弓形虫表面抗原SAG3基因和IL-2基因佐剂混合诱导小鼠免疫应答研究 被引量：18

1

作者 周永安 余新炳 +4 位作者 陈海峰 郑焕钦 殷国荣 吴忠道 陈观今 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第11期945-948,共4页

目的了解编码SAG3的重组质粒和IL-2基因佐剂在小鼠体内的免疫反应,为进一步的核酸疫苗及免疫学研究创造条件。方法将编码SAG3的质粒和鼠源性IL-2表达载体以100μg的剂量感染小鼠,3周中两次以相同的剂量加强免疫,分别以PBS和空质粒pcDNA... 目的了解编码SAG3的重组质粒和IL-2基因佐剂在小鼠体内的免疫反应,为进一步的核酸疫苗及免疫学研究创造条件。方法将编码SAG3的质粒和鼠源性IL-2表达载体以100μg的剂量感染小鼠,3周中两次以相同的剂量加强免疫,分别以PBS和空质粒pcDNA3.1感染。采用ELISA法测定抗体水平、亚型、IFN-γI、L-4和IL-2的含量,RT-PCR方法检测注射部位目的基因的转录,所有鼠均由强毒力ZS2株弓形虫感染。结果SAG3表达质粒3次免疫后鼠体内特异IgG水平明显上升,IL-2表达质粒的联合使用导致IgG2a水平的升高和IFN-γ的产生,提高了其分泌IL-2的水平,但对IL-4的水平产生轻微的影响;RT-PCR显示首次使用导致IgG2a水平的升高和IFN-γ的产生,提高了其分泌IL-2的水平,但对IL-4的水平产生轻微的影响;RT-PCR显示首次免疫15天后,目的基因在肌肉组织中仍有表达;混合质粒注射和小鼠抗弓形虫感染的存活时间延长。结论由SAG3 DNA诱导的免疫应答因IL-2表达质粒的共同注射而增强,DNA疫苗和适当细胞因子的共注射对抵抗弓形虫感染的效果值得进一步研究。 展开更多

关键词 DNA免疫 弓形虫表面抗原sag3 基因佐剂 免疫应答

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弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体的构建及筛选 被引量：6

2

作者 韦相才 钟兴明 +2 位作者 郑焕钦 陈观今 王景圆 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第12期1045-1048,1061,共5页

目的　构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体 ,建立基因敲除突变株 ,为进一步探讨SAG3功能和弓形虫侵入宿主细胞机制提供可行的研究方法。方法　用基因克隆方法将SAG31.5 3kb和 2 .81kb两个同源序列分别插入TUB5 /CAT质粒中 ,构建置换型打... 目的　构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体 ,建立基因敲除突变株 ,为进一步探讨SAG3功能和弓形虫侵入宿主细胞机制提供可行的研究方法。方法　用基因克隆方法将SAG31.5 3kb和 2 .81kb两个同源序列分别插入TUB5 /CAT质粒中 ,构建置换型打靶载体 ,氯霉素乙酰转移酶 (CAT)抗性基因作为筛选标记 ,采用电转移转染细胞方法进行基因打靶 ,建立突变型的弓形虫株 ,采用PCR、酶切分析和SouthernBlot杂交方法筛选鉴定。结果　构建了弓形虫RH株 5’SAG3 TUB5 /CAT 3’SAG3置换型载体 ,获得了敲除SAG3基因的弓形虫突变株 ,建立基因敲除突变株 ,获得了阳性的筛选克隆 ,经鉴定证明基因打靶结果准确。结论　通过构建基因打靶载体 ,可有目的地敲除弓形虫膜抗原基因 ,为进一步研究弓形虫侵入机制 ,探讨弓形虫病防治提供可行的方法。 展开更多

关键词 弓形虫 膜抗原 sag3 基因打靶 载体

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弓形虫RH株表面抗原SAG3去信号肽基因的蛋白原核表达及鉴定 被引量：5

3

作者 马亮 刁玉梅 +3 位作者 任保彦 宫鹏涛 李建华 张西臣 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期104-108,共5页

根据GenBank中弓形虫表面抗原SAG3基因序列,以弓形虫总RNA反转录的cDNA为模板,扩增出SAG3去除信号肽基因并进行原核表达。将重组pET-28a(+)-SAG3阳性表达质粒转入大肠杆菌BL(DE3)中,用IPTG进行诱导表达。通过SDS-PAGE和Western blottin... 根据GenBank中弓形虫表面抗原SAG3基因序列,以弓形虫总RNA反转录的cDNA为模板,扩增出SAG3去除信号肽基因并进行原核表达。将重组pET-28a(+)-SAG3阳性表达质粒转入大肠杆菌BL(DE3)中,用IPTG进行诱导表达。通过SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定。结果表明:成功扩增了不含信号肽的SAG3基因,构建的原核表达质粒在大肠杆菌中得到了高效表达,能够与鼠抗弓形虫阳性血清发生特异性反应,去信号肽的SAG蛋白具有反应原性。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 sag3基因 原核表达

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弓形虫表面抗原SAG3基因片段克隆及序列测定 被引量：4

4

作者 周永安 余新炳 +2 位作者 吴忠道 郑焕钦 徐劲 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期28-30,54,共4页

目的　克隆弓形虫ZS2及RH株SAG3表面抗原基因片段 ,并进行序列分析。方法　设计合成引物 ,从弓形虫ZS2、RH及ZS1株基因组DNA中分别特异扩增出编码SAG3抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,克隆到原核表达... 目的　克隆弓形虫ZS2及RH株SAG3表面抗原基因片段 ,并进行序列分析。方法　设计合成引物 ,从弓形虫ZS2、RH及ZS1株基因组DNA中分别特异扩增出编码SAG3抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,克隆到原核表达质粒 pGEX - 4T - 2中 ,转化入大肠杆菌JM10 9,用PCR初筛 ,将PCR扩增阳性的重组子用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定 ,并进行序列的测定。结果　从弓形虫ZS2、RH和ZS1株DNA中扩增出 1176bp的SAG3基因 ,构建重组质粒 pGEX - 4T - 2 -SAG3(pGEX -SAG3) ,酶切产物的大小分别与预期相符。 结论　成功地对弓形虫ZS2、RH和ZS1株SAG3基因进行体外扩增及构建原核表达重组质粒 pGEX -SAG3,并经酶切及序列分析所验证 ,为弓形虫SAG3表面抗原的表达、体外诊断研究做好准备。 展开更多

关键词 弓形虫 表面抗原 sag3 基因片段 克隆 序列 测定

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弓形虫SAG3基因克隆及生物信息学分析 被引量：3

5

作者 张玉英 贺新红 +6 位作者 陈莎丽 覃珊珊 金小宝 朱家勇 江钢锋 李娟兰 汪琦 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第6期428-430,439,共4页

目的克隆弓形虫表面抗原SAG3基因,对其结构和功能进行生物信息学分析,为进一步研究奠定基础。方法提取虫体总RNA,RT-PCR扩增SAG3基因并用生物信息学方法对SAG3蛋白的理化性质、结构和功能进行预测。结果扩增出的基因片段约1158bp,与预... 目的克隆弓形虫表面抗原SAG3基因,对其结构和功能进行生物信息学分析,为进一步研究奠定基础。方法提取虫体总RNA,RT-PCR扩增SAG3基因并用生物信息学方法对SAG3蛋白的理化性质、结构和功能进行预测。结果扩增出的基因片段约1158bp,与预期相符。预测SAG3蛋白分子质量单位约41.7732ku,PI为6.75,为两亲性蛋白,有2个保守结构域和功能域。结论成功克隆出SAG3基因,为深入研究该基因结构和功能奠定了基础。 展开更多

关键词 弓形虫 sag3基因 RT—PCR 生物信息学分析

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弓形虫表面抗原SAG3基因的克隆与表达 被引量：2

6

作者 陈莎丽 覃珊珊 +5 位作者 张玉英 李娟兰 金小宝 朱家勇 江钢锋 汪琦 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期562-565,共4页

目的克隆表达弓形虫RH株SAG3基因,为深入研究其结构及功能奠定基础。方法从弓形虫RH株基因组DNA中特异性扩增出编码SAG3基因的片段,相应酶切后克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,构建pET-SAG3重组质粒。将pET30-SAG3重组质粒转化大肠杆菌B... 目的克隆表达弓形虫RH株SAG3基因,为深入研究其结构及功能奠定基础。方法从弓形虫RH株基因组DNA中特异性扩增出编码SAG3基因的片段,相应酶切后克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,构建pET-SAG3重组质粒。将pET30-SAG3重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株。经EcoRⅠ、Hind III酶切及测序鉴定后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达情况。结果体外扩增的SAG3基因片段与目的片段大小相符约1 155bp,成功构建了重组表达质粒pET30-SAG3,SDS-PAGE、Western blot显示SAG3-His融合蛋白的分子量大小约为50kd。结论弓形虫表面抗原SAG3基因在大肠杆菌中成功表达,为进一步研究SAG3的结构和功能奠定基础。 展开更多

关键词 弓形虫 表面抗原sag3 基因克隆 蛋白表达

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弓形虫表面抗原SAG3基因表达干扰体系的建立 被引量：2

7

作者 陈莎丽 张玉英 +4 位作者 覃姗姗 金小宝 朱家勇 汪琦 江钢锋 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第7期509-514,共6页

目的建立弓形虫SAG3基因RNAi体系,为近一步研究SAG3的功能奠定基础。方法以弓形虫SAG3基因3′-UTR区及CDS区为靶目标体外转录合成dsRNAs,通过电转法化将其分别导入弓形虫速殖子体内,用转染后的弓形虫感染SMMC7721细胞,半定量RT-PCR分析... 目的建立弓形虫SAG3基因RNAi体系,为近一步研究SAG3的功能奠定基础。方法以弓形虫SAG3基因3′-UTR区及CDS区为靶目标体外转录合成dsRNAs,通过电转法化将其分别导入弓形虫速殖子体内,用转染后的弓形虫感染SMMC7721细胞,半定量RT-PCR分析鉴定RNAi效果。结果分别于转染12、24和48h后,RT-PCR检测SAG3基因mRNA,显示dsRNA转染组SAG3mRNA水平明显低于未转染dsRNA的空白对照组和阴性对照组。其中以电压0.4kV,时间延迟为9ms的3′UTRdsRNA转染组效果最好。转染12h后,即有较明显的干扰效果。转染24h后,干扰效果最为显著。结论筛选出了可以有效抑制弓形虫SAG3基因的dsRNA序列,初步确定了RNAi发生及持续时间,为进一步研究SAG3基因功能奠定了基础。 展开更多

关键词 弓形虫 sag3 RNAI DSRNA

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弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体构建方法探讨 被引量：2

8

作者 韦相才 钟兴明 +1 位作者 郑焕钦 陈观今 《热带医学杂志》 CAS 2004年第3期243-246,共4页

目的探讨构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体的方法,为建立基因敲除弓形虫基因突变株打下基础。方法用PCR方法扩增弓形虫SAG3基因同源序列,将所获得的1.53kb和2.81kb序列连接克隆插入TUB5/CAT质粒中,构建置换型打靶载体,采用PCR扩增、酶... 目的探讨构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体的方法,为建立基因敲除弓形虫基因突变株打下基础。方法用PCR方法扩增弓形虫SAG3基因同源序列,将所获得的1.53kb和2.81kb序列连接克隆插入TUB5/CAT质粒中,构建置换型打靶载体,采用PCR扩增、酶切分析鉴定。结果将SAG3基因中1.53kb和2.81kb两个同源序列分别插入TUB5/CAT质粒中,构建了弓形虫RH株5'SAG3-TUB5/CAT-3'SAG3置换型载体,经鉴定所获得的打靶载体结构准确。结论建立了弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体,并获得了弓形虫RH株SAG3基因置换型打靶载体,为分析弓形虫基因功能提供了可行的方法。 展开更多

关键词 弓形虫 膜抗原 sag3 基因打靶 载体

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刚地弓形虫SAG3基因体外扩增及生物信息学分析 被引量：1

9

作者 杨雯 朱穗京 +2 位作者 田春林 王卫群 刘晓泉 《热带医学杂志》 CAS 2009年第5期474-479,共6页

目的获取刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株表面抗原SAG3目的基因片段,对其结构和功能进行生物信息学分析,预测其编码蛋白作为候选抗原基因的可行性。方法提取弓形虫的基因组DNA,自行设计一对寡核苷酸引物,PCR体外扩增SAG3基因,用生物... 目的获取刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株表面抗原SAG3目的基因片段,对其结构和功能进行生物信息学分析,预测其编码蛋白作为候选抗原基因的可行性。方法提取弓形虫的基因组DNA,自行设计一对寡核苷酸引物,PCR体外扩增SAG3基因,用生物信息学方法对SAG3蛋白的理化性质、结构和功能进行预测。结果扩增出的基因片段约1174bp,测序后鉴定其为弓形虫RH株SAG3基因片段。预测SAG3蛋白相对分子质量约为41785.2,能形成两个功能结构域,氨基酸序列的前38(或39)位为信号肽序列。通过多种预测方法分析SAG3氨基酸序列抗原表位可能位于第10、50、80、95、160、180、220、250、300、330和360位点内或附近。结论成功获得SAG3基因,为深入研究该基因结构奠定了基础。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 sag3基因 体外扩增 生物信息学分析

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弓形虫入侵宿主细胞时SAG3基因表达抑制对β-微管蛋白mRNA水平的影响 被引量：1

10

作者 张玉英 汪琦 +4 位作者 朱家勇 江钢锋 覃姗姗 李娟兰 金小宝 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第4期273-275,共3页

目的研究表面抗原3(SAG3)基因表达被抑制对弓形虫β-微管蛋白mRNA水平的影响。方法用电穿孔的方法将针对SAG3基因3′-UTR区的dsRNA转入弓形虫速殖子体内,转染后的虫体感染Hela细胞,感染后5min提取总RNA,RT-PCR检测SAG3基因的抑制效率,... 目的研究表面抗原3(SAG3)基因表达被抑制对弓形虫β-微管蛋白mRNA水平的影响。方法用电穿孔的方法将针对SAG3基因3′-UTR区的dsRNA转入弓形虫速殖子体内,转染后的虫体感染Hela细胞,感染后5min提取总RNA,RT-PCR检测SAG3基因的抑制效率,并分别于感染后5min、30min和1h检测β-微管蛋白mRNA水平。结果实验组SAG3基因表达被抑制,弓形虫转染宿主细胞后5min、30min和1h的β-微管蛋白mRNA水平均降低。结论SAG3影响弓形虫入侵蛋白β-微管蛋白mRNA水平。 展开更多

关键词 弓形虫 表面抗原3(sag3)基因 β-微管蛋白基因 RNA干扰

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刚地弓形虫RH株SAG3蛋白抗体检测的ELISA方法建立 被引量：2

11

作者 马亮 任保彦 +5 位作者 左绍志 宫鹏涛 李建华 张国才 杨举 张西臣 《安徽农业科学》 CAS 2012年第15期8527-8528,8550,共3页

[目的]利用纯化的刚地弓形虫RH株表面蛋白SAG3的原核重组蛋白为基础,建立抗体间接ELISA检测方法。[方法]采用棋盘滴定法,确定间接ELISA的最佳条件。采用鼠抗新孢子虫阳性血清、鼠抗安氏隐孢子虫阳性血清、鼠抗柔嫩艾美尔球虫阳性血清、... [目的]利用纯化的刚地弓形虫RH株表面蛋白SAG3的原核重组蛋白为基础,建立抗体间接ELISA检测方法。[方法]采用棋盘滴定法,确定间接ELISA的最佳条件。采用鼠抗新孢子虫阳性血清、鼠抗安氏隐孢子虫阳性血清、鼠抗柔嫩艾美尔球虫阳性血清、鼠抗蓝氏贾第虫阳性血清以及鼠抗微小隐孢子虫阳性血清和健康小鼠阴性血清作对照,检测血清之间是否有交叉反应。[结果]最佳包被条件为:抗原包被浓度0.25μg/孔,被检血清稀释度1∶400,酶标二抗稀释度1∶3 000,封闭剂5%脱脂奶粉的PBST溶液;血清之间没有交叉反应。该方法的灵敏度为1∶1 600。[结论]该方法灵敏度高,特异性较强,可重复性较好,可用于对弓形虫感染的检测及流行病学调查。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 sag3 表面蛋白 间接ELISA

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SAG3基因在肾移植患者弓形虫感染诊断中的应用 被引量：1

12

作者 周永安 马艳萍 +1 位作者 李荣山 尚丽红 《中国中西医结合肾病杂志》 2006年第2期88-90,共3页

目的:建立快速、特异、敏感诊断肾移植患者弓形虫感染情况的DNA检测方法,并讨论其临床意义。方法:利用ELISA和PCR方法对68例肾移植受者及20例正常供者同时进行检测。结果:检测肾移植受者68例,PCR和ELISA方法检测弓形虫SAG3基因片段和其... 目的:建立快速、特异、敏感诊断肾移植患者弓形虫感染情况的DNA检测方法,并讨论其临床意义。方法:利用ELISA和PCR方法对68例肾移植受者及20例正常供者同时进行检测。结果:检测肾移植受者68例,PCR和ELISA方法检测弓形虫SAG3基因片段和其抗原,阳性各为5例及4例;其阳性率分别为7.35%和5.91%。作为阴性对照的20名正常者同时进行弓形虫的检测,其结果均为阴性。结论:体外扩增弓形虫SAG3基因的方法具有准确、快速、特异和敏感的优点,可以作为肾移植患者弓形虫感染诊断的有价值的方法之一。 展开更多

关键词 肾移植 弓形虫 PCR sag3基因

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检测犬弓形虫SAG3抗体间接ELISA方法的建立 被引量：5

13

作者 宋慧琦 杨升 +3 位作者 高珺珊 宫鹏涛 李建华 张西臣 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第4期338-341,345,共5页

目的以弓形虫重组SAG3蛋白为抗原,建立一种检测犬弓形虫抗体的间接ELISA方法。方法采用棋盘滴定法确定抗原的包被浓度和阳性血清稀释度,再对该方法的封闭剂以及封闭时间、犬弓形虫阳性血清孵育时间、二抗稀释度以及加入显色液孵育时间... 目的以弓形虫重组SAG3蛋白为抗原,建立一种检测犬弓形虫抗体的间接ELISA方法。方法采用棋盘滴定法确定抗原的包被浓度和阳性血清稀释度,再对该方法的封闭剂以及封闭时间、犬弓形虫阳性血清孵育时间、二抗稀释度以及加入显色液孵育时间等各项条件进行优化;通过对弓形虫感染犬血清及犬心丝虫、等孢球虫、蛔虫及巴贝斯虫感染血清的检测评价方法的敏感性和特异性。结果该方法最佳优化条件分别为:抗原包被浓度0.82μg/孔,封闭剂为含10%胎牛血清的PBST,被检血清稀释度1∶20;兔抗犬酶标二抗稀释度1∶8 000。优化的ELISA敏感性为1∶1 280,犬心丝虫、等孢球虫、蛔虫及巴贝斯虫感染血清均未发生交叉阳性反应;批间、批内重复性试验的变异系数均<15%。结论建立的ELISA方法特异性较强,敏感性高,批内、批间重复性较好,可用于犬弓形虫感染的检测。 展开更多

关键词 犬 弓形虫 sag3 抗体 间接ELISA

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弓形虫SAG1、SAG3基因的克隆和复合基因SAG1/SAG3真核表达重组质粒的构建 被引量：3

14

作者 陈晓燕 马济宏 《医学动物防制》 2008年第11期809-811,共3页

目的构建弓形虫表面抗原SAG1、SAG3复合基因的真核表达重组质粒,为弓形虫疫苗的研制作准备。方法提取弓形虫基因组DNA;用PCR技术扩增出表面抗原SAG1、SAG3的基因,再分别重组入pGEM-T克隆载体;将pGEM-SAG1和pGEM-SAG3重组质粒分别经酶切... 目的构建弓形虫表面抗原SAG1、SAG3复合基因的真核表达重组质粒,为弓形虫疫苗的研制作准备。方法提取弓形虫基因组DNA;用PCR技术扩增出表面抗原SAG1、SAG3的基因,再分别重组入pGEM-T克隆载体;将pGEM-SAG1和pGEM-SAG3重组质粒分别经酶切、纯化后定向亚克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体,经PCR、酶切及测序等方法对重组子进行鉴定。结果从弓形虫基因组DNA中扩增出SAG1、SAG3基因;构建了pGEM-SAG1、pGEM-SAG3克隆质粒;成功构建pcDNA3.1(+)-SAG1-SAG3真核表达复合基因质粒,测序表明目的基因定向正确连接。结论构建了pcDNA3.1(+)-SAG1-SAG3复合基因表达质粒,为今后研制弓形虫复合多价疫苗提供候选抗原奠定了实验基础。 展开更多

关键词 弓形虫 SAG1基因 sag3基因 克隆 基因重组

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云南大理HIV阳性者感染弓形虫表面抗原SAG1和SAG3基因位点的初步分析 被引量：1

15

作者 冷丽 陈凌娟 +5 位作者 李伟 和艳红 罗米 高菊 马宁 申丽洁 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期273-276,共4页

目的 通过分析云南大理HIV阳性者感染弓形虫表面抗原SAG1和SAG3基因位点，鉴定该地区HIV阳性者感染弓形虫的基因型。 方法 自云南省艾滋病防治机构收集大理HIV阳性者全血样品291份，运用巢式PCR技术对血样DNA进行弓形虫SAG1和SAG3基... 目的 通过分析云南大理HIV阳性者感染弓形虫表面抗原SAG1和SAG3基因位点，鉴定该地区HIV阳性者感染弓形虫的基因型。 方法 自云南省艾滋病防治机构收集大理HIV阳性者全血样品291份，运用巢式PCR技术对血样DNA进行弓形虫SAG1和SAG3基因的扩增，扩增产物分别用限制性内切酶Sau96Ⅰ、HaeⅡ和NciⅠ酶切，并对扩增阳性的产物序列进行测定与分析。 结果 291份HIV阳性者血样中，成功扩增出弓形虫SAG1基因64份，SAG3基因42份，产物分别为390 bp和225 bp。扩增产物经酶切后电泳，结果显示，64份SAG1基因均得到2个片段，分别为350 bp和50 bp，42份SAG3基因均得到约200 bp大小的条带，与弓形虫基因Ⅰ型标准株（RH株）结果一致。从酶切的标本中选择多份进行测序，结果与基因Ⅰ型标准株SAG1基因序列（登录号为GQ253073）和SAG3基因序列（登录号为JX218225.1）进行比对分析，发现序列一致性分别为99.98%-100%和99.96%-99.98%。 结论 云南大理HIV阳性者感染弓形虫为基因Ⅰ型。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 HIV 表面抗原1 表面抗原3 基因型

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dsRNA抑制SAG3表达对弓形虫入侵蛋白ROP2、MIC2的影响

16

作者 张玉英 汪琦 +4 位作者 朱家勇 江钢锋 覃姗姗 李娟兰 金小宝 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第12期910-912,共3页

目的观察表面抗原3(SAG3)对弓形虫入侵相关蛋白的影响,为深入研究弓形虫的致病机制奠定基础。方法用电穿孔的方法将针对SAG3基因3-′UTR区的dsRNA转入弓形虫速殖子体内,转染后的虫体感染Hela细胞,转染后2 h提取总RNA,RT-PCR检测SAG3的... 目的观察表面抗原3(SAG3)对弓形虫入侵相关蛋白的影响,为深入研究弓形虫的致病机制奠定基础。方法用电穿孔的方法将针对SAG3基因3-′UTR区的dsRNA转入弓形虫速殖子体内,转染后的虫体感染Hela细胞,转染后2 h提取总RNA,RT-PCR检测SAG3的抑制效率,同时检测弓形虫入侵蛋白ROP2、MIC2的表达情况。结果dsRNA电穿孔转染弓形虫速殖子后抑制SAG3 mRNA表达,ROP2、MIC2的表达量显著低于对照组。结论抑制SAG3的表达影响ROP2、MIC2的表达。 展开更多

关键词 弓形虫 表面抗原3 棒状体蛋白2 微线体蛋白2

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脂质体介导弓形虫SAG1与SAG3复合基因诱导小鼠免疫应答研究 被引量：5

17

作者 周永安 余新炳 +4 位作者 陈海峰 郑焕钦 殷国荣 吴忠道 陈观今 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期647-653,共7页

目的评价弓形虫SAG1与SAG3基因真核表达质粒DNA免疫小鼠的免疫应答效果。方法以PCR方法扩增出SAG1与SAG3目的基因片段,并插入载体pEGFP-N3以构建重组质粒pE- SAG1／SAG3,瞬时转染细胞Cos-7。质粒pESAG1／SAG3以10μg剂量,脂质体介导肌... 目的评价弓形虫SAG1与SAG3基因真核表达质粒DNA免疫小鼠的免疫应答效果。方法以PCR方法扩增出SAG1与SAG3目的基因片段,并插入载体pEGFP-N3以构建重组质粒pE- SAG1／SAG3,瞬时转染细胞Cos-7。质粒pESAG1／SAG3以10μg剂量,脂质体介导肌肉注射BALB／c小鼠,免疫3次,最后一次免疫后4周,观察体液和细胞免疫。RT-PCR方法检测注射部位目的基因的转录;斑点杂交方法检测目的基因是否与小鼠染色体基因组整合。结果质粒pESAG1／SAG3转染细胞后观察到绿色荧光;Western blot显示pESAG1/SAG3表达识别条带在相对分子质量(Mr)66．2×103附近。小鼠免疫后,血清产生抗弓形虫速殖子抗体,诱导IFN-γ及IL-2水平高于对照组。RT-PCR显示首次免疫15 d后,目的基因在肌肉组织中仍有转录,斑点杂交显示目的基因未与小鼠的基因组发生整合,混合质粒注射的小鼠抗弓形虫感染的存活时间延长。结论脂质体介导弓形虫SAG1与SAG3复合编码基因质粒接种小鼠能明显诱导体液和细胞免疫应答。 展开更多

关键词 弓形虫 SAG1 sag3 脂质体 DNA免疫

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SAG3基因在造血干细胞移植患者弓形虫感染诊断中的应用 被引量：4

18

作者 周永安 余新炳 +3 位作者 吴忠道 乔振华 郑焕钦 徐劲 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期171-173,共3页

目的　探讨造血干细胞移植患者弓形虫感染的快速、特异、敏感的诊断方法。方法　以弓形虫SAG3基因为靶基因 ,采用聚合酶链反应法 (PCR)对 5 6例造血干细胞移植受者及 2 0名正常对照者进行检测 ,同时以酶联免疫吸附试验 (ELISA)进行弓形... 目的　探讨造血干细胞移植患者弓形虫感染的快速、特异、敏感的诊断方法。方法　以弓形虫SAG3基因为靶基因 ,采用聚合酶链反应法 (PCR)对 5 6例造血干细胞移植受者及 2 0名正常对照者进行检测 ,同时以酶联免疫吸附试验 (ELISA)进行弓形虫抗体IgG、IgM的血清学检测。 结果　以PCR和ELISA检测弓形虫SAG3基因片段和其抗原 ,阳性分别为 10例及 7例 ,阳性率分别为17.9%和 12 .5 % ,其中PCR检测阳性、而ELISA检测阴性的 3例 ,经病原学检测 ,均证实有弓形虫感染 ;2 0名正常对照者的检测结果均为阴性。结论　体外扩增弓形虫SAG3基因的方法诊断弓形虫感染具有准确、快速、特异和敏感的优点 ,可作为造血干细胞移植患者弓形虫感染的诊断方法之一。 展开更多

关键词 sag3基因 造血干细胞 细胞移植 弓形虫 细菌感染 聚合酶链反应法 PCR 免疫测定

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猪弓形虫感染免疫胶体金试纸条的制备与初步应用 被引量：13

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作者 寇金华 杨正涛 +5 位作者 刘维建 高珺珊 李建华 杨举 张西臣 宫鹏涛 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期82-87,共6页

制备1种检测猪弓形虫血清循环抗原的免疫胶体金试纸条。利用柠檬酸三钠还原法制备40nm的胶体金溶液，标记抗弓形虫表面抗原sAG3（surfaceantigen3，sAG3）单克隆抗体（Anti-A—SAG3—7），用另1株抗弓形虫表面抗原sAG3单克隆抗体（Anti... 制备1种检测猪弓形虫血清循环抗原的免疫胶体金试纸条。利用柠檬酸三钠还原法制备40nm的胶体金溶液，标记抗弓形虫表面抗原sAG3（surfaceantigen3，sAG3）单克隆抗体（Anti-A—SAG3—7），用另1株抗弓形虫表面抗原sAG3单克隆抗体（Anti—A—SAG3—23）与羊抗小鼠IgG抗体分别包被于硝酸纤维素膜（NC膜）上的检测线和质控线，制备并优化免疫胶体金试纸条检测条件。胶体金溶液的最适pH值为加入4uL 0．2mol／L K2CO3时的pH值。Anti—A-SAG3—7的最适标记量为12ug。最佳NC膜为Miltipore 135。T、C线抗体最佳包被质量浓度均为0．25g／L，T、C线抗体最佳包被体积均为8uL。试纸条的灵敏度达1：160，与猪囊虫阳性血清无交叉反应。稳定性试验表明，该试纸条置于室温至少可保存1个月有效，置于4℃可保存3个月有效。对广东某地区、吉林某地区猪场的各94份猪待检血清进行检测，分别有17，10份为阳性血清，样品阳性率为18．08％，10．63％。本研究制备的胶体金试纸条具有操作简单，敏感特异等优点，适合临床基层单位对猪弓形虫病的早期诊断及流行病学调查。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 sag3 循环抗原 胶体金

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寄生虫学

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《中国医学文摘（基础医学）》 CSCD 2005年第3期158-162,共5页

弓形虫不同地理株致密颗粒蛋白基因的比较研究；zs株弓形虫p22基因片段在巨噬细胞中的表达；急性弓形虫感染所致昆明鼠不孕的实验研究；弓形虫p24基因敲除转染质粒pGB／P5-P3的构建；大鼠天然抗体相关的弓形虫抗原基因的免疫筛选与克隆... 弓形虫不同地理株致密颗粒蛋白基因的比较研究；zs株弓形虫p22基因片段在巨噬细胞中的表达；急性弓形虫感染所致昆明鼠不孕的实验研究；弓形虫p24基因敲除转染质粒pGB／P5-P3的构建；大鼠天然抗体相关的弓形虫抗原基因的免疫筛选与克隆；弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体的构建及筛选；大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的实验病理学研究；卡氏肺孢子虫病鼠氧化损害与中药防治的实验研究；肾移植后并发卡氏肺孢子虫肺炎12例临床研究；人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导人肺上皮细胞凋亡；旋毛虫新生幼虫cDNA文库的免疫筛选；广州管圆线虫成虫cDNA文库抗原基因的筛选；用组织化学方法鉴别日本血吸虫细胞来源的研究；日本血吸虫EST序列的电子延伸及结果分析。 展开更多

关键词 寄生虫学 急性弓形虫感染 卡氏肺孢子虫肺炎 成虫CDNA文库 旋毛虫新生幼虫 卡氏肺孢子虫病 日本血吸虫 免疫筛选 sag3基因

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