目的:研究O-GlcNAcylation调节蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinase 1,Rack1)的稳定性在SHH型髓母细胞瘤(SHH type medulloblastoma,SHH-MB)形成中的功能作用。方法:选取中国人民解放军西部战区总医院临床肿瘤标本库中分子...目的:研究O-GlcNAcylation调节蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinase 1,Rack1)的稳定性在SHH型髓母细胞瘤(SHH type medulloblastoma,SHH-MB)形成中的功能作用。方法:选取中国人民解放军西部战区总医院临床肿瘤标本库中分子分型所确定的SHH-MB肿瘤及癌旁组织,分析样本中Rack1和O-GlcNAcylation(O-Glc NAc)的表达水平差异。对于人源髓母细胞瘤细胞系Daoy使用糖基化转移酶(OGT)抑制剂(OSMI-1)和去糖基化转移酶(OGA)抑制剂(TM-G)进行处理,通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法和免疫荧光染色检测肿瘤细胞增殖能力。采用O-Glc NAc酶标记系统、免疫共沉淀(Co-IP)和Western blot法判断Rack1有无发生O-Glc NAc,而后通过环己酰亚胺(CHX)实验和泛素化修饰实验证实O-GlcNAcylation对Rack1蛋白水平的影响。构建敲低Rack1的髓母细胞瘤模型,通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法、免疫荧光染色和划痕实验检测肿瘤细胞增殖能力。同时通过在免疫缺陷型小鼠进行异种原位肿瘤移植进行验证,在所得组织样本中(sh-NC和shRack1)使用Western blot检测下游SHH信号通路变化。结果:Rack1和O-GlcNAcylation在SHH-MB中表达水平显著增高,且Rack1表达水平和患者生存率呈负相关关系。对Daoy细胞系使用OSMI-1、TM-G处理后,发现O-Glc NAc能明显促进Daoy细胞增殖,而抑制细胞O-GlcNAc则抑制细胞增殖。分子实验证实Rack1蛋白O-GlcNAcylation可以调节其蛋白稳定性,进而促进肿瘤细胞增殖。在Daoy细胞系敲低Rack1表达,其细胞增殖能力明显低于对照组;在动物水平方面,相较于对照组,Rack1蛋白敲低的肿瘤组织增殖受到显著抑制。并且Rack1可通过调节SHH信号通路参与SHH-MB形成。结论:O-GlcNAcylation可通过调节Rack1蛋白的稳定性进而参与SHH-MB形成。展开更多
活化的蛋白激酶C受体l(receptor for activated C kinase1,RACKl)广泛分布于真核生物和原核生物中,在生物体内具有极其重要的调节功能。本实验利用RT-PCR和RACE的方法扩增获得了棉铃虫Helicoverpa armigera (Hübner)RACK1基因全序...活化的蛋白激酶C受体l(receptor for activated C kinase1,RACKl)广泛分布于真核生物和原核生物中,在生物体内具有极其重要的调节功能。本实验利用RT-PCR和RACE的方法扩增获得了棉铃虫Helicoverpa armigera (Hübner)RACK1基因全序列,序列分析结果表明,该基因开放阅读框为957bp,编码319个氨基酸残基。5'端非编码区长为36bp,3'端非编码区长为112bp。发育时相表达发现RACK1基因在棉铃虫的蜕皮时期大量表达,进一步的激素处理实验发现,蜕皮激素诱导RACK1基因表达,保幼激素和饥饿抑制RACK1基因表达。这些研究结果为进一步研究RACK1基因的功能奠定基础。展开更多
目的以GEO(Gene Expression Omnibus)数据库为基础分析活化的蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinase1,RACK1)在糖尿病肾小管病中的表达及可能的机制。方法通过搜索Nephroseq数据库及KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Gen...目的以GEO(Gene Expression Omnibus)数据库为基础分析活化的蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinase1,RACK1)在糖尿病肾小管病中的表达及可能的机制。方法通过搜索Nephroseq数据库及KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes),明确RACK1在人的糖尿病肾小管病中表达情况及可能的通路。将培养的肾小管上皮细胞分为对照组、甘露醇组和高糖组,实时定量PCR测定其下游靶基因STAT1和STAT3的变化。FVB/N小鼠分为对照组和糖尿病肾病组,糖尿病肾病组小鼠给予腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病肾病的模型,实时定量PCR测定STAT1和STAT3 mRNA水平,免疫荧光染色明确p-STAT1和p-STAT3的表达情况。结果数据库数据分析发现RACK1在人糖尿病肾小管中表达明显升高。KEGG提示RACK1可能通过激活Jak-STAT信号通路发挥作用。与对照组比较,高糖组肾小管上皮细胞的RACK1、STAT1及STAT3的mRNA水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。糖尿病肾病动物模型中,肾小管的RACK1、STAT1及STAT3的mRNA水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);免疫荧光示p-STAT1阳性,主要位于肾小管上皮细胞中。结论 RACK1在糖尿病肾小管中高表达,可能是通过磷酸化STAT1激活Jak-STAT信号通路参与糖尿病肾小管病的发生发展。展开更多
文摘活化的蛋白激酶C受体l(receptor for activated C kinase1,RACKl)广泛分布于真核生物和原核生物中,在生物体内具有极其重要的调节功能。本实验利用RT-PCR和RACE的方法扩增获得了棉铃虫Helicoverpa armigera (Hübner)RACK1基因全序列,序列分析结果表明,该基因开放阅读框为957bp,编码319个氨基酸残基。5'端非编码区长为36bp,3'端非编码区长为112bp。发育时相表达发现RACK1基因在棉铃虫的蜕皮时期大量表达,进一步的激素处理实验发现,蜕皮激素诱导RACK1基因表达,保幼激素和饥饿抑制RACK1基因表达。这些研究结果为进一步研究RACK1基因的功能奠定基础。
文摘目的以GEO(Gene Expression Omnibus)数据库为基础分析活化的蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinase1,RACK1)在糖尿病肾小管病中的表达及可能的机制。方法通过搜索Nephroseq数据库及KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes),明确RACK1在人的糖尿病肾小管病中表达情况及可能的通路。将培养的肾小管上皮细胞分为对照组、甘露醇组和高糖组,实时定量PCR测定其下游靶基因STAT1和STAT3的变化。FVB/N小鼠分为对照组和糖尿病肾病组,糖尿病肾病组小鼠给予腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病肾病的模型,实时定量PCR测定STAT1和STAT3 mRNA水平,免疫荧光染色明确p-STAT1和p-STAT3的表达情况。结果数据库数据分析发现RACK1在人糖尿病肾小管中表达明显升高。KEGG提示RACK1可能通过激活Jak-STAT信号通路发挥作用。与对照组比较,高糖组肾小管上皮细胞的RACK1、STAT1及STAT3的mRNA水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。糖尿病肾病动物模型中,肾小管的RACK1、STAT1及STAT3的mRNA水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);免疫荧光示p-STAT1阳性,主要位于肾小管上皮细胞中。结论 RACK1在糖尿病肾小管中高表达,可能是通过磷酸化STAT1激活Jak-STAT信号通路参与糖尿病肾小管病的发生发展。
