目的·探讨沉默信息调节因子2相关酶5(sirtuin 5,SIRT5)在脓毒症肺血管内皮细胞损伤中的作用及机制。方法·对野生型(wild-type,WT)和Sirt5基因敲除的C57BL/6雄性小鼠行盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP),对小...目的·探讨沉默信息调节因子2相关酶5(sirtuin 5,SIRT5)在脓毒症肺血管内皮细胞损伤中的作用及机制。方法·对野生型(wild-type,WT)和Sirt5基因敲除的C57BL/6雄性小鼠行盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP),对小鼠安乐死后进行肺组织取材。苏木精-伊红(hematoxylin and eosin staining,H-E)染色评估肺组织炎症水平;伊文思蓝(Evans blue,EB)染色评估血管渗漏;肺组织免疫荧光染色评估小鼠凝血功能改变情况;采用免疫组化染色检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)蛋白表达,评估CLP小鼠内皮细胞炎症水平。采用基因编辑技术对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)SIRT5基因进行敲减或者过表达,并使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激诱导内皮细胞炎症。采用蛋白质印迹法检测VCAM-1、组织因子(tissue factor,TF)等内皮细胞损伤标志物,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qPCR)检测白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、IL-1β等炎症指标。对SIRT5过表达的HUVEC进行转录组测序,并通过qPCR验证关键基因如F2R样凝血酶或胰蛋白酶受体3(F2R like thrombin or trypsin receptor 3,F2RL3)或serpin家族成员3(serpin family A member 3,SERPINA3)以及转化生长因子-β2/3(transforming growth factorβ2/3,TGF-β2/3)的表达。结果·Sirt5基因敲除显著加重CLP小鼠肺损伤,使其生存率降低(P<0.001);H-E染色显示小鼠肺组织炎症浸润增加,EB染色观察到血管渗漏增加(P<0.001),免疫荧光染色可见纤维蛋白原沉积升高。SIRT5基因敲减的HUVEC中VCAM-1、TF蛋白及IL-6、IL-1β、VCAM-1、E选择素(E-selectin)等炎症因子mRNA表达上调(均P<0.001),而SIRT5过表达可逆转此效应。转录组测序分析表明SIRT5通过抑制F2RL3/SERPINA3/TGF-β通路调控内皮炎症与凝血反应。结论·SIRT5通过负向调控F2RL3/SERPINA3/TGF-β信号轴减轻内皮炎症及促凝血反应,提示其在脓毒症肺损伤中的潜在保护作用。展开更多
目的探讨乳腺癌中SIRT5的表达及其与PKM2及HK2相关性及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测130例乳腺癌组织及癌旁正常组织中SIRT5、PKM2及HK2的表达,应用RT-PCR法检测60例乳腺癌组织及癌旁正常组织SIRT5、PKM2及HK2的基因表达,分析SIRT...目的探讨乳腺癌中SIRT5的表达及其与PKM2及HK2相关性及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测130例乳腺癌组织及癌旁正常组织中SIRT5、PKM2及HK2的表达,应用RT-PCR法检测60例乳腺癌组织及癌旁正常组织SIRT5、PKM2及HK2的基因表达,分析SIRT5表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果乳腺癌组织中SIRT5、PKM2及HK2的平均光密度值均显著高于癌旁正常组织(5824.4±163.1 vs 2629.9±132.3、5980.3±232.2 vs 2164.9±121.3、6005.1±197.5 vs 2196.7±155.4,P<0.01),乳腺癌组织SIRT5、PKM2及HK2 mRNA的表达均高于癌旁正常组织(P<0.01)。乳腺癌组织中SIRT5与PKM2、HK2蛋白间呈正相关(r=0.647、r=0.600,P<0.01)。SIRT5阳性率与患者年龄、淋巴结转移、TNM分期、ER及PR表达差异无统计学意义(P=0.859,P=0.248,P=0.986,P=0.489,P=0.882);与肿瘤大小、组织学分级及HER-2表达差异有统计学意义(P=0.003,P=0.001,P=0.037)。结论SIRT5的过表达对判断乳腺癌的发生、发展及预后具有一定价值,并为SIRT5可能通过有氧糖酵解影响乳腺癌的发生、发展奠定基础。展开更多
文摘目的·探讨沉默信息调节因子2相关酶5(sirtuin 5,SIRT5)在脓毒症肺血管内皮细胞损伤中的作用及机制。方法·对野生型(wild-type,WT)和Sirt5基因敲除的C57BL/6雄性小鼠行盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP),对小鼠安乐死后进行肺组织取材。苏木精-伊红(hematoxylin and eosin staining,H-E)染色评估肺组织炎症水平;伊文思蓝(Evans blue,EB)染色评估血管渗漏;肺组织免疫荧光染色评估小鼠凝血功能改变情况;采用免疫组化染色检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)蛋白表达,评估CLP小鼠内皮细胞炎症水平。采用基因编辑技术对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)SIRT5基因进行敲减或者过表达,并使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激诱导内皮细胞炎症。采用蛋白质印迹法检测VCAM-1、组织因子(tissue factor,TF)等内皮细胞损伤标志物,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qPCR)检测白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、IL-1β等炎症指标。对SIRT5过表达的HUVEC进行转录组测序,并通过qPCR验证关键基因如F2R样凝血酶或胰蛋白酶受体3(F2R like thrombin or trypsin receptor 3,F2RL3)或serpin家族成员3(serpin family A member 3,SERPINA3)以及转化生长因子-β2/3(transforming growth factorβ2/3,TGF-β2/3)的表达。结果·Sirt5基因敲除显著加重CLP小鼠肺损伤,使其生存率降低(P<0.001);H-E染色显示小鼠肺组织炎症浸润增加,EB染色观察到血管渗漏增加(P<0.001),免疫荧光染色可见纤维蛋白原沉积升高。SIRT5基因敲减的HUVEC中VCAM-1、TF蛋白及IL-6、IL-1β、VCAM-1、E选择素(E-selectin)等炎症因子mRNA表达上调(均P<0.001),而SIRT5过表达可逆转此效应。转录组测序分析表明SIRT5通过抑制F2RL3/SERPINA3/TGF-β通路调控内皮炎症与凝血反应。结论·SIRT5通过负向调控F2RL3/SERPINA3/TGF-β信号轴减轻内皮炎症及促凝血反应,提示其在脓毒症肺损伤中的潜在保护作用。
文摘目的探讨乳腺癌中SIRT5的表达及其与PKM2及HK2相关性及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测130例乳腺癌组织及癌旁正常组织中SIRT5、PKM2及HK2的表达,应用RT-PCR法检测60例乳腺癌组织及癌旁正常组织SIRT5、PKM2及HK2的基因表达,分析SIRT5表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果乳腺癌组织中SIRT5、PKM2及HK2的平均光密度值均显著高于癌旁正常组织(5824.4±163.1 vs 2629.9±132.3、5980.3±232.2 vs 2164.9±121.3、6005.1±197.5 vs 2196.7±155.4,P<0.01),乳腺癌组织SIRT5、PKM2及HK2 mRNA的表达均高于癌旁正常组织(P<0.01)。乳腺癌组织中SIRT5与PKM2、HK2蛋白间呈正相关(r=0.647、r=0.600,P<0.01)。SIRT5阳性率与患者年龄、淋巴结转移、TNM分期、ER及PR表达差异无统计学意义(P=0.859,P=0.248,P=0.986,P=0.489,P=0.882);与肿瘤大小、组织学分级及HER-2表达差异有统计学意义(P=0.003,P=0.001,P=0.037)。结论SIRT5的过表达对判断乳腺癌的发生、发展及预后具有一定价值,并为SIRT5可能通过有氧糖酵解影响乳腺癌的发生、发展奠定基础。
