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PEDV S1-NTD和S1-CTD不同组合假病毒的构建及鉴定
1
作者 张永晨 齐珊珊 +3 位作者 李春秋 朱庆贺 邢晓旭 孙东波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2025年第2期46-52,共7页
猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种具有高度传染性的冠状病毒,可引起仔猪严重腹泻和高死亡率。PEDV刺突糖蛋白(spike,S)中S1亚基N末端结构域(S1 subunit N-terminal domain,S1-NTD)和C末端结构域(S1subunit... 猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种具有高度传染性的冠状病毒,可引起仔猪严重腹泻和高死亡率。PEDV刺突糖蛋白(spike,S)中S1亚基N末端结构域(S1 subunit N-terminal domain,S1-NTD)和C末端结构域(S1subunit C-tjerminal domain,S1-CTD)在病毒入侵过程中发挥重要作用,但其机制尚未完全阐明。为进一步探索PEDV S1-NTD和S1-CTD在病毒入侵宿主细胞过程中的协同作用,研究利用水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)假病毒系统,构建了PEDV经典毒株CV777和PEDV GIIa型变异毒株HM2017的S1-NTD和S1-CTD不同组合S蛋白假病毒,分别命名为rvCV777-S1-NTD+CV777-S1-CTD、rvCV777-S1-NTD+HM2017-S1-CTD、rvHM2017-S1-NTD+CV777-S1-CTD和rvHM2017-S1-NTD+HM2017-S1-CTD,并对构建的重组病毒进行鉴定。结果显示:透射电镜(TEM)观察到不同组合的S蛋白假病毒均呈直径约180 mn的典型子弹状粒子;Western blot检测显示,表达不同的S1-NTD和S1-CTD组合S蛋白的假病毒与PEDV S蛋白单克隆抗体均发生特异性反应,条带大小为180 kDa;间接免疫荧光试验表明,实验组均呈现清晰的绿色荧光。上述结果证明,研究成功构建了不同S1-NTD和S1-CTD组合的S蛋白假病毒,为PEDV入侵机制研究提供了实验基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 水疱性口炎病毒 s1-NTD s1-CTD 假病毒
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小白菊内酯调控SphK1/S1P通路减轻小鼠脑缺血再灌注损伤
2
作者 解春丽 鞠永红 +1 位作者 刘海睿 冯光坤 《中国新药与临床杂志》 北大核心 2025年第7期528-532,共5页
目的 探究小白菊内酯对小鼠脑缺血再灌注损伤及鞘氨醇激酶1(Sph K1)/1-磷酸鞘氨醇(S1P)信号通路的影响。方法 通过线栓法构建脑缺血再灌注小鼠模型,将造模成功的小鼠随机分为模型组,小白菊内酯低、中、高剂量组(1.0、2.0、4.0 mg·k... 目的 探究小白菊内酯对小鼠脑缺血再灌注损伤及鞘氨醇激酶1(Sph K1)/1-磷酸鞘氨醇(S1P)信号通路的影响。方法 通过线栓法构建脑缺血再灌注小鼠模型,将造模成功的小鼠随机分为模型组,小白菊内酯低、中、高剂量组(1.0、2.0、4.0 mg·kg^(-1))组和小白菊内酯高剂量+Sph K1激活剂K6PC-5组(4.0 mg·kg^(-1)小白菊内酯+0.05 mg·kg^(-1) K6PC-5),每组15只,另外取15只小鼠仅进行分离血管后缝合操作,作为对照组。Longa法、HE染色法、ELISA法、TUNEL染色法以及Western blot法分别检测小鼠神经功能缺损程度、脑组织损伤、炎症及氧化应激指标、神经元凋亡以及Sph K1/S1P信号通路相关蛋白水平。结果 对照组脑组织海马神经元形态完整,排列规则紧密;模型组神经元排列散乱;小白菊内酯各剂量组神经元增多,坏死情况减少。与对照组比较,模型组神经功能评分,IL-6、IL-1β、TNF-α、MDA水平,神经元凋亡率、Sph K1、S1P蛋白表达显著增加(P<0.05),GSH、SOD水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,小白菊内酯各剂量组神经功能评分,IL-6、IL-1β、TNF-α、MDA水平,神经元凋亡率,Sph K1、S1P蛋白表达显著降低(P<0.05),GSH、SOD水平显著增加(P<0.05);小白菊内酯高剂量+K6PC-5组较小白菊内酯高剂量组神经功能评分,IL-6、IL-1β、TNF-α、MDA水平,神经元凋亡率,Sph K1、S1P蛋白表达显著增加(P<0.05),GSH、SOD水平显著降低(P<0.05)。结论 小白菊内酯可能通过抑制Sph K1/S1P信号通路发挥对脑缺血再灌注小鼠的保护作用。 展开更多
关键词 小白菊内酯 SphK1/s1P信号通路 脑缺血 缺血再灌注 炎症反应 氧化应激 凋亡
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AP4S1基因变异致遗传性痉挛性截瘫52型一个家系的临床表型及遗传学分析
3
作者 杨李 朱子豪 +4 位作者 华冉 王宝田 姜俊红 唐久来 吴德 《中华医学遗传学杂志》 2025年第9期1106-1113,共8页
目的探讨AP4S1基因变异所致遗传性痉挛性截瘫52型(SPG52)1家系的临床表型及遗传学特征。方法选取2010年5月于安徽医科大学第一附属医院儿科就诊的1例SPG52患儿(患儿1,先证者)家系为研究对象。对该家系患儿1及其父母进行全外显子组测序(W... 目的探讨AP4S1基因变异所致遗传性痉挛性截瘫52型(SPG52)1家系的临床表型及遗传学特征。方法选取2010年5月于安徽医科大学第一附属医院儿科就诊的1例SPG52患儿(患儿1,先证者)家系为研究对象。对该家系患儿1及其父母进行全外显子组测序(WES),采用Sanger测序对候选基因变异进行家系验证。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)制定的《遗传变异分类标准与指南》(以下简称为"ACMG"指南),对检出的基因变异位点进行致病性评级。本研究遵循的研究程序已通过安徽医科大学第一附属医院医学伦理委员会的审查(批准号:PJ2024-04-56)。结果①患儿1(男)自婴儿期起即有全面性发育落后,逐渐加重的下肢痉挛、挛缩、马蹄足及下肢肌力低下,但无明显面部畸形;1岁内首次发生发热性惊厥,随后发生数次无热惊厥,抗癫痫治疗3~4年后获得缓解,脑电图未见异常;但是合并严重的智力低下,头颅MRI提示脑白质减少。WES结果发现,患儿1携带AP4S1基因c.289C>T(p.Arg97*)纯合变异,Sanger测序显示其父母携带AP4S1基因相同位点的杂合变异,"ACMG"指南将患儿1的AP4S1基因变异评级为致病性变异。②根据本研究设定的文献检索策略,检索到关于SPG52患儿研究的文献共计8篇,涉及12个家系18例SPG52患儿(患儿2~19)+患儿1,共计19例SPG52患儿纳入临床表型及遗传学分析。这19例SPG52患儿中,14例为AP4S1基因纯合变异,3例为复合杂合变异,2例为杂合变异,包括12个不同变异位点;其中,男性患儿为7例,女性为12例;均以逐渐加重的下肢痉挛、无力为主要表现,部分失去独走能力;绝大多数存在智力障碍,部分存在特殊面容,合并热性惊厥及癫痫,脑电图多见慢波增多;头颅MRI多为脑室系统扩大,胼胝体薄,脑白质减少等表现。结论AP4S1基因c.289C>T(p.Arg97*)纯合变异,可能是患儿1家系的遗传学病因,该研究扩展了AP4S1基因变异谱,为SPG52患儿的基因诊断、遗传咨询及临床治疗提供了参考。 展开更多
关键词 遗传性痉挛性截瘫 AP4s1 智力障碍 癫痫
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甲状腺癌组织中B7S1、BTEB2表达及其与患者临床特征的关系
4
作者 乐飞 欧阳骞 +2 位作者 甘婷 李红米 黄先明 《实用癌症杂志》 2025年第7期1045-1048,共4页
目的 探讨甲状腺癌组织中B7S1、BTEB2表达及其与患者临床特征的关系。方法 选取江西省肿瘤医院2023年1月至2024年12月收治的103例甲状腺癌患者作为研究对象,采用免疫组化法检测甲状腺癌组织中B7S1、BTEB2的表达水平,并分析其与患者临床... 目的 探讨甲状腺癌组织中B7S1、BTEB2表达及其与患者临床特征的关系。方法 选取江西省肿瘤医院2023年1月至2024年12月收治的103例甲状腺癌患者作为研究对象,采用免疫组化法检测甲状腺癌组织中B7S1、BTEB2的表达水平,并分析其与患者临床特征的关系。结果 (1)103例甲状腺癌患者中B7S1高表达67例,低表达36例;BTEB2高表达61例,低表达42例。(2)B7S1高表达组与B7S1低表达组之间性别、年龄、病理类型、结节数目、结节最大径、T分期、包膜侵犯,以及血清促甲状腺素(TSH)、游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平相比,差异无统计学意义(P>0.05);B7S1高表达组N分期显著高于B7S1低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)BTEB2高表达组与BTEB2低表达组之间性别、年龄、病理类型、结节数目、T分期、包膜侵犯,以及血清TSH、FT3、FT4水平相比,差异无统计学意义(P>0.05);BTEB2高表达组结节最大径、N分期显著高于BTEB2低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)甲状腺癌组织中B7S1与BTEB2表达呈显著正相关(γ_(s)=0.718,P<0.05)。结论 甲状腺癌组织中B7S1、BTEB2表达与患者N分期密切相关,且在甲状腺癌淋巴结转移过程中可能存在一定的协同作用。 展开更多
关键词 甲状腺癌 B7s1 BTEB2 淋巴结转移
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基于TGF-β1介导SK1/S1P3信号轴探讨针刀疗法对颈椎病兔颈后肌纤维化的影响
5
作者 刘洪 张泽升 +6 位作者 张良志 刘晶 张晓菁 潘细桂 陈斌 黄旺祥 修忠标 《医学理论与实践》 2025年第15期2525-2528,2546,共5页
目的:基于TGF-β1介导的SK1/S1P3信号轴,观察针刀疗法对颈椎病兔颈后肌纤维化的影响,探讨针刀疗法治疗颈椎病的可能分子机制。方法:选取兔龄6个月的9只健康雄性新西兰兔,体质量(2.0±0.5)kg,根据随机数字法分为空白组、模型组和针刀... 目的:基于TGF-β1介导的SK1/S1P3信号轴,观察针刀疗法对颈椎病兔颈后肌纤维化的影响,探讨针刀疗法治疗颈椎病的可能分子机制。方法:选取兔龄6个月的9只健康雄性新西兰兔,体质量(2.0±0.5)kg,根据随机数字法分为空白组、模型组和针刀组,每组3只。空白组不进行任何造模或干预;模型组、针刀组行低头固定法造模,共进行6周。造模成功后,模型组不采取任何干预措施;针刀组采用针刀疗法选取颈后肌病灶点进行松解干预,每周1次,共进行4次干预。干预结束后1周,采用Masson染色观察颈后肌组织纤维化情况,IF法检测颈后肌相关COL1A1、COL3A1、Myf5、N-Cadherin表达量,Real-time PCR、Western blot法检测颈后肌相关TGF-β1、SMAD2、S1P3、Rho-c mRNA和蛋白表达水平。结果:Masson染色结果显示,与空白组相比,模型组肌纤维破坏明显;与模型组相比,针刀组肌纤维化相对减轻。IF检测结果显示,与空白组比较,模型组COL1A1、COL3A1、Myf5、N-Cadherin等平均光密度明显减弱;与模型组比较,针刀组COL1A1、COL3A1、Myf5、N-Cadherin等平均光密度明显增强。Real-time PCR检测结果显示,与空白组比较,模型组TGF-β1、SMAD2、S1P3、Rho-c等mRNA表达量显著升高;与模型组比较,针刀组TGF-β1、SMAD2、S1P3、Rho-c等mRNA表达量显著降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与空白组比较,模型组TGF-β1、SMAD2、S1P3、Rho-c等蛋白表达显著上调;与模型组比较,针刀组TGF-β1、SMAD2、S1P3、Rho-c等蛋白表达显著下调。结论:针刀疗法松解颈后肌病灶点能通过调节TGF-β1介导SK1/S1P3信号轴,改善颈后肌纤维化程度,发挥对颈椎病的治疗作用。 展开更多
关键词 颈椎病 肌纤维化 针刀 TGF-Β1 SK1/s1P3信号轴
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西门子840D s1数控系统在五轴龙门铣床技术改造中的应用
6
作者 杨珍珠 《数控机床市场》 2025年第4期31-33,共3页
1.序言。哈尔滨电机厂有限责任公司在20世纪90年代末从德国科堡公司引进PMC5500AG数控五轴龙门铣床(见图1),主要用于完成水轮机叶片等较复杂曲面的加工,原机床采用西门子840C数控系统,由于电气系统老化严重,因此经常出现龙门不同步等报... 1.序言。哈尔滨电机厂有限责任公司在20世纪90年代末从德国科堡公司引进PMC5500AG数控五轴龙门铣床(见图1),主要用于完成水轮机叶片等较复杂曲面的加工,原机床采用西门子840C数控系统,由于电气系统老化严重,因此经常出现龙门不同步等报警,故障率高。为使设备稳定运行,决定对设备的数控电气系统进行全面升级改造,恢复设备功能及精度。 展开更多
关键词 数控系统 西门子840D s1
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基于SPHK1/S1P信号通路探讨灰树花提取物对溃疡性结肠炎大鼠肠道炎症反应的影响 被引量：1
7
作者 杜晗 金雪 +6 位作者 马贤德 雷萍 董墨思 陈杰 许欣竹 张雨晴 韩晓伟 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第4期847-853,共7页
目的:探讨灰树花提取物通过鞘氨醇激酶1(SPHK1)/鞘氨醇-1-磷酸(S1P)信号通路改善溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织炎症反应的免疫机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为5组,即空白组、模型组、柳氮磺吡啶治疗组(SASP组)、灰树花提取物治疗组... 目的:探讨灰树花提取物通过鞘氨醇激酶1(SPHK1)/鞘氨醇-1-磷酸(S1P)信号通路改善溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织炎症反应的免疫机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为5组,即空白组、模型组、柳氮磺吡啶治疗组(SASP组)、灰树花提取物治疗组(GF组)、柳氮磺吡啶联合灰树花提取物治疗组(SASP+GF组)。应用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮用法建立UC模型。1周后,各治疗组分别进行柳氮磺吡啶0.3 g(/kg·d)、灰树花提取物10 mg(/kg·d)以及两种药物联合灌胃治疗。实验期间观察大鼠一般状态,统计疾病活动指数(DAI)评分,免疫组化法检测大鼠结肠组织SPHK1、S1P、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、TNF-α的蛋白含量及阳性表达水平;RT-qPCR法及Western blot法检测大鼠结肠组织中SPHK1、S1P、TRAF2、TNF-αmRNA和蛋白表达水平。结果:与空白组相比,模型组大鼠一般状态欠佳,DAI评分显著升高,结肠组织SPHK1、S1P、TRAF2和TNF-α蛋白阳性表达、mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组相比,各治疗组大鼠一般状态明显好转,DAI评分降低(P<0.01),各目标蛋白阳性表达均显著降低(P<0.01),其中GF组与SASP+GF组下降更为明显;SPHK1和TRAF2 mRNA及蛋白表达水平均有不同程度降低(P<0.01或P<0.05),而S1P和TNF-αmRNA及蛋白表达水平在GF组和SASP+GF组下降明显(P<0.01)。与SASP组相比,GF组仅SPHK1蛋白表达、TNF-αmRNA及蛋白表达水平降低,而SASP+GF组数据均显著降低(P<0.01或P<0.05)。与GF组相比,SASP+GF组SPHK1蛋白阳性表达及含量、S1P mRNA表达水平和TNF-α蛋白含量均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:灰树花提取物可能通过抑制SPHK1/S1P通路激活,减轻UC大鼠结肠组织炎症反应,恢复肠黏膜屏障功能,改善UC症状。 展开更多
关键词 灰树花提取物 溃疡性结肠炎 SPHK1 s1P 黏膜 免疫机制
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S1P/S1PR1的血管调节功能在胸腔积液形成中的作用
8
作者 钱倩 李孟兰 景楚薇 《中国工业医学杂志》 2025年第3期292-297,I0002,共7页
目的探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)对人血管内皮细胞(HUVECs)的生物调节功能在胸腔积液产生中的可能作用。方法利用含S1P受体(S1PR)1-shRNA的慢病毒转染HUVECs以沉默S1PR1;将实验分为shRNA对照、shRNA+S1P(100μmol/L)、shRNA+SEW287(S1PR1激动... 目的探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)对人血管内皮细胞(HUVECs)的生物调节功能在胸腔积液产生中的可能作用。方法利用含S1P受体(S1PR)1-shRNA的慢病毒转染HUVECs以沉默S1PR1;将实验分为shRNA对照、shRNA+S1P(100μmol/L)、shRNA+SEW287(S1PR1激动剂,20μg/L)、shRNA+W146(S1PR1抑制剂,0.2 mmol/L)、S1PR1-shRNA、S1PR1-shRNA+S1P、S1PR1-shRNA+SEW287、S1PR1-shRNA+W146共8组,应用划痕实验、Transwell小室实验、成管实验和流式细胞术等技术分别检测细胞迁移、侵袭、血管形成和凋亡情况。结果划痕实验、Transwell小室实验和成管实验结果表明,shRNA+S1P和shRNA+SEW287组细胞迁移、侵袭和成管能力增强;shRNA组的细胞迁移、侵袭和成管能力显著高于S1PR1-shRNA组(P<0.05);S1PR1-shRNA+S1P和S1PR1-shRNA+SEW287组细胞的迁移、侵袭和成管能力有所恢复,而S1PR1-shRNA+W146组显著降低。流式细胞术结果显示,S1PR1-shRNA组的凋亡率相较shRNA组略有升高;S1PR1-shRNA+S1P和S1PR1-shRNA+SEW287组凋亡率有所下降,接近shRNA组水平;而S1PR1-shRNA+W146组凋亡率进一步上升至最高水平,但差异无统计学意义。结论S1P似可通过S1PR1促进细胞的迁移、侵袭和脉管形成,并抑制细胞凋亡,提示S1P/S1PR1通路在调节血管生成中发挥一定作用,并可能参与胸腔积液的病程。 展开更多
关键词 1-磷酸鞘氨醇(s1P) s1P受体1(s1PR1) 慢病毒 血管内皮细胞 血管功能 胸腔积液
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SphK1/S1P/S1PR2信号通路促进肌生成:运动改善骨骼肌健康的新视角 被引量：1
9
作者 张文华 李荀 +3 位作者 张伟超 李欣颖 马帼澳 王孝强 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第6期1265-1275,共11页
背景:近年来,运动改善骨骼肌的健康已成为学者们关注的一个重要研究内容,适宜的运动对骨骼肌具有积极的作用,其中在运动激活鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SphK1)/鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)/鞘氨醇-1-磷酸受体2(sp... 背景:近年来,运动改善骨骼肌的健康已成为学者们关注的一个重要研究内容,适宜的运动对骨骼肌具有积极的作用,其中在运动激活鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SphK1)/鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)/鞘氨醇-1-磷酸受体2(sphingosine-1-phosphate receptor2,S1PR2)信号通路如何改善骨骼肌的健康,正受到科研人员的重视。目的:研究运动经SphK1/S1P/S1PR2信号通路如何改善骨骼肌的健康,探索治疗相关肌肉疾病的新方法,以改善人的骨骼肌健康。方法:检索Web of Science、PubMed、中国知网、万方和维普数据库从建库至今与文章主题相关的文献,以“signaling pathway,SphK1,S1P,S1PR2,skeletal muscle,satellite cell,myogenesis,exercise”为英文检索词,以“信号通路,SphK1,S1P,S1PR2,骨骼肌,卫星细胞,肌生成,运动”为中文检索词,最终纳入69篇文献进行分析。结果与结论:①SphK1/S1P/S1PR2信号通路是一个复杂的调控网络,通过SphK1催化产生的S1P,与S1PR2等受体的相互作用,触发下游信号转导过程,进而调控细胞、组织、器官和系统的多种生物学功能。②SphK1/S1P/S1PR2信号通路能调控卫星细胞增殖和成肌细胞分化,改善肌生成。③文章通过文献资料调研法分析了SphK1/S1P/S1PR2信号通路的生理基础以及运动对其影响的可能性。急性有氧运动可提高骨骼肌中SphK1的表达,人体和动物研究中已证实急性和长期运动均可提高骨骼肌中S1P水平,另外研究表明长期抗阻运动可提高S1PR2在骨骼肌中的表达,部分实验结果表明急性和长期运动对肌肉或者血液中S1P水平无显著影响,出现不同结果的原因可能是选择的研究对象、方式、强度及频率不同,而具体机制尚不明确。④研究认为,运动能够促进SphK1/S1P/S1PR2信号通路在骨骼肌中的表达,调控下游相关信号通路,并且针对这一信号通路的研究可能为骨骼肌疾病的治疗提供新的策略和方法,从而改善骨骼肌健康。⑤未来应深化对SphK1/S1P/S1PR2信号通路与骨骼肌健康关联的研究,进一步揭示其与卫星细胞、成肌细胞的调控关系及与上下游通路的相互作用,挖掘其临床应用价值,制定康复方案时考虑该通路变化,探索不同运动对该通路的影响机制,并将其作为潜在治疗靶点,结合人体肌肉模型提升研究深度和准确性。 展开更多
关键词 SphK1/s1P/s1PR2信号通路 骨骼肌 运动 肌生成 卫星细胞 成肌细胞 机制
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基于鞘脂代谢探索开玄解毒核心方对银屑病样小鼠皮损SPHK2/S1P/MCP-1通路的调控作用 被引量：1
10
作者 覃叶萍 刘文慧 +4 位作者 代丹 许佳 李翀 杨斌 宋坪 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第17期60-68,共9页
目的:探讨开玄解毒核心方对于咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠皮损中鞘脂代谢产物的影响。方法:37只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组(n=11)、模型组(n=11)、甲氨蝶呤组(n=5)、开玄解毒核心方低剂量组(n=5)及开玄解毒核心方高剂量组(n=5)。... 目的:探讨开玄解毒核心方对于咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠皮损中鞘脂代谢产物的影响。方法:37只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组(n=11)、模型组(n=11)、甲氨蝶呤组(n=5)、开玄解毒核心方低剂量组(n=5)及开玄解毒核心方高剂量组(n=5)。除正常组外,其余组均采用背部外涂5%咪喹莫特乳膏62.5 mg的方式进行银屑病样皮炎的造模,开玄解毒核心方组及甲氨蝶呤组每日分别予0.2 mL中药复方水煎液(高剂量组:30.42 g·kg^(-1);低剂量组:15.21 g·kg^(-1))、0.2 mL甲氨蝶呤混悬液(1 mg·kg^(-1))灌胃,其余组均以等体积生理盐水灌胃。连续干预5 d后,进行背部皮损取材。首先,选取正常组与模型组小鼠,利用串联质谱标签(TMT)定量蛋白质组学(正常组-模型组3∶3)、靶向脂质代谢组学(正常组-模型组11∶11)的方法检测鞘脂代谢通路相关差异表达蛋白及差异鞘脂代谢产物。然后利用网络药理学与分子对接技术预测开玄解毒核心方的重要活性成分与靶标蛋白的结合程度。最后,实验验证开玄解毒核心方对于鞘脂代谢的具体调节机制,使用免疫组化法检测小鼠皮损中1-磷酸鞘氨醇(S1P)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测皮损组织中鞘氨醇激酶2(SPHK2)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达。结果:TMT蛋白组学及脂质代谢组学提示,与正常组比较,银屑病模型小鼠皮损中鞘脂代谢通路表达活跃,通路关键蛋白酶[丝氨酸棕榈酰转移酶(SPTLC2)、SPHK2、二氢神经酰胺去饱和酶(Degs1)、神经酰胺合成酶4(CerS4)]及8种鞘脂代谢产物(含神经酰胺、鞘氨醇、鞘磷脂、糖鞘脂等)均有明显变化(P<0.05)。分子对接结果提示,开玄解毒核心方中的活性成分(槲皮素、山柰酚、木犀草素)与鞘脂代谢的关键蛋白的分子结合力均<−8 kal·mol^(-1)。进一步实验验证,与正常组比较,模型组小鼠皮损中SPHK2、S1P及MCP-1表达升高(P<0.05);与模型组比较,开玄解毒核心方能有效降低SPHK2、S1P及MCP-1表达水平(P<0.05)。结论:咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠皮损中存在鞘脂代谢失衡,开玄解毒核心方可能通过调节皮损中的鞘脂代谢从而起到改善银屑病样小鼠皮损的作用,其潜在的作用机制可能与SPHK2/S1P/MCP-1通路相关。 展开更多
关键词 开玄解毒核心方 多组学分析 鞘脂代谢 寻常型银屑病 鞘氨醇激酶2(SPHK2)/1-磷酸鞘氨醇(s1P)/单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)通路
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猪流行性腹泻病毒S1蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备 被引量：1
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作者 李佳晋 杨克礼 +3 位作者 朱啟超 任曼 江昌盛 李升和 《安徽科技学院学报》 2025年第1期9-16,共8页
以猪流行性腹泻病毒(PEDV)的S1蛋白为研究对象,构建PEDV S1的杆状病毒系统并稳定表达高纯度的S1蛋白,制备高特异性的S1蛋白多克隆抗体。基于多种基因型PEDV S1基因序列信息,使用生物信息学技术分析其理化特性、跨膜结构域、抗原表位和... 以猪流行性腹泻病毒(PEDV)的S1蛋白为研究对象,构建PEDV S1的杆状病毒系统并稳定表达高纯度的S1蛋白,制备高特异性的S1蛋白多克隆抗体。基于多种基因型PEDV S1基因序列信息,使用生物信息学技术分析其理化特性、跨膜结构域、抗原表位和二级结构等性质。进一步对S1基因序列进行适用于昆虫细胞表达的密码子优化,通过基因合成、载体构建、杆粒转化、细胞培养等步骤,构建适用于表达PEDV S1重组蛋白的Bac-to-Bac杆状病毒表达系统。通过镍柱亲和层析和超滤技术纯化S1重组蛋白,将其与弗氏佐剂混合乳化后免疫BALB/c小鼠,制备鼠多克隆抗血清(多抗血清)。通过间接免疫荧光(IFA)、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western Blot)等方法,成功证明了本研究所建立的杆状病毒表达系统能够有效地表达S1重组蛋白。ELISA和IFA验证了所得抗体在特异识别PEDV感染Vero细胞方面的有效性。本文成功构建了PEDV S1的杆状病毒表达系统,稳定表达了高纯度的S1蛋白,并制备了具有高特异性的S1蛋白多克隆抗体,为未来猪流行性腹泻单克隆抗体的制备及检测试剂的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 s1蛋白 生物信息学 杆状病毒表达 多克隆抗体
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利用BLUP和Bayes方法对湘佳黑凤鸡S1系产蛋性状基因组育种值预测效果的比较研究 被引量：1
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作者 刘勃攻 杨杰 +2 位作者 肖健 贺喜 张海涵 《中国家禽》 北大核心 2025年第1期1-7,共7页
试验旨在评估湘佳黑凤鸡S1系产蛋性状遗传参数,比较BLUP和Bayes算法对肉鸡产蛋性状基因组育种值预测的准确性,为湘佳黑凤鸡S1系选育及育种值估计的策略提供依据。研究以2886只黄羽肉鸡品系的产蛋性状为研究对象,利用ASREML软件以平均信... 试验旨在评估湘佳黑凤鸡S1系产蛋性状遗传参数,比较BLUP和Bayes算法对肉鸡产蛋性状基因组育种值预测的准确性,为湘佳黑凤鸡S1系选育及育种值估计的策略提供依据。研究以2886只黄羽肉鸡品系的产蛋性状为研究对象,利用ASREML软件以平均信息约束最大似然法(AIREML)分别估计开产日龄、40周产蛋量以及43周平均蛋重的遗传力和遗传相关,并基于PBLUP、SSGBLUP、GBLUP和BayesA、BayesB、BayesC模型对产蛋性状基因组育种值预测效果进行比较研究。结果显示:开产日龄遗传力为0.263~0.429,40周产蛋量遗传力为0.213~0.359,43周平均蛋重遗传力为0.441~0.553;开产日龄与40周产蛋量、43周平均蛋重间的遗传相关分别为-0.72、0.10,表型相关为-0.57、0.10,40周产蛋量和43周平均蛋重间遗传相关和表型相关系数分别为-0.29和-0.21;在对开产日龄和40周产蛋量的基因组预测准确性上,BayesB方法分别有最高准确性0.236和0.251,BayesC方法对43周平均蛋重有最高的准确性0.345。结果表明:开产日龄和40周产蛋量属于中等遗传力性状,43周平均蛋重属于中等偏高遗传力性状。开产日龄和40周产蛋量之间存在强的遗传负相关,与43周平均蛋重呈低的遗传正相关;40周产蛋量与43周平均蛋重间具有一定程度的遗传负相关。对于开产日龄,Bayes方法的基因组预测准确性均高于GBLUP方法,Bayes方法的计算时间远大于GBLUP;对于40周产蛋量,BayesB方法的预测准确性最高;BayesC方法对43周平均蛋重有最高的准确性。综上所述,在湘佳黑凤鸡S1系产蛋性状中应用BayesB方法将获得最高的育种值估计准确性。 展开更多
关键词 湘佳黑凤鸡s1系 产蛋性状 遗传参数 基因组选择
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猪流行性腹泻病毒S1蛋白的真核表达及中和性单克隆抗体制备
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作者 李春震 李青梅 +5 位作者 邹婉莹 孟泽锟 孙亚宁 杨苏珍 郭军庆 张改平 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期4854-4863,共10页
【目的】制备猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1重组蛋白及其中和性单克隆抗体,为PEDV诊断试剂和新型疫苗研发提供材料。【方法】构建可表达S1蛋白的重组质粒,转染HEK293F细胞,以镍亲和层析和凝胶过滤层析进行... 【目的】制备猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1重组蛋白及其中和性单克隆抗体,为PEDV诊断试剂和新型疫苗研发提供材料。【方法】构建可表达S1蛋白的重组质粒,转染HEK293F细胞,以镍亲和层析和凝胶过滤层析进行蛋白纯化。将PEDV CH/Hubei/2016毒株接种于Vero细胞进行培养增殖,对病毒液进行浓缩并利用凝胶过滤层析纯化PEDV,以SDS-PAGE及Western blotting对纯化的PEDV进行鉴定后免疫BALB/c小鼠以制备杂交瘤细胞;以间接ELISA及免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选阳性杂交瘤细胞,并通过病毒中和试验筛选鉴定抗PEDV S1蛋白中和性单克隆抗体。【结果】SDS-PAGE和Western blotting结果显示,S1重组蛋白在HEK293F细胞培养上清中高效表达。获得TCID_(50)为1×10^(-6.5)/0.1 mL纯化的PEDV。筛选获得5株稳定分泌抗PEDV S1重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2E1E10、4A8C8、8G9B11、9H8H1和10C9A5,其腹水的IPMA和ELISA效价分别为6.4×10^(-4)至1.28×10^(-5)和6.4×10^(-5)至1.024×10^(-7)。病毒中和试验结果显示,单克隆抗体2E1E10和4A8C8对PEDV有显著中和活性,对DR13毒株的半数抑制浓度(IC_(50))分别为1.212和1.203μg/mL,对CHHB毒株的IC 50分别为0.948和1.712μg/mL。【结论】本研究获得了具有良好抗原活性的PEDV S1重组蛋白和抗S1蛋白中和性单克隆抗体,为PEDV诊断试剂和疫苗研发奠定良好的研究基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) s1蛋白 单克隆抗体 中和活性 广谱反应性
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PEDV S1蛋白单克隆抗体的制备及其表位的初步鉴定
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作者 李宇鹏 李运川 +8 位作者 钱嘉莉 刘诗雨 谢景媛 宋旭 王祎 郭容利 范宝超 索朗斯珠 李彬 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期470-476,共7页
为研制针对PEDV S1蛋白单克隆抗体,为下一步应用研究奠定材料基础,本研究构建了表达三聚化形态的S1蛋白的重组质粒,利用HEK 293T细胞表达并纯化获得S1蛋白,经免疫小鼠后,制备并筛选分泌S1特异性单克隆抗体的杂交瘤B细胞,制备腹水后利用... 为研制针对PEDV S1蛋白单克隆抗体,为下一步应用研究奠定材料基础,本研究构建了表达三聚化形态的S1蛋白的重组质粒,利用HEK 293T细胞表达并纯化获得S1蛋白,经免疫小鼠后,制备并筛选分泌S1特异性单克隆抗体的杂交瘤B细胞,制备腹水后利用间接ELISA法测定了腹水效价及单抗的亚型;通过SDS-PAGE、Western-blot、间接免疫荧光试验分析制备抗体与病毒S蛋白的特异性结合能力。结果显示,成功表达和纯化三聚化PEDV重组S1蛋白,通过免疫制备筛选了15株特异性识别病毒S蛋白的单克隆抗体。15株单克隆抗体的重链为IgG1型11株,IgG2b型3株,32#抗体未检测到分型结果。除25#抗体未检测到轻链结构外,其余抗体轻链均为kappa链。Western-blot和间接免疫荧光分析表明制备抗体与病毒S蛋白特异性反应。功能域结合试验表明抗体20#、21#、31#与S1 D0区域反应,抗体9#、16#、25#与S1 NTD反应,抗体15#、27#、37#与S1 SD2反应,所制备抗体均无病毒中和活性。结果表明,本研究成功制备了多株可特异性识别PEDVS1蛋白的单克隆抗体,为病毒感染机制研究及免疫学诊断研究提供了重要的生物材料。 展开更多
关键词 PEDV s1蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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传染性支气管炎病毒S1蛋白中和表位-Fc融合蛋白的表达及免疫原性鉴定
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作者 郭森 李慧昕 +2 位作者 韩宗玺 孙军峰 夏长友 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5758-5769,共12页
为构建禽传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的免疫原,本研究通过比对已公布的S1中和表位和当前我国流行的GI-19型代表毒株ck/CH/LDL/091022(LDL091022)S1蛋白氨基酸序列,鉴定第22—100和410—492位氨基酸区域为中和表位优势区,分别命名为B1... 为构建禽传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的免疫原,本研究通过比对已公布的S1中和表位和当前我国流行的GI-19型代表毒株ck/CH/LDL/091022(LDL091022)S1蛋白氨基酸序列,鉴定第22—100和410—492位氨基酸区域为中和表位优势区,分别命名为B1和B2。构建表达LDL091022 B1和B2的质粒以及在C端融合鸡IgY Fc片段的质粒,通过Western blot和IFA检测发现融合IgY Fc片段后能够显著提高蛋白的表达量。转染Expi 293F细胞表达并纯化获得了融合IgY Fc片段的重组蛋白B1-Fc和B2-Fc。通过Western blot和ELISA鉴定B1-Fc和B2-Fc与LDL091022血清的反应性,结果发现B2-Fc与血清的反应性明显优于B1-Fc。将质粒pCAGGS-B2-Fc和重组蛋白B2-Fc免疫SPF鸡,通过ELISA和IFA检测血清中的抗体水平,结果显示B2-Fc加强免疫后能够有效诱导针对B2表位的抗体,且IFA结果显示血清能与LDL091022-S1蛋白和B2-Fc发生特异性反应。进一步利用中和试验检测血清中和效价为16。上述结果表明,本研究制备的IBV S1蛋白中和表位-Fc融合蛋白具有良好的表达水平和免疫原性,能够诱导机体产生一定水平的中和抗体,为进一步研发新型IBV亚单位疫苗提供了借鉴。 展开更多
关键词 禽传染性支气管炎病毒 s1亚基 中和表位 IgY Fc片段 免疫原性
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BLOC1S1基因过表达山羊的生产及生物安全评估
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作者 王聪亮 万仕成 +9 位作者 陈文博 李剑南 宋岩峰 杜晓敏 刘王叶 李荣荣 雷安民 屈雷 朱海鲸 华进联 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4328-4340,共13页
旨在制备BLOC1S1基因过表达山羊,并探究其生物安全性,为抗布鲁氏菌病模型建立和转基因动物遗传育种提供研究模型与平台。本研究以5只经产、健康雌性陕北白绒山羊(2~3岁)为供体进行超数排卵,公羊本交后经输卵管冲胚获得原核胚,通过显微... 旨在制备BLOC1S1基因过表达山羊,并探究其生物安全性,为抗布鲁氏菌病模型建立和转基因动物遗传育种提供研究模型与平台。本研究以5只经产、健康雌性陕北白绒山羊(2~3岁)为供体进行超数排卵,公羊本交后经输卵管冲胚获得原核胚,通过显微注射系统将BLOC1S1慢病毒浓缩液注射至原核胚透明带间隙后继续培养待其发育至2细胞,再移植至15只经产陕北白绒山羊受体(2~3岁)输卵管内;产羔后,利用PCR、实时荧光定量PCR和Western blotting技术对F0代羔羊进行BLOC1S1基因过表达山羊鉴定,对BLOC1S1基因过表达与野生型山羊的血液生理生化、体重和体高等生长性状指标监测比较。结果显示,原核胚胎显微注射后移植共获得13只羔羊,经PCR检测鉴定,7只为阳性BLOC1S1基因过表达山羊,阳性率为53.8%;qRT-PCR结果显示,BLOC1S1基因在大脑(P<0.01)、脾脏(P<0.001)和肺脏(P<0.05)组织mRNA表达量均显著上调,脾脏组织蛋白水平表达量显著上调(P<0.001);与野生型山羊相比,BLOC1S1基因过表达山羊WBC、Neu等血液生理指标和TBIL、GLU等血液生化指标均无显著差异(P>0.05);生长发育速度监测分析结果显示,BLOC1S1基因过表达与野生型山羊初生重、1~6月龄体重和3~6月龄生长性状指标相比无显著差异(P>0.05)。本研究成功生产了BLOC1S1基因过表达山羊,且基因过表达山羊的生长发育、血液生理生化指标与野生型山羊相比无显著差异,进一步为抗布鲁氏菌病模型建立和生物安全评价体系提供理论依据。 展开更多
关键词 BLOC1s1 过表达 山羊 布鲁氏菌 生物安全
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猪流行性腹泻病毒S1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 刘超凡 任静 +5 位作者 王飞燕 石晓静 侯佳璐 翟雨薇 袁晨 宋勤叶 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第4期627-633,共7页
为了制备猪流行性腹泻病毒(procine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1蛋白的单克隆抗体,本研究首先利用大肠杆菌表达系统和亲和层析法成功获得纯化的重组PEDV S1蛋白,免疫BALB/c小鼠后利用杂交瘤技术和间接ELISA方法制备并筛选阳性的杂... 为了制备猪流行性腹泻病毒(procine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1蛋白的单克隆抗体,本研究首先利用大肠杆菌表达系统和亲和层析法成功获得纯化的重组PEDV S1蛋白,免疫BALB/c小鼠后利用杂交瘤技术和间接ELISA方法制备并筛选阳性的杂交瘤细胞,最后利用体内诱生法制备腹水抗体。ELISA结果显示筛选到抗PEDV S1单克隆抗体的杂交瘤细胞株共有4株,并将其命名为E6、G3、H6、F2。4株杂交瘤细胞上清效价都达到1:6400,选择抗体效价高、抗体分泌更稳定的单克隆抗体H6进行抗体类型鉴定,发现单抗H6为IgG1亚类,轻链为λ链,诱生小鼠腹水的抗体效价为1:10~6且与其他蛋白无交叉反应;Western blot结果显示单抗与重组S1蛋白PEDV QY2016和PEDV CV777毒株均在38 kDa处出现特异性条带;IFA结果也同时发现单抗与感染PEDV QY2016和PEDV CV777毒株的细胞反应出现绿色荧光信号;单克隆抗体H6的亲和常数为K=1.75×10^(7)mol/L,说明H6株具有良好的亲和性,可用于后续诊断抗体的开发。综上,本研究成功制备了能够特异性识别PEDV S1蛋白的单克隆抗体,该抗体可用于PEDV的抗原检测,为PEDV检测方法的研究提供了重要试验材料。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 s1蛋白 单克隆抗体
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贵州某规模化猪场PEDV诊断及S1基因变异分析
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作者 程振孔 覃一峰 +4 位作者 尹业师 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《广西农学报》 2025年第2期38-47,共10页
猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起猪群以呕吐、水样腹泻、脱水以及初生仔猪高死亡率为特征的急性传染病的病原,给生猪养殖行业带来了严重的经济损失。为确诊贵州某猪场发生仔猪腹泻的病原及其基因变异情况... 猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起猪群以呕吐、水样腹泻、脱水以及初生仔猪高死亡率为特征的急性传染病的病原,给生猪养殖行业带来了严重的经济损失。为确诊贵州某猪场发生仔猪腹泻的病原及其基因变异情况,研究通过对发病猪群的临床观察、死亡仔猪病理剖检RT-PCR检测及S1基因的序列分析,最终诊断为PEDV变异株感染。对获得的3条PEDV S1部分基因序列进行分析显示,3条PEDV S1基因序列均属于G2a型;氨基酸序列比对发现,病毒S1-D0区出现4处氨基酸突变;S蛋白疏水性氨基酸和抗原位点均发生较为明显的变化。研究结果为PEDV病原学研究以及科学防控该病提供参考依据。 展开更多
关键词 PEDV s1基因 基因变异 遗传进化分析
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降气平哮方调控SphK1/S1P/NF-κB通路对哮喘气道炎症的影响及机制研究
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作者 袁宸 赵霞 +3 位作者 严花 陈文婷 陈文君 代晓寒 《时珍国医国药》 北大核心 2025年第22期4249-4254,共6页
目的观察降气平哮方对鞘氨醇激酶1(SphK1)/鞘氨醇-1-磷酸(S1P)/核因子κB(NF-κB)通路、炎症因子及氧化应激的影响,探讨其改善哮喘发作期小鼠气道炎症的作用机制。方法采用卵清蛋白(OVA)建立小鼠哮喘发作期模型,将小鼠随机分为正常组、... 目的观察降气平哮方对鞘氨醇激酶1(SphK1)/鞘氨醇-1-磷酸(S1P)/核因子κB(NF-κB)通路、炎症因子及氧化应激的影响,探讨其改善哮喘发作期小鼠气道炎症的作用机制。方法采用卵清蛋白(OVA)建立小鼠哮喘发作期模型,将小鼠随机分为正常组、模型组、降气平哮方低、中、高剂量组、地塞米松组。采用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肺组织病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠肺组织中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及S1P的表达;WAT-1法、微量法、TBA法分别检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及丙二醛(MDA)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肺组织中SphK1、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、蛋白激酶Cδ(PKCδ)以及核因子κB p65(NF-κB p65)磷酸化蛋白水平;免疫组化法检测SphK1在小鼠肺组织中的定位及表达。结果与正常组比较,模型组哮喘小鼠气道炎症明显,肺组织中IL-6、TNF-α表达增加,血清中MDA升高,SOD和CAT降低,肺组织中SphK1、S1P、TRAF2、PKCδ、p-NF-κB p65蛋白均升高,SphK1在气道上皮细胞中表达增加。与模型组比较,降气平哮方各剂量组及地塞米松组气道炎症明显减轻,肺组织中IL-6、TNF-α表达减少,血清中MDA降低,SOD和CAT表达升高,SphK1、S1P、TRAF2、PKCδ、p-NF-κB p65的蛋白表达均降低,且SphK1在气道上皮细胞中的分布减少。结论降气平哮方改善哮喘发作期小鼠气道炎症,可能与其调控SphK1/S1P/NF-κB通路介导的炎症和氧化应激有关。 展开更多
关键词 支气管哮喘 降气平哮方 气道炎症 SphK1/s1P/NF-κB通路 氧化应激
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猪流行性腹泻病毒S1蛋白的原核表达及其核酸适配体的筛选
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作者 张冬萱 王智豪 +3 位作者 乔岩 赵肖肖 范松杰 张超 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第2期839-850,共12页
本文旨在可溶性原核表达猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1蛋白的C端结合域(S1-CTD),并利用指数富集的配体系统进化技术筛选靶向S1-CTD蛋白的DNA适配体,为该病毒治疗药物的开发以及检测方法的建立奠定基础。采... 本文旨在可溶性原核表达猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1蛋白的C端结合域(S1-CTD),并利用指数富集的配体系统进化技术筛选靶向S1-CTD蛋白的DNA适配体,为该病毒治疗药物的开发以及检测方法的建立奠定基础。采用大肠杆菌原核表达系统,将PEDV-S1-CTD质粒与带有麦芽糖结合蛋白(MBP)、小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)、反转录终止因子(NusA)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)四种促溶标签的原核表达载体pET21b连接,构建重组质粒pET21b-MBP-S1、pET21b-SUMO-S1、pET21b-NusA-S1、pET21b-GST-S1,将双酶切鉴定和测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21进行诱导表达,选择可溶性好且表达量高的rMBP-S1重组蛋白进行后续试验,Western blot结果显示该重组蛋白正确表达,间接免疫荧光试验(IFA)结果表明rMBP-S1能与细胞表面受体结合。随后经磁珠法筛选得到111条靶向rMBP-S1重组蛋白的候选DNA适配体,其中Apt-S1-3、Apt-S1-11富集程度最高,分别是18%和16.2%,酶联适配体吸附试验ELASA(enzyme-linked aptamer sorbent assays,ELASA)测定适配体Apt-S1-3的解离常数为2.09 nmol,并且该适配体不与rMBP蛋白、rMBP-gD蛋白、rMBP-GP5蛋白以及BSA蛋白发生交叉反应,表明该适配体具有高亲和力与高特异性。此外,使用在线软件Mfold分析适配体Apt-S1-3形成的二级结构,并且通过分子对接模拟,发现该适配体能够与靶标蛋白形成稳定的复合物。最后的间接免疫荧光试验表明适配体Apt-S1-3能够识别PEDV,流式细胞术试验证实该适配体能够抑制PEDV感染宿主细胞。本研究筛选得到的DNA适配体能够与猪流行性腹泻病毒S1-CTD蛋白高亲和力、高特异性结合,而且能够抑制猪流行性腹泻病毒感染细胞,为PEDV的靶向治疗和检测方法开发奠定基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 s1-CTD蛋白 磁珠法 核酸适配体 亲和力
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