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DHAV-3弱毒活疫苗株(HB80株)与野毒株鉴别检测的RT-PCR-RFLP方法的建立
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作者 傅秋玲 万春和 +13 位作者 焦文龙 韩相敏 程龙飞 陈珍 赖志 陈红梅 梁齐章 江南松 刘荣昌 施少华 陈翠腾 苏敬良 黄瑜 傅光华 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期691-696,共6页
为建立一种能快速、简便、准确鉴别检测我国鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)野毒株与弱毒活疫苗HB80株的方法,本研究根据DHAV-3野毒株及HB80株的2A基因序列差异片段设计并合成一对特异性引物,经反应条件的优化,初步建立了鉴别检测我国DHAV-3野毒... 为建立一种能快速、简便、准确鉴别检测我国鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)野毒株与弱毒活疫苗HB80株的方法,本研究根据DHAV-3野毒株及HB80株的2A基因序列差异片段设计并合成一对特异性引物,经反应条件的优化,初步建立了鉴别检测我国DHAV-3野毒株与HB80株的反转录聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(RTPCR-RFLP)方法。利用该方法检测DHAV-3野毒株和疫苗株,以及DHAV-1、鸭3型星状病毒、H9亚型禽流感病毒、禽坦布苏病毒、鸭瘟病毒、鸭3型腺病毒、鸭呼肠孤病毒和番鸭细小病毒,结果显示该方法仅能特异性扩增DHAV-3(包括野毒株和疫苗株)的682 bp片段,且仅DHAV-3野毒株的RT-PCR产物(682 bp片段)能够被Apa I酶切为444 bp和238 bp两个片段。将DHAV-3的RNA 10倍倍比稀释(1.7×10^(6)拷贝/μL~1.7×10^(1)拷贝/μL)后作为模板,利用该方法检测,结果显示该方法能够检出DHAV-3 RNA的最低浓度为170拷贝/μL。重复性结果显示,该方法对3个不同浓度DHAV-3野毒株和HB80株RNA的检测结果均一致。利用该方法和常规RT-PCR方法同时对疑似临床鸭肝炎组织、实验感染DHAV-3野毒株(HB株)和免疫DHAV-3活疫苗株鸭组织等10^(1)份样品检测,结果显示两者检测结果的符合率为100%。本研究首次建立了能特异性鉴别检测DHAV-3野毒株与我国弱毒活疫苗株的RT-PCR-RFLP方法,为我国鸭DHAV-3感染的防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 鸭3型甲肝病毒 野毒株 弱毒疫苗株 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法 鉴别
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非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型PCR-RFLP鉴别方法的建立
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作者 孙仁杰 徐慧玲 +6 位作者 孙思琪 柴娟 虞一聪 谢荣辉 李肖梁 赵灵燕 张传亮 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第5期1017-1028,共12页
本研究旨在建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)基因Ⅰ型和Ⅱ型的PCR-RFLP鉴别方法。通过对ASFV基因Ⅰ型与基因Ⅱ型基因组序列的比对分析,针对B385R基因和B125R基因保守区设计1对特异性PCR-RFLP引物,与其他临床上常... 本研究旨在建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)基因Ⅰ型和Ⅱ型的PCR-RFLP鉴别方法。通过对ASFV基因Ⅰ型与基因Ⅱ型基因组序列的比对分析,针对B385R基因和B125R基因保守区设计1对特异性PCR-RFLP引物,与其他临床上常见的9种猪病病毒均无交叉反应。通过该引物扩增获得覆盖B646L基因全长的DNA片段作为检测靶标,结合BmgBⅠ酶切进行RFLP图谱分析,即可实现对B646L基因全序列的快速检测,有效区分ASFV基因Ⅰ型和Ⅱ型,最低检测DNA质量浓度可达到5 pg·mL^(-1)。模拟临床样本的研究结果表明,本方法还能够有效应对实际检测中基因Ⅰ型和Ⅱ型的混合感染。综上,本方法操作简便、准确性高、特异性强、灵敏度高、成本较低,具有良好的应用前景,为基层兽医技术人员开展非洲猪瘟疫情的监测和流行病学研究提供了一种新方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 基因Ⅰ型 基因Ⅱ型
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一种鉴别山豆根的PCR-RFLP方法研究
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作者 肖阳央 林锦锋 +3 位作者 张金聚 黄国凯 陆佳 刘潇潇 《中国药事》 2025年第9期1027-1037,共11页
目的:建立鉴别山豆根的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法,有效区分山豆根和混伪品苦参。方法:通过对山豆根和混伪品苦参的DNA条形码进行对比分析,寻找山豆根的关键差异性位点并建立相应的PCR-RFLP方法。此外,优化... 目的:建立鉴别山豆根的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法,有效区分山豆根和混伪品苦参。方法:通过对山豆根和混伪品苦参的DNA条形码进行对比分析,寻找山豆根的关键差异性位点并建立相应的PCR-RFLP方法。此外,优化PCR-RFLP反应体系和程序,进行退火温度、反应循环数、仪器品牌、样品DNA模板量、酶切反应体系的方法学考察。结果:山豆根和混伪品苦参的ITS2序列具有明显差异,山豆根序列有1个关键差异性位点可被限制性内切酶BamHI识别和酶切。经PCR-RFLP反应后,山豆根在200~300 bp附近有2条条带,混伪品苦参无条带。其中,最适退火温度为58℃,最适循环次数为35次。结论:建立了有效区分山豆根和混伪品苦参的PCR-RFLP方法。 展开更多
关键词 山豆根 苦参 ITS2 BamHI 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析
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基于PCR-RFLP方法对酸枣仁和理枣仁真伪鉴别研究
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作者 赖晶 马莉雅 +6 位作者 靳婉君 蔺瑞丽 史小亚 马潇 宋平顺 张明童 何小英 《药物分析杂志》 北大核心 2025年第11期1955-1965,共11页
目的:建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,以实现酸枣仁及其常见伪品理枣仁的快速鉴别。方法:对酸枣仁和理枣仁的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列进行限制性酶切位点分析,筛选出酸枣仁限制性酶切位点PaeR7I(C^TCGA... 目的:建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,以实现酸枣仁及其常见伪品理枣仁的快速鉴别。方法:对酸枣仁和理枣仁的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列进行限制性酶切位点分析,筛选出酸枣仁限制性酶切位点PaeR7I(C^TCGAG),以及理枣仁限制性酶切位点Hpy188I(TCN^GA),设计PCR-RFLP引物,并优化PCR-RFLP反应的关键参数,包括退火温度、循环数、底物量及酶切时间。结果:建立了酸枣仁、理枣仁的PCR-RFLP鉴别方法,在最佳反应条件下[退火温度为58~60℃、30个循环、鉴别引物(10μmol·L^(-1))各0.5μL],经PaeR7I酶酶切后,酸枣仁产生2条特异性DNA条带,理枣仁则无此条带;经Hpy188I酶酶切后,理枣仁产生2条特异性DNA条带,酸枣仁则无此条带。该方法具有良好的专属性,灵敏度高,可检测出掺有5%的理枣仁。结论:建立的PCR-RFLP法稳定性好,准确度高,可有效鉴别酸枣仁及其掺伪品理枣仁,为解决酸枣仁的质量控制问题提供了可靠的技术手段。 展开更多
关键词 酸枣仁 理枣仁 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 鉴别
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中药材地骨皮PCR-RFLP鉴别方法研究
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作者 王庆 董文静 +3 位作者 张美 齐喜红 张宇欣 胡寒雪 《中国药事》 2025年第3期317-326,共10页
目的:建立中药材地骨皮聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)鉴别方法,有效区分地骨皮正伪品,保障其用药安全。方法:运用SnapGene软件对地骨皮正品来源中国枸杞(Lycium chinense)和宁夏枸杞(Lycium barbarum),伪品来源鹅绒藤(... 目的:建立中药材地骨皮聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)鉴别方法,有效区分地骨皮正伪品,保障其用药安全。方法:运用SnapGene软件对地骨皮正品来源中国枸杞(Lycium chinense)和宁夏枸杞(Lycium barbarum),伪品来源鹅绒藤(Cynanchum chinense)、黑果枸杞(Lycium ruthenicum)、香加皮(Periploca sepium)的ITS序列进行比对分析,筛选出差异限制性内切酶位点Eag I,利用Eag I对ITS序列PCR扩增产物进行酶切鉴别。主要对药材DNA提取方法,PCR扩增的退火温度、循环数及不同酶的扩增效果,酶切反应时间和酶切底物量进行优化,建立地骨皮PCR-RFLP鉴别方法,并对该方法的稳定性、准确性进行考察。结果:药材DNA适宜提取方法为试剂盒法,PCR扩增适宜退火温度为67℃、适宜循环数为35。Eag I酶切反应适宜底物量为25μL、温度为37℃、反应30min,地骨皮正品PCR扩增产物可被酶切产生酶切条带,而地骨皮伪品PCR扩增产物不能被酶切。结论:研究建立了地骨皮正伪品的PCR-RFLP鉴别方法,可为地骨皮市场流通鉴别提供技术支撑。 展开更多
关键词 地骨皮 正品药材 伪品 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 鉴别方法
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结肠小袋纤毛虫PCR-RFLP分型方法的建立 被引量:1
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作者 徐啊慧 冯彩彩 +6 位作者 丰山旺 赵立卓 齐闻新 张雯 胡苏辉 王天奇 闫文朝 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期829-833,840,共6页
目的建立高效、特异的结肠小袋纤毛虫遗传亚型分析方法。方法选择限制性内切酶ApoI和PflMI对结肠小袋纤毛虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的PCR扩增产物进行酶切分析,建立PCR-RFLP分型方法,利用建立的PCR-RFLP方法对猪源、羊源和豚鼠源临床粪便... 目的建立高效、特异的结肠小袋纤毛虫遗传亚型分析方法。方法选择限制性内切酶ApoI和PflMI对结肠小袋纤毛虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的PCR扩增产物进行酶切分析,建立PCR-RFLP分型方法,利用建立的PCR-RFLP方法对猪源、羊源和豚鼠源临床粪便样品进行遗传亚型分析。结果基于ApoI和PflMI的PCR-RFLP方法可以准确区分结肠小袋纤毛虫遗传变异型A和B,用PflMI可以进一步将遗传变异型B细分为B-c和B-t两个亚型。与镜检和测序结果比较,建立的PCR-RFLP方法具有良好的特异性和更高的灵敏性,不仅可以鉴定临床样品中结肠小袋纤毛虫单个亚型,而且可以鉴别单个样品中结肠小袋纤毛虫多个亚型的混合感染。结论本研究成功建立了结肠小袋纤毛虫PCR-RFLP方法,可用于结肠小袋纤毛虫遗传多态性鉴定和分子流行病学研究。 展开更多
关键词 结肠小袋纤毛虫 PCR-rflp分析 豚鼠
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基于DNA条形码和PCR-RFLP技术的进口紫草ITS2序列特征研究 被引量:2
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作者 刘杰 戴胜云 +6 位作者 谷海媛 乔菲 连超杰 过立农 郑健 马双成 米加 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期750-755,共6页
目的:基于DNA条形码和PCR-RFLP技术研究进口紫草ITS2序列的特征,为市场紫草药材和饮片的质量控制与真伪鉴别提供参考依据。方法:选用ITS2区域作为对进口紫草和紫草对照药材进行比较、鉴定的DNA条形码序列,并基于DNA条形码和PCR-RFLP技... 目的:基于DNA条形码和PCR-RFLP技术研究进口紫草ITS2序列的特征,为市场紫草药材和饮片的质量控制与真伪鉴别提供参考依据。方法:选用ITS2区域作为对进口紫草和紫草对照药材进行比较、鉴定的DNA条形码序列,并基于DNA条形码和PCR-RFLP技术比较不同来源进口紫草的ITS2序列与紫草对照药材的异同。结果:39份进口紫草样品经限制性内切酶AluI酶切后,其产物的琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,仅DH3在500 bp左右有条带,而在100~300 bp无条带,其余样品均在100~300 bp有2条或3条明显条带;进口紫草样品与紫草对照药材的ITS2序列进行比对,其中样品DH3与紫草对照药材的碱基差异最多,有15个碱基差异,样品F2与紫草对照药材的ITS2序列一致,其他进口紫草样品与紫草对照药材的碱基差异为1~9个碱基;从聚类结果中可以看出进口紫草样品DH3与其他进口紫草样品和紫草对照药材均明显区分,独自为一枝,而与紫草对照药材共同聚为一枝且支持率≥50%的样品共有14个。结论:选用ITS2区域,基于DNA条形码和PCR-RFLP技术,比较了进口紫草与紫草对照药材ITS2序列的异同,为紫草药材及饮片的有效鉴定提供参考依据,为紫草药材的市场监管提供有力保障。 展开更多
关键词 进口紫草 内部转录间隔区2(ITS2) DNA条形码 限制性内切酶 限制性片段长度多态性聚合酶链反应
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利用PCR-RFLP方法快速鉴别中国牛蒡属药用植物
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作者 黄彦昌 宋跃岳 +6 位作者 许亮 郑汉 董玉玮 张娜 胡传银 窦德强 康廷国 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2024年第12期80-83,I0021,共5页
目的随着近十几年来国内学者对牛蒡属药用植物研究的深入,中国牛蒡属植物鉴定需要一种快速、准确的分子鉴别手段。因此研究拟通过利用聚合酶链式反应-限制性酶切长度多态性(polymerase chain reaction restriction frag-ment length pol... 目的随着近十几年来国内学者对牛蒡属药用植物研究的深入,中国牛蒡属植物鉴定需要一种快速、准确的分子鉴别手段。因此研究拟通过利用聚合酶链式反应-限制性酶切长度多态性(polymerase chain reaction restriction frag-ment length polymorphism,PCR-RFLP)建立一种快速鉴定中国牛蒡属药用植物的方法。方法通过对两种中国牛蒡属药用植物牛蒡与毛头牛蒡常用鉴定DNA条形码进行限制性核酸内切酶图谱分析,找到牛蒡在内源转录间隔区1(internal transcribed spacer-1,ITS1)片段中有一个单核苷酸多态性(Single-nucleotide polymorphism,SNP)位点,正好为BsaAⅠ酶(YAC/GTR)的酶切位点,根据该酶切位点,设计引物对目标片段进行扩增。另外建立PCR体系:95℃预变性5min,循环反应40次(90℃20s,60℃20s,72℃20s),72℃延伸5min,4℃保温。建立限制性内切酶BsaAⅠ酶切体系,制作琼脂糖凝胶电泳观察结果。结果电泳结果表明在经过BsaAⅠ酶切后牛蒡将会产生长度分别为101bp与125bp的短条带,而毛头牛蒡未被切开仍为226bp的长条带,成功将两种药用植物区分开。该方法简单、快速、准确,满足日常对中国牛蒡属植物的鉴定。结论该实验通过从牛蒡与毛头牛蒡的ITS1序列入手,利用PCR-RFLP技术首次完成了对两种植物的鉴别研究,建立了中国牛蒡属植物的PCR-RFLP鉴别方法。 展开更多
关键词 牛蒡 毛头牛蒡 鉴别 PCR-rflp
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千里香杂合度PCR-RFLP快速评估方法的建立
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作者 王博铖 陈梓媛 +3 位作者 华中一 田慧 谢文波 袁媛 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期29-34,共6页
目的:建立一种快速评估千里香种质材料杂合度的方法,为制定千里香的优异种质繁育策略和促进种质创新提供依据。方法:以65株千里香重测序数据为基础,检测并筛选单核苷酸多态性(SNPs),利用其中20个SNP位点,通过自编脚本将其转化为限制性... 目的:建立一种快速评估千里香种质材料杂合度的方法,为制定千里香的优异种质繁育策略和促进种质创新提供依据。方法:以65株千里香重测序数据为基础,检测并筛选单核苷酸多态性(SNPs),利用其中20个SNP位点,通过自编脚本将其转化为限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)标记;采用聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性(PCR-RFLP)法对12份千里香种质的20个RFLP标记进行检测,根据RFLP标记位点酶切片段数目计算千里香种质的杂合度;采用plink软件计算12份千里香种质的全基因组杂合度,并比较不同种质杂合度评估方法得到的结果。结果:PCR-RFLP法和基因组重测序法计算的杂合度间差异无统计学意义。利用PCR-RFLP法筛选获得了8份杂合度<30%的种质材料,利用基因组重测序法筛选获得9份杂合度<30%的种质材料,2种方法计算杂合度均<30%的种质材料共7份。结论:该文建立了千里香种质杂合度评估的PCR-RFLP法,其精确度为87.5%,准确率为77.8%,该法可为其他药用植物种质杂合度评估方法研究提供借鉴。 展开更多
关键词 千里香 聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性(PCR-rflp) 单核苷酸多态性(SNPs) 杂合度 全基因组重测序
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一种基于线粒体COI PCR-RFLP单酶切快速鉴定4种巨蛎属牡蛎的方法
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作者 崔中望 于诗奇 +1 位作者 缪雄平 阙华勇 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期68-73,共6页
本文报道了一种基于线粒体细胞色素氧化酶亚基I(mt COI)基因序列PCR-RFLP单酶切的牡蛎物种鉴定方法。本方法可快速鉴定福建牡蛎(Crassostrea angulata)、熊本牡蛎(Crassostrea sikamea)、香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)和近江牡蛎... 本文报道了一种基于线粒体细胞色素氧化酶亚基I(mt COI)基因序列PCR-RFLP单酶切的牡蛎物种鉴定方法。本方法可快速鉴定福建牡蛎(Crassostrea angulata)、熊本牡蛎(Crassostrea sikamea)、香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)和近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)等中国沿海常见的4种巨蛎属(Crassostrea)牡蛎。该方法以甲基转移酶(Msp I)作为限制性内切酶,对4种巨蛎属牡蛎的线粒体DNA COI扩增序列进行酶切,以得到的特异性条带为依据进行物种鉴定。本方法的鉴定结果与COI测序方法的鉴定结果一致,并且筛选出的单一的限制性内切酶Msp I在4种牡蛎的COI序列中不存在酶切位点的突变,准确率达到100%,能够为巨蛎属牡蛎的物种鉴别提供简便可靠的技术支撑。 展开更多
关键词 巨蛎属(Crassostrea)牡蛎 线粒体COI PCR-rflp
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用RFLP和PCR-RFLP技术研究东北虎和华南虎线粒体DNA多态性 被引量:6
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作者 吴平 周开亚 +2 位作者 王亚明 黄恭情 徐麟木 《生物多样性》 CAS CSCD 1997年第3期173-178,共6页
采用mtDNARFLP和PCRRFLP技术研究了东北虎和华南虎的mtDNA的多态性。在mtDNARFLP研究中,分离纯化了东北虎和华南虎肝、肾和心脏组织的mtDNA,用20种识别6碱基对的限制性内切酶消化,结果只... 采用mtDNARFLP和PCRRFLP技术研究了东北虎和华南虎的mtDNA的多态性。在mtDNARFLP研究中,分离纯化了东北虎和华南虎肝、肾和心脏组织的mtDNA,用20种识别6碱基对的限制性内切酶消化,结果只有1种限制性内切酶(XbaⅠ)检测到多态性片段,其余19种限制性内切酶消化产生的限制性格局在东北虎和华南虎完全一致。在PCRRFLP研究中,用PCR技术分别扩增了东北虎和华南虎mtDNA的控制区(controlregion),用8种识别4碱基对的限制性内切酶分别对扩增产物进行消化,结果只有1种限制性内切酶(RsaⅠ)检测到多态性片段。mtDNARFLP及PCRRFLP的结果均提示东北虎和华南虎之间的遗传距离极小。这可能与下列因素有关:两者分布区间无天然隔离屏障;具有强扩散能力;近几百年才被相互隔离。 展开更多
关键词 东北虎 华南虎 线粒体 DNA多态性 rflp PCR-rflp
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香加皮与五加皮、地骨皮的PCR-RFLP鉴别 被引量:3
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作者 刁晓微 刘亚男 +3 位作者 金艳 蒋超 赵玉洋 袁媛 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期42-47,共6页
目的:建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法快速鉴别香加皮与其混淆品五加皮、地骨皮,避免因基原混乱影响用药安全。方法:从CGIR数据库获取的香加皮DSS标记序列,对香加皮DSS序列进行酶切位点分析,筛选香加皮与五加皮、... 目的:建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法快速鉴别香加皮与其混淆品五加皮、地骨皮,避免因基原混乱影响用药安全。方法:从CGIR数据库获取的香加皮DSS标记序列,对香加皮DSS序列进行酶切位点分析,筛选香加皮与五加皮、地骨皮间差异位点,选择香加皮的特异性酶切位点Cla I,设计PCR-RFLP反应引物,对影响PCR-RFLP反应的退火温度、循环数、Taq酶、不同型号PCR仪、酶切时间等条件进行考察。利用建立的PCR-RFLP鉴别方法对不同产地香加皮与五加皮、地骨皮进行适用性考察。结果:在退火温度59℃、循环数为40个时,香加皮与五加皮、地骨皮样品经过特异性引物进行PCR扩增后,可出现清晰明亮的片段,酶切时间30 min,香加皮药材及其基原物种均可产生约140 bp和290 bp的目的片段,而2种混淆品五加皮和地骨皮药材及其基原物种只在250~500 bp有一条约430 bp的目的片段。该方法能对香加皮及其混淆品五加皮、地骨皮进行准确鉴别。结论:建立了香加皮与五加皮、地骨皮的PCR-RFLP鉴别方法,稳定性好、灵敏度高、适用性好,为香加皮与五加皮、地骨皮的质量控制提供参考。 展开更多
关键词 香加皮 五加皮 地骨皮 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 分子鉴定
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Characterization of Bulinus Snails in Sô-Ava and Azowlissè, Two Localities in Southern Benin, Using PCR-RFLP
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作者 Elokou Alabi Codjo Gaston Ouikoun +4 位作者 Halfane Lehmane Haziz Sina Michele Sezonlin Adolphe Adjanohoun Lamine Baba-Moussa 《Open Journal of Ecology》 2024年第12期938-949,共12页
Schistosomiasis is a public health concern in Benin. Freshwater snails of the genus Bulinus serve as intermediate hosts for schistosomes, trematode parasites responsible for bilharzia. The urinary form, caused by Schi... Schistosomiasis is a public health concern in Benin. Freshwater snails of the genus Bulinus serve as intermediate hosts for schistosomes, trematode parasites responsible for bilharzia. The urinary form, caused by Schistosoma haematobium, is the most widespread and is transmitted to humans by these mollusks, with Bulinus truncatus and Bulinus globosus being the most important species. Effective strategies to combat the transmission of these parasites require a prior understanding of the molecular characterization of Bulinus snails. For this purpose, 293 Bulinus snails were collected and morphologically identified from two localities in southern Benin, Sô-Ava and Azowlissè. The snails were preserved in absolute alcohol. To achieve the set objectives, DNA was extracted from the collected biological material, and SSU gene fragments were amplified. Using PCR-RFLP, the amplified fragments were digested with the restriction endonucleases HaeIII, HinfI, and DdeI to perform molecular characterization. In this study, 80 individuals of B. globosus and 10 of B. truncatus were subjected to molecular analysis. The PCR-RFLP profiles showed bands of different sizes for the Bulinus species when analyzed with the three endonucleases using the SSU molecular marker. PCR-RFLP analysis revealed that the snails belonged to the freshwater genus Bulinus, including Bulinus globosus and B. truncatus, based on reference profiles from studies conducted in Nigeria, which enabled precise identification of these gastropods. This study provided initial insights, although still incomplete, into the molecular diversity of these species. 展开更多
关键词 Bulinus globosus Truncatus Molecular Diversity PCR-rflp BENIN
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RFLP和PCR-RFLP标记与牦牛遗传育种研究 被引量:1
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作者 马玉红 马志杰 《中国牛业科学》 2006年第5期48-51,共4页
在归纳总结RFLP和PCR-RFLP标记技术的原理、优缺点的基础上,系统论述了其在牦牛遗传育种研究中的应用现状,并提出了个人的建议和看法。
关键词 rflp PCR-rflp牦牛 遗传 育种
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RFLP和PCR-RFLP技术与猪分子育种 被引量:6
15
作者 邢晋祎 帅素容 《畜禽业》 2001年第7期24-25,共2页
RFLP作为第一代DNA遗传标记,在动植物DNA多态性研究中发挥了重要作用。RFLP和PCR技术结合而成的PCR-RFLP技术更是在DNA标记中得到了广泛应用。本文就RFLP和PCR-RFLP技术的基本原理、特点及在猪分子育种中的应用进行了综述。
关键词 rflp PCR-rflp 遗传标记 分子育种
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拓扑异构酶II基因区PCR-RFLP法鉴别常见皮肤癣菌
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作者 谭志建 何甘霖 +1 位作者 丁娟 李家文 《中国麻风皮肤病杂志》 2006年第2期114-116,共3页
目的:探讨拓扑异构酶Ⅱ基因区PCR~RFLP法鉴别常见皮肤癣菌的可行性。方法:用真菌拓扑异构酶Ⅱ基因区通用引物dPsD1、dPsD2,先后对6种34株临床常见皮肤癣菌和2株白念珠菌以及4株曲霉的DNA进行巢式PCR(nested PER)扩增,扩增后的阳... 目的:探讨拓扑异构酶Ⅱ基因区PCR~RFLP法鉴别常见皮肤癣菌的可行性。方法:用真菌拓扑异构酶Ⅱ基因区通用引物dPsD1、dPsD2,先后对6种34株临床常见皮肤癣菌和2株白念珠菌以及4株曲霉的DNA进行巢式PCR(nested PER)扩增,扩增后的阳性产物分别用限制性内切酶HincⅡ和HinfⅠ酶切,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,根据结果来鉴定皮肤癣菌并在种的水平上区分这6种常见皮肤癣菌。结果:通用引物dPsD1对6种皮肤癣菌均能扩增出3390bp、dPsD2能扩增出2380bp的片段,而白念珠菌和曲霉则未见阳性扩增条带。扩增出的产物分别经HincⅡ和HinfⅠ酶切后表现为58—1670bp长短不等的片段组合,根据这些特异性条带谱可以区分这6种临床常见皮肤癣菌。结论:拓扑异构酶Ⅱ基因区的巢式PCR—RFLP方法,是鉴定和区分常见皮肤癣菌的有效方法。 展开更多
关键词 皮肤癣菌 拓扑异构酶 巢式PCR rflp Ⅱ基因区 PCR—rflp
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青海省2例锡兰钩虫的PCR-RFLP鉴定
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作者 王珍珍 吴玛莉 +4 位作者 朵红 彭必露 铁成 俄日姐 冯凯 《医学动物防制》 2024年第10期937-940,945,共5页
目的为了解青海省犬科动物流行的钩虫种类,为青藏高原地区钩虫的流行分布及种群进化研究提供依据。方法2014—2016年在青海省达日县和兴海县分别收集犬科动物粪便样本,洗脱获取粪便表面动物细胞,通过PCR扩增和测序对粪便标本溯源,以饱... 目的为了解青海省犬科动物流行的钩虫种类,为青藏高原地区钩虫的流行分布及种群进化研究提供依据。方法2014—2016年在青海省达日县和兴海县分别收集犬科动物粪便样本,洗脱获取粪便表面动物细胞,通过PCR扩增和测序对粪便标本溯源,以饱和蔗糖水漂浮法进行粪便虫卵检查,收集虫卵提取DNA,以聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)法进行虫种鉴定。结果通过动物粪便溯源试验,获得动物线粒体D-loop区域长度为372bp的基因片段,运用基本局部比对搜索工具(basic local alignment search tool,BLAST)分析显示达日县和兴海县动物粪便标本来源分别为家犬和红狐;虫卵内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)的PCR扩增,获得长度约为544bp的特异性电泳条带,PCR产物经限制性内切酶RsaⅠ和HinfⅠ的酶切反应显示特异性的酶切、电泳条带,两个钩虫样本均被鉴定为锡兰钩虫。结论锡兰钩虫首次在青藏高原地区报道,并在野生红狐体内被发现,有一定的生物学意义。 展开更多
关键词 锡兰钩虫 鉴定 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 青海省 犬科动物
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利用RFLP和SSR标记划分玉米自交系杂种优势群的研究 被引量:134
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作者 袁力行 傅骏骅 +5 位作者 张世煌 刘新芝 彭泽斌 李新海 Khairalla M 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期149-156,共8页
利用 RFL P和 SSR标记对 2 9个玉米自交系进行杂种优势群划分 ,筛选出 56个多态性 RFL P探针酶组合 ,6 6对多态性 SSR引物 ,分别在供试材料中检测到 187个和 2 32个等位基因变异。两种方法比较表明 ,SSR标记的平均多态性信息量 (PIC,0 .... 利用 RFL P和 SSR标记对 2 9个玉米自交系进行杂种优势群划分 ,筛选出 56个多态性 RFL P探针酶组合 ,6 6对多态性 SSR引物 ,分别在供试材料中检测到 187个和 2 32个等位基因变异。两种方法比较表明 ,SSR标记的平均多态性信息量 (PIC,0 .54)高于 RFLP(0 .4 2 ) ;但对供试材料的遗传多样性评价基本一致 ,平均遗传相似系数 (GS)分别为 0 .6 4和 0 .6 2。综合 RFL P和 SSR分析结果进行聚类分析 ,将供试材料划分为四平头 ,旅大红骨 ,L SC,BSSS和 PA五个类群 ,划分结果与系谱分析基本一致 ,并把系谱来源不清的种质划分到相应的杂种优势群。其中 PN群的确认 ,进一步完善了我国玉米种质杂种优势群的基本框架 ,为育种实践提供了有价值的信息。 展开更多
关键词 玉米 rflp SSR 遗传相似系数 杂种优势群 自交系 划分
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AFLP和RFLP标记检测水稻亲本遗传多样性比较研究 被引量:46
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作者 陈亮 梁春阳 +4 位作者 孙传清 金德敏 姜廷波 王斌 王象坤 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期589-595,共7页
利用AFLP和RFLP技术对 2 0个水稻品种 (系 )进行了遗传多样性分析。在AFLP分析中 ,用 6 4对引物组合进行了初筛 ,然后用其中适合水稻的 15对引物进行了详细研究 ,每对AFLP引物组合扩增出了 4 7~ 118条带 ,其中多态性带为 5~ 32条 ,15... 利用AFLP和RFLP技术对 2 0个水稻品种 (系 )进行了遗传多样性分析。在AFLP分析中 ,用 6 4对引物组合进行了初筛 ,然后用其中适合水稻的 15对引物进行了详细研究 ,每对AFLP引物组合扩增出了 4 7~ 118条带 ,其中多态性带为 5~ 32条 ,15个引物组合共得到多态性条带 2 99条 ;在RFLP分析中 ,4 9个RFLP探针共检测出 10 7条多态性带。聚类分析表明 ,两种标记均能将 2 0个材料分成籼粳两大类群 ,但AFLP标记比RFLP标记更能反映品种间系谱亲缘和地理生态上的差异。两种标记检测出的遗传距离的趋势是一致的 ,但AFLP标记相对于RFLP而言提高了品种间的遗传距离的估计 ,降低了亚种间遗传距离的估计 ,因此 ,AFLP更适应于多样性的研究 。 展开更多
关键词 AFLP rflp标记 检测 水稻亲本 分子标记 聚类分析 遗传多样性
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中外11个猪种H-FABP基因PCR-RFLP的研究 被引量:35
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作者 李桢 曹红鹤 +4 位作者 储明星 李宏滨 马月辉 郑友民 周忠孝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期313-317,共5页
本文利用PCR RFLP技术对五指山猪、沂蒙黑猪、汉江黑猪、莱芜猪、香猪、民猪、成华猪、内江猪、二花脸猪、巴马香猪和大白猪11个猪种共420头猪的心脏脂肪酸结合蛋白基因5′ 端上游区(HinfI RFLP)和第二内含子内(HinfI RFLP、HaeⅢ RFLP... 本文利用PCR RFLP技术对五指山猪、沂蒙黑猪、汉江黑猪、莱芜猪、香猪、民猪、成华猪、内江猪、二花脸猪、巴马香猪和大白猪11个猪种共420头猪的心脏脂肪酸结合蛋白基因5′ 端上游区(HinfI RFLP)和第二内含子内(HinfI RFLP、HaeⅢ RFLP)的遗传变异进行了研究。研究表明:(1)在5′ 端上游区的HinfI RFLP位点上,所有的品种都有变异,但沂蒙黑猪和大白猪只有两种基因型(HH、Hh);(2)在第二内含子内的HinfI RFLP位点上,二花脸只有BB基因型,而其它品种都表现出多态性;(3)在第二内含子内的HaeⅢ RFLP位点上,只在五指山猪、香猪和大白猪中发现有多态性存在,等位基因D的频率分别为0 86,0 98和0 68,其余8个猪种均表现为DD型。 展开更多
关键词 中国 外国 品种 H—FABP基因 PCR—rflp 心脏脂肪酸 蛋白基因
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