期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到84篇文章
< 1 2 … 5 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
脯氨酰寡肽酶促进口蹄疫病毒在PK15细胞中的复制
1
作者 王姿逸 茹毅 +9 位作者 卢炳州 杨洋 赵陇和 李亚军 李建斌 李明桂 马坤 冷非凡 郝荣增 郑海学 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4593-4603,共11页
本研究旨在探究宿主蛋白脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase,POP)在PK15细胞中对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)复制的影响。首先利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)分析FMDV感染P... 本研究旨在探究宿主蛋白脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase,POP)在PK15细胞中对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)复制的影响。首先利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)分析FMDV感染PK15细胞后POP蛋白的表达变化。进一步构建POP真核表达质粒,通过病毒半数细胞感染量(TCID50)、Western blot和RT-qPCR检测过表达POP对FMDV复制的影响;合成针对POP基因的特异性siRNA,利用TCID50、Western blot和RT-qPCR检测siRNA对POP表达的干扰效果及POP被干扰后对FMDV复制的影响。结果表明,FMDV感染PK15细胞后对宿主细胞POP的mRNA和蛋白表达均没有显著影响,而过表达POP能显著促进FMDV在PK15细胞中复制水平,并且病毒复制水平随着POP的剂量递增呈现剂量依赖式增加;siRNA-S112显著下调内源性POP表达,进而显著抑制FMDV的复制。本研究首先在宿主细胞水平揭示了POP蛋白对FMDV复制的影响,证明POP对FMDV复制具有显著的促进作用,研究结果为进一步探究POP促进FMDV的复制及作用机制提供了基础。 展开更多
关键词 脯氨酰寡肽酶 口蹄疫病毒 病毒复制 pk15细胞
在线阅读 下载PDF
稳定表达脯氨酰寡肽酶基因的PK15细胞系的建立及其对口蹄疫病毒增殖的影响
2
作者 王姿逸 茹毅 +9 位作者 卢炳州 杨洋 赵陇和 李亚军 李建斌 李明桂 马坤 冷非凡 郝荣增 郑海学 《微生物学报》 北大核心 2025年第10期4458-4471,共14页
【目的】利用PiggyBac转座子系统构建稳定表达脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase, POP)基因的猪肾PK15细胞系,并系统评估POP蛋白表达对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)增殖的影响。【方法】构建重组表达质粒,转染PK15... 【目的】利用PiggyBac转座子系统构建稳定表达脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase, POP)基因的猪肾PK15细胞系,并系统评估POP蛋白表达对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)增殖的影响。【方法】构建重组表达质粒,转染PK15细胞后通过Western blotting检测目的蛋白表达;采用有限稀释法筛选获得稳定表达POP的单克隆细胞系,并利用RT-qPCR和Western blotting检测POP基因和蛋白表达的稳定性;通过Cell Counting Kit-8试验评估筛选细胞系的细胞活力;综合运用Western blotting、RT-qPCR以及病毒滴度测定等方法,系统分析FMDV在稳定表达细胞系中的复制。【结果】成功构建了稳定表达POP蛋白的PK15单克隆细胞系;与对照细胞系相比,该细胞系的细胞活力无显著差异;单克隆细胞系传至P30代时,POP蛋白表达水平保持稳定;接种病毒实验结果显示,FMDV在稳定表达POP的PK15细胞系中的增殖水平显著高于对照组,并在不同代次细胞系中保持稳定。【结论】本研究成功构建了稳定表达POP蛋白的PK15细胞系,并证实该细胞系可显著促进FMDV的复制,为进一步解析POP蛋白促进FMDV复制的分子机制提供了实验材料。 展开更多
关键词 脯氨酰寡肽酶(POP) PiggyBac转座子系统 pk15细胞 病毒增殖
原文传递
稳定表达猪源CD163蛋白PK15细胞系的构建及评价
3
作者 赵清扬 张晓晓 郭春和 《中国农业科学》 北大核心 2025年第11期2253-2264,共12页
【背景】CD163是一种重要的跨膜蛋白,在宿主免疫调节、炎症反应及多种病原感染过程中发挥关键作用。研究表明,CD163作为宿主受体,不仅影响细胞信号通路,还调控宿主对外来病原体的易感性。由于CD163参与的受体-病原相互作用机制尚未完全... 【背景】CD163是一种重要的跨膜蛋白,在宿主免疫调节、炎症反应及多种病原感染过程中发挥关键作用。研究表明,CD163作为宿主受体,不仅影响细胞信号通路,还调控宿主对外来病原体的易感性。由于CD163参与的受体-病原相互作用机制尚未完全阐明,建立稳定表达CD163的细胞模型对于相关研究具有重要意义。猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是研究CD163介导的病毒侵入机制的重要模型之一。然而,PRRSV的主要靶细胞——猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)在体外无法长期增殖,限制了其在病原学研究中的应用。因此,通常采用猴源细胞系MARC-145进行PRRSV体外培养,但其非猪源特性可能影响实验结果的生物学相关性。【目的】通过构建一株稳定表达猪CD163蛋白的猪源细胞系,并验证其对PRRSV感染的敏感性。【方法】研究于2022年6月至2023年11月在岭南现代农业科学与技术广东省实验室开展,克隆了猪CD163基因,并采用两种策略尝试在猪肾细胞系(PK15)中表达该基因。首先,尝试使用重组质粒瞬时转染,但由于PK15细胞瞬时转染效率较低,未能获得稳定表达的细胞系。为优化表达策略,进一步采用慢病毒载体介导基因转导,并筛选稳定细胞系。本研究利用293T细胞进行慢病毒包装,并将所得病毒转导至PK15细胞,随后使用嘌呤霉素筛选阳性克隆,以确保外源基因的稳定整合和长期表达。通过RT-qPCR和Western blot检测CD163的mRNA和蛋白表达水平,并进一步进行传代试验评估CD163表达的稳定性,以确保细胞系的长期应用价值。【结果】成功构建了带有CD163基因的重组慢病毒载体,并通过慢病毒转染技术获得了稳定表达CD163的PK15细胞系,命名为PK15-CD163。RT-qPCR和Western blot结果表明,PK15-CD163细胞系中CD163 mRNA和蛋白表达量显著高于正常PK15细胞,且在多代传代后仍能保持稳定表达。然而,PRRSV感染试验结果表明,无论是RT-qPCR还是Western blot均未检测到PRRSV N蛋白的表达,提示PRRSV在该细胞系中的复制可能受到某些限制。【结论】成功构建了PK15-CD163细胞系,为进一步研究CD163在宿主细胞生物学中的作用提供了重要的实验工具。尽管PRRSV在PK15-CD163细胞中的感染未取得明显效果,但该细胞系仍可用于探索CD163介导的免疫调控、细胞受体功能及其他病原感染机制研究,并为抗病毒药物筛选提供潜在的平台。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 CD163 慢病毒载体 pk15
在线阅读 下载PDF
猪流行性腹泻病毒感染PK15细胞的转录组学分析
4
作者 曲艺 秦达 余丽芸 《黑龙江八一农垦大学学报》 2025年第5期73-80,共8页
猪流行性腹泻病毒感染会导致新生仔猪严重腹泻、呕吐和脱水,平均死亡率高达80%,给养猪业带来巨大经济损失和危害。为探究先天免疫如何影响PEDV复制,首先对PEDV CV777毒株MOI=1分别感染PK15细胞24 h和48 h的差异表达基因(Differentially ... 猪流行性腹泻病毒感染会导致新生仔猪严重腹泻、呕吐和脱水,平均死亡率高达80%,给养猪业带来巨大经济损失和危害。为探究先天免疫如何影响PEDV复制,首先对PEDV CV777毒株MOI=1分别感染PK15细胞24 h和48 h的差异表达基因(Differentially expressed gene,DEGs)进行GO功能分析(Gene ontology,GO)和KEGG途径富集分析(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG),并选择部分DEGs进行RT-qPCR验证。转录组学结果显示,与正常未感染的PK15细胞相比,PKp24组存在1 798个差异基因,GO分子功能结果显示,主要与生物过程调控、对刺激的反应、免疫反应等有关;KEGG富集显示,DEGs主要涉及细胞因子与因子受体结合通路、PI3K-Akt信号通路、趋化因子信号通路等。PK-p48组存在3 970个差异基因,GO分子功能结果显示,主要与信号转导、对刺激的反应、免疫反应、炎症反应等有关;KEGG富集显示,DEGs主要涉及PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、细胞因子与因子受体结合通路等。进一步将PK-p24与PK-p48两组DEGs进行筛选和统计,发现有773个共同差异基因,其中有3个差异基因(CCL8、PRKN、FGL2),同时富集在先天免疫反应、对刺激的反应、炎症反应、宿主对病毒基因组复制等生物功能。利用RT-qPCR进行验证3个共同的差异基因,其结果与转录组学结果基本一致。分析结果阐明PK15细胞感染PEDV CV777 MOI=1后,可能通过调控CCL8、PRKN、FGL2转录水平的变化来抑制病毒的复制,增强先天免疫反应。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 转录组分析 差异表达 先天免疫 pk15细胞
在线阅读 下载PDF
PK15细胞凋亡过程中角蛋白中间纤维的变化 被引量：7
5
作者 陈丹英 高云飞 +1 位作者 李丽霞 翟中和 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期58-63,共6页
用放线菌素D诱导上皮型猪肾细胞PK15 (PorcrneKidney 15 )发生凋亡。细胞在凋亡诱导过程中经历了从铺展、皱缩变圆至脱落的形态变化。凝胶电泳证明被诱导细胞的DNA发生降解 ,形成明显的DNAladder。免疫荧光显示凋亡过程中细胞角蛋白网... 用放线菌素D诱导上皮型猪肾细胞PK15 (PorcrneKidney 15 )发生凋亡。细胞在凋亡诱导过程中经历了从铺展、皱缩变圆至脱落的形态变化。凝胶电泳证明被诱导细胞的DNA发生降解 ,形成明显的DNAladder。免疫荧光显示凋亡过程中细胞角蛋白网状结构发生改变 ;应用选择性抽提结合整装电镜技术 ,观察到凋亡细胞中仍有中间纤维网络存在 ,这一现象前人未曾报道。免疫印迹反应进一步证明 ,凋亡细胞中部分Ⅱ型角蛋白发生降解 。 展开更多
关键词 猪 猪肾细胞 pk15 角蛋白 中间纤维 放线菌素D 细胞凋亡
在线阅读 下载PDF
适合猪圆环病毒2生长的PK15均质细胞株的构建 被引量：5
6
作者 罗维 赵墩 +1 位作者 蒋大良 余兴龙 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期404-408,共5页
为筛选出PCV2培养滴度最高的PK15细胞克隆株,采用稀释法从PK15混合细胞中分离单细胞克隆株,获得的细胞克隆用于接毒试验,即用同步接种法将猪圆环病毒2(PCV2)病毒细胞混合液以1∶100的比例接种单克隆细胞,接毒后经PCR与定量PCR检测得出A1... 为筛选出PCV2培养滴度最高的PK15细胞克隆株,采用稀释法从PK15混合细胞中分离单细胞克隆株,获得的细胞克隆用于接毒试验,即用同步接种法将猪圆环病毒2(PCV2)病毒细胞混合液以1∶100的比例接种单克隆细胞,接毒后经PCR与定量PCR检测得出A10细胞克隆培养PCV2,获得的病毒含量最高。将A10细胞进行第2轮细胞克隆,之后用同步接种法和异步接种法将PCV2感染A10细胞,并检测A10细胞接毒后的PCV2 DNA含量,2种接毒方法获得的最高PCV2基因组的拷贝数分别为3.0×109、6.2×109/mL,高于用PK15混合细胞培养PCV2所获得的最高PCV2基因组拷贝数(107/mL)。综合以上结果,构建的PK15均质细胞克隆株比PK15混合细胞更适合PCV2的培养。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2(PCV2) pk15细胞 细胞克隆 定量PCR 同步接毒 异步接毒
在线阅读 下载PDF
3种介导猪NR2F2基因转染PK15细胞方法的比较研究 被引量：5
7
作者 张万锋 黑伟 +8 位作者 何志强 刘敏 孟珊 高鹏飞 蔡春波 杨阳 郭晓红 曹果清 李步高 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第5期1352-1359,共8页
试验旨在研究3种转染方法对猪肾上皮细胞(PK15)的转染效率,为以PK15细胞为模型研究外源基因的功能提供参考。本研究以PK15细胞为研究对象,用脂质体、电穿孔、慢病毒3种转染方法转染后,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,采用实时荧... 试验旨在研究3种转染方法对猪肾上皮细胞(PK15)的转染效率,为以PK15细胞为模型研究外源基因的功能提供参考。本研究以PK15细胞为研究对象,用脂质体、电穿孔、慢病毒3种转染方法转染后,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,采用实时荧光定量PCR检测EGFP和NR2F2基因的表达情况,采用CCK-8检测细胞存活率,进而比较3种方法的转染效果。结果显示,转染PK15细胞后,电穿孔和慢病毒方法转染效率极显著高于脂质体(P<0.01),但电穿孔方法和慢病毒方法之间差异不显著(P>0.05);EGFP和NR2F2基因的实时荧光定量PCR结果显示慢病毒方法效果最好,脂质体方法较差,与细胞转染效率基本一致;CCK-8结果显示,电穿孔转染后细胞存活率最低,极显著低于对照组(P<0.01),脂质体方法显著低于对照组(P<0.05),慢病毒方法与对照组间差异不显著(P>0.05)。综合考虑转染效率及细胞活性,本研究认为慢病毒转染方法最适合转染PK15细胞,为今后高效转染PK15细胞提供了理想的方法。 展开更多
关键词 pk15细胞 NR2F2基因 脂质体转染 电穿孔转染 慢病毒转染
在线阅读 下载PDF
逆转录病毒载体介导的T7RNA聚合酶在猪源细胞PK15及SK6中的稳定表达 被引量：3
8
作者 吴锦艳 田宏 +4 位作者 郑海学 陈妍 靳野 尚佑军 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期527-532,共6页
本研究旨在利用逆转录病毒载体系统将T7RNA聚合酶基因导入猪源细胞,并对该基因的遗传稳定性进行分析。作者克隆并构建含T7RNA聚合酶基因的逆转录病毒重组载体pBABEpuro/T7。将pBABEpuro/T7与水泡性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞... 本研究旨在利用逆转录病毒载体系统将T7RNA聚合酶基因导入猪源细胞,并对该基因的遗传稳定性进行分析。作者克隆并构建含T7RNA聚合酶基因的逆转录病毒重组载体pBABEpuro/T7。将pBABEpuro/T7与水泡性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获重组病毒并用该病毒在Polybrene的介导下分别感染PK15和SK6细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。对此阳性细胞进行传代,并对不同代次细胞中的T7RNA聚合酶基因进行扩增,确定其遗传稳定性。用直接荧光法和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测细胞中T7RNA聚合酶基因的表达及其活性。结果表明T7RNA聚合酶能够被稳定地整合进靶细胞基因组内,细胞系内的T7RNA聚合酶具有较好的转录活性,其活性传代不减弱。免疫荧光检测发现所表达的T7RNAP蛋白具有良好的反应原性。本研究表明T7RNA聚合酶基因稳定整合进猪源细胞,该基因的稳定整合为建立高效体内病毒拯救系统提供了良好的工具。 展开更多
关键词 T7RNA聚合酶基因 逆转录病毒载体 pk15细胞 SK6细胞 稳定表达
在线阅读 下载PDF
猪圆环病毒Ⅱ型Rep基因在PK15细胞中的表达及特性 被引量：7
9
作者 申会刚 周继勇 +4 位作者 陈庆新 郭军庆 陈婷飞 商绍彬 李增魁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期244-246,329,共4页
为研究猪圆环病毒型(PCV2)Rep基因在PK15细胞中的表达特性,通过PCR方法克隆了PCV2杭州株(HZ0201)Rep基因全长945bp片段,与真核表达载体pCI-neo构建为重组质粒pCI-PCV2-Rep。pCI-PCV2-Rep质粒转染PK15细胞后48h,通过RT-PCR可检测到PCV2Re... 为研究猪圆环病毒型(PCV2)Rep基因在PK15细胞中的表达特性,通过PCR方法克隆了PCV2杭州株(HZ0201)Rep基因全长945bp片段,与真核表达载体pCI-neo构建为重组质粒pCI-PCV2-Rep。pCI-PCV2-Rep质粒转染PK15细胞后48h,通过RT-PCR可检测到PCV2RepmRNA的转录;用猪PCV2多抗血清作间接免疫荧光试验,可检测到Rep基因表达产物。在表达量低的细胞中,PCV2Rep蛋白主要位于PK15的细胞浆,在表达量高的细胞中,细胞浆和细胞核中均含有大量的Rep蛋白,表明Rep对PK15细胞的细胞浆和细胞核的亲嗜性没有明显差别。 展开更多
关键词 pk15细胞 猪圆环病毒Ⅱ型 REP 间接免疫荧光试验 PCV2 RT-PCR 基因表达产物 PCR方法 表达特性 重组质粒 真核表达 质粒转染 mRNA 表达量 细胞核 neo pCI 抗血清 胞浆 检测 蛋白 全长
在线阅读 下载PDF
猪传染性胃肠炎病毒感染PK15细胞抗病毒相关因子转录变化分析 被引量：2
10
作者 胡晓亮 刘家森 +4 位作者 田进 姜骞 郭东春 曲娟娟 曲连东 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期22-27,共6页
为研究猪传染性胃肠炎病毒感染与固有免疫之间关系,研究构建含有巴马猪IFN-α1,IFN-β和NF-κB启动子的报告基因载体,将转染上述报告基因的PK15细胞接种TGEV和灭活TGEV后发现,与灭活TGEV相比,TGEV能够诱导IFN-α1、IFN-β和NF-κB报告... 为研究猪传染性胃肠炎病毒感染与固有免疫之间关系,研究构建含有巴马猪IFN-α1,IFN-β和NF-κB启动子的报告基因载体,将转染上述报告基因的PK15细胞接种TGEV和灭活TGEV后发现,与灭活TGEV相比,TGEV能够诱导IFN-α1、IFN-β和NF-κB报告基因低水平表达;其次,利用荧光定量RT-PCR方法检测接种病毒0、2、6和10 h后PK15细胞中IFN-α1、IFN-β、IL6、TNF-α、ISG56和IRF7转录量,结果表明,TGEV对IL6转录没有影响,而诱导IFN-α1、IFN-β、TNF-α、ISG56和IRF7低水平转录,分别为对照组1.49、1.5、2.2、2.5和1.8倍。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎 细胞因子 pk15细胞 转录时相
在线阅读 下载PDF
黑曲霉β-甘露聚糖酶基因manA在PK15细胞中的分泌表达 被引量：2
11
作者 邹娴 张茂 +5 位作者 许惠 林纯 贺晓燕 刘德武 蔡更元 吴珍芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期192-197,共6页
通过RT-PCR方法,从黑曲霉总RNA中克隆出β-甘露聚糖酶基因manA的成熟肽编码序列。将其与猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽序列通过重叠延伸PCR方法得到拼接片段,并插入到真核表达载体pcD-NA6.0/HisTMA中,得... 通过RT-PCR方法,从黑曲霉总RNA中克隆出β-甘露聚糖酶基因manA的成熟肽编码序列。将其与猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽序列通过重叠延伸PCR方法得到拼接片段,并插入到真核表达载体pcD-NA6.0/HisTMA中,得到重组质粒pcDNA-PSmanA。重组质粒经过PCR、酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且读码框完全正确。在脂质体介导下将pcDNA-PSmanA转染猪肾(PK15)细胞进行分泌表达,通过RT-PCR方法证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中检测酶活性得到β-甘露聚糖酶基因酶活性为14.5 IU/mL。 展开更多
关键词 黑曲霉 Β-甘露聚糖酶 重叠延伸PCR pk15细胞
在线阅读 下载PDF
猪传染性胃肠炎病毒在PK15和ST细胞上的增殖特性比较 被引量：7
12
作者 苏万国 唐永兰 +1 位作者 邹勇 钱永清 《上海畜牧兽医通讯》 北大核心 2000年第3期40-40,共1页
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 pk15细胞 ST细胞 增殖特性
在线阅读 下载PDF
杆状病毒介导猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白在PK15细胞中的表达与鉴定 被引量：2
13
作者 呼高伟 余婉婷 +6 位作者 朱哲 王占锋 邹亚文 王乃东 王爱兵 邓治邦 杨毅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期701-706,共6页
以pFastBac I为载体骨架,通过PCR从pcDNA3.3-TOPO载体引入巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV3.3)强启动子及不同功能调控元件,构建成含有双启动子,能在PK15细胞(porcine kidney cell)中表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent... 以pFastBac I为载体骨架,通过PCR从pcDNA3.3-TOPO载体引入巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV3.3)强启动子及不同功能调控元件,构建成含有双启动子,能在PK15细胞(porcine kidney cell)中表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)的昆虫杆状病毒转移(穿梭)载体pFastBac I-CMV3.3-eGFP。收获重组杆状病毒,侵染PK15细胞。倒置荧光显微镜下验证该重组转移载体构建成功,根据荧光水平筛选出重组杆状病毒侵染PK15细胞的最佳MOI(multiplicity of infection)和最佳表达强度时间。另将PRRSV(porcine reproductive and respiratory syndrome virus)GP5蛋白基因克隆到pFastBac I-CMV3.3载体。获得的重组杆状病毒以MOI=100侵染PK15细胞48h后收获细胞产物。Western blot鉴定目的蛋白的表达。结果表明,成功构建了重组杆状病毒介导PRRSV GP5蛋白在PK15细胞表达系统。因此,建立的重组杆状病毒在PK15细胞中高效表达GP5蛋白的方法,将为研究PRRSV吸附机制,GP5蛋白与宿主细胞互作蛋白的筛选和针对PRRSV基因工程疫苗的开发奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 重组杆状病毒表达系统 猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白GP5 pk15细胞 WESTERN BLOT
原文传递
PK15细胞cDNA T7噬菌体展示文库的构建及鉴定 被引量：1
14
作者 王国栋 邓小芸 刘书梅 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1372-1376,共5页
【目的】构建PK15细胞cDNAT7噬菌体展示文库，为研究猪源病毒与宿主细胞的相互作用奠定基础。【方法】分离纯化PK15细胞mRNA，先后合成第一链和第二链cDNA，经平末端修饰后，定向导入EcoR Ⅰ和HindⅢ接头，再由EcoRⅠ和HindⅢ双酶切消... 【目的】构建PK15细胞cDNAT7噬菌体展示文库，为研究猪源病毒与宿主细胞的相互作用奠定基础。【方法】分离纯化PK15细胞mRNA，先后合成第一链和第二链cDNA，经平末端修饰后，定向导入EcoR Ⅰ和HindⅢ接头，再由EcoRⅠ和HindⅢ双酶切消化，与噬菌体载体臂相连，然后用噬菌体包装抽提物进行体外包装，形成初级cDNAT7噬菌体展示文库，并通过滴度测定和PCR鉴定文库质量。【结果】经噬斑试验鉴定，初级文库滴度为2．0×10^5PFU／mL，扩增后滴度达6．0×10^10PFU／mL。PCR鉴定结果显示，文库的重组率为95．83％，且插入片段主要分布于500-2000bp，其中500～750bp的占21．73％，750～100bp的占21．73％，1000-2000bp的占39．13％。随机挑选20个克隆进行测序，发现均为猪源序列。【结论】构建的PK15细胞cDNAT7噬菌体展示文库具备较高库容量和重组率，质量良好，符合后续文库筛选的要求，可用于研究猪源病毒蛋白与PK15细胞的相互作用。 展开更多
关键词 pk15细胞 CDNA T7噬菌体展示文库 构建 鉴定
在线阅读 下载PDF
miR-20a在pk15细胞的过表达及其对炎症细胞因子的影响 被引量：1
15
作者 汪亮 庞宇 +3 位作者 韩丽鑫 王金奎 刘娣 杨秀芹 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期316-321,336,共7页
炎症反应是机体应对外界刺激的自我保护机制,近年发现一些miRNA与机体的炎症因子存在相互调控关系,试验利用人工合成的miR-20a模拟物及抑制剂,建立了脂质体转染最佳体系,检测了miR-20a在pk15细胞中对炎症因子的调节作用。结果表明:60 pm... 炎症反应是机体应对外界刺激的自我保护机制,近年发现一些miRNA与机体的炎症因子存在相互调控关系,试验利用人工合成的miR-20a模拟物及抑制剂,建立了脂质体转染最佳体系,检测了miR-20a在pk15细胞中对炎症因子的调节作用。结果表明:60 pmol/μL和80 pmol/μL为最佳转染浓度,36 h为最佳转染时间,抑制miR-20a的表达会显著提高干扰素和白细胞介素的表达(P<0.05)。这一结果揭示了miR-20a在机体免疫过程中对炎症反应起到负调控作用,在一定程度上可以预防过度炎症反应的发生。 展开更多
关键词 miR-20a 细胞因子 pk15细胞
原文传递
不同培养基对PK15细胞增殖影响的研究 被引量：3
16
作者 付世新 李晓龙 +1 位作者 王长远 刘国文 《黑龙江八一农垦大学学报》 2004年第1期62-64,共3页
采用无血清液体培养基、DMEM培养基和MEM培养基进行PK15细胞的培养,观察细胞增殖及传代效果,确定无血清液体培养基的营养功能。结果表明:无血清液体培养基只能维持第一代细胞的生长,不能用于第二代后的培养,效果不如DMEM、MEM培养基,且... 采用无血清液体培养基、DMEM培养基和MEM培养基进行PK15细胞的培养,观察细胞增殖及传代效果,确定无血清液体培养基的营养功能。结果表明:无血清液体培养基只能维持第一代细胞的生长,不能用于第二代后的培养,效果不如DMEM、MEM培养基,且差异显著。 展开更多
关键词 培养基 pk15细胞 增殖 营养 猪传代肾细胞
在线阅读 下载PDF
铜对猪传代肾细胞(PK15)增殖的影响 被引量：3
17
作者 付世新 罗春海 刘海瑞 《黑龙江八一农垦大学学报》 2008年第2期47-50,共4页
为了解铜对猪肾细胞增殖和代谢的影响,了解铜促生长机理,采用猪传代肾细胞PK15,在培养液中添加不同铜水平对PK15细胞进行体外培养,计算了PK15细胞的增殖率和3H-TdR掺入率。结果表明PK15细胞对铜刺激敏感,铜可有效促进PK15细胞增殖,铜添... 为了解铜对猪肾细胞增殖和代谢的影响,了解铜促生长机理,采用猪传代肾细胞PK15,在培养液中添加不同铜水平对PK15细胞进行体外培养,计算了PK15细胞的增殖率和3H-TdR掺入率。结果表明PK15细胞对铜刺激敏感,铜可有效促进PK15细胞增殖,铜添加组细胞增殖率和3H-TdR掺入率显著,高于对照组(p<0.05),且以培养液中添加31.2μmol.L-1Cu PK15细胞的增殖作用最强。 展开更多
关键词 铜:pk15细胞 细胞增殖
在线阅读 下载PDF
不同种属H1启动子驱动miR-1在PK15细胞中的表达情况
18
作者 郭晓萍 陈时锦 +4 位作者 蒋钦杨 杨秀荣 郭亚芬 黄建芳 兰干球 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2020-2025,共6页
【目的】筛选出能高效表达外源性成熟miR-1的真核表达载体,为揭示miR-1参与猪肌肉发育及肉质性状形成的分子机制奠定基础。【方法】分别克隆巴马小型猪miR-1前体序列、H1启动子序列及人类H1启动子序列,并构建不同种属H1启动子驱动其表... 【目的】筛选出能高效表达外源性成熟miR-1的真核表达载体,为揭示miR-1参与猪肌肉发育及肉质性状形成的分子机制奠定基础。【方法】分别克隆巴马小型猪miR-1前体序列、H1启动子序列及人类H1启动子序列,并构建不同种属H1启动子驱动其表达的真核表达载体,利用脂质体法转染PK15细胞后,采用荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测不同种属H1启动子表达载体驱动miR-1表达效率。【结果】经酶切鉴定和测序分析证实,成功构建了3个miR-1过表达载体(pEGFP-miR-1、pEGFP-hH1-miR-1和pEGFP-pH1-miR-1),以其转染PK15细胞24和48 h后,荧光显微镜观察发现绝大部分细胞都发出绿色荧光,且含有H1启动子细胞的荧光强于无H1启动子细胞。转染pEGFP-pH1-miR-1细胞、转染pEGFP-hH1-miR-1细胞、转染pEGFP-miR-1细胞的miR-1相对表达量分别为105.02、99.00和79.65,其miR-1表达水平均极显著高于转染pEGFP-C 1细胞和空白对照组细胞(P<0.01)。【结论】重组质粒pEGFP-miR-1、pEGFP-hH1-miR-1和pEGFP-pH1-miR-1均能在PK15细胞中高效表达miR-1,即猪源与人源的H1启动子均能提高外源性miR-1表达,可用于后续的miR-1功能研究。 展开更多
关键词 巴马小型猪 H1启动子 MIR-1 pk15细胞 真核表达载体
在线阅读 下载PDF
NR2F2基因调控猪PK15细胞增殖和凋亡的研究
19
作者 张万锋 赵天枝 +7 位作者 李娇 尤紫薇 杨阳 蔡春波 高鹏飞 曹果清 郭晓红 李步高 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3242-3251,共10页
旨在探究NR2F2基因对猪PK15细胞增殖和凋亡的影响。本研究在猪PK15细胞中过表达NR2F2基因,通过qRT-PCR、Western blot、CCK-8、EdU、流式细胞术、划痕试验等方法检测了过表达NR2F2基因对细胞增殖的影响;采用CO-IP技术验证NR2F2与Smad4... 旨在探究NR2F2基因对猪PK15细胞增殖和凋亡的影响。本研究在猪PK15细胞中过表达NR2F2基因,通过qRT-PCR、Western blot、CCK-8、EdU、流式细胞术、划痕试验等方法检测了过表达NR2F2基因对细胞增殖的影响;采用CO-IP技术验证NR2F2与Smad4蛋白结合能力;用qRT-PCR方法检测了NR2F2基因对Smad 4基因表达以及下游基因Cyclin B、CDK1、CDK4、Cyclin D 1表达的影响;挽救试验过表达NR2F2基因且干扰Smad 4基因检测下游基因及增殖基因Ki67、PCNA的表达。结果发现,过表达NR2F2基因极显著上调了Ki 67基因的表达(P<0.01),显著上调了PCNA的表达(P<0.05),促进了细胞周期的进程,抑制了细胞凋亡,促进了细胞的增殖。CO-IP结果证明了NR2F2与Smad4蛋白物理性结合,且发现过表达NR2F2基因后,Smad 4基因表达显著上升(P<0.01),Smad 4基因调控的下游基因Cyclin B、CDK1、CDK4、Cyclin D 1表达显著升高(P<0.01);干扰NR2F2基因后,Smad 4基因表达显著下降(P<0.01),Smad 4基因调控的下游基因表达显著降低(P<0.01)。挽救试验发现,过表达NR2F2基因后,干扰Smad 4基因的表达,能显著降低Cyclin D1、Cyclin B、CDK 1以及Ki67、PCNA的表达(P<0.01,P<0.05)。本研究结果表明,过表达NR2F2基因后促进了细胞的增殖,抑制凋亡,且NR2F2蛋白能与Smad4蛋白结合并影响Smad 4基因的表达,进而影响下游基因的表达。 展开更多
关键词 NR2F2基因 Smad 4基因 细胞增殖 pk15细胞
在线阅读 下载PDF
类猪圆环病毒P1诱导PK15细胞自噬的研究
20
作者 温立斌 王凤芝 +2 位作者 何孔旺 解建平 贾化生 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第B12期85-88,共4页
旨在探讨类猪圆环病毒P1感染对PK15细胞自噬的影响。将同一批PK15细胞分成对照组和感染组,感染组在类猪圆环病毒P1感染PK15细胞后14,24,48 h分别收集细胞,对照组也在同样时间收获,用透射电镜观察自噬现象的发生。结果表明,与对照组相比... 旨在探讨类猪圆环病毒P1感染对PK15细胞自噬的影响。将同一批PK15细胞分成对照组和感染组,感染组在类猪圆环病毒P1感染PK15细胞后14,24,48 h分别收集细胞,对照组也在同样时间收获,用透射电镜观察自噬现象的发生。结果表明,与对照组相比,感染组PK15细胞内出现典型自噬形态学变化。揭示类猪圆环病毒P1能诱导PK15细胞发生自噬,但细胞发生自噬的相关信号传导通路还有待进一步研究。 展开更多
关键词 类猪圆环病毒P1 pk15细胞 自噬
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 5 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部