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沙眼衣原体Pgp3蛋白及其抗体在血清学检测中的应用进展
1
作者 周涵 陈文韬 +2 位作者 陈洋 张自岩 郑和平 《皮肤性病诊疗学杂志》 2025年第8期598-603,共6页
沙眼衣原体感染已成为全球重要的公共卫生问题。Pgp3是由隐蔽性质粒编码的毒力蛋白,具有高度保守的三聚体结构,通过中和抗菌肽LL-37和激活TNFR1通路在沙眼衣原体致病过程中发挥关键作用。Pgp3蛋白作为免疫优势蛋白,基于Pgp3的血清学检... 沙眼衣原体感染已成为全球重要的公共卫生问题。Pgp3是由隐蔽性质粒编码的毒力蛋白,具有高度保守的三聚体结构,通过中和抗菌肽LL-37和激活TNFR1通路在沙眼衣原体致病过程中发挥关键作用。Pgp3蛋白作为免疫优势蛋白,基于Pgp3的血清学检测方法(ELISA/MBA/LISA)显著优于传统MOMP检测。其抗体可持续存在12年以上,是评估既往感染的理想标志物。与输卵管不孕症(aOR=2.6)和盆腔炎(PR=2)显著相关,具有预测深部感染的潜力。本综述系统分析沙眼衣原体Pgp3蛋白结构、致病机制及其抗体评估既往感染和预测深部感染中的应用,为Pgp3在沙眼衣原体感染的预后评估中的临床应用提供理论依据。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 pgp3 血清学检测 既往感染 深部感染
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沙眼衣原体Pgp3多克隆抗体的制备及鉴定 被引量:1
2
作者 周璐琪 杨佳 +1 位作者 李洋 朱珊丽 《温州医科大学学报》 CAS 2024年第3期184-189,共6页
目的:制备沙眼衣原体(Ct)Pgp3蛋白的兔多克隆抗体,并检测其生物学功能。方法:采用原核表达系统制备Pgp3蛋白,通过镍柱亲和纯化Pgp3蛋白并进行复性。将复性的Pgp3蛋白经皮下多点注射免疫家兔制备兔多克隆抗体,利用ELISA和Western blot法... 目的:制备沙眼衣原体(Ct)Pgp3蛋白的兔多克隆抗体,并检测其生物学功能。方法:采用原核表达系统制备Pgp3蛋白,通过镍柱亲和纯化Pgp3蛋白并进行复性。将复性的Pgp3蛋白经皮下多点注射免疫家兔制备兔多克隆抗体,利用ELISA和Western blot法检测抗体的效价和特异性。随后建立Ct感染HeLa细胞模型,通过间接免疫荧光法和非变性Western blot法检测兔多克隆抗体对天然Pgp3蛋白的特异性识别能力。结果:Pgp3重组蛋白成功诱导表达,且主要以包涵体形式存在。ELISA显示制备的兔多克隆抗体效价可达1:512000,Western blot法和间接免疫荧光法显示Pgp3兔多克隆抗体可以特异性识别重组及天然Pgp3蛋白。结论:制备的Pgp3多克隆抗体效价高,能特异性识别重组Pgp3蛋白及天然Pgp3蛋白,为Pgp3蛋白功能的研究及Ct免疫制剂的研发等奠定基础。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 多克隆抗体 pgp3
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沙眼衣原体分泌性蛋白Pgp3滴鼻免疫增强小鼠对衣原体生殖道感染的保护作用 被引量:7
3
作者 陆春雪 吴移谋 +3 位作者 彭波 李忠玉 胡四海 钟光明 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期226-236,共11页
【目的】探讨不同免疫途径沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)分泌性蛋白Pgp3的免疫保护效果,分析其可能的保护机制,以确定Pgp3蛋白疫苗在Ct疫苗研制中的应用价值。【方法】分泌性蛋白Pgp3经滴鼻或肌注途径免疫雌性Balb/c小鼠,免疫6... 【目的】探讨不同免疫途径沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)分泌性蛋白Pgp3的免疫保护效果,分析其可能的保护机制,以确定Pgp3蛋白疫苗在Ct疫苗研制中的应用价值。【方法】分泌性蛋白Pgp3经滴鼻或肌注途径免疫雌性Balb/c小鼠,免疫60 d后,阴道接种鼠沙眼衣原体(Chlamydia muridarum,Cm)建立生殖道感染动物模型,在该模型中评价Pgp3蛋白疫苗抗Cm感染的保护效果,并探讨其机制。【结果】滴鼻或肌注免疫后,小鼠血清及生殖道中检测到了特异性抗体;小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ、IL-17及IL-5水平均明显高于对照组,且滴鼻免疫组IFN-γ水平升高较肌注组更显著(P<0.05);Pgp3蛋白滴鼻免疫组小鼠经Cm生殖道感染后,阴道带菌时间明显缩短,输卵管病理改变轻而肌注免疫组其保护作用不明显。【结论】Pgp3蛋白经滴鼻免疫可有效诱导小鼠产生明显的抗Cm保护效应。其可能的免疫保护机制与诱导Th1型为主的细胞免疫应答及高效价的特异性抗体有关,提示Pgp3蛋白疫苗具有潜在的疫苗研究与开发价值。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 pgp3 蛋白疫苗 免疫保护 Th1型免疫反应
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沙眼衣原体质粒蛋白Pgp3经NOD1/RIP2信号通路诱导HeLa细胞产生IL-8 被引量:4
4
作者 张莉 钱后 +3 位作者 徐应杰 邹燕 李忠玉 陈超群 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期760-764,共5页
目的探讨沙眼衣原体质粒蛋白Pgp3诱导HeLa细胞产生IL-8的机制。方法选择不同质量浓度的Pgp3蛋白刺激HeLa细胞并在不同时间点收集细胞,Real-time PCR检测Pgp3刺激HeLa细胞后IL-8转录水平,Western blot和Real-time PCR分别检测NOD1的表达... 目的探讨沙眼衣原体质粒蛋白Pgp3诱导HeLa细胞产生IL-8的机制。方法选择不同质量浓度的Pgp3蛋白刺激HeLa细胞并在不同时间点收集细胞,Real-time PCR检测Pgp3刺激HeLa细胞后IL-8转录水平,Western blot和Real-time PCR分别检测NOD1的表达水平及下游蛋白RIP2的转录水平;Western blot检测ERK1/2和p38磷酸化水平;HeLa细胞用NOD1抑制剂ML130、RIP2抑制剂GSK583、ERK抑制剂PD98059和p38抑制剂LY2228820分别预处理后,再用Pgp3蛋白刺激细胞,ELISA和Real-time PCR检测IL-8的表达水平。结果 0~24μg/ml的Pgp3蛋白刺激HeLa细胞后,IL-8的含量呈时间和质量浓度依赖性,Pgp3蛋白刺激HeLa细胞能调控NOD1及RIP2的表达,同时ERK1/2和p38磷酸化水平显著升高;NOD1和RIP2抑制剂并不影响Pgp3蛋白诱导的ERK和p38磷酸化水平;用4种抑制剂预处理HeLa细胞后,Pgp3刺激HeLa细胞,IL-8表达量均出现下降。结论 Pgp3经NOD1/RIP2以及活化ERK1/2和p38信号通路诱导HeLa细胞调控IL-8的产生。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 pgp3 IL-8 NOD1/RIP2 ERK
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沙眼衣原体质粒蛋白pgp3的研究进展 被引量:2
5
作者 贾晓晖 杨新玲 贾天军 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期467-470,共4页
沙眼衣原体分泌性蛋白在沙眼衣原体致病过程中起重要作用,质粒编码的蛋白pgp3(即pORF5)是迄今为止发现的唯一由沙眼衣原体质粒编码的分泌性蛋白。pgp3在沙眼衣原体感染早期即可表达,在感染人群中具有很强的免疫原性,且人抗体对pgp3的识... 沙眼衣原体分泌性蛋白在沙眼衣原体致病过程中起重要作用,质粒编码的蛋白pgp3(即pORF5)是迄今为止发现的唯一由沙眼衣原体质粒编码的分泌性蛋白。pgp3在沙眼衣原体感染早期即可表达,在感染人群中具有很强的免疫原性,且人抗体对pgp3的识别具有高度的结构依赖性,对该蛋白的研究将有助于进一步了解衣原体质粒编码蛋白的作用及衣原体致病机制,以寻找更好的衣原体诊断方法和防治措施。本文就沙眼衣原体质粒编码蛋白pgp3的生物学性质及其致病机制作一简要综述。 展开更多
关键词 沙眼衣原体质粒 pgp3 免疫显性
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衣原体质粒编码蛋白pGP3致病机制的研究进展 被引量:4
6
作者 侯淑萍 《中国中西医结合皮肤性病学杂志》 CAS 2019年第2期183-185,共3页
生殖道沙眼衣原体感染可以导致女性异位妊娠及输卵管性不孕,其致病机制一直不明确。衣原体质粒已被证实在衣原体对生殖道的致病过程中发挥了关键作用。质粒缺失或者质粒编码蛋白pGP3缺失的鼠肺炎沙眼衣原体上行感染的能力以及对输卵管... 生殖道沙眼衣原体感染可以导致女性异位妊娠及输卵管性不孕,其致病机制一直不明确。衣原体质粒已被证实在衣原体对生殖道的致病过程中发挥了关键作用。质粒缺失或者质粒编码蛋白pGP3缺失的鼠肺炎沙眼衣原体上行感染的能力以及对输卵管的致病性均显著减弱,提示pGP3是一个重要的毒力因子。近年来研究发现pGP3可以结合人类抗菌多肽LL-37及其小鼠同源物CRAMP形成稳定复合物从而抑制其对衣原体的杀伤作用,表明衣原体可能通过分泌pGP3抵御抗菌多肽的杀伤作用从而实现自身的繁殖及上行感染。pGP3与LL-37结合后,LL-37对上皮细胞的促炎活性被抑制而pGP3对中性粒细胞的促炎性功能被增强,提示衣原体可能通过pGP3操纵宿主的炎性反应来实现对宿主的致病。另外,p GP3的三聚体结构也提示pGP3可能通过激活肿瘤坏死因子途径直接刺激输卵管部位的炎性反应。本文就衣原体质粒编码蛋白pGP3致病机制的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 衣原体 pgp3 致病机制
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Pgp3对抗LL37杀灭沙眼衣原体的作用及机制研究 被引量:1
7
作者 张晗 孟宪勇 +3 位作者 武海霞 杨建明 吴苗苗 董晓华(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期917-921,共5页
目的:探讨质粒编码的分泌蛋白Pgp3在沙眼衣原体(Ct)感染宿主过程中的作用及机制,为防治Ct引起的泌尿生殖道感染提供实验依据。方法:构建pGEX-6p/Pgp3原核表达重组质粒并转化XL1-Blue大肠杆菌,IPTG诱导表达GSTPgp3融合蛋白,融合蛋白经亲... 目的:探讨质粒编码的分泌蛋白Pgp3在沙眼衣原体(Ct)感染宿主过程中的作用及机制,为防治Ct引起的泌尿生殖道感染提供实验依据。方法:构建pGEX-6p/Pgp3原核表达重组质粒并转化XL1-Blue大肠杆菌,IPTG诱导表达GSTPgp3融合蛋白,融合蛋白经亲和层析纯化及GST标签切割后制备Pgp3蛋白。将抗菌肽LL37和Pgp3蛋白共同孵育Ct后感染HeLa细胞,间接免疫荧光技术检测不同处理组Ct包涵体数量。GST pull-down法研究Pgp3与LL37的作用方式及Pgp3的活性片段。结果:LL37与Ct内原体(EB)孵育后感染HeLa细胞,感染率从50%降至10%,不同浓度Pgp3与LL37预先孵育后处理Ct EB再感染HeLa细胞,感染率较LL37组显著升高(P<0.05),且具有剂量依赖性。GST pull-down实验结果显示,LL37可与Pgp3结合,且结合部位位于Pgp3中间段(67~132 aa)。结论:Pgp3在Ct感染宿主过程中通过与人类抗菌肽LL37结合,抑制LL37对Ct的杀伤作用,导致Ct感染。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 pgp3 质粒 抗菌肽 LL37
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衣原体蛋白Pgp3抑制小鼠银屑病样皮损进展的初步研究
8
作者 岑醒洪 侯淑萍 +5 位作者 李絮茹 毕田田 薛璐 单士军 刘原君 王惠平 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期564-568,573,共6页
目的探索衣原体蛋白Pgp3通过结合内源性抗菌肽LL37抑制银屑病皮损进展的可能性。方法诱导大肠埃希菌表达出蛋白GST-Pgp3,经谷胱甘肽巯基转移酶(GST)磁珠纯化、PP蛋白酶切除GST标签后得到蛋白Pgp3。BALB/C雌性小鼠32只,随机分成正常空白... 目的探索衣原体蛋白Pgp3通过结合内源性抗菌肽LL37抑制银屑病皮损进展的可能性。方法诱导大肠埃希菌表达出蛋白GST-Pgp3,经谷胱甘肽巯基转移酶(GST)磁珠纯化、PP蛋白酶切除GST标签后得到蛋白Pgp3。BALB/C雌性小鼠32只,随机分成正常空白对照组,咪喹莫特(IMQ)模型组,IMQ诱导同时进行Pgp3干预的外涂高浓度组、外涂低浓度组、注射高浓度组、注射低浓度组,IMQ诱导同时进行PBS干预的外涂对照组及注射对照组。采用银屑病皮损面积和疾病严重程度(PASI)评分标准记录银屑病样小鼠模型皮损变化,镜下观察皮损组织形态学改变并测量小鼠皮损表皮层厚度。结果与模型组比较,Pgp3干预的4组小鼠银屑病样皮损外观均有不同程度缓解,红斑变浅、鳞屑减少,各项指标PASI分数均低于同期模型组,镜下角化过度及角化不全减轻,棘层增厚减少,表皮突延伸缓解;外涂高浓度组及注射高浓度组皮损厚度与模型组、PBS对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);外涂低浓度组及注射低浓度组小鼠皮损厚度与模型组、PBS对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论蛋白Pgp3可抑制咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损的形成,推测Pgp3可能通过结合抗菌肽LL37从而抑制小鼠银屑病样皮损的形成。 展开更多
关键词 银屑病 咪喹莫特 pgp3 抗菌肽 LL37
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鼠肺炎沙眼衣原体毒力因子Pgp3蛋白的分段克隆表达
9
作者 徐宏俊 孙毅娜 +1 位作者 刘全忠 刘原君 《临床和实验医学杂志》 2021年第8期785-788,共4页
目的获得鼠肺炎沙眼衣原体(CM)质粒编码蛋白Pgp3氨基端(n)、羧基端(c)和中间段(m)分别删除的蛋白Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc,为近一步研究其功能及沙眼衣原体(C.t)致病机制提供基础。方法用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因Pgp3Δn、Pgp... 目的获得鼠肺炎沙眼衣原体(CM)质粒编码蛋白Pgp3氨基端(n)、羧基端(c)和中间段(m)分别删除的蛋白Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc,为近一步研究其功能及沙眼衣原体(C.t)致病机制提供基础。方法用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc,分别将其定向插入原核表达载体PET-30a(+)中,连接产物转化入大肠埃希菌DH5α、涂板、挑取单克隆提取质粒进行酶切、测序鉴定。鉴定正确的重组质粒分别转化入大肠埃希菌BL21,15℃诱导表达16 h和37℃诱导表达4 h,考马斯亮蓝染色和蛋白质印迹法鉴定目的蛋白。结果PCR扩增的目的基因Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc的长度分别为597、525、324 bp,NdeI和HindⅢ双酶切重组质粒后电泳显示酶切片段大小符合预期,测序结果显示插入片段序列均与基因库中一致;考马斯亮蓝染色和蛋白质印迹显示目的蛋白分子量分别约为22000、18700和12000,3个蛋白片段均在15℃诱导表达16 h的条件下表达量更多。结论成功表达Pgp3Δn-His、Pgp3Δm-His和Pgp3Δc-His融合蛋白,为进一步研究Pgp3的功能位点和作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 鼠肺炎沙眼衣原体 pgp3 基因表达 结构域
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广东省育龄女性生殖道沙眼衣原体Pgp3抗体阳性率及其影响因素分析 被引量:3
10
作者 刘洁 刘丽军 +3 位作者 李畅畅 李侠 王成 杨斌 《中国艾滋病性病》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期440-445,共6页
目的生殖道沙眼衣原体(CT)质粒编码蛋白3(Pgp3)血清学抗体是判别机体感染状况的重要指标,为了解广东省育龄女性人群抗Pgp3血清学抗体流行情况及其影响因素开展本次调查。方法运用横断面调查方法对广东省五地市育龄女性开展问卷调查,收... 目的生殖道沙眼衣原体(CT)质粒编码蛋白3(Pgp3)血清学抗体是判别机体感染状况的重要指标,为了解广东省育龄女性人群抗Pgp3血清学抗体流行情况及其影响因素开展本次调查。方法运用横断面调查方法对广东省五地市育龄女性开展问卷调查,收集一般情况,并采集静脉血和宫颈拭子,分别采用荧光素酶免疫试验和实时荧光定量PCR进行衣原Pgp3抗体和核酸检测。使用多因素Logistic回归分析相关人口行为学指标与Pgp3抗体的关系。结果调查的943名育龄女性中,Pgp3抗体阳性率为40.7%(95%CI:37.6%~43.9%),核酸扩增试验(NAAT)阳性率为7.2%(95%CI:5.6%~8.9%)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄>25岁(其中年龄26~35岁,OR=1.9,95%CI:1.3~2.9;年龄>35岁,OR=3.2,95%CI:2.0~5.3)、有饮酒史(OR=1.8,95%CI:1.3~2.7)、有盆腔炎史(OR=1.8,95%CI:1.1~3.1)和有其他性传播疾病史(OR=2.3,95%CI:1.4~3.7)是Pgp3抗体阳性的危险因素;已婚(OR=0.6,95%CI:0.4~0.9)和首次性行为年龄≥18岁(OR=0.4,95%CI:0.3~0.5)是Pgp3抗体的保护因素。结论广东省育龄女性Pgp3抗体阳性率较高,提示既往CT感染率较高,应加强筛查力度,力争早发现早治疗。 展开更多
关键词 生殖道沙眼衣原体 pgp3抗体 育龄女性 阳性率
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衣原体质粒蛋白Pgp3的研究进展
11
作者 谈园 吴移谋 《微生物与感染》 2017年第2期126-130,共5页
衣原体中普遍含有一个7.5kb左右的隐蔽性质粒,在衣原体物种中高度保守。Pgp3为该质粒编码的相对分子质量约28 000的免疫原性蛋白,能分泌到宿主细胞胞质中。在衣原体感染期间人类抗体可识别Pgp3的天然三聚体结构。Pgp3在衣原体致病机制... 衣原体中普遍含有一个7.5kb左右的隐蔽性质粒,在衣原体物种中高度保守。Pgp3为该质粒编码的相对分子质量约28 000的免疫原性蛋白,能分泌到宿主细胞胞质中。在衣原体感染期间人类抗体可识别Pgp3的天然三聚体结构。Pgp3在衣原体致病机制中起重要作用,是诱导输卵管积液的主要毒力因子,能中和抗菌肽LL37的抗衣原体活性,且其DNA疫苗对衣原体感染具有一定的保护作用。本文就Pgp3的结构、在衣原体致病中的作用及其在疫苗与诊断抗原方面的应用进行简要概述,为进一步研究衣原体感染的发病机制及其诊断与预防提供新的思路。 展开更多
关键词 衣原体 pgp3 质粒蛋白 致病机制
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Pgp3生物学特性与致病机制研究进展
12
作者 方春霞 周辉 李忠玉 《生命科学》 CSCD 北大核心 2023年第5期569-575,共7页
衣原体具有广泛的致病谱,能够引起多种疾病,而分泌性蛋白在衣原体致病过程中发挥了重要的作用。Pgp3 (plasmid gene protein 3)是由衣原体质粒基因编码的一种主要定位于宿主细胞质的分泌性蛋白,具有调控炎症反应、细胞凋亡、自噬等多种... 衣原体具有广泛的致病谱,能够引起多种疾病,而分泌性蛋白在衣原体致病过程中发挥了重要的作用。Pgp3 (plasmid gene protein 3)是由衣原体质粒基因编码的一种主要定位于宿主细胞质的分泌性蛋白,具有调控炎症反应、细胞凋亡、自噬等多种生物学功能。Pgp3也是一种免疫优势抗原,可用于衣原体疾病的诊断和作为疫苗研制的靶点。全面、深入地研究该蛋白功能将有助于进一步了解衣原体的致病机制,为衣原体感染的诊断和防治提供新的思路。 展开更多
关键词 衣原体 pgp3 致病机制 生物学特性
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SiO_(2)-Pickering乳液佐剂增强沙眼衣原体Pgp3蛋白免疫效果
13
作者 史可靓 方春霞 +2 位作者 赵兰华 周辉 李忠玉 《中南医学科学杂志》 CAS 2023年第3期319-324,共6页
目的优化二氧化硅(SiO_(2))Pickering(SPE)乳液佐剂,研究其对沙眼衣原体(Ct)Pgp3蛋白的免疫增强效应,为预防Ct感染性疾病提供实验依据。方法优化SiO_(2)质量浓度、水油比及超声功率,超声乳化制备SPE佐剂。30只小鼠均分为SPE+Pgp3组(Pgp... 目的优化二氧化硅(SiO_(2))Pickering(SPE)乳液佐剂,研究其对沙眼衣原体(Ct)Pgp3蛋白的免疫增强效应,为预防Ct感染性疾病提供实验依据。方法优化SiO_(2)质量浓度、水油比及超声功率,超声乳化制备SPE佐剂。30只小鼠均分为SPE+Pgp3组(Pgp3蛋白和SPE混合免疫)、Pgp3组(Pgp3蛋白单独免疫)和PBS组。ELISA检测各组小鼠血清抗体水平和脾细胞上清细胞因子水平,流式细胞术检测脾细胞γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平。结果SPE最优制备条件为超声功率337 W、水油比10∶2、SiO_(2)质量浓度1 g/L,最优条件下SPE直径为(300.12±44.26)nm,聚合物分散性指数为0.33±0.12。除PBS组外,其他组均检测到了特异性抗体,SPE+Pgp3组总抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a抗体水平高于Pgp3组,且以IgG2a升高为主(P<0.05)。SPE+Pgp3组、Pgp3组脾细胞IFN-γ和刺激指数高于PBS组,且SPE+Pgp3组高于Pgp3组(P<0.05);IFN-γ主要由CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞分泌。各组IL-4含量均较低。结论SPE乳液佐剂具有良好的佐剂效应,能有效增强Pgp3蛋白体液免疫和细胞免疫,且可优势诱导Th1型免疫反应。 展开更多
关键词 SPE乳液佐剂 沙眼衣原体 pgp3蛋白 免疫反应
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D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3的克隆、表达、鉴定及其免疫原性初探 被引量:5
14
作者 孔杰 孙毅娜 +5 位作者 赵乐然 肖萌 王敬 李卓然 刘原君 刘全忠 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期333-336,共4页
目的获得D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3基因及其蛋白,并鉴定其免疫原性。方法PCR扩增目的基因,将其定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中,连接产物转化入大肠埃希菌DH5c~,提取质粒进行酶切、测序、PCR鉴定。再将重组质粒转化人大肠埃希菌B... 目的获得D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3基因及其蛋白,并鉴定其免疫原性。方法PCR扩增目的基因,将其定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中,连接产物转化入大肠埃希菌DH5c~,提取质粒进行酶切、测序、PCR鉴定。再将重组质粒转化人大肠埃希菌BL21并诱导表达,Western印迹鉴定目的蛋白,谷胱甘肽巯基转移酶(GST)磁珠纯化pgp3-GST融合蛋白。用纯化后的蛋白免疫新西兰家兔,Western印迹检测抗体与pgp3蛋白的结合,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体效价。结果克隆目的基因序列长度为795bp,与基因库中一致,Western印迹显示目的蛋白相对分子质量为54000,并得到纯化蛋白。所得兔血清可识别pgp3蛋白,ELISA检测多克隆抗体效价达1:25600。结论成功表达具有强免疫原性的pgp3-GST融合蛋白,为进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 衣原体 沙眼 pgp3蛋白 重组融合蛋白质类 免疫法 疫苗 合成
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沙眼衣原体质粒蛋白pgp3多克隆抗体的制备及鉴定 被引量:4
15
作者 孔杰 孙毅娜 +5 位作者 赵乐然 肖萌 王敬 马璟玥 刘原君 刘全忠 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期77-79,共3页
目的表达并纯化D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3,制备鼠源性多克隆抗体。方法诱导表达pgp3蛋白,经谷胱甘肽-S-转移酶(GST)磁珠纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,Western印迹、细胞免疫荧光鉴定抗体的特异性,间接ELISA法测定抗体... 目的表达并纯化D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3,制备鼠源性多克隆抗体。方法诱导表达pgp3蛋白,经谷胱甘肽-S-转移酶(GST)磁珠纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,Western印迹、细胞免疫荧光鉴定抗体的特异性,间接ELISA法测定抗体效价。结果得到纯化的pgp3蛋白,获得鼠源性多克隆抗体,经Western印迹和细胞免疫荧光鉴定抗体可特异性结合pgp3蛋白,ELISA测定所得抗体效价为1:819200。结论成功制备具有高效价、高特异性的抗pgp3多克隆抗体。 展开更多
关键词 衣原体 沙眼 质粒 pgp3蛋白 衣原体 抗体 细菌
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肝细胞ABCB4基因与胆囊胆固醇结石关系的研究 被引量:4
16
作者 陈星 冯俊 +1 位作者 夏先明 李波 《四川医学》 CAS 2010年第12期1725-1727,共3页
目的探讨胆囊胆固醇结石的形成与肝脏组织内ABCB4基因表达的相关性。方法实验组选取14例胆囊胆固醇结石患者的肝组织标本,以10例非胆囊结石患者的肝组织标本为对照组。应用RT-PCR技术检测两组患者肝脏组织ABCB4基因的表达强度;应用免疫... 目的探讨胆囊胆固醇结石的形成与肝脏组织内ABCB4基因表达的相关性。方法实验组选取14例胆囊胆固醇结石患者的肝组织标本,以10例非胆囊结石患者的肝组织标本为对照组。应用RT-PCR技术检测两组患者肝脏组织ABCB4基因的表达强度;应用免疫组化方法检测两组患者肝脏组织Pgp3蛋白的表达强度,所有检测结果行统计学分析。结果实验组和对照组ABCB4mRNA相对表达量分别为(0.91±0.06)和(1.15±0.04),两者比较差异有统计学意义(P<0.05),实验组Pgp3蛋白表达量(14.29%)明显低于对照组(80%)(P<0.05)。结论 ABCB4基因的表达降低使其编码的Pgp3蛋白表达降低,从而可能导致胆囊胆固醇结石的形成。 展开更多
关键词 胆囊胆固醇结石 ABCB4基因 pgp3
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分泌型蛋白在沙眼衣原体活动性感染中的诊断价值
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作者 袁红霞 龙歆孜 +3 位作者 陈虹亮 周安文 蔡友香 罗丽裴 《分子诊断与治疗杂志》 2022年第7期1089-1093,共5页
目的探讨分泌型蛋白在沙眼衣原体(Ct)活动性感染中的诊断价值。方法通过基因工程方法筛选目的分泌型蛋白,构建重组质粒,转化至表达宿主菌中进行诱导表达,利用Western-Blot分析和鉴定表达产物。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立其血清... 目的探讨分泌型蛋白在沙眼衣原体(Ct)活动性感染中的诊断价值。方法通过基因工程方法筛选目的分泌型蛋白,构建重组质粒,转化至表达宿主菌中进行诱导表达,利用Western-Blot分析和鉴定表达产物。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立其血清学诊断的间接ELISA法,并用已有的IgG试剂盒与其共同检测Ct感染血清标本,评价二者敏感度与特异性,分析该抗血清在临床标本抗原检测中的应用价值。结果经1.5%琼脂糖凝胶电泳,目的基因Pgp3在对应的位置上(大小约564 bp)可见清晰的条带,与预期片段一致。pET30a/Pgp3经表达引物扩增,在对应的位置上(大小约792 bp)可见清晰的条带,经NdeⅠ和HindⅢ双酶切,得到大小约为792 bp的清晰条带。pET30a/Pgp3表达蛋白的诱导剂IPTG温度为10℃,浓度为0.6 mmol/L出现相应的蛋白条带最粗。阴性血清中无重组蛋白的表达,阳性血清有一条反应较弱的明显条带,抗HIS标签有一个明显的清晰条带。阳性标本中,重组蛋白Pgp3的敏感度为86.21%(50/58),特异度为93.83%(152/162),与CtIgG试剂盒符合率为91.82%[(50+152)/220],两种检测结果比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.056,P=0.814)。结论纯化的Ct重组蛋白Pgp3具有较好的免疫原性,以Pgp3蛋白建立的间接ELISA法的具有较好的特异性和敏感度,且与商品CtIgG ELISA试剂盒检测结果符合率高,可能有望作为Ct活动期感染的血清学诊断的候选抗原。 展开更多
关键词 分泌型蛋白 pgp3 沙眼衣原体 活动性感染 诊断价值
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沙眼衣原体质粒蛋白研究进展
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作者 戴文婷 李忠玉 《微生物学免疫学进展》 2013年第6期76-79,共4页
沙眼衣原体除含有高度保守的基因组外,也含一个7.5kb的隐蔽性质粒,隐蔽性质粒具有8个开放阅读(ORF1-8),编码8种质粒蛋白pgpl-8。质粒蛋白在沙眼衣原体致病过程中发挥重要的作用,尤其是新近发现沙眼衣原体的唯一一种分泌到胞浆中... 沙眼衣原体除含有高度保守的基因组外,也含一个7.5kb的隐蔽性质粒,隐蔽性质粒具有8个开放阅读(ORF1-8),编码8种质粒蛋白pgpl-8。质粒蛋白在沙眼衣原体致病过程中发挥重要的作用,尤其是新近发现沙眼衣原体的唯一一种分泌到胞浆中的分泌性蛋白pgp3和对毒力相关基因具有转录调节功能的pgp4。对就沙衣原体的质粒蛋白研究现状进行了综述。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 质粒蛋白 pgp3 pgp4
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沙眼衣原体隐匿质粒编码蛋白的表达及其相互作用
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作者 高磊琼 张燕 +1 位作者 华子瑜 沈犁 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期34-38,共5页
目的分析沙眼衣原体隐匿质粒编码蛋白的相互作用。方法采用基因克隆的方法将沙眼衣原体质粒基因pgp1~4及pgp8分别克隆到pRAC和pRBR上,通过转录激活细菌双杂交系统分析蛋白相互作用。结果 Western blot结果显示Pgp1、Pgp3与大肠杆菌Rpo ... 目的分析沙眼衣原体隐匿质粒编码蛋白的相互作用。方法采用基因克隆的方法将沙眼衣原体质粒基因pgp1~4及pgp8分别克隆到pRAC和pRBR上,通过转录激活细菌双杂交系统分析蛋白相互作用。结果 Western blot结果显示Pgp1、Pgp3与大肠杆菌Rpo A氨基末端功能区(α-NTD)融合蛋白及Pgp1、Pgp3、Pgp4与DNA结合蛋白λCI融合蛋白,能在大肠杆菌中表达。在报告菌株中,共表达与α-NTD融合的Pgp3蛋白(α-Pgp3)及与λCI融合的Pgp3蛋白(CI-Pgp3),导致报告基因产物β-半乳糖苷酶的活性升高。而余无明显变化。结论 pgp3编码的Pgp3能与自身相互作用。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 隐匿质粒 pgp3 蛋白相互作用
原文传递
抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的制备和活性检测
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作者 邵晓枫 高灜岱 +5 位作者 刘娟妮 王金宏 许元富 范冬梅 杨纯正 熊冬生 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期354-359,共6页
目的制备抗抗CD3ScFv单克隆抗体,用以抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测。方法采用常规免疫学方法制备抗抗CD3ScFv单克隆体并制备抗抗CD3ScFv单克隆抗体免疫亲和层析柱,用于抗CD3ScFv蛋白和去除E-tag的Diabody[CD3... 目的制备抗抗CD3ScFv单克隆抗体,用以抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测。方法采用常规免疫学方法制备抗抗CD3ScFv单克隆体并制备抗抗CD3ScFv单克隆抗体免疫亲和层析柱,用于抗CD3ScFv蛋白和去除E-tag的Diabody[CD3×Pgp]的分离纯化。采用FACS法测定分别经抗抗CD3ScFV抗体免疫亲和层析柱及抗E-tag亲和层析柱纯化的抗CD3ScFv蛋白和Diabody[CD3×Pgp]对K562/A02和Jurkat细胞特异结合活性。采用间接ELISA法进行抗抗CD3ScFv抗体特异性结合活性的检测。结果抗抗CD3ScFV单克隆抗体能特异性地与抗CD3ScFv蛋白结合而不与血清发生反应。经抗抗CD3ScFV抗体免疫亲和层析柱和经抗E-tag亲和层析柱纯化后的抗CD3ScFv蛋白均能与Jurkat细胞特异结合。经抗抗CD3ScFV抗体免疫亲和层析柱纯化的去除E-tag的Diabody[CD3×Pgp]与K562/A02和Jurkat细胞结合的阳性率分别为89.87%和83.95%;与其亲代抗体竞争结合K562/A02和Jurkat细胞后,结合率分别下降为56.30%和43.78%。结论制备了抗抗CD3单克隆抗体和亲和层析柱,可用于抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测。 展开更多
关键词 抗CD3ScFv蛋白 单克隆抗体 免疫亲和层析 Diabody[CD3×Pgp]
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