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富含多糖的芜菁根皮中磷酸化蛋白的Pro-Q Diamond/SYPRO荧光染料分析技术和质谱鉴定方法
1
作者 闫海芳 安春鹏 +1 位作者 河鳍实之 李玉花 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期598-602,共5页
介绍了利用Pro-Q Diamond/SYPRO荧光染料分析磷酸化蛋白在芜菁根皮中的表达。比较了酚法、SDS法、Tris-HCl法、TCA-丙酮法、裂解液直接裂解法和改良的酚2h沉淀法所提取芜菁根皮中总蛋白的浓度和纯度。最后用改良酚法提取了芜菁的总蛋白... 介绍了利用Pro-Q Diamond/SYPRO荧光染料分析磷酸化蛋白在芜菁根皮中的表达。比较了酚法、SDS法、Tris-HCl法、TCA-丙酮法、裂解液直接裂解法和改良的酚2h沉淀法所提取芜菁根皮中总蛋白的浓度和纯度。最后用改良酚法提取了芜菁的总蛋白,双相电泳分离后,用Pro-Q Diamond/SYPRO荧光染料染色对磷酸化蛋白进行染色分析,并对磷酸化蛋白点做了质谱鉴定。 展开更多
关键词 pro-q Diamond/SYPRO 芜菁 磷酸化蛋白 质谱鉴定
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碳离子辐照对菘蓝药性品质和分子水平的诱变效应 被引量：6
2
作者 阎侃 李雪虎 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期906-914,共9页
以野生菘蓝种子为材料,以不同剂量的碳离子(12 C6+)进行辐照处理(辐照剂量分别为30Gy、60Gy、90Gy、120Gy),分析12 C6+辐照对菘蓝种子萌发、幼苗生长、主要药用成分含量及其基因和蛋白质多态性变化的影响,为菘蓝品质育种、分子生物学研... 以野生菘蓝种子为材料,以不同剂量的碳离子(12 C6+)进行辐照处理(辐照剂量分别为30Gy、60Gy、90Gy、120Gy),分析12 C6+辐照对菘蓝种子萌发、幼苗生长、主要药用成分含量及其基因和蛋白质多态性变化的影响,为菘蓝品质育种、分子生物学研究和重离子辐照诱变的应用提供依据。结果显示:(1)12 C6+辐照处理后菘蓝的成苗率和根鲜重均随辐照剂量增加而逐步显著降低,其中30Gy处理对菘蓝生长抑制程度最小,但处理后菘蓝根中的主要药效成分4(3H)喹唑酮和靛玉红的含量增加幅度最大且最高,分别为野生型的2.2倍和2.3倍。(2)SRAP分子标记分析表明,菘蓝基因组的变异度随着辐照强度的增强而增大,其中30Gy处理的突变体与野生型相比有33.59%的多态性变异。(3)SDS-PAGE考马斯亮蓝染色和磷酸化染色分析表明,菘蓝的总蛋白和磷酸化蛋白表达水平均随辐照剂量变化出现了不同程度的改变,但并不与辐照强度呈正相关,说明植物在防御重离子辐照伤害时存在补偿机制。研究发现,30Gy的12 C6+辐照是菘蓝诱变的最佳剂量,能够显著提高其有效成分的含量,为优质菘蓝诱变育种奠定了基础。 展开更多
关键词 菘蓝 碳离子辐照 SRAP pro-q染色 补偿机制
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白眉蝮蛇蛇毒糖基化蛋白的质谱分析 被引量：2
3
作者 张翠丽 刘淑清 +2 位作者 孙明忠 辛毅 赵宝昌 《大连医科大学学报》 CAS 2008年第3期196-200,共5页
[目的]蛋白质组学方法分析和初步鉴定旅顺产白眉蝮蛇(Gloydius blomhoffi Brevicaudus)蛇毒中的糖蛋白。[方法]SDS-PAGE用于白眉蝮蛇粗毒蛋白质组份分离,糖蛋白凝胶荧光染料Pro-Q-Emerald染糖基化蛋白,采用胰蛋白酶酶解蛋白质,用反相C18... [目的]蛋白质组学方法分析和初步鉴定旅顺产白眉蝮蛇(Gloydius blomhoffi Brevicaudus)蛇毒中的糖蛋白。[方法]SDS-PAGE用于白眉蝮蛇粗毒蛋白质组份分离,糖蛋白凝胶荧光染料Pro-Q-Emerald染糖基化蛋白,采用胰蛋白酶酶解蛋白质,用反相C18-HPLC分离肽段混合物,用纳升电喷雾电离串联质谱(nESI-MS/MS)系统进行的质谱数据采集,蛋白质鉴定用Biowroks软件搜索NCBInr数据库完成。[结果]旅顺产白眉蝮蛇蛇毒L-氨基酸氧化酶、金属蛋白酶、谷氨酰环化酶、salmobin、纤溶酶原激活物、contortrixobin、磷脂酶A2,神经增长因子和较小分子量的L-氨基酸氧化酶被初步鉴定为糖蛋白,其匹配的肽段数分别为8、4、7、2、3、3、4、2和5个。L-氨基酸氧化酶的纯化与表征结果验证了其糖基化,并以多种糖基化形式存在。[结论]采用蛋白质组学手段从旅顺产白眉蝮蛇蛇毒中鉴定出了8种糖蛋白,该方法简便、快速、准确。 展开更多
关键词 蛇毒 糖基化 pro-q-Emerald 电喷雾电离串联质谱
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全氟十二烷酸(PFDoA)慢性暴露干扰大鼠肝脏磷酸化蛋白质水平 被引量：1
4
作者 张红霞 崔瑞娜 戴家银 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期266-274,共9页
全氟烷基类化合物(PFASs)是一类新型持久性有机污染物,因其独特的理化性质被广泛应用于工业和商业领域,对生物体具有一定的毒性作用。为探究全氟十二烷酸(PFDo A)致肝脏毒性作用机制,选择雄性大鼠为受试生物,采用2-DE蛋白质组学技术与Pr... 全氟烷基类化合物(PFASs)是一类新型持久性有机污染物,因其独特的理化性质被广泛应用于工业和商业领域,对生物体具有一定的毒性作用。为探究全氟十二烷酸(PFDo A)致肝脏毒性作用机制,选择雄性大鼠为受试生物,采用2-DE蛋白质组学技术与Pro Q Diamond dye磷酸化蛋白染色结合的方法初步研究了不同剂量PFDo A暴露110 d后大鼠肝脏蛋白磷酸化水平的变化。结果表明,30个磷酸化蛋白表达水平在PFDo A处理后发生显著变化,其中,经过MALDI-TOF/TOF质谱分析,成功鉴定18个蛋白点。经过生物信息学分析,发现这些蛋白主要涉及糖脂代谢、氨基酸代谢、应激防御及电子传递等途径。以上结果有助于进一步从翻译后修饰水平了解PFDo A的肝脏毒性作用。 展开更多
关键词 PFDo A 大鼠 肝脏毒性 磷酸化蛋白 pro-q DIAMOND
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一种磷酸化蛋白质组定性定量分析方法的考察
5
作者 赵丽艳 刘金凤 +5 位作者 蔡芸 钱小红 马守栋 程艳芹 纪松岗 李明春 《热带医学杂志》 CAS 2012年第12期1434-1437,F0004,共5页
目的对用于磷酸化蛋白质的相对定量分析的一种基于双向差示凝胶电泳(2-DDIGE)技术和Pro-Q Diamond荧光染色的方法进行考察。方法采用DIGE技术,从Pro-Q Diamond染色后对Cy2、Cy5荧光强度的影响、Pro-Q Diamond染色过程中采用的试剂对CyDy... 目的对用于磷酸化蛋白质的相对定量分析的一种基于双向差示凝胶电泳(2-DDIGE)技术和Pro-Q Diamond荧光染色的方法进行考察。方法采用DIGE技术,从Pro-Q Diamond染色后对Cy2、Cy5荧光强度的影响、Pro-Q Diamond染色过程中采用的试剂对CyDye标记的蛋白质的影响、去离子水对DIGE扫描结果的影响、CyDye染料扫描的稳定性影响等方面,考察了该方法的有效性和特异性。结果在Pro-Q Diamond染色前对DIGE凝胶进行处理的过程中,有多种因素影响荧光强度变化,以致在进行Pro-Q Diamond染色后,凝胶点的荧光强度变化无法区分是染色造成的灰度值变化还是CyDye染料自身的变化,从而使通过荧光强度变化来定量检测磷酸化蛋白质变得困难。结论不宜采用对同一DIGE凝胶进行Pro-Q Diamond再染色检测磷酸化蛋白质的方法进行比较蛋白质组学的定量分析,为能同时展示出胶上的磷酸化蛋白质和总蛋白质,可通过DIGE实验与Pro-Q Diamond分开运行,再通过DIGE扫描图谱与Pro-Q Diamond染色图谱进行匹配的方法进行改进。 展开更多
关键词 比较蛋白质组学 双向差示凝胶电泳 pro-q Diamond荧光染色 磷酸化蛋白质
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长双歧杆菌NCC2705葡萄糖与乳糖代谢的比较蛋白质组学 被引量：4
6
作者 何湘 刘大伟 +6 位作者 孙忠科 王芳 姜铮 赵红庆 陈宣男 黄留玉 袁静 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1451-1458,共8页
【目的】以本实验室前期构建的长双歧杆菌NCC2705菌株蛋白质参考图谱为基础,研究长双歧杆菌发酵乳糖和葡萄糖的比较蛋白质组学。【方法】采用ImageMaster 2D Elite Platnum Version5.0比较分析3倍以上蛋白差异点;利用MALDI-TOF进行差异... 【目的】以本实验室前期构建的长双歧杆菌NCC2705菌株蛋白质参考图谱为基础,研究长双歧杆菌发酵乳糖和葡萄糖的比较蛋白质组学。【方法】采用ImageMaster 2D Elite Platnum Version5.0比较分析3倍以上蛋白差异点;利用MALDI-TOF进行差异蛋白鉴定,每个蛋白质点的肽指纹图谱在长双歧杆菌NCC2705菌株的蛋白质数据库用Mascot进行检索;采用Pro-Q磷酸化试剂进行磷酸化蛋白的染色。【结果】鉴定到31个蛋白表达发生显著变化,在乳糖发酵中14个蛋白上调17个蛋白下调。这些蛋白为亲水性酸性蛋白,它们基因的CAI值均在0.5以上,主要包括糖代谢相关蛋白、应激蛋白、转录和翻译相关蛋白,还有一些未知功能的蛋白。此外,有两个蛋白:转醛缩酶(BL0715,transaldolase,tal)L3蛋白点和丙酮酸激酶(BL0988,pyruvate kinase,pyk)G9蛋白点发生了磷酸化作用。【结论】长双歧杆菌NCC2705在乳糖中生长快于葡萄糖,它们的降解途径是相同的;转醛缩酶和丙酮酸激酶发生了翻译后修饰作用,推测转醛缩酶在43T和47S发生了磷酸化,而丙酮酸激酶在65S发生了磷酸化。 展开更多
关键词 比较蛋白质组 乳糖代谢 双向电泳 Pro—Q Diamond染色 MALDI—TOF 磷酸化蛋白
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益气化浊胶囊对2型糖尿病患者胰岛素抵抗及CTRP3的影响 被引量：3
7
作者 闫冬雪 郭晓霏 +1 位作者 刘亚丽 郭俊杰 《中国中医药科技》 CAS 2017年第6期688-689,693,共3页
目的:探讨益气化浊胶囊对2型糖尿病患者胰岛素抵抗及CTRP3的影响。方法:72例符合入组标准的糖尿病患者,按随机数字表法分为对照组、观察组,各36例。对照组予常规治疗,观察组在对照组基础上加用益气化浊胶囊口服治疗,1个月为1疗程,连续治... 目的:探讨益气化浊胶囊对2型糖尿病患者胰岛素抵抗及CTRP3的影响。方法:72例符合入组标准的糖尿病患者,按随机数字表法分为对照组、观察组,各36例。对照组予常规治疗,观察组在对照组基础上加用益气化浊胶囊口服治疗,1个月为1疗程,连续治疗2个疗程。比较2组患者中医证候疗效、空腹血糖、空腹胰岛素(INS)、胰岛素抵抗指数(IRI)及CTRP3的变化。结果:观察组中医证候疗效总有效率88.9%,对照组总有效率66.7%,观察组优于对照组(P<0.05);治疗后,两组FBG、INS、IRI均明显下降,CTRP3明显上升,观察组优于对照组(P<0.05)。结论:益气化浊胶囊不但能够能改善2型糖尿病患者中医证候,而且能降低空腹血糖、空腹胰岛素水平、胰岛素抵抗指数,升高血清CTRP3水平,减轻胰岛素抵抗。 展开更多
关键词 益气化浊胶囊 糖尿病 胰岛素抵抗 C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3
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人C1q/TNFα相关蛋白-6的表达、纯化及生物活性分析 被引量：1
8
作者 李洪波 高学飞 +1 位作者 李娜 吴东海 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1165-1168,共4页
目的利用大肠杆菌表达可溶性h CTRP6蛋白并分析其活性。方法重组载体转化大肠杆菌表达菌株、IPTG诱导表达、纯化后测定活性。结果 Trx-h CTRP6蛋白在大肠杆菌中高效表达,经镍亲合纯化和分子筛纯化,Trx-h CTRP6在细胞和动物水平上都有生... 目的利用大肠杆菌表达可溶性h CTRP6蛋白并分析其活性。方法重组载体转化大肠杆菌表达菌株、IPTG诱导表达、纯化后测定活性。结果 Trx-h CTRP6蛋白在大肠杆菌中高效表达,经镍亲合纯化和分子筛纯化,Trx-h CTRP6在细胞和动物水平上都有生物活性。结论利用大肠杆菌表达系统高效制备了具有生物活性的Trx-h CTRP6蛋白。 展开更多
关键词 C1q/TNFα相关蛋白-6 大肠杆菌 重组蛋白 亲合纯化 蛋白印迹 分子筛
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生猪屠宰检疫中存在问题及建议 被引量：1
9
作者 刘彩霞 《农业技术与装备》 2017年第9期91-92,共2页
生猪屠宰检疫作为猪肉安全的重要防线,提升其检疫质量,确保猪肉品质安全可靠,不仅关乎到我国畜禽养殖业的发展,还关乎到人民群众的身体健康。文章从生猪屠宰场检疫中存在问题入手,提出提升生猪屠宰检疫质量的措施,促使检疫工作变得更加... 生猪屠宰检疫作为猪肉安全的重要防线,提升其检疫质量,确保猪肉品质安全可靠,不仅关乎到我国畜禽养殖业的发展,还关乎到人民群众的身体健康。文章从生猪屠宰场检疫中存在问题入手,提出提升生猪屠宰检疫质量的措施,促使检疫工作变得更加完善。 展开更多
关键词 生猪屠宰 检疫问题 对策
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纺织企业建立和实施ISO9001∶2000标准质量管理体系的步骤和要求 被引量：1
10
作者 赖志峰 张其道 《广东化纤》 2001年第3期54-58,共5页
本文对企业在建立和实施ISO90012000标准质量管理体系时的实施步骤和要求进行了详细的论述,为纺织企业贯标、建立及实施质量管理体系时提供全面、清晰的理解,并可作为纺织企业决策者贯标的参考。
关键词 ISO9001:2000标准 质量管理体系 贯标 纺织工业企业
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