衣原体具有广泛的致病谱,能够引起多种疾病,而分泌性蛋白在衣原体致病过程中发挥了重要的作用。Pgp3 (plasmid gene protein 3)是由衣原体质粒基因编码的一种主要定位于宿主细胞质的分泌性蛋白,具有调控炎症反应、细胞凋亡、自噬等多种...衣原体具有广泛的致病谱,能够引起多种疾病,而分泌性蛋白在衣原体致病过程中发挥了重要的作用。Pgp3 (plasmid gene protein 3)是由衣原体质粒基因编码的一种主要定位于宿主细胞质的分泌性蛋白,具有调控炎症反应、细胞凋亡、自噬等多种生物学功能。Pgp3也是一种免疫优势抗原,可用于衣原体疾病的诊断和作为疫苗研制的靶点。全面、深入地研究该蛋白功能将有助于进一步了解衣原体的致病机制,为衣原体感染的诊断和防治提供新的思路。展开更多
目的 通过构建高表达Pgp3而不表达Pgp4的新突变衣原体,研究Pgp3的分泌是否受到Pgp4的调控。方法 以质粒pGFP::CM为模板通过聚合酶链反应(PCR)和In-Fusion克隆技术依次构建质粒pGFP::CM BFP R Pgp3和pGFP::CM BFP R Pgp3&Pgp3 R Pgp...目的 通过构建高表达Pgp3而不表达Pgp4的新突变衣原体,研究Pgp3的分泌是否受到Pgp4的调控。方法 以质粒pGFP::CM为模板通过聚合酶链反应(PCR)和In-Fusion克隆技术依次构建质粒pGFP::CM BFP R Pgp3和pGFP::CM BFP R Pgp3&Pgp3 R Pgp4。经过PCR、酶切和测序鉴定正确的重组质粒pGFP::CM BFP R Pgp3&Pgp3 R Pgp4转化至无质粒的鼠衣原体株CMUT3中,荧光显微镜下观察并挑选带有荧光的鼠衣原体包涵体,经过氨苄青霉素药物筛选和噬菌斑纯化后,间接免疫荧光染色对新的鼠衣原体株进行鉴定。结果 经PCR、酶切和测序鉴定后得到正确序列的重组质粒pGFP::CM BFP R Pgp3和pGFP::CM BFP R Pgp3&Pgp3 R Pgp4,转化CMUT3后可见含有绿色荧光的衣原体包涵体,氨苄青霉素药物筛选和噬菌斑实验纯化后,得到新的鼠衣原体株CMUT3-pGFP::CM BFP R Pgp3&Pgp3 R Pgp4,免疫荧光证实Pgp3蛋白在新衣原体中的表达量高于CMUT3-pGFP::CM,但是Pgp3蛋白只存在于衣原体包涵体中,并没有分泌到宿主细胞的胞浆中。结论 衣原体分泌蛋白Pgp3的分泌受到质粒蛋白Pgp4的调控,本研究为进一步理解衣原体的生物学性状提供新的线索。展开更多
目的分析沙眼衣原体隐匿质粒编码蛋白的相互作用。方法采用基因克隆的方法将沙眼衣原体质粒基因pgp1~4及pgp8分别克隆到pRAC和pRBR上,通过转录激活细菌双杂交系统分析蛋白相互作用。结果 Western blot结果显示Pgp1、Pgp3与大肠杆菌Rpo ...目的分析沙眼衣原体隐匿质粒编码蛋白的相互作用。方法采用基因克隆的方法将沙眼衣原体质粒基因pgp1~4及pgp8分别克隆到pRAC和pRBR上,通过转录激活细菌双杂交系统分析蛋白相互作用。结果 Western blot结果显示Pgp1、Pgp3与大肠杆菌Rpo A氨基末端功能区（α-NTD）融合蛋白及Pgp1、Pgp3、Pgp4与DNA结合蛋白λCI融合蛋白,能在大肠杆菌中表达。在报告菌株中,共表达与α-NTD融合的Pgp3蛋白（α-Pgp3）及与λCI融合的Pgp3蛋白（CI-Pgp3）,导致报告基因产物β-半乳糖苷酶的活性升高。而余无明显变化。结论 pgp3编码的Pgp3能与自身相互作用。展开更多
文摘衣原体具有广泛的致病谱,能够引起多种疾病,而分泌性蛋白在衣原体致病过程中发挥了重要的作用。Pgp3 (plasmid gene protein 3)是由衣原体质粒基因编码的一种主要定位于宿主细胞质的分泌性蛋白,具有调控炎症反应、细胞凋亡、自噬等多种生物学功能。Pgp3也是一种免疫优势抗原,可用于衣原体疾病的诊断和作为疫苗研制的靶点。全面、深入地研究该蛋白功能将有助于进一步了解衣原体的致病机制,为衣原体感染的诊断和防治提供新的思路。
文摘目的 通过构建高表达Pgp3而不表达Pgp4的新突变衣原体,研究Pgp3的分泌是否受到Pgp4的调控。方法 以质粒pGFP::CM为模板通过聚合酶链反应(PCR)和In-Fusion克隆技术依次构建质粒pGFP::CM BFP R Pgp3和pGFP::CM BFP R Pgp3&Pgp3 R Pgp4。经过PCR、酶切和测序鉴定正确的重组质粒pGFP::CM BFP R Pgp3&Pgp3 R Pgp4转化至无质粒的鼠衣原体株CMUT3中,荧光显微镜下观察并挑选带有荧光的鼠衣原体包涵体,经过氨苄青霉素药物筛选和噬菌斑纯化后,间接免疫荧光染色对新的鼠衣原体株进行鉴定。结果 经PCR、酶切和测序鉴定后得到正确序列的重组质粒pGFP::CM BFP R Pgp3和pGFP::CM BFP R Pgp3&Pgp3 R Pgp4,转化CMUT3后可见含有绿色荧光的衣原体包涵体,氨苄青霉素药物筛选和噬菌斑实验纯化后,得到新的鼠衣原体株CMUT3-pGFP::CM BFP R Pgp3&Pgp3 R Pgp4,免疫荧光证实Pgp3蛋白在新衣原体中的表达量高于CMUT3-pGFP::CM,但是Pgp3蛋白只存在于衣原体包涵体中,并没有分泌到宿主细胞的胞浆中。结论 衣原体分泌蛋白Pgp3的分泌受到质粒蛋白Pgp4的调控,本研究为进一步理解衣原体的生物学性状提供新的线索。
文摘目的分析沙眼衣原体隐匿质粒编码蛋白的相互作用。方法采用基因克隆的方法将沙眼衣原体质粒基因pgp1~4及pgp8分别克隆到pRAC和pRBR上,通过转录激活细菌双杂交系统分析蛋白相互作用。结果 Western blot结果显示Pgp1、Pgp3与大肠杆菌Rpo A氨基末端功能区（α-NTD）融合蛋白及Pgp1、Pgp3、Pgp4与DNA结合蛋白λCI融合蛋白,能在大肠杆菌中表达。在报告菌株中,共表达与α-NTD融合的Pgp3蛋白（α-Pgp3）及与λCI融合的Pgp3蛋白（CI-Pgp3）,导致报告基因产物β-半乳糖苷酶的活性升高。而余无明显变化。结论 pgp3编码的Pgp3能与自身相互作用。
