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Evaluation of the Protective Efficacy of a Fused OmpK/Omp22 Protein Vaccine Candidate against Acinetobacter baumannii Infection in Mice 被引量:5
1
作者 GUO San Jun REN Shan XIE Yong En 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2018年第2期155-158,共4页
Acinetobocter baumannfi (A. Baumannii) is an emerging opportunistic pathogen responsible for hospital-acquired infections, and which now constitutes a sufficiently serious threat to public health to necessitate the ... Acinetobocter baumannfi (A. Baumannii) is an emerging opportunistic pathogen responsible for hospital-acquired infections, and which now constitutes a sufficiently serious threat to public health to necessitate the development of an effective vaccine. In this study, a recombinant fused protein named OmpK/Omp22 and two individual proteins OmpK and Omp22 were obtained using recombinant expression and Ni-affinity purification. Groups of BALB/c mice were immunized with these proteins and challenged with a clinically isolated strain of A. boumonnii. The bacterial load in the blood, pathological changes in the lung tissue and survival rates after challenge were evaluated. Mice immunized with OmpK/Omp22 fused protein provided significantly greater protection against A. boumonnfi challenge than those immunized with either of the two proteins individually. The results provide novel clues for future design of vaccines against A. boumonnii. 展开更多
关键词 Evaluation of the Protective Efficacy of a fused OmpK/Omp22 protein Vaccine Candidate against Acinetobacter baumannii Infection in Mice
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Fused-core particle technology in high-performance liquid chromatography: An overview 被引量:6
2
作者 Joseph J.Kirkland Stephanie A.Schuster +1 位作者 William L.Johnson Barry E.Boyes 《Journal of Pharmaceutical Analysis》 SCIE CAS 2013年第5期303-312,共10页
The advent of superficially porous particles (SPPs) for packed HPLC columns has changed the way that many practitioners have approached the problem of developing needed separations. The very high efficiency of such ... The advent of superficially porous particles (SPPs) for packed HPLC columns has changed the way that many practitioners have approached the problem of developing needed separations. The very high efficiency of such columns, combined with convenient operating conditions, modest back pressures and the ability to use conventional HPLC instruments has resulted in intense basic studies of SPP technology, and widespread applications in many sciences. This report contains an overview of the SPP technology first developed in 2006 by Advanced Materials Technology, Inc., for sub-3-11m particles, then expanded into a family of SPP products with different particle sizes, pore sizes and other physical parameters. This approach was designed so that each particle of the family could be optimized for separating a particular group of compounds, usually based on solute size. 展开更多
关键词 Superfcially porous particles fused-core particles Core–shell particles PEPTIDES proteinS Drug separations
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丹参酮ⅡA诱导NB4细胞分化与PML-RARα融合蛋白的关系 被引量:5
3
作者 郭庆寅 伍学强 刘玉峰 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期15-20,共6页
背景与目的:目前研究证实丹参酮ⅡA(TanⅡA)对白血病细胞具有抑制增殖、诱导分化和促凋亡的作用,但其具体作用机制尚不明确。本实验旨在研究TanⅡA与全反式维甲酸(all-tram retinoid,ATRA)及三氧化二砷(As2O3)诱导NB4细胞分化在细胞形... 背景与目的:目前研究证实丹参酮ⅡA(TanⅡA)对白血病细胞具有抑制增殖、诱导分化和促凋亡的作用,但其具体作用机制尚不明确。本实验旨在研究TanⅡA与全反式维甲酸(all-tram retinoid,ATRA)及三氧化二砷(As2O3)诱导NB4细胞分化在细胞形态学、免疫表型和对PML-RARα融合基因及其蛋白影响的比较。方法:采用免疫荧光法观察NB4细胞内PML蛋白,Western blot检测PML-RARα融合蛋白,实时定量PCR方法检测PML-RARαmRNA;同时计算细胞生长抑制率,观察细胞形态学、免疫表型的变化。结果:TanⅡA能抑制NB4细胞生长,诱导分化,使NB4细胞PML蛋白异常分布重新定位、NBs结构恢复、PML-RARα融合蛋白降解。结论:降解PML-RARα融合蛋白可能是TanⅡA诱导NB4细胞分化的机制。 展开更多
关键词 丹参酮ⅡA NB4细胞 细胞分化 pml-rarΑ融合蛋白
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丹参酮ⅡA诱导NB_4细胞分化凋亡与PML-RARα融合蛋白的关系 被引量:2
4
作者 黄纯兰 羊裔明 +3 位作者 刘志刚 孟文彤 邓承祺 刘霆 《实用癌症杂志》 2004年第2期123-126,共4页
目的 探讨丹参酮ⅡA (TanⅡA )诱导NB4细胞分化和凋亡过程中PML RARα融合蛋白变化及其与细胞分化、凋亡的关系。方法 采用免疫荧光法检测PML RARα融合蛋白的变化 ;同时计算细胞生长抑制率 ,观察细胞形态学变化 ,进行NBT还原实验 ,... 目的 探讨丹参酮ⅡA (TanⅡA )诱导NB4细胞分化和凋亡过程中PML RARα融合蛋白变化及其与细胞分化、凋亡的关系。方法 采用免疫荧光法检测PML RARα融合蛋白的变化 ;同时计算细胞生长抑制率 ,观察细胞形态学变化 ,进行NBT还原实验 ,采用流式细胞术检测细胞凋亡和分析细胞周期。结果 TanⅡA能减少NB4细胞中微小荧光颗粒数 ,恢复NBs大斑点荧光颗粒 ,作用 72h后颗粒数减少最明显 ;同时 ,TanⅡA能提高细胞生长抑制率、诱导分化 ,增强NBT还原能力和提高凋亡细胞比率 ,降低细胞增殖指数 ,作用 12 0h后细胞分化和凋亡作用最强。结论 PML 展开更多
关键词 丹参酮ⅡA NB4细胞 细胞分化 细胞凋亡 pml-rarΑ融合蛋白 免疫荧光法 流式细胞术
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蛋白药降免疫原性改造策略
5
作者 李庆斯 包准 +1 位作者 周晓 张雷 《石油化工》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1196-1204,共9页
蛋白药是一种生物活性大分子,可高效治疗多种疾病,近年来在生物医疗领域受到了广泛关注。然而,由于免疫原性的问题,蛋白药很容易被患者的免疫系统快速清除。因此,降低免疫原性对于蛋白药的发展至关重要。讨论了影响免疫原性的主要因素... 蛋白药是一种生物活性大分子,可高效治疗多种疾病,近年来在生物医疗领域受到了广泛关注。然而,由于免疫原性的问题,蛋白药很容易被患者的免疫系统快速清除。因此,降低免疫原性对于蛋白药的发展至关重要。讨论了影响免疫原性的主要因素以揭示其背后的机制;综述了多种降免疫原性的策略,包括聚乙二醇化、两性离子化、糖基化以及蛋白质融合等;对未来蛋白药的发展趋势进行了展望。 展开更多
关键词 蛋白药 免疫原性 两性离子材料 融合蛋白
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pWX146-β-半乳糖苷酶融合蛋白表达载体的构建及对疟原虫基因的表达 被引量:6
6
作者 王萍 李明 +2 位作者 谢毅 殷明 李英杰 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 1999年第1期12-17,共6页
本文根据抗原分子特性,用限制性内切酶HpaⅠ和EcoRⅠ及三对XhoⅠ-EcoRⅠ接头,对β-半乳糖苷酶融合蛋白表达载体pWR450进行了改建,截去其β-半乳糖苷酶C端约300个氨基酸的编码序列,构建了一组含β-半乳... 本文根据抗原分子特性,用限制性内切酶HpaⅠ和EcoRⅠ及三对XhoⅠ-EcoRⅠ接头,对β-半乳糖苷酶融合蛋白表达载体pWR450进行了改建,截去其β-半乳糖苷酶C端约300个氨基酸的编码序列,构建了一组含β-半乳糖苷酶N端146个氨基酸编码序列的pWX146融合蛋白表达载体,以pWX146-Ⅰ作为载体。 展开更多
关键词 融合蛋白 表达载体 疟原虫
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融合基因研究进展 被引量:11
7
作者 武东亮 郭三堆 《生物技术通报》 CAS CSCD 2001年第2期5-7,共3页
基因融合是生物技术领域大有发展前景的一类方法 ,其理论和实践意义重大。总结了融合基因的概念、分类及应用。
关键词 融合基因 融合蛋白 基因表达 研究进展
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HCV复合多表位抗原基因的克隆表达及其免疫学特性分析 被引量:5
8
作者 韦三华 尹文 +5 位作者 胡兴斌 雷迎峰 杨敬 吕欣 孙梦宁 徐志凯 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期652-655,共4页
目的构建丙型肝病炎病毒(HCV)截短C基因和多表位基因重组原核表达质粒,表达纯化融合蛋白,分析其免疫原性和抗原性。方法PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段Ct;合成HCVE2区模拟表位与NS3~NS57个表位基因Em;分别将Ct、Em... 目的构建丙型肝病炎病毒(HCV)截短C基因和多表位基因重组原核表达质粒,表达纯化融合蛋白,分析其免疫原性和抗原性。方法PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段Ct;合成HCVE2区模拟表位与NS3~NS57个表位基因Em;分别将Ct、Em克隆人原核表达质粒pQE30,筛选阳性重组质粒pQE30-CtEm,转化E.coli M15,IPTG诱导融合蛋白表达,薄层扫描分析表达蛋白;可溶性分析后用Ni^2+-NTA凝胶亲和层析柱纯化、透析并浓缩融合蛋白;Westernblot分析纯化蛋白的特异性和抗原性;纯蛋白免疫小鼠后分析其免疫原性。结果成功构建了HCV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pQE30-CtEm,目的基因可高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,Ni^2+-NTA纯化可获得目的蛋白,纯化蛋白具有良好的抗原性和免疫原性。结论HCV复合多表位抗原基因融合蛋白可高效表达并得到纯化,该融合蛋白可作为HCV诊断抗原,也为丙型肝炎新型疫苗的研究提供了靶抗原。 展开更多
关键词 丙肝肝炎病毒 融合蛋白 原核表达 疫苗
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汉滩病毒结构蛋白昆虫细胞融合表达产物的免疫原性评价 被引量:3
9
作者 罗雯 徐志凯 +5 位作者 张芳琳 阎岩 吴兴安 刘勇 白文涛 王海涛 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期411-413,417,共4页
目的 研究汉滩病毒 (HTNV)囊膜糖蛋白G1与核蛋白 (NP)部分片段在昆虫细胞中融合表达产物的免疫学特性 ,为HTNV基因工程疫苗的研制提供依据。方法 构建含有HTNVG1S0 .7嵌合基因的重组杆状病毒Bac G1S0 .7,用其感染的Sf9细胞免疫Balb c... 目的 研究汉滩病毒 (HTNV)囊膜糖蛋白G1与核蛋白 (NP)部分片段在昆虫细胞中融合表达产物的免疫学特性 ,为HTNV基因工程疫苗的研制提供依据。方法 构建含有HTNVG1S0 .7嵌合基因的重组杆状病毒Bac G1S0 .7,用其感染的Sf9细胞免疫Balb c小鼠。用间接免疫荧光法、ELISA法、微量细胞培养中和试验及T淋巴细胞增殖试验对被免疫小鼠的体液免疫及细胞免疫应答效果进行检测。结果 Bac G1S0 .7感染的昆虫细胞免疫小鼠后 ,测得免疫鼠血清抗HTNV抗体滴度最高达 1∶3 2 0 0 ,含有特异性抗HTNVNP及抗HTNV糖蛋白G1的抗体 ,被免疫小鼠中有部分产生了较低滴度的中和抗体 ,免疫鼠脾细胞对HTNVNP或糖蛋白的增殖反应指数均高于阴性对照组。结论 G1S0 .7嵌合基因的昆虫细胞表达产物具有较好的免疫原性 。 展开更多
关键词 汉滩病毒 结构蛋白 融合表达 免疫原性 肾综合征出血热
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人B7-2和增强型绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建 被引量:3
10
作者 路静 杨洪艳 +3 位作者 赵军 黄幼田 赵国强 董子明 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第7期19-20,共2页
目的 构建含人B7- 2与增强型绿色荧光蛋白融合基因表达载体p EGFP- N3- B7- 2。方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)方法从重症肌无力患者胸腺组织中扩增到人B7- 2 c DNA基因片段,经回收、纯化、酶切后,依次连接到质粒p GEM- Teasy... 目的 构建含人B7- 2与增强型绿色荧光蛋白融合基因表达载体p EGFP- N3- B7- 2。方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)方法从重症肌无力患者胸腺组织中扩增到人B7- 2 c DNA基因片段,经回收、纯化、酶切后,依次连接到质粒p GEM- Teasy和p EGFP- N3上。结果 通过酶切和序列分析证实插入片段序列正确。结论 应用基因工程技术构建成功p EGFP- N3- B7- 2融合基因表达载体,为增强型绿色荧光蛋白作为人B7- 2生物标记分子,转染肿瘤细胞及树突状细胞制备疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 B7-2 融合基因 增强型绿色荧光蛋白 表达载体 基因表达 肿瘤细胞
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一株分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞的鉴定 被引量:7
11
作者 张敬梅 余为一 +1 位作者 李林 张春玲 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第27期12955-12956,12983,共3页
[目的]应用杂交瘤技术获得稳定分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]先将原核表达产物His-PoIFN-γ免疫BALB/c小鼠4次,然后进行细胞融合,再以纯化的GST-PoIFN-γ作为包被抗原,用间接ELISA筛选阳性杂交瘤无性系,最终获得... [目的]应用杂交瘤技术获得稳定分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]先将原核表达产物His-PoIFN-γ免疫BALB/c小鼠4次,然后进行细胞融合,再以纯化的GST-PoIFN-γ作为包被抗原,用间接ELISA筛选阳性杂交瘤无性系,最终获得能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对其进行间接ELISA和Western blot检测。[结果]试验获得1株能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,被命名为B3株,经间接ELISA和Western blot检测,该株分泌的抗体能与融合蛋白His-PoIFN-γ和GST-PoIFN-γ发生特异性反应,而与其他表达鸡γ-干扰素、His和GST蛋白等的重组质粒均不发生反应。B3株分泌的抗体小鼠腹水的ELISA效价达到1∶160 000,抗体亚型为IgG1型,且轻链为κ链。[结论]该研究为建立猪γ-干扰素检测方法,研究机体的免疫状态及免疫机制提供了技术基础。 展开更多
关键词 猪Γ-干扰素 融合蛋白 单克隆抗体 制备 鉴定
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AtPCS1基因的原核表达及多抗血清的制备 被引量:2
12
作者 王鸣刚 赵宏 +2 位作者 刘左军 吴亦亮 陈亮 《兰州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期37-40,共4页
利用RT-PCR扩增拟南芥螯合肽合成酶(AtPCS1)基因全序列,构建原核表达载体pET28a- AtPCS1并测序.将该载体转化大肠杆菌BL21,用0.75 mmol/LIPTG诱导融合蛋白AtPCS1-His的表达,纯化该融合蛋白.用纯化的融合蛋白免疫小鼠,ELISA法测定抗血清... 利用RT-PCR扩增拟南芥螯合肽合成酶(AtPCS1)基因全序列,构建原核表达载体pET28a- AtPCS1并测序.将该载体转化大肠杆菌BL21,用0.75 mmol/LIPTG诱导融合蛋白AtPCS1-His的表达,纯化该融合蛋白.用纯化的融合蛋白免疫小鼠,ELISA法测定抗血清的效价可达1:2 000.抗血清与融合蛋白及拟南芥总蛋白的western-blot结果表明:制备的抗血清具有较高的活性和特异性. 展开更多
关键词 植物螯合肽合成酶 原核表达 融合蛋白 抗血清
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应用乙肝核心抗原增强肌肉抑制素免疫原性的研究 被引量:1
13
作者 马毅 陈小强 +4 位作者 王文杰 李晴 关宏 安晓荣 陈永福 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期197-200,共4页
为提高肌肉抑制素(Myostatin,MSTN)免疫原性,进行了乙肝核心抗原(HBcAg)作为分子佐剂可能性的研究。利用PCR方法获得了MSTN的C端片段,并分别在乙肝核心抗原的N端、C端及中间位点融合,构建了3个融合表达克隆:pET-30a-MSTN/HBcAg(N)、pET-... 为提高肌肉抑制素(Myostatin,MSTN)免疫原性,进行了乙肝核心抗原(HBcAg)作为分子佐剂可能性的研究。利用PCR方法获得了MSTN的C端片段,并分别在乙肝核心抗原的N端、C端及中间位点融合,构建了3个融合表达克隆:pET-30a-MSTN/HBcAg(N)、pET-30a-MSTN/HBcAg(C)和pET-30a-MSTN/HBcAg(M),转化大肠杆菌后IPTG诱导表达,然后利用Ni2+亲和层析纯化融合蛋白。应用重组蛋白免疫小鼠后利用间接ELISA法检测抗血清效价。结果表明:融合蛋白免疫效果要显著优于MSTN(P<0.05);融合蛋白MSTN/HBcAg(M)的免疫效果最佳。乙肝核心抗原可以作为分子佐剂以增强肌肉抑制素免疫原性。 展开更多
关键词 肌肉抑制素 乙肝核心抗原 融合蛋白 免疫原性
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人釉原蛋白基因在大肠杆菌中的融合表达 被引量:1
14
作者 张雪洋 赵华 +2 位作者 赵红宇 王春先 章锦才 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期27-30,共4页
目的建立人釉原蛋白(AMG)成熟肽基因在大肠杆菌中融合表达和纯化的技术路线。方法利用已构建并经鉴定的重组质粒pGEX-4T-1/AMG转化大肠杆菌BL21,分别对诱导时间、异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)浓度和诱导温度进行优化,在最佳诱导表达... 目的建立人釉原蛋白(AMG)成熟肽基因在大肠杆菌中融合表达和纯化的技术路线。方法利用已构建并经鉴定的重组质粒pGEX-4T-1/AMG转化大肠杆菌BL21,分别对诱导时间、异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)浓度和诱导温度进行优化,在最佳诱导表达条件下,分别对菌液上清、周质、胞质和包涵体中的目的蛋白表达进行分析,在可溶性蛋白中发现大量目的蛋白,随后利用GSTrapFF亲和层析柱进行人AMG融合蛋白的过柱纯化。结果pGEX-4T-1/AMG重组质粒的双酶切凝胶电泳鉴定结果和测序鉴定结果和预期一致。最佳诱导时间为14.5h、最佳诱导剂浓度为1.0mmol/L、最佳诱导温度为20℃,在此条件下目的蛋白的表达量达到峰值。在最佳诱导条件下,胞质蛋白和包涵体中都有大量的目的蛋白。提取大量胞质蛋白,经GSTrapFF亲和层析柱纯化,收集纯化液,进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,显示成功纯化了AMG融合蛋白,在提取液洗涤2次后,可获得高纯度的融合蛋白。结论利用pGEX-4T-1/AMG原核表达体系成功获得纯化的人AMG融合蛋白。 展开更多
关键词 人釉原蛋白 融合蛋白 纯化
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乙型肝炎病毒截短C基因与前S1基因在大肠杆菌中的融合表达及纯化 被引量:2
15
作者 胡兴斌 尹文 +5 位作者 韦三华 雷迎峰 吕欣 孙梦宁 杨敬 徐志凯 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第1期49-52,共4页
目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)截短C基因和前S1基因重组原核表达质粒,获得融合蛋白的表达并进行抗原性分析.方法:PCR扩增获得截短C基因片段和前S1基因,双酶切后克隆至原核表达质粒pET28a,转化E.coliDH5α,酶切鉴定得阳性重组质粒pET28a并... 目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)截短C基因和前S1基因重组原核表达质粒,获得融合蛋白的表达并进行抗原性分析.方法:PCR扩增获得截短C基因片段和前S1基因,双酶切后克隆至原核表达质粒pET28a,转化E.coliDH5α,酶切鉴定得阳性重组质粒pET28a并测序;然后转化E.coliBL21,IPTG诱导融合蛋白表达,薄层扫描分析表达蛋白组成;可溶性分析后用Ni2+-NTA凝胶亲和层析柱纯化、透析并浓缩融合蛋白,WesternBlot分析特异性和抗原性.结果:成功构建了HBV截短C基因和前S1基因融合的原核表达质粒pET28a-Ct-preS1,目的基因可高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,Ni2+-NTA纯化可获得目的蛋白,纯化蛋白具有良好的抗原性和特异性.结论:HBV截短HBcAg和preS1抗原融合蛋白可高效表达并得到纯化,为研究新型乙肝疫苗奠定了基础. 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 融合蛋白 原核表达 疫苗
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ctB和ure I双基因融合表达及其免疫特性分析 被引量:8
16
作者 王保宁 杨晓芳 +4 位作者 施桥发 李明远 陈翠萍 曹康 李虹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期276-279,共4页
目的构建霍乱毒素B亚单位(CtB)和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(UreI)融合的原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,并初步研究融合蛋白CtB/UreI的表达特性和免疫特性。方法PCR从pUC18ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a(+)/ureI的ureI基因5′端插入ct... 目的构建霍乱毒素B亚单位(CtB)和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(UreI)融合的原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,并初步研究融合蛋白CtB/UreI的表达特性和免疫特性。方法PCR从pUC18ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a(+)/ureI的ureI基因5′端插入ctB基因,构建ctB和ureI双基因原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,转该质粒于E.coliBL-21(DE3),经酶切和序列分析鉴定工程菌。IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-ProAnalizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠。用Westernblot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性。结果工程菌含完整的ctB和ureI基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%。在22℃,1mmol/LIPTG诱导4h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%。Westernblot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体。结论成功构建了能表达CtB/UreI蛋白的大肠杆菌表达菌株。对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和UreI的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 霍乱毒素B亚单位 尿素膜通道蛋白 融合表达 免疫特性
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胞浆转导肽介导抑癌基因NPRL2对肾癌细胞凋亡及Bax-Caspase3凋亡通路的影响 被引量:4
17
作者 叶茂 唐伟 +2 位作者 常启跃 罗琦 梁思敏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1101-1107,共7页
目的:证实胞浆转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)介导抑癌基因NPRL2以CTP-NPRL2融合蛋白形式对人肾癌细胞株786-O的作用,检测其诱导的肾癌细胞凋亡及其对Bax-Caspase3凋亡通路的影响。方法:构建重组质粒p ET28aCTP-NPRL2和p... 目的:证实胞浆转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)介导抑癌基因NPRL2以CTP-NPRL2融合蛋白形式对人肾癌细胞株786-O的作用,检测其诱导的肾癌细胞凋亡及其对Bax-Caspase3凋亡通路的影响。方法:构建重组质粒p ET28aCTP-NPRL2和p ET28a-NPRL2并转染大肠杆菌DH5α,从而得到原核表达体系用于CTP-NPRL2融合蛋白及NPRL2蛋白的表达和提取;Western blot验证CTP-NPRL2蛋白和NPRL2蛋白的表达;将肾癌786-O细胞分为2组,分别与等量的NPRL2蛋白和CTP-NPRL2蛋白共培养,采用免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜检测2种蛋白在肾癌细胞786-O的亚细胞定位情况;将在96孔板培养的786-O细胞分为5组,其中4组分别用1.0μmol/L CTP-NPRL2蛋白、2.0μmol/L CTP-NPRL2蛋白、4.0μmol/L CTP-NPRL2蛋白、4.0μmol/L NRPL2蛋白处理,剩余1组为对照组;MTT法检测各组786-O细胞增殖的情况;流式细胞仪分析各组细胞周期和细胞凋亡情况;real-time PCR、Western blot检测各组786-O细胞中Bax和Caspase-3在m RNA及蛋白水平的表达情况。结果:质粒测序结果显示成功构建所需的原核表达载体;Western blot结果显示CTP-NPRL2融合蛋白在原核表达载体中有表达。激光共聚焦显微镜结果提示CTP-NPRL2蛋白导入786-O细胞后定位于胞浆;MTT发现CTP-NPRL2组细胞增殖较NPRL2组及空白对照组受到明显的抑制(P<0.05);流式细胞分析显示,相对于空白对照组和NPRL2组,CTP-NPRL2组的凋亡率显著增高且处于G0/G1期细胞明显增多(P<0.05)。real-time PCR和Western blot结果提示,与空白对照组和NPRL2组比较,CTP-NPRL2组Bax和Caspase-3在m RNA和蛋白质水平的表达均明显上调(P<0.05)。结论:CTP介导抑癌基因NRPL2以CTP-NPRL2融合蛋白形式导入肾癌786-O细胞中并对其有明显的抑制作用,可能通过影响Bax-Caspase3凋亡通路的活性,抑制786-O细胞的增殖,并诱导其凋亡将细胞周期阻滞于G0/G1期,从而发挥抑癌作用。 展开更多
关键词 CTP-NPRL2融合蛋白 肾细胞癌 Bax-Caspase3凋亡通路
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靶向IL18-EGF融合蛋白的表达及其体外抗肿瘤活性研究 被引量:2
18
作者 吕建新 王震 +1 位作者 何剪太 张阳德 《科技通报》 北大核心 2009年第2期183-190,201,共9页
人白介素-18(human interleukin 18,hIL18)基因与表皮生长因子受体干扰序列(EGF loop Csequence,EGF)构建IL18-EGF融合基因,利用pET32a/E.coli BL21(DE3)表达IL18-EGF融合基因,通过纯化获得有活性的靶向的IL18-EGF融合蛋白,并进行体外... 人白介素-18(human interleukin 18,hIL18)基因与表皮生长因子受体干扰序列(EGF loop Csequence,EGF)构建IL18-EGF融合基因,利用pET32a/E.coli BL21(DE3)表达IL18-EGF融合基因,通过纯化获得有活性的靶向的IL18-EGF融合蛋白,并进行体外细胞试验评价IL18-EGF融合蛋白的抗肿瘤活性。结果表明IL18-EGF融合蛋白能促进人PBMNC的增殖,诱导KG-1细胞分泌IFN-γ、促进肿瘤抗原诱导的B细胞、NK及其CD4+T细胞的活化。 展开更多
关键词 IL18-EGF 表达 肿瘤 靶向
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HCVCE2融合蛋白在家蚕培养细胞、蚕幼虫中的表达及其初步应用 被引量:2
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作者 王克霞 汪雪峰 +1 位作者 彭江龙 梁勇 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第9期792-795,共4页
目的:高效表达HCVCE2融合蛋白并进行初步应用.方法:将2a型HCV全长CE2基因的cDNA重组于质粒pBacPAK8,构建重组转移载体pBacPAK CE2,与经线性化修饰的家蚕核型多角体病毒(BmNPV)DNA共转染家蚕培养细胞株,构建重组病毒.双酶切及PCR鉴定重... 目的:高效表达HCVCE2融合蛋白并进行初步应用.方法:将2a型HCV全长CE2基因的cDNA重组于质粒pBacPAK8,构建重组转移载体pBacPAK CE2,与经线性化修饰的家蚕核型多角体病毒(BmNPV)DNA共转染家蚕培养细胞株,构建重组病毒.双酶切及PCR鉴定重组病毒基因组中目的片段的表达.重组病毒感染BmN细胞株及五龄家蚕幼虫后,SDS PAGE分析细胞培养上清、细胞抽提物及幼虫体液样品中,HCVCE2融合蛋白的特异性条带.并用间接ELISA法初步检测表达产物的生物活性.结果:双酶切及PCR鉴定重组病毒基因组含有约1.6kb的目的片段,重组病毒感染后的BmN细胞培养上清、细胞抽提物及幼虫体液样品中,均可见一Mr约90×103的特异性条带;用间接ELISA检测证明表达产物具有较好的免疫原性.结论:HCVCE2融合基因在家蚕培养细胞及蚕幼虫中获得了高效表达,并具有生物活性,为进一步进行疫苗的研究及临床诊断试剂的开发奠定基础. 展开更多
关键词 肝炎病毒 CE2融合蛋白质类 重组杆状病毒 细胞 培养的 幼虫
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甲型流感病毒M2e与CtB基因融合表达及其免疫特性初步研究 被引量:1
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作者 杨晓芳 江滟 +4 位作者 李婉宜 邝玉 蒋忠华 王丰平 李明远 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期263-266,共4页
目的:构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB,并初步研究其在NIH3T3细胞中的表达特性及免疫特性。方法:重叠PCR法扩增甲型流感病毒M2e基因和霍乱毒素CtB基因,将扩增得到的融合基因片段M2e-CtB定向克隆入真核表达载体pcDNA 3.1a(+)... 目的:构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB,并初步研究其在NIH3T3细胞中的表达特性及免疫特性。方法:重叠PCR法扩增甲型流感病毒M2e基因和霍乱毒素CtB基因,将扩增得到的融合基因片段M2e-CtB定向克隆入真核表达载体pcDNA 3.1a(+)中,再转化E.coli JM109。将酶切鉴定、PCR扩增及序列鉴定正确的重组质粒命名为pcDNA3.1a(+)-M2e/CtB。用KEGEN TRANSⅢ阳离子聚合物将重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB转染NIH3T3细胞,经免疫荧光、RT-PCR产物序列分析、Western blot检测其稳定表达产物。结果:重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB含完整的M2e和CtB基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%。重组质粒转染NIH3T3细胞后获得了有效表达,并且稳筛株细胞裂解物和上清均能用抗霍乱毒素抗体和抗流感病毒抗体检测到Mr约18000的蛋白条带。结论:成功构建了真核表达重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB,初步证明其在体外表达的重组蛋白可分泌至胞外,且有M2e和CTB的双特异反应原性和免疫原性,为流感病毒核酸疫苗的进一步研究奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 M2e 黏膜免疫佐剂 霍乱毒素B亚单位 融合蛋白
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