反相液相色谱-质谱联用技术对重组腺相关病毒6型衣壳蛋白的表征分析

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作者 郭莹 李响 +7 位作者 张拓 史新昌 何娟 聂爱英 裴德宁 周勇 秦玺 梁成罡 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第7期769-774,共6页

目的应用反相液相色谱-质谱(reversed phase liquid chromatography-mass spectrometry,RPLC-MS)联用技术对重组腺相关病毒6型(recombinant adeno-associated virus 6,rAAV6)载体的衣壳蛋白进行表征分析,包括一级结构和翻译后修饰(post-... 目的应用反相液相色谱-质谱(reversed phase liquid chromatography-mass spectrometry,RPLC-MS)联用技术对重组腺相关病毒6型(recombinant adeno-associated virus 6,rAAV6)载体的衣壳蛋白进行表征分析,包括一级结构和翻译后修饰(post-translational modification,PTM)。方法流动相A为0.1%二氟乙酸(difluoroacetic acid,DFA)的水溶液;流动相B为0.1%DFA的乙腈溶液;柱温:80℃;梯度洗脱10 min(0→10 min,流动相B 15%→45%)。ESI-Q-TOF质谱检测设为阳离子模式:质荷比扫描范围400~4000 m/z;扫描频率:2 Hz,锥孔电压:80 V;毛细管电压:3.0 kV;离子源温度:120℃。结果AAV衣壳蛋白VP1实测相对分子质量为81255.9,与理论值偏差为8.1 ppm;VP2蛋白实测相对分子质量为66062.9,与理论值偏差为3.8 ppm;VP3蛋白实测相对分子质量为59488.6,与理论值偏差为36 ppm。rAAV6酶切后质量肽图分析,样品序列覆盖率为89%,检测到的PTM主要包括脱酰胺、N-末端乙酰化、泛素化、磷酸化等,并未发现糖基化修饰位点。通过串联质谱分析确证了rAAV6衣壳蛋白N-末端和C-末端的序列以及N-末端的PTM。结论应用RPLC-MS联用技术分析了rAAV6衣壳蛋白的完整相对分子质量,并在肽段水平运用串联质谱深度分析了rAAV6衣壳蛋白的PTM,对AAV基因治疗制品的质量控制及生产工艺的提高具有一定意义。 展开更多

关键词 腺相关病毒 衣壳蛋白 反相液相色谱 串联质谱 相对分子质量 肽图

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反相液相色谱-串联质谱法鉴定油菜蜂花粉中的蛋白质及活性肽 被引量：4

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作者 郭静 晏嘉泽 +1 位作者 郭明 靳艳 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期284-289,共6页

基于鸟枪法蛋白质组学分析方法,使用反相液相色谱-串联质谱(RPLC-MS/MS)系统分析油菜蜂花粉蛋白质的胰蛋白酶酶解产物,结合数据库检索,共鉴定到353条肽段。鉴定到的肽段所归属的蛋白质中有239个蛋白质可检索到其分子生物学功能,主要功... 基于鸟枪法蛋白质组学分析方法,使用反相液相色谱-串联质谱(RPLC-MS/MS)系统分析油菜蜂花粉蛋白质的胰蛋白酶酶解产物,结合数据库检索,共鉴定到353条肽段。鉴定到的肽段所归属的蛋白质中有239个蛋白质可检索到其分子生物学功能,主要功能为结合活性、酶活性、运输活性、抑制活性等。根据血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽活性与多肽构效之间的关系,从鉴定到的肽段中筛选并适当修饰后得到5条可能具有ACE抑制活性的肽段,化学合成肽段后进行了活性验证。结果表明5条肽段均具有良好的活性,其中肽段AELDIVLALF和LAVNLIPFP表现出较高的ACE抑制活性,半数抑制浓度(IC50)分别为(10.65±0.50)μmol/L和(23.66±1.08)μmol/L。该方法速度快,成本低,大大缩短了鉴定周期,达到了高通量筛选生物活性肽的目的。 展开更多

关键词 反相液相色谱-串联质谱 蛋白质 血管紧张素转化酶抑制肽 油菜蜂花粉 REVERSED-PHASE liquid chromatography-tandem mass SPECTROMETRY ( rplc-ms MS)

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快速分离液相色谱/串联四级杆电喷雾质谱法同时测定食品中多种人工合成甜味剂 被引量：11

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作者 李传慧 李淑娟 +1 位作者 安娟 李建中 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期319-320,358,共3页

建立了同时检测食品中糖精钠(SA)、安赛蜜(AK)、甜蜜素(SC)、阿斯巴甜(ASP)、纽甜(NTM)5种人工合成甜味剂的RPLC/MS/MS分析方法。色谱分离采用ZOBAX SB-C18(2·1mm×50mm,1·8μm),以乙腈-水为流动相,ESI(-)电离模式下,采... 建立了同时检测食品中糖精钠(SA)、安赛蜜(AK)、甜蜜素(SC)、阿斯巴甜(ASP)、纽甜(NTM)5种人工合成甜味剂的RPLC/MS/MS分析方法。色谱分离采用ZOBAX SB-C18(2·1mm×50mm,1·8μm),以乙腈-水为流动相,ESI(-)电离模式下,采用多反应监测(MRM)进行监测,5种甜味剂的平均添加回收率在82·3%～104·3%之间,相对标准偏差(RSD)≤2·0%。本方法可用于食品中5种人工合成甜味剂的同时测定。 展开更多

关键词 人工合成甜味剂 快速高效液相色谱/串联质谱 测定 食品

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运用RPLC-ICP-MS对富硒酵母中硒形态分析 被引量：14

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作者 刘扬 张涛 +3 位作者 杨静 高愈希 吴刚 陈春英 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1261-1265,共5页

分析了硒酵母片中硒的存在形态。采用蛋白酶解法水解酵母片中的蛋白质部分,并提取出构成酵母蛋白质的各种氨基酸成分,利用反相离子对色谱与电感耦合等离子质谱联用方法对其中的含硒氨基酸进行测定,确定含硒氨基酸种类。通过与含硒标准... 分析了硒酵母片中硒的存在形态。采用蛋白酶解法水解酵母片中的蛋白质部分,并提取出构成酵母蛋白质的各种氨基酸成分,利用反相离子对色谱与电感耦合等离子质谱联用方法对其中的含硒氨基酸进行测定,确定含硒氨基酸种类。通过与含硒标准化合物在色谱柱上的保留时间比较,确定蛋白酶解液中主要的含硒氨基酸为硒代蛋氨酸。蛋白酶解提取手段和反相离子对色谱与电感耦合等离子质谱联用的检测技术,适合于酵母中的硒形态分析。 展开更多

关键词 富硒酵母 反相离子对色谱与电感耦合等离子质谱联用技术 硒代蛋氨酸

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肽段反相色谱保留时间预测算法及其在蛋白质鉴定中的应用 被引量：3

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作者 刘超 王海鹏 +5 位作者 付岩 袁作飞 迟浩 王乐珩 孙瑞祥 贺思敏 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期529-534,共6页

液相色谱-质谱(LC-MS)联用是当今规模化蛋白质鉴定的主流技术。肽段在反相液相色谱(RPLC)中的保留时间主要是由肽段的理化性质和LC条件(固定相、流动相)决定的。可以通过分析肽段的理化性质,并量化它们对肽段色谱行为的影响来预测保留... 液相色谱-质谱(LC-MS)联用是当今规模化蛋白质鉴定的主流技术。肽段在反相液相色谱(RPLC)中的保留时间主要是由肽段的理化性质和LC条件(固定相、流动相)决定的。可以通过分析肽段的理化性质,并量化它们对肽段色谱行为的影响来预测保留时间。预测结果可以用于帮助提高蛋白质鉴定的数量和可信度,也可用于肽段的翻译后修饰等研究。现在已有的保留时间预测算法主要有保留系数法和机器学习法两大类,得到的预测保留时间与实际保留时间相关系数可达到0.93。随着色谱和质谱技术的不断发展,肽段色谱行为的稳定性和重现性越来越好,保留时间预测结果也越来越准确。预测肽段保留时间将成为提高蛋白质鉴定结果的重要技术手段之一。 展开更多

关键词 反相液相色谱-质谱联用 保留系数 机器学习 保留时间 预测 蛋白质 肽 鉴定

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纳升级反相液相色谱-串联质谱法分析锦灯笼提取物中的蛋白质 被引量：6

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作者 于海洋 晏嘉泽 +1 位作者 郭明 靳艳 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期362-366,共5页

通过水提、酸沉法得到锦灯笼果实提取物,其中蛋白质含量为188 mg/g(以提取物干重计),共含有18种氨基酸,其中8种人体必需氨基酸占氨基酸总量的31%。基于鸟枪法蛋白质组学的分析方法,用纳升级反相液相色谱-串联质谱(nano-RPLC-MS/MS)系统... 通过水提、酸沉法得到锦灯笼果实提取物,其中蛋白质含量为188 mg/g(以提取物干重计),共含有18种氨基酸,其中8种人体必需氨基酸占氨基酸总量的31%。基于鸟枪法蛋白质组学的分析方法,用纳升级反相液相色谱-串联质谱(nano-RPLC-MS/MS)系统分析锦灯笼果实提取物中蛋白质的酶解产物,结合数据库检索,共鉴定得到60种蛋白质;通过生物信息学分析,得到锦灯笼提取物中的蛋白质具有催化活性、抗氧化活性、酶调节活性、养分贮液囊活性、运输活性、结合活性六大生物活性,其中鉴定到与抗氧化相关的蛋白质有3种,为锦灯笼中蛋白质的功能性质的进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 纳升级反相液相色谱-串联质谱 蛋白质 锦灯笼

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基于RPLC／Q-TOF-MS技术的黄柏炭制前后化学成分变化研究 被引量：15

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作者 李利新 乔斌 +4 位作者 李遇伯 张丽媛 王玉明 靳晶 张秀秀 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1314-1319,共6页

目的分析黄柏炭制前后化学成分的变化情况,为黄柏炭炮制原理的阐明提供依据。方法按照《中国药典》2010年版方法炮制黄柏炭,采用RPLC/Q-TOF-MS技术对生黄柏及黄柏炭的提取样品进行检测,找出炮制前后具有显著性差异的物质。结果共找出21... 目的分析黄柏炭制前后化学成分的变化情况,为黄柏炭炮制原理的阐明提供依据。方法按照《中国药典》2010年版方法炮制黄柏炭,采用RPLC/Q-TOF-MS技术对生黄柏及黄柏炭的提取样品进行检测,找出炮制前后具有显著性差异的物质。结果共找出21种化学成分在炮制前后具有显著性差异,其中炮制后新生成的物质有5种,质量分数增加的物质有8种,减少的物质有8种。结论采用RPLC/Q-TOF-MS法进行中药炮制研究具有方法灵敏度高,结果准确可靠的优点,该法能够全面地反映出中药在炮制过程中多种化学成分的变化。 展开更多

关键词 黄柏 RPLC/Q-TOF-MS 炮制 黄柏炭 化学成分

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基于整体材料的微流控芯片反相液相色谱-串联质谱平台用于蛋白质分析 被引量：1

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作者 梁玉 吴慈 +4 位作者 戴忠鹏 梁作成 梁振 张丽华 张玉奎 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期469-474,共6页

微流控芯片高效液相色谱-串联质谱系统具有高通量、高灵敏度等优点,已成为生物样品分析的热点领域之一。本文在玻璃芯片上以甲基丙烯酸十二酯(LMA)和三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TMPTMA)为单体,制备了以聚丙烯酸酯整体材料为固定相的捕... 微流控芯片高效液相色谱-串联质谱系统具有高通量、高灵敏度等优点,已成为生物样品分析的热点领域之一。本文在玻璃芯片上以甲基丙烯酸十二酯(LMA)和三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TMPTMA)为单体,制备了以聚丙烯酸酯整体材料为固定相的捕集柱和分离柱。通过在芯片通道末端连接细内径的毛细管作为芯片-质谱接口,并以常规的液相色谱泵和微阀控制流体,构建了芯片反相液相色谱-电喷雾串联质谱(RPLC-ESI-MS/MS)平台,并将其用于分析牛血清白蛋白(BSA)的酶解产物。经过3次平行分析,BSA的序列覆盖率分别为39.37%、37.89%和34.10%(相对标准偏差为7.3%)。采用不同批次制作的芯片构建RPLC-ESI-MS/MS平台,对BSA酶解产物进行分析,其序列覆盖率相当。上述结果表明,该平台具有灵敏度高和重现性好等优点,有望用于蛋白质样品的快速分离和高灵敏度鉴定。 展开更多

关键词 微流控芯片 反相液相色谱 串联质谱 整体材料 蛋白质分析

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多维色谱-质谱联用技术分析胰腺癌血清差异表达蛋白 被引量：1

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作者 刘峰 刘捷登 +2 位作者 刘彬霞 薛丹阳 杨雁灵 《现代肿瘤医学》 CAS 2012年第10期2121-2123,共3页

目的:探讨胰腺癌患者血清和健康人血清之间蛋白质的差异表达,寻找特异性的肿瘤生物标志物。方法:应用多维色谱-基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法,检测23例胰腺癌患者和30例健康人血清蛋白质谱图表达。结果:与健康人... 目的:探讨胰腺癌患者血清和健康人血清之间蛋白质的差异表达,寻找特异性的肿瘤生物标志物。方法:应用多维色谱-基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法,检测23例胰腺癌患者和30例健康人血清蛋白质谱图表达。结果:与健康人血清比较,胰腺癌患者血清谱图中显示1个特异性蛋白质峰明显增高,相对分子质量为5734D,其特异性和敏感性高。结论:人胰腺癌血清特异性蛋白质的发现,对进一步研究肿瘤发生机理及其临床特异性生物标志物的检测等具有重要意义。 展开更多

关键词 多维色谱 体积排阻色谱 反相液相色谱 胰腺癌 质谱 蛋白质组学 生物标记物

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基于氨基柱的反相/正相液相色谱-电喷雾串联质谱法测定纺织品中的二硬脂基二甲基氯化铵 被引量：7

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作者 丁友超 申晓萍 +2 位作者 吴晓琼 吴丽娜 曹锡忠 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期507-512,共6页

建立了纺织品中二硬酯基二甲基氯化铵(DSDMAC)的反相(RP)/正相(NP)液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱(LC-ESI-MS/MS)的分析方法。选用甲醇为提取溶剂,确定了超声功率为420 W、提取温度为70℃的超声波辅助提取条件,实现了30 min快速提取样... 建立了纺织品中二硬酯基二甲基氯化铵(DSDMAC)的反相(RP)/正相(NP)液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱(LC-ESI-MS/MS)的分析方法。选用甲醇为提取溶剂,确定了超声功率为420 W、提取温度为70℃的超声波辅助提取条件,实现了30 min快速提取样品中的DSDMAC。建立了基于氨基柱的反相和正相两套液相色谱分离系统,采用LC-MS/MS的选择反应监测(SRM)模式检测3个DSDMAC组分。结果显示:RPLC和NPLC对DSDMAC的检出限(S/N=3)分别为0.1 mg/kg和0.01 mg/kg。采用RPLC-MS/MS为定量方法,对8种不同的空白纤维纺织品的添加回收率为85.5%～103%(n=5);平行测试的相对标准偏差(RSD)为4.18%～12.8%(n=5)。5家外部实验室分别采用上述方法对2种参考样品中的DSDMAC进行检测,实验室间测定的RSD分别为7.3%和9.4%。该方法快速、准确、稳定,适用于纺织品中DSDMAC的检测。 展开更多

关键词 反相/正相液相色谱 液相色谱-串联质谱 季铵盐化合物 二硬酯基二甲基氯化铵 纺织品

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蛋白质组衍生肽段文库用于鉴定酪蛋白激酶2的底物模体 被引量：2

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作者 张曼玉 王春丽 +4 位作者 边阳阳 程凯 卫晓鸾 叶明亮 邹汉法 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期706-711,共6页

模体是蛋白质二级结构上的一种特征序列,激酶底物通常具有一类特征性的模体,识别底物模体对鉴定激酶底物具有重要意义。为了快速鉴定激酶底物模体,将全细胞蛋白质酶解液作为肽段文库的来源,采用碱性磷酸酶去除肽段的固有磷酸化后构建了... 模体是蛋白质二级结构上的一种特征序列,激酶底物通常具有一类特征性的模体,识别底物模体对鉴定激酶底物具有重要意义。为了快速鉴定激酶底物模体,将全细胞蛋白质酶解液作为肽段文库的来源,采用碱性磷酸酶去除肽段的固有磷酸化后构建了用于筛选激酶底物模体的肽段文库。该肽段文库是大量非磷酸化肽段的混合物,将此混合肽段与酪蛋白激酶2和三磷酸腺苷作用30min后,通过固定化金属离子亲和色谱法富集磷酸化肽段,采用反相液相色谱-串联质谱分析,成功地鉴定到472条非冗余底物肽段,包含451个非冗余磷酸化位点,并由此得到底物模体S/T-D/E-x-D/E。该法能够快速准确地筛选出激酶底物模体,对研究激酶-底物识别以及信号转导过程具有重要意义。 展开更多

关键词 固定化金属离子亲和色谱 反相液相色谱-串联质谱 模体 激酶 肽段文库 蛋白质组学

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米格列奈及其3个异构体杂质的反相液相色谱分离及质谱碎裂分析 被引量：3

12

作者 李珉 刘海涛 +3 位作者 侯金凤 王成刚 李文东 车宝泉 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期412-417,共6页

建立了超高效反相液相色谱-高分辨质谱方法以实现米格列奈及其3种异构体杂质的分离,以ACQUITY UPLC HSS T3(100 mm×2.1 mm, 1.8μm)为色谱柱,以水-乙腈-正戊醇(75∶25∶1)(用甲酸调节pH至1.8)为流动相,流速为0.4 mL/min。根据Q Exa... 建立了超高效反相液相色谱-高分辨质谱方法以实现米格列奈及其3种异构体杂质的分离,以ACQUITY UPLC HSS T3(100 mm×2.1 mm, 1.8μm)为色谱柱,以水-乙腈-正戊醇(75∶25∶1)(用甲酸调节pH至1.8)为流动相,流速为0.4 mL/min。根据Q Exactive四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱的精确质量数及碎裂情况,发现了米格列奈及3种异构体存在碎片离子丰度的明显差异,确认其中两种为本次新发现的异构体杂质,并推断了米格列奈及3种异构体杂质可能的质谱裂解机理。经验证,该方法的灵敏度、重复性及线性均满足分析要求。在此基础上,对米格列奈异构体杂质的来源进行了探讨,发现异构体杂质1可在高温下降解产生,并对各企业的米格列奈钙原料样品进行了测定。 展开更多

关键词 反相液相色谱 质谱 米格列奈 异构体 裂解机理

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RPLC-ESI／MS法测定人血浆中阿普唑仑及其代谢产物的浓度 被引量：3

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作者 李建国 《湘南学院学报（医学版）》 2010年第2期6-8,共3页

目的建立RPLC-ESI/MS法测定人血浆中阿普唑仑及其代谢产物浓度的方法。方法以地西泮为内标物;色谱柱:Agilent Zorbax SB C_(18)柱(2.1 mm×30 mm,3.5μm),流动相为10 mmol/L乙酰胺-乙腈(2:8),流速为0.2 ml/min,柱温30℃,进样量10μl... 目的建立RPLC-ESI/MS法测定人血浆中阿普唑仑及其代谢产物浓度的方法。方法以地西泮为内标物;色谱柱:Agilent Zorbax SB C_(18)柱(2.1 mm×30 mm,3.5μm),流动相为10 mmol/L乙酰胺-乙腈(2:8),流速为0.2 ml/min,柱温30℃,进样量10μl;质谱条件为电喷雾电离源(ESI),检测方式为正离子电离、多离子反应监测(MRM)。结果阿普唑仑、α-羟基阿普唑仑和4-羟基阿普唑仑在0.5～50 ng/ml血浆浓度范围内线性关系良好(r=0.9996,r=0.9997,r=0.9994;n=7);批内和批间精密度均低于5%;最低检测限为0.5 ng/ml。结论该方法灵敏、准确可用于临床上阿普唑仑及α-羟基阿普唑仑和4-羟基阿普唑仑的药代动力学研究。 展开更多

关键词 代谢产物浓度 阿普唑仑 人血浆 MS法 ESI 测定 电喷雾电离源 批间精密度

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比较纳升反相色谱-串联质谱与毛细管区带电泳-串联质谱用于自顶向下蛋白质组学（英文） 被引量：3

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作者 Elijah N.MCCOOL 孙良亮 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期878-886,共9页

自顶向下蛋白质组学的一个重要难题是缺乏与质谱可以在线连用并且可以提供高效蛋白质分离的液相分离技术。毛细管区带电泳与纳升反相色谱都可以与质谱在线连用,并且在复杂蛋白质样品分析方面也都有了显著的提升。在这里,我们首次比较了... 自顶向下蛋白质组学的一个重要难题是缺乏与质谱可以在线连用并且可以提供高效蛋白质分离的液相分离技术。毛细管区带电泳与纳升反相色谱都可以与质谱在线连用,并且在复杂蛋白质样品分析方面也都有了显著的提升。在这里,我们首次比较了先进的纳升反相色谱-串联质谱与毛细管区带电泳-串联质谱平台用于自顶向下蛋白质组学分析。相对于纳升反相色谱-质谱而言,毛细管区带电泳-质谱可以将标准蛋白质样品的消耗量降低10倍,而且保持与纳升反相色谱-质谱相当的蛋白质信号强度。有意思的是,与毛细管区带电泳-质谱相比,纳升反相色谱-质谱可以获得更高的蛋白质分子的气相价态。这个现象可能是由于反相流动相中的高浓度乙腈使得蛋白质变性的更加充分。从1微克的大肠杆菌蛋白质样品中,毛细管区带电泳-串联质谱可以鉴定到159个蛋白质和513个蛋白质变体,而纳升反相色谱-串联质谱仅鉴定到105个蛋白质和277个蛋白质变体。当将大肠杆菌蛋白质的上样量提高到8微克时,纳升反相色谱-串联质谱可以鉴定到245个蛋白质和1004个蛋白质变体。由于纳升反相色谱-串联质谱具有比毛细管区带电泳-串联质谱更高的上样量与更宽的分离窗口,当蛋白质样品量不受限制时,纳升反相色谱-串联质谱具有明显的优势。但是,在痕量样品分析方面,毛细管区带电泳-串联质谱具有更大的潜力。 展开更多

关键词 自顶向下蛋白质组学 毛细管区带电泳-串联质谱 纳升反相色谱-串联质谱 大肠杆菌 高灵敏度

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