目的研究布地奈德(BUD)对S100钙结合蛋白A4(S100A4)诱导的肥大细胞活化、炎性因子释放及受体表达的影响。方法8~10周龄野生型(WT)的C57BL/6健康雄性小鼠2只,取胫骨与股骨提取骨髓进行骨髓源肥大细胞(BMMCs)培养,将5 mL PBS注射至小鼠腹...目的研究布地奈德(BUD)对S100钙结合蛋白A4(S100A4)诱导的肥大细胞活化、炎性因子释放及受体表达的影响。方法8~10周龄野生型(WT)的C57BL/6健康雄性小鼠2只,取胫骨与股骨提取骨髓进行骨髓源肥大细胞(BMMCs)培养,将5 mL PBS注射至小鼠腹腔,取腹腔灌洗液以获取腹膜来源的肥大细胞(PMCs);采用S100A4蛋白与BUD处理小鼠BMMCs和PMCs,实验分为PBS组、S100A4组、BUD组及S100A4+BUD组;β-己糖胺酶(β-hex)释放实验检测细胞脱颗粒指标β-hex、ELISA测定细胞活化介质类胰蛋白酶、糜蛋白酶及白三烯B4的释放,流式细胞术编码微球芯片技术(CBA)法检测炎性因子(IL-5、IL-6、IL-13和TNF-α)分泌水平以及Toll样受体4(TLR4)和晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达。结果在BMMCs与PMCs中,与PBS组相比,S100A4组培养上清中β-hex、类胰蛋白酶、白三烯B4及相关炎性因子IL-5、IL-6、IL-13和TNF-α的释放增加,细胞上TLR4和RAGE的表达上调(P<0.05);与S100A4组相比,S100A4+BUD组肥大细胞活化及炎性因子分泌明显被抑制,同时TLR4的表达下调(P<0.05),而RAGE的表达无显著变化(P>0.05)。结论BUD能够抑制S100A4介导的肥大细胞活化及炎性因子释放,并下调TLR4的表达,但不影响RAGE的表达,BUD可能通过TLR-4受体发挥其功能,为BUD在过敏性炎症中的应用提供新的理论依据。展开更多
目的:探究牛结核分枝杆菌减毒株卡介苗(bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染人单核-巨噬细胞THP-1后,S100钙结合蛋白A4(S100 calcium-binding protein A4,S100A4)通过磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激...目的:探究牛结核分枝杆菌减毒株卡介苗(bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染人单核-巨噬细胞THP-1后,S100钙结合蛋白A4(S100 calcium-binding protein A4,S100A4)通过磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路对BCG诱导的巨噬细胞自噬的调控作用。方法:采用S100A4小干扰RNA(S100A4 small interfering RNA,si-S100A4)转染或PI3K抑制剂LY294002预处理THP-1巨噬细胞,并经BCG感染,设置不同处理组和对照组,通过Western blot方法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白和自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3-II(microtubule-associated protein 1 light chain 3-II,LC3-II)、自噬相关蛋白7(autophagy-related protein 7,Atg7)和beclin-1]的表达,mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒方法检测自噬流,透射电子显微镜观察细胞中自噬体和自噬溶酶体数量变化。结果:与未感染组相比,BCG感染组中p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白水平显著降低(P<0.05)。与BCG感染组相比,si-S100A4+BCG组上述磷酸化蛋白水平显著升高(P<0.05),LC3-II、Atg7和beclin-1蛋白水平显著降低(P<0.01);LY294003+BCG组上述磷酸化蛋白水平显著降低(P<0.01),LC3-II、Atg7和beclin-1蛋白水平显著升高(P<0.05),自噬体和自噬溶酶体数量显著增多(P<0.01)。与si-S100A4+BCG组相比,si-S100A4+LY294002+BCG组中p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白水平显著降低(P<0.01),LC3-II、Atg7和beclin-1蛋白水平显著升高(P<0.01),自噬体和自噬溶酶体数量显著增多(P<0.01),胞内菌载量显著减少(P<0.01)。结论:干扰S100A4经由PI3K/AKT/mTOR信号通路对BCG诱导的巨噬细胞自噬具有抑制作用。展开更多
钙结合蛋白S100A(calcium binding protein S100A,S100A)4是经RNA互作组技术发现的一种新型RNA结合蛋白(RNA-binding proteins,RBPs)[1],能够识别特定RNA结合域并与RNA相互作用,在转录后基因表达调控中起着重要作用[2]。先前的研究发现,...钙结合蛋白S100A(calcium binding protein S100A,S100A)4是经RNA互作组技术发现的一种新型RNA结合蛋白(RNA-binding proteins,RBPs)[1],能够识别特定RNA结合域并与RNA相互作用,在转录后基因表达调控中起着重要作用[2]。先前的研究发现,S100A4不仅在银屑病患者皮肤的真皮组织中表达上调,而且能通过影响表皮细胞增殖和真皮血管增生参与银屑病的发生发展,然而其中潜在的调控机制尚不清楚[3]。展开更多
文摘目的研究布地奈德(BUD)对S100钙结合蛋白A4(S100A4)诱导的肥大细胞活化、炎性因子释放及受体表达的影响。方法8~10周龄野生型(WT)的C57BL/6健康雄性小鼠2只,取胫骨与股骨提取骨髓进行骨髓源肥大细胞(BMMCs)培养,将5 mL PBS注射至小鼠腹腔,取腹腔灌洗液以获取腹膜来源的肥大细胞(PMCs);采用S100A4蛋白与BUD处理小鼠BMMCs和PMCs,实验分为PBS组、S100A4组、BUD组及S100A4+BUD组;β-己糖胺酶(β-hex)释放实验检测细胞脱颗粒指标β-hex、ELISA测定细胞活化介质类胰蛋白酶、糜蛋白酶及白三烯B4的释放,流式细胞术编码微球芯片技术(CBA)法检测炎性因子(IL-5、IL-6、IL-13和TNF-α)分泌水平以及Toll样受体4(TLR4)和晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达。结果在BMMCs与PMCs中,与PBS组相比,S100A4组培养上清中β-hex、类胰蛋白酶、白三烯B4及相关炎性因子IL-5、IL-6、IL-13和TNF-α的释放增加,细胞上TLR4和RAGE的表达上调(P<0.05);与S100A4组相比,S100A4+BUD组肥大细胞活化及炎性因子分泌明显被抑制,同时TLR4的表达下调(P<0.05),而RAGE的表达无显著变化(P>0.05)。结论BUD能够抑制S100A4介导的肥大细胞活化及炎性因子释放,并下调TLR4的表达,但不影响RAGE的表达,BUD可能通过TLR-4受体发挥其功能,为BUD在过敏性炎症中的应用提供新的理论依据。
文摘目的:探究牛结核分枝杆菌减毒株卡介苗(bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染人单核-巨噬细胞THP-1后,S100钙结合蛋白A4(S100 calcium-binding protein A4,S100A4)通过磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路对BCG诱导的巨噬细胞自噬的调控作用。方法:采用S100A4小干扰RNA(S100A4 small interfering RNA,si-S100A4)转染或PI3K抑制剂LY294002预处理THP-1巨噬细胞,并经BCG感染,设置不同处理组和对照组,通过Western blot方法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白和自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3-II(microtubule-associated protein 1 light chain 3-II,LC3-II)、自噬相关蛋白7(autophagy-related protein 7,Atg7)和beclin-1]的表达,mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒方法检测自噬流,透射电子显微镜观察细胞中自噬体和自噬溶酶体数量变化。结果:与未感染组相比,BCG感染组中p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白水平显著降低(P<0.05)。与BCG感染组相比,si-S100A4+BCG组上述磷酸化蛋白水平显著升高(P<0.05),LC3-II、Atg7和beclin-1蛋白水平显著降低(P<0.01);LY294003+BCG组上述磷酸化蛋白水平显著降低(P<0.01),LC3-II、Atg7和beclin-1蛋白水平显著升高(P<0.05),自噬体和自噬溶酶体数量显著增多(P<0.01)。与si-S100A4+BCG组相比,si-S100A4+LY294002+BCG组中p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白水平显著降低(P<0.01),LC3-II、Atg7和beclin-1蛋白水平显著升高(P<0.01),自噬体和自噬溶酶体数量显著增多(P<0.01),胞内菌载量显著减少(P<0.01)。结论:干扰S100A4经由PI3K/AKT/mTOR信号通路对BCG诱导的巨噬细胞自噬具有抑制作用。
文摘钙结合蛋白S100A(calcium binding protein S100A,S100A)4是经RNA互作组技术发现的一种新型RNA结合蛋白(RNA-binding proteins,RBPs)[1],能够识别特定RNA结合域并与RNA相互作用,在转录后基因表达调控中起着重要作用[2]。先前的研究发现,S100A4不仅在银屑病患者皮肤的真皮组织中表达上调,而且能通过影响表皮细胞增殖和真皮血管增生参与银屑病的发生发展,然而其中潜在的调控机制尚不清楚[3]。
