粉背南蛇藤中新三萜化合物对RKO细胞体外抗癌作用的研究 被引量：14

1

作者 毛建山 王奎武 +1 位作者 郑树 潘远江 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第17期1450-1453,共4页

目的：探讨粉背南蛇藤中新的三萜齐墩果-12-烯-3β，6α-二醇对人结肠癌细胞系RKO细胞的体外增殖抑制作用和诱导凋亡作用。方法：采用MTT法检测齐墩果-12-烯-3β，6α-二醇对体外培养人结肠癌细胞系RKO细胞的增殖抑制作用，通过AO／EB... 目的：探讨粉背南蛇藤中新的三萜齐墩果-12-烯-3β，6α-二醇对人结肠癌细胞系RKO细胞的体外增殖抑制作用和诱导凋亡作用。方法：采用MTT法检测齐墩果-12-烯-3β，6α-二醇对体外培养人结肠癌细胞系RKO细胞的增殖抑制作用，通过AO／EB双染色荧光显微镜、HE染色光学显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪分析齐墩果-12-烯-3β，6α-二醇对RKO细胞的诱导凋亡作用及对细胞周期的影响。结果：齐墩果-12-烯-3β，6α-二醇对RKO细胞生长抑制作用具有剂量依赖性和时间依赖性，作用48h时IC50为（12．20±0．79）μg·mL^-1；AO／EB双染色、HE染色可见典型的肿瘤细胞凋亡改变；10μg·mL^-1的三萜处理RKO细胞48h即可出现明显的DNA梯带、流式细胞仪可检测到亚二倍体峰，在10-20μg·mL^-1内具有明显的量-效作用关系；并可见RKO细胞G0-G1期、G2-M期的细胞明显减少，而S期细胞无变化。结论：粉背南蛇藤中新的三萜齐墩果-12-烯-3β，6α-二醇能抑制人结肠癌细胞系RKO细胞增殖和诱导凋亡。 展开更多

关键词 齐墩果-12-烯-3β 6α-二醇 粉背南蛇藤 抗肿瘤 细胞凋亡 rko细胞

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CCK-8法与Alamar blue法对RKO细胞株增殖活力测试条件的对比分析 被引量：7

2

作者 高丕尧 龙军先 +2 位作者 甘嘉亮 曹云飞 高枫 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2015年第1期38-41,共4页

目的以RKO细胞株为增殖活力测试的研究对象，比较CCK-8法与Alamarblue法在检测中波长、孵育时间、细胞密度等方面的差异性。方法取体外培养对数生长期的RKO细胞株，分别比较两者在不同检测波长（380、430、480、530、580、630nm）、不... 目的以RKO细胞株为增殖活力测试的研究对象，比较CCK-8法与Alamarblue法在检测中波长、孵育时间、细胞密度等方面的差异性。方法取体外培养对数生长期的RKO细胞株，分别比较两者在不同检测波长（380、430、480、530、580、630nm）、不同孵育时间（1、2、3、4、5、6h）、不同细胞密度（2×10^4、5×10^3、1．25×10^3CUF·mL^-1）下所测的光密度值（OD值），并比较两者在相同条件下同-标本重复检测时的平衡性。结果ALamarblue法在不同细胞密度中的最佳检测波长皆为580nm，而CCK-8法的最佳检测波长会随着细胞密度的变化而有所改变；1—6h时，CCK-8法适合的孵育时间在1h以后，Alamarblue为2h以后，且CCK-8法的灵敏度、平衡性都强于Alamarblue法。结论CCK-8法在细胞增殖活力检测中的灵敏性、平衡性、快捷性等都略强于ALamarblue法。 展开更多

关键词 CCK-8法 Alamar blue法 rko细胞株 细胞增殖活力 测试条件 对比分析

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构建稳定干扰RN181的RKO细胞系并研究其生长现象 被引量：8

3

作者 张贤 王穗海 +4 位作者 彭迎霞 高彦君 张雪峰 孙政 李纪良 《热带医学杂志》 CAS 2014年第5期571-573,577,F0002,共5页

目的构建稳定干扰RN181的重组RKO细胞系,并研究下调RN181水平后,重组细胞系在体内外生长的规律。方法 RN181干扰慢病毒感染RKO细胞系,荧光与Western blotting鉴定该重组细胞系,CCK-8法、平板克隆实验研究该重组细胞系在体外增殖规律,裸... 目的构建稳定干扰RN181的重组RKO细胞系,并研究下调RN181水平后,重组细胞系在体内外生长的规律。方法 RN181干扰慢病毒感染RKO细胞系,荧光与Western blotting鉴定该重组细胞系,CCK-8法、平板克隆实验研究该重组细胞系在体外增殖规律,裸鼠成瘤实验研究其在体内增殖情况。结果重组细胞系荧光良好,Western blotting证实重组细胞干扰组与对照组的RN181表达量差异有统计学意义(P<0.05)。体外细胞生长曲线实验与平板克隆结果显示,干扰组与对照组之间增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。干扰组的瘤体生长速度明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建稳定干扰RN181的肠癌细胞系,并证实了下调RN181对RKO细胞在体外生长无影响但在体内能显著抑制细胞生长。 展开更多

关键词 RN181 结直肠癌 rko细胞系

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三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡的影响 被引量：43

4

作者 汪珍 冯健 +2 位作者 王晓华 茅文亭 丁钢强 《浙江中医药大学学报》 CAS 2008年第3期321-322,324,共3页

[目的]观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡的作用,初步探讨其可能的机制。[方法]采用体外细胞培养技术,用MTT法观察三叶青提取物RKO细胞的影响;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bid,Bax,Bcl-2和Bcl-XL的表达改变。[结果... [目的]观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡的作用,初步探讨其可能的机制。[方法]采用体外细胞培养技术,用MTT法观察三叶青提取物RKO细胞的影响;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bid,Bax,Bcl-2和Bcl-XL的表达改变。[结果]三叶青提取物能显著地抑制人结肠癌细胞系RKO细胞的生长,并且具有浓度依赖性,且细胞有明显的凋亡特征性改变,并能下调Bcl-XL、上调Bid来诱导凋亡。[结论]三叶青提取物具有对人结肠癌细胞系RKO细胞抗增殖和诱导凋亡的作用,且呈剂量依赖性。 展开更多

关键词 三叶青提取物 rko细胞 凋亡

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miR-143-3p通过靶向EZH2调控结肠癌RKO细胞增殖、迁移和侵袭 被引量：5

5

作者 冯曜宇 张承磊 +3 位作者 张世超 侯丽娟 吴秀灵 罗华友 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期735-741,共7页

目的:探讨miR-143-3p通过靶向果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)调控结肠癌RKO细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法:选用2015年3月至2017年7月昆明医科大学第一附属医院手术切除的40例结肠癌患者的癌及... 目的:探讨miR-143-3p通过靶向果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)调控结肠癌RKO细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法:选用2015年3月至2017年7月昆明医科大学第一附属医院手术切除的40例结肠癌患者的癌及癌旁组织标本,以及结肠癌细胞系COLO320、RKO、CL-11和正常肠黏膜细胞株NCM460,用qPCR法检测结肠癌组织和细胞系中miR-143-3p的表达水平。分别将miR-143-3p mimics、miR-143-3p inhibitor、EZH2 shRNA及阴性对照质粒转染进RKO细胞,用CCK-8法、Transwell小室法分别检测miR-143-3p/EZH2分子轴对RKO细胞增殖、迁移和侵袭的影响,用Western blotting检测RKO细胞中EZH2蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-143-3p和EZH2的靶向关系。结果:miR-143-3p在结肠癌组织和细胞系中均低表达(均P<0.01)。过表达miR-143-3p显著抑制RKO细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-143-3p靶向EZH2。同时敲降miR-143-3p和EZH2可逆转敲降EZH2对RKO细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用。结论:miR-143-3p通过靶向EZH2并下调其表达水平进而抑制结肠癌细胞的增殖、迁移与侵袭。 展开更多

关键词 miR-143-3p 果蝇zeste基因增强子同源物2 结肠癌 rko细胞 增殖 迁移 侵袭

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褪黑素对结肠癌细胞系RKO增殖和凋亡的影响 被引量：3

6

作者 胡若磊 韦晓 +2 位作者 周青 桂淑玉 汪渊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第1期27-30,共4页

目的研究褪黑素(Mel)作用下,结直肠癌细胞系RKO细胞增殖和凋亡发生的变化。方法 MTT法检测Mel对RKO细胞增殖的影响,并同时观察不同浓度Mel作用下相应受体表达的变化,通过Hoechst染色观察细胞核染色结果,判断细胞凋亡情况,并同时用Wester... 目的研究褪黑素(Mel)作用下,结直肠癌细胞系RKO细胞增殖和凋亡发生的变化。方法 MTT法检测Mel对RKO细胞增殖的影响,并同时观察不同浓度Mel作用下相应受体表达的变化,通过Hoechst染色观察细胞核染色结果,判断细胞凋亡情况,并同时用Western blot观察凋亡相关蛋白表达的变化。结果毫摩尔级的Mel可以抑制细胞增殖,膜受体MEL1AR随着浓度的增加表达上调,Hoechst染色显示Mel作用下细胞凋亡增加,抑制凋亡的相关蛋白,如Bcl-2和Bcl-XL的表达明显下降,而促进凋亡的相关蛋白,如Bax、Bak等表达量相应提高。结论 Mel通过受体MEL1AR发挥作用,抑制细胞的增殖,并促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 结直肠肿瘤 细胞凋亡 褪黑激素 rko

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香加皮宝藿苷-Ⅰ抑制结肠癌细胞株SW480和RKO的恶性表型及其作用机制 被引量：4

7

作者 王晓华 李晓亚 +1 位作者 白函瑜 霍炳杰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期228-234,共7页

目的:探讨香加皮宝藿苷-Ⅰ对人结肠癌细胞株SW480和RKO增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响,并对其机制进行初步的探讨。方法:用不同质量浓度(0、5、10、20μg/ml)的香加皮宝藿苷-Ⅰ溶液分别处理结肠癌细胞株SW480和RKO,采用MTT法检测细胞的... 目的:探讨香加皮宝藿苷-Ⅰ对人结肠癌细胞株SW480和RKO增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响,并对其机制进行初步的探讨。方法:用不同质量浓度(0、5、10、20μg/ml)的香加皮宝藿苷-Ⅰ溶液分别处理结肠癌细胞株SW480和RKO,采用MTT法检测细胞的增殖情况,通过细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,通过Transwell方法检测细胞的迁移和侵袭能力,通过流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。通过Western blotting检测C-PARP、Bcl-2与caspase-3蛋白的表达水平,通过RNA-seq检测分析香加皮宝藿苷-Ⅰ对SW480细胞转录组的影响及其可能影响的信号通路。结果:香加皮宝藿苷-Ⅰ能抑制SW480和RKO细胞的增殖、侵袭和迁移,并且能够诱导细胞凋亡和阻滞于细胞G0/G1期。香加皮宝藿苷-Ⅰ处理可上调SW480和RKO细胞株中C-PARP与caspase-3蛋白的表达水平、下调Bcl-2蛋白的表达水平;RNA-seq数据分析显示,SW480细胞DNA复制及ERBB信号通路等相关基因的转录都受到香加皮宝藿苷-Ⅰ的影响。结论:香加皮宝藿苷-Ⅰ通过影响凋亡相关蛋白的表达、细胞DNA复制和ERBB信号通路来诱导细胞凋亡和细胞G0/G1期阻滞,进而抑制人结肠癌细胞株SW480和RKO的恶性表型。 展开更多

关键词 结肠癌 SW480细胞 rko细胞 宝藿苷-Ⅰ 恶性表型 DNA复制 ERBB通路

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lncRNA ZSWIM8-AS1对结直肠癌细胞RKO增殖、凋亡、迁移和放射敏感性的影响 被引量：1

8

作者 侯歌 张家杰 +5 位作者 肖陈虎 宋锐 黄洋洋 袁金金 柴婷 刘宗文 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2021年第4期485-492,共8页

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)ZSWIM8-AS1对结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和放射敏感性的影响及作用机制。方法:选取25例结直肠癌组织和对应的癌旁组织,采用qRT-PCR法检测组织中ZSWIM8-AS1和miR-15b表达水平。体外培养结直肠癌细胞RKO... 目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)ZSWIM8-AS1对结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和放射敏感性的影响及作用机制。方法:选取25例结直肠癌组织和对应的癌旁组织,采用qRT-PCR法检测组织中ZSWIM8-AS1和miR-15b表达水平。体外培养结直肠癌细胞RKO,双荧光素酶报告基因实验验证ZSWIM8-AS1和miR-15b调控关系。分组培养RKO细胞(pcDNA组、pcDNA-ZSWIM8-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-15b组、pcDNA-ZSWIM8-AS1+miR-NC组和pcDNA-ZSWIM8-AS1+miR-15b组),采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组细胞存活率,双染法检测各组细胞凋亡率,Transwell小室检测各组细胞迁移,克隆形成实验检测各组细胞放射敏感性,Western blot法检测各组细胞中Ki-67、Cleaved Caspase-3、N-cadherin、E-cadherin的蛋白表达水平。结果:与癌旁组织比较,结直肠癌组织中ZSWIM8-AS1表达降低(P<0.001),miR-15b表达升高(P<0.001)。ZSWIM8-AS1在RKO细胞中负调控miR-15b表达。与pcDNA组或anti-miR-NC组比较,pcDNA-ZSWIM8-AS1组和anti-miR-15b组细胞存活率、迁移数及Ki-67和N-cadherin蛋白表达均降低(P均<0.001),凋亡率及Cleaved Caspase-3和E-cadherin蛋白表达升高(P均<0.001),增敏比分别为1.747、1.977。与pcDNA-ZSWIM8-AS1+miR-NC组比较,pcDNA-ZSWIM8-AS1+miR-15b组细胞存活率、迁移数及Ki-67和N-cadherin蛋白表达升高(P均<0.001),凋亡率及Cleaved Caspase-3和E-cadherin蛋白表达降低(P均<0.001),增敏比为0.645。结论:ZSWIM8-AS1在结直肠癌组织中表达降低,上调其表达可通过靶向负调控miR-15b抑制结直肠癌细胞RKO增殖和迁移,并促进细胞凋亡和对放射线的敏感性。 展开更多

关键词 结直肠癌 ZSWIM8-AS1 miR-15b 放射敏感性 rko细胞

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大黄素对人结肠癌细胞系RKO、HT-29、Caco-2体外增殖的抑制作用 被引量：2

9

作者 顾晔斌 郭立杰 蔡骏 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期518-519,共2页

目的:观察大黄素在体外抑制人结肠癌细胞RKO、HT-29、Caco-2的增殖作用。方法:选择低、中、高3种分化程度的人结肠癌细胞RKO、HT-29、Caco-2,100、50、25、12.5μM大黄素处理3种细胞24、48、72h后,采用四唑氮盐(MTT)比色法检测3种细胞... 目的:观察大黄素在体外抑制人结肠癌细胞RKO、HT-29、Caco-2的增殖作用。方法:选择低、中、高3种分化程度的人结肠癌细胞RKO、HT-29、Caco-2,100、50、25、12.5μM大黄素处理3种细胞24、48、72h后,采用四唑氮盐(MTT)比色法检测3种细胞的吸光度并计算生长抑制率。结果:在各个作用时段内,随着大黄素浓度的升高,3种细胞各组的吸光度明显减弱。大黄素对RKO、Caco-2细胞抑制作用表现出不同程度的剂量依赖性,对HT-29细胞抑制作用表现出明显的时间和剂量依赖性。结论:大黄素能在体外抑制RKO、HT-29、Caco-2细胞的增殖,且对HT-29、RKO细胞的抑制作用高于Caco-2细胞。 展开更多

关键词 大黄素 结肠癌 rko HT-29 CACO-2

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MTA对NCM460和结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的影响 被引量：4

10

作者 张青松 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第5期468-469,共2页

目的:探讨甲基硫代腺苷(MTA)对NCM460和结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的作用.方法:采用MTT比色技术、Hoechst33258染色技术检测MTA对NCM460和RKO细胞增殖和凋亡的影响.结果:MTA对结肠癌RKO细胞具有明显的抑制增殖和促进凋亡的作用,该作用强... 目的:探讨甲基硫代腺苷(MTA)对NCM460和结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的作用.方法:采用MTT比色技术、Hoechst33258染色技术检测MTA对NCM460和RKO细胞增殖和凋亡的影响.结果:MTA对结肠癌RKO细胞具有明显的抑制增殖和促进凋亡的作用,该作用强于对结肠正常上皮细胞NCM460细胞的增殖和凋亡的影响.结论:MTA对RKO细胞具有明显的抗肿瘤活性,对NCM460细胞的毒性较低. 展开更多

关键词 甲基硫代腺苷 结肠/细胞学 rko细胞 结肠肿瘤 细胞凋亡 增殖

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叶绿酸铜钠对RKO肠癌细胞系生物学行为的影响 被引量：1

11

作者 刘建 郑树 +3 位作者 邹璎 毛捷鸿 张磊 董琦 《肿瘤学杂志》 CAS 2011年第12期889-892,共4页

[目的]研究叶绿酸铜钠(CHL)体外抑制RKO肠癌细胞系的作用及机制。[方法]不同浓度CHL作用于RKO细胞,倒置显微镜下观察形态学变化;流式细胞仪观察CHL对RKO肠癌细胞凋亡的诱导作用;免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(Cy-clin... [目的]研究叶绿酸铜钠(CHL)体外抑制RKO肠癌细胞系的作用及机制。[方法]不同浓度CHL作用于RKO细胞,倒置显微镜下观察形态学变化;流式细胞仪观察CHL对RKO肠癌细胞凋亡的诱导作用;免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(Cy-clin D1)、环氧化酶-2(COX-2)的表达。[结果]CHL对RKO细胞有增殖抑制作用,24h IC50值为0.523±0.061mg/ml,48h IC50值为0.314±0.058mg/ml。随着CHL浓度的增高,RKO细胞抑制率明显上升;CHL能诱导RKO细胞G1期阻滞、降低S期,从而抑制肿瘤细胞增殖。CHL对RKO细胞凋亡未见明显影响。CHL能减少RKO细胞PCNA和COX-2蛋白表达,并具有一定的浓度依赖性。[结论]CHL能明显抑制RKO大肠癌细胞的生长,并且呈一定的浓度和剂量效应,抑制作用可能与PCNA、COX-2表达下调及细胞G1期阻滞有关。 展开更多

关键词 叶绿酸铜钠 结肠肿瘤 细胞增殖 细胞凋亡 rko细胞

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光甘草定对结直肠癌细胞RKO增殖和凋亡的影响

12

作者 杨小平 邹多兵 +3 位作者 丁延辉 左莉 周青 汪渊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第1期42-46,共5页

目的研究光甘草定(Gla)对人结直肠癌细胞株RKO增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法选取RKO细胞为研究对象,采用MTT比色法测定Gla对RKO细胞增殖的影响,通过Hoechst 33258染色检测RKO细胞凋亡情况;Western blot法检测RKO... 目的研究光甘草定(Gla)对人结直肠癌细胞株RKO增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法选取RKO细胞为研究对象,采用MTT比色法测定Gla对RKO细胞增殖的影响,通过Hoechst 33258染色检测RKO细胞凋亡情况;Western blot法检测RKO细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白以及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)、半胱天冬氨酸蛋白酶-9前体(Procaspase-9)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平。结果 Gla抑制RKO细胞的增殖,并呈浓度与时间依赖性(P<0.05);Gla能调节MAPK信号通路JNK1/2,p38磷酸化的水平;Gla可诱导RKO细胞凋亡,下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Procaspase-9的表达水平(P<0.05),上调Bax、Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),而Caspase-8蛋白水平在各组变化均不明显。结论 Gla能抑制结直肠癌RKO细胞的增殖,并通过下调Bcl-2/Bax的比值诱导凋亡,其可能与MAPK信号通路的激活有关。 展开更多

关键词 结直肠癌 rko细胞 光甘草定 凋亡

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C-FLIP基因在甲基硫代腺苷诱导结肠癌RKO细胞凋亡过程中的作用

13

作者 张青松 李东坤 朱理玮 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第24期3019-3021,共3页

目的:探讨甲基硫代腺苷(MTA)对结肠癌RKO细胞凋亡的作用及其相关机制的研究.方法:采用Hoechst33258染色技术检测MTA对结肠癌RKO细胞凋亡的影响,并采用Realtime PCR和Western Blot的方法在mRNA和蛋白水平研究cFLIP基因在MTA诱导的结肠癌... 目的:探讨甲基硫代腺苷(MTA)对结肠癌RKO细胞凋亡的作用及其相关机制的研究.方法:采用Hoechst33258染色技术检测MTA对结肠癌RKO细胞凋亡的影响,并采用Realtime PCR和Western Blot的方法在mRNA和蛋白水平研究cFLIP基因在MTA诱导的结肠癌RKO细胞凋亡过程中的作用.结果:MTA对结肠癌RKO细胞具有明显促进凋亡的作用.在这一过程中,cFLIP基因在mRNA和蛋白水平上均出现明显下调情况.结论:MTA对RKO细胞具有明显凋亡诱导作用,cFLIP基因的下调可能起到了重要的作用. 展开更多

关键词 甲基硫代腺苷 细胞凋亡 CFLIP 结肠肿瘤 rko细胞

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结肠癌RKO细胞P物质和NK-1免疫细胞化学检测

14

作者 赵岭岭 陈桦 王继刚 《齐鲁医学杂志》 2010年第4期289-290,293,共3页

目的探讨P物质及其受体神经激肽1(NK-1)在体外培养的结肠癌细胞系RKO中的表达及免疫细胞化学定位。方法将RKO细胞接种于提前放入盖玻片的6孔板进行细胞培养,细胞融合30%时将盖玻片取出进行免疫细胞化学染色。结果在RKO细胞系中P物质和N... 目的探讨P物质及其受体神经激肽1(NK-1)在体外培养的结肠癌细胞系RKO中的表达及免疫细胞化学定位。方法将RKO细胞接种于提前放入盖玻片的6孔板进行细胞培养,细胞融合30%时将盖玻片取出进行免疫细胞化学染色。结果在RKO细胞系中P物质和NK-1呈阳性表达,P物质阳性表达多数位于细胞浆;而NK-1阳性表达多数位于细胞浆,少数位于细胞膜。结论神经内分泌机制可能参与了结肠癌的发病过程。 展开更多

关键词 结肠肿瘤 rko细胞系 P物质 受体 神经激肽 免疫细胞化学

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敲低鞘氨醇激酶1增强人结肠癌RKO细胞对顺铂的敏感性 被引量：3

15

作者 覃琳 刘诗权 +6 位作者 覃蒙斌 伍文红 覃楠 符振华 徐春燕 黄杰安 赖铭裕 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期623-629,共7页

目的探讨沉默结肠癌RKO细胞鞘氨醇激酶1(SphK1)基因对顺铂(DDP)敏感性的影响及作用机制。方法构建靶向SphK1基因的慢病毒载体并感染RKO细胞后,实时定量PCR检测SphK1的mRNA水平,Western blot法检测SphK1蛋白水平。然后将RKO细胞分为SphK... 目的探讨沉默结肠癌RKO细胞鞘氨醇激酶1(SphK1)基因对顺铂(DDP)敏感性的影响及作用机制。方法构建靶向SphK1基因的慢病毒载体并感染RKO细胞后,实时定量PCR检测SphK1的mRNA水平,Western blot法检测SphK1蛋白水平。然后将RKO细胞分为SphK1低表达组(sh SphK1组)、阴性感染对照组(sh Control组)和空白对照组。培养24、48、72 h,MTT法检测细胞增殖活性;(0、2、4、8、16、32)μg/m L DDP处理细胞后,MTT法再次检测细胞增殖活性,TUNEL检测细胞凋亡,Western blot法检测KI-67抗原(ki67)、Bcl-2、胱天蛋白酶9(caspase-9)和caspase-3蛋白的水平。结果敲低SphK1基因能抑制RKO细胞的增殖,促进细胞凋亡。DDP呈时间和浓度依赖性抑制各组细胞的增殖,与对照组和sh Control组相比,敲低SphK1的细胞增殖能力显著降低;DDP呈剂量依赖性诱导细胞凋亡,且敲低SphK1的细胞凋亡率明显高于对照组和sh Control组。此外,敲低SphK1后,抑制ki67和Bcl-2的表达,增加caspase-9和caspase-3的表达,经DDP处理后,ki67和Bcl-2蛋白的表达水平明显下降,caspase-9和caspase-3蛋白的表达水平显著增加。结论敲低SphK1基因降低Bcl-2水平、增加caspase-9、caspase-3水平,抑制RKO结肠癌细胞增殖并促进其凋亡,并增强RKO细胞对DDP的敏感性。 展开更多

关键词 鞘氨醇激酶1(SphK1) 顺铂(DDP) rko结肠癌细胞 细胞增殖 细胞凋亡 化疗敏感性

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MicroRNA-192对结肠癌RKO细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制研究 被引量：7

16

作者 范盼红 赵文月 +2 位作者 贾琳娇 刘秋雨 赵跃武 《现代肿瘤医学》 CAS 2020年第3期374-379,共6页

目的:探讨microRNA-192(miR-192)对于高侵袭性结肠癌RKO细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:将miR-192 mimics(miR-192)通过脂质体转染至RKO细胞,应用qRT-PCR检测细胞中miR-192表达情况,采用CCK-8实验和集落形成实验研究miR-192对... 目的:探讨microRNA-192(miR-192)对于高侵袭性结肠癌RKO细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:将miR-192 mimics(miR-192)通过脂质体转染至RKO细胞,应用qRT-PCR检测细胞中miR-192表达情况,采用CCK-8实验和集落形成实验研究miR-192对结肠癌RKO细胞增殖的影响,采用细胞划痕实验和Transwell小室模型检测miR-192对结肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响,应用Western blot检测miR-192对结肠癌RKO细胞内上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin,E-cad)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达的影响。结果:CCK-8实验和集落形成实验结果显示:转染了miR-192的结肠癌RKO细胞,癌细胞增殖显著受到抑制。细胞划痕实验、迁移实验和细胞侵袭实验结果显示:RKO细胞转染miR-192后,迁移和侵袭的细胞数量显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示:结肠癌细胞转染miR-192后可升高E-cad蛋白的表达,并且降低VEGF蛋白的表达。结论:转染miR-192可抑制结肠癌RKO细胞增殖,降低其迁移和侵袭能力,其可能的机制是升高结肠癌RKO细胞E-cad的表达,并且降低VEGF的表达。miR-192可能作为肿瘤诊断及治疗的新靶点。 展开更多

关键词 miR-192 结肠癌rko细胞 上皮性钙黏附蛋白 血管内皮生长因子

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呋喃二烯酮对结直肠癌RKO细胞的促凋亡作用 被引量：3

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作者 江莹 密玉帅 +2 位作者 王小琴 顾超 胡道德 《中国新药与临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期223-228,共6页

目的 研究呋喃二烯酮对人结直肠癌RKO细胞凋亡的影响。方法 将不同浓度的呋喃二烯酮溶液(50、100、200、300、400μmol·L^(-1))加入体外培养的RKO细胞中,处理24、48、72 h后,通过CCK-8法检测RKO细胞的活性;用DAPI染色和Annexin V... 目的 研究呋喃二烯酮对人结直肠癌RKO细胞凋亡的影响。方法 将不同浓度的呋喃二烯酮溶液(50、100、200、300、400μmol·L^(-1))加入体外培养的RKO细胞中,处理24、48、72 h后,通过CCK-8法检测RKO细胞的活性;用DAPI染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测药物处理过后细胞凋亡情况;Western blotting检测RKO细胞Bcl-2、Bcl-xl、Bax、凋亡诱导因子(AIF)、细胞色素C、第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂(Smac/DIABLO)及存活素的蛋白表达情况。结果 呋喃二烯酮处理后24、48、72 h呋喃二烯酮对RKO细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(248.13±5.79)、(154.26±4.87)和(117.40±5.14)μmol·L^(-1),对RKO细胞的毒性呈现时间依赖性。流式细胞术检测显示细胞凋亡率随药物浓度的增加而明显增加。不同浓度呋喃二烯酮作用于RKO细胞后,细胞活性明显受到抑制,且随着呋喃二烯酮浓度的上升,细胞活性显著降低(P<0.05)。呋喃二烯酮能够显著降低线粒体凋亡通路的相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl和存活素的表达,升高Bax、AIF、Smac/DIABLO和细胞色素C的含量。结论 呋喃二烯酮能抑制RKO细胞增殖、诱导细胞凋亡,激活细胞内线粒体凋亡途径通路可能是其作用机制之一。 展开更多

关键词 呋喃二烯酮 结直肠肿瘤 rko细胞 细胞凋亡 线粒体通路

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Sphk1基因对间充质干细胞诱导结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响 被引量：3

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作者 伍文红 刘诗权 +4 位作者 符振华 覃蒙斌 徐春燕 朱丽叶 黄杰安 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期221-228,共8页

目的:探讨鞘氨醇激酶1(sphigosine kinase 1,SphK1)基因下调对间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)诱导的结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响。方法:采用MSC条件培养液(MSC-CM)和对照培养液(Control-CM)分别干预RKO细胞,CCK-8法检测细... 目的:探讨鞘氨醇激酶1(sphigosine kinase 1,SphK1)基因下调对间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)诱导的结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响。方法:采用MSC条件培养液(MSC-CM)和对照培养液(Control-CM)分别干预RKO细胞,CCK-8法检测细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞的迁移能力,Western blotting法检测Ki-67抗原(Ki-67)、MMP-2/9、肿瘤干细胞标志物CD44和CD133蛋白的表达。用慢病毒shRNA载体转染RKO细胞抑制SphK1的表达,观察抑制SphK1的表达对MSC-CM诱导的RKO细胞增殖、迁移以及MMP-2/9、CD44和CD133蛋白表达的影响。结果:MSC-CM可时间依赖性促进RKO细胞的增殖(P<0.05),并明显增强细胞的迁移能力(P<0.01)和细胞中Ki-67、MMP-2/9、CD44和CD133蛋白的表达(均P<0.05或P<0.01)。慢病毒shRNA转染明显抑制RKO细胞SphK1的表达,抑制SphK1的表达可显著抑制MSC-CM对RKO细胞增殖和迁移的促进作用(均P<0.05或P<0.01),且明显抑制MSC-CM诱导的Ki-67、MMP-2/9、CD44和CD133蛋白的表达。结论:MSC-CM可促进RKO细胞的增殖和迁移,下调SphK1可通过抑制MMP-2/9、CD44和CD133的表达逆转MSC-CM诱导的细胞增殖和迁移。 展开更多

关键词 鞘氨醇激酶1基因 间充质干细胞 结肠癌 rko细胞 增殖 迁移

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山柰酚调控PI3K/Akt/mTOR通路诱导人结直肠癌RKO细胞自噬 被引量：14

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作者 顾超 王恺纯 +2 位作者 徐勤芬 刘微 胡道德 《中南药学》 CAS 2020年第10期1668-1673,共6页

目的研究山柰酚对人结直肠癌RKO细胞增殖和自噬的影响及其诱导自噬的作用机制。方法CCK-8法检测山柰酚溶液处理RKO细胞24 h和48 h后的细胞活力,计算半数抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测山柰酚对RKO细胞周期的影响;TUNEL染色检测山柰酚对... 目的研究山柰酚对人结直肠癌RKO细胞增殖和自噬的影响及其诱导自噬的作用机制。方法CCK-8法检测山柰酚溶液处理RKO细胞24 h和48 h后的细胞活力,计算半数抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测山柰酚对RKO细胞周期的影响;TUNEL染色检测山柰酚对RKO细胞凋亡的影响;MDC荧光染色检测山柰酚对RKO细胞自噬的影响;Western blot检测山柰酚处理RKO细胞后自噬相关蛋白Beclin1和LC3及信号通路蛋白PI3K、Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR的表达水平。结果山柰酚处理RKO细胞24 h和48 h后的IC50分别为(41.52±1.09)、(25.07±0.81)mg·L^-1。山柰酚能阻滞RKO细胞周期停留在G0/G1期。TUNEL染色实验显示山柰酚可诱导RKO细胞凋亡,且呈现浓度依赖性。MDC荧光染色结果表明,山柰酚诱导RKO细胞自噬体的形成,而自噬抑制剂3-MA可抑制山柰酚诱导RKO细胞自噬体的形成。Western blot结果显示,在山柰酚的作用下,RKO细胞中自噬标志蛋白Beclin1表达水平上升、LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值降低;而3-MA抑制山柰酚引起的Beclin1蛋白表达水平上升和LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值降低。信号通路蛋白研究表明,山柰酚显著降低PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达,而Akt和mTOR蛋白表达量无明显变化。结论山柰酚可抑制人结直肠癌RKO细胞增殖并诱导其凋亡,同时可能通过下调PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导RKO细胞自噬。 展开更多

关键词 山柰酚 结直肠癌 rko细胞 自噬 PI3K/Akt/mTOR信号通路

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信号转导与转录活化因子6过表达和抑制表达对结肠癌RKO细胞增殖及迁移的影响

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作者 杨青青 李晓云 +3 位作者 陈健 彭翼飞 马文丽 郑文岭 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期668-674,共7页

目的:分别构建信号转导与转录活化因子6(signal transducer and activator of transcription6,STAT6)过表达及RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,研究STAT6基因表达对人结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响。方法:以人胚肾HEK293FT细... 目的:分别构建信号转导与转录活化因子6(signal transducer and activator of transcription6,STAT6)过表达及RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,研究STAT6基因表达对人结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响。方法:以人胚肾HEK293FT细胞cDNA为模板,PCR扩增STAT6基因的完整开放阅读框(open reading frame,ORF)片段,化学合成针对STAT6基因的RNAi靶向单链片段,通过pLVTHm慢病毒载体三质粒包装系统对以上2种片段进行慢病毒颗粒包装;再用病毒感染结肠癌RKO细胞,获得稳定表达STAT6-ORF和STAT6-RNAi的细胞株。RT-PCR和蛋白质印迹法检测稳定感染细胞株中STAT6基因的表达情况,CCK8法检测细胞活性的变化,Transwell实验检测细胞迁移能力的变化。结果:成功构建STAT6-ORF和STAT6-RNAi慢病毒表达载体,并获得稳定表达STAT6的相应RKO细胞株。与对照组细胞相比,STAT6-ORF转染组细胞的增殖速度加快不明显(P=0.609),细胞迁移能力显著增强(P<0.01);而STAT6-RNAi转染组的细胞活性显著降低(P<0.001),迁移能力显著下降(P<0.01)。结论:STAT6可能是促进结肠癌细胞增殖和迁移的重要转录因子。 展开更多

关键词 结肠肿瘤 STAT6转录因子 基因表达 RNA干扰 细胞增殖 细胞迁移分析 rko细胞

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