mg2＋1.5 mmol/L,dNTP 0.3 mmol/L,引物各0.4μmol/L,TaqDNA聚合酶1.0 U。应用筛选出的12对多态性丰富的SRAP引物组合对8个观赏和砧木用苹果品种进行遗传多样性分析,共得到97条扩增谱带,其中多态性谱带78条,多态性比率80.4%,平均每个引物组合产生6.5个多态性位点,供试材料间遗传变异相对丰富。运用NTSYS软件中的UPGMA算法分析,各材料的遗传相似系数为0.62~0.92。树状图中,芭蕾苹果‘舞乐’、‘舞佳’聚为同组,遗传变异较小;砧木种质‘CX3’、‘CX5’遗传差异相对较大;‘秋幸’、‘秋实’具有较近的遗传关系。此研究结果可为观赏及砧木用苹果种质资源的品种鉴定及分子标记辅助育种提供参考。 展开更多
关键词 苹果 srap 体系优化 引物筛选 多态性检测
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芦笋SRAP反应体系优化及引物筛选 被引量：13
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作者 盛文涛 周劲松 +2 位作者 汤泳萍 罗绍春 陈光宇 《分子植物育种》 CAS CSCD 2010年第3期612-618,共7页
本研究以芦笋基因组总DNA为模板,通过对芦笋SRAP反应体系的重要参数进行优化,建立了一套适用于芦笋的SRAP反应体系:25μL的反应体系中,模板DNA量80ng、Mg2+浓度3.0mmol/L、上下游引物各0.2μmol/L、dNTPs0.3mmol/L、Taq DNA聚合酶1U以及... 本研究以芦笋基因组总DNA为模板,通过对芦笋SRAP反应体系的重要参数进行优化,建立了一套适用于芦笋的SRAP反应体系:25μL的反应体系中,模板DNA量80ng、Mg2+浓度3.0mmol/L、上下游引物各0.2μmol/L、dNTPs0.3mmol/L、Taq DNA聚合酶1U以及1×Buffer。扩增程序为:94℃预变性3min;94℃30s、35℃30s、72℃1.5min,5个循环;然后退火温度提高到50℃,35个循环;最后72℃延伸10min。比较琼脂糖凝胶和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SRAP扩增产物的多态性,结果发现:6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物比琼脂糖的效果好。利用该优化体系筛选引物,从256个SRAP引物组合中筛选出239个,它们具有扩增条带清晰、丰富、重复性好的优点,证明了此优化体系稳定可靠。 展开更多
关键词 芦笋 srap 反应体系 优化 引物筛选
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