70株猪链球菌的分离鉴定和毒力基因检测及耐药性分析

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作者 韦文飞 袁朝原 +5 位作者 李雪珍 农爱红 易雪丽 言天久 黄婵娟 黄伟坚 《动物医学进展》 北大核心 2025年第10期56-62,共7页

为了解广西百色市猪源猪链球菌流行分布、菌株携带毒力基因及对常用抗菌药物耐药情况,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对分离自广西百色市辖12个县(市、区)农村散养的366份健康生猪扁桃体样品的猪链球菌进行鉴定,以聚合酶链反应(P... 为了解广西百色市猪源猪链球菌流行分布、菌株携带毒力基因及对常用抗菌药物耐药情况,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对分离自广西百色市辖12个县(市、区)农村散养的366份健康生猪扁桃体样品的猪链球菌进行鉴定,以聚合酶链反应(PCR)对菌株携带毒力基因进行检测,并用微量肉汤稀释法对菌株开展常用抗菌药物耐药性分析。结果显示,共有70株分离株被鉴定为猪链球菌,样品携菌率为19.1%,检出阳性样品主要以右江河为中轴线聚集分布,并与县域生猪调运流通量呈正相关关系。70株猪链球菌的优势毒力基因型以fbps、gapdh、orf2为主,其中有4株全部携带fbps、gapdh、orf2、mrp、sly、cps2J等6种毒力基因,辖区各县(市、区)分离株毒力基因型分布略有差异。70株分离株对红霉素和克林霉素耐药最高,均为94.3%,其次为四环素耐药(92.3%),对头孢曲松耐药性最低(2.8%);分离株整体耐药情况严重,62株表现为多重耐药,占比88.6%,其中34株为三重耐药,12株四重耐药,11株五重耐药,5株六重耐药;菌株流行的耐药谱型为克林霉素、红霉素和四环素三重耐药。研究结果为临床科学用药对猪链球菌病进行预防和治疗,促进养猪业的健康发展具有参考意义。 展开更多

关键词 猪链球菌 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 毒力基因 聚合酶链反应 耐药

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PCR-核酸飞行时间质谱系统检测新型冠状病毒方法的建立及应用研究 被引量：15

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作者 王俊 张栋 +4 位作者 陈晴晴 俞俊岭 杨奕 乔亮 孙永 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2020年第35期4430-4435,4442,共7页

背景新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在全球暴发,实验室检测结果是疾病诊断的重要依据,检测方法的灵敏度和特异度是影响实验结果的关键因素,现实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)核酸检测方法是COVID-19确诊的通用方法,但其检测灵敏度有方法局限... 背景新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在全球暴发,实验室检测结果是疾病诊断的重要依据,检测方法的灵敏度和特异度是影响实验结果的关键因素,现实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)核酸检测方法是COVID-19确诊的通用方法,但其检测灵敏度有方法局限性,依赖标本病毒含量。通过对PCR-核酸飞行时间质谱检测方法的优化,从而提高对低新型冠状病毒(SARS-CoV-2)含量病例检测的灵敏度,可为现有方法做有效补充。目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)原理,在Clin-ToFⅡ飞行时间质谱系统上,建立PCR-核酸飞行时间质谱(PCR-TOF MS)系统检测SARS-CoV-2的方法,并评估其实际应用价值。方法2020年2—3月于上海市临床检验中心室间质评阳性样本40份、阴性样本7份,国家卫生健康委员会室间质评阳性样本41份、阴性样本33份,本实验室购买阳性质粒及稀释样本32份,健康人样本28份,空白对照超纯水5份,共186份样本作为建立PCR-TOF MS系统数据。于2020年1—2月收集安徽省内临床送检到安徽省疾病预防控制中心的疑似COVID-19患者上呼吸道样本80份(咽拭子样本55份、痰液样本25份)及健康人群样本20份(均为咽拭子样本)作为评估PCR-TOF MS系统效果的数据。建立PCR-TOF MS系统试验体系步骤,包括PCR扩增、虾碱性磷酸酶(SAP)消化、单碱基延伸和质谱检测;并基于阳性质粒优化模版量,根据186份样本检测质谱峰的信噪比(SNP)确定该方法在SARS-CoV-2检测时的判读标准。对80份疑似SARS-CoV-2样本和20份健康人群样本进行检测分析,并与实时荧光定量PCR法进行对比。结果通过对PCR-TOF MS模板条件的优化,模版量6μl时,扩增产物可获得典型的质谱峰图。建立的PCR-TOF MS反应体系可以对SARS-CoV-2核酸的开放读码框1ab(ORF1ab)基因和核壳蛋白(N)基因进行有效扩增检测。本研究PCR-TOF MS方法对临床疑似病例样本的检出率为90.00%,高于实时荧光定量PCR法的75.00%,同时,结果显示,实时荧光定量PCR法检出中含有25.00%的可疑结果,而PCR-TOF MS则无可疑结果。对于痰液和咽拭子两种样本的检出率,PCR-TOF MS法分别为100.00%和85.45%,高于荧光定量PCR法的64.00%和43.64%。阴性样本两种方法均未检出。结论通过PCR技术与飞行时间质谱技术的结合,使得检测SARS-CoV-2目标片段指数级扩大,从而提高样本的检测灵敏度。MALDI-TOF MS技术通过对离子分子量的检测分析,具有较高的准确性和特异性,同时证实了痰液样本优于咽拭子样本。该方法可作为实时荧光定量PCR法的补充和协同,在一定程度上有利于弥补假阴性的问题,从而降低临床漏诊率,提高检测效率,为疫情的研判缩短时间。 展开更多

关键词 新型冠状病毒肺炎 新型冠状病毒 PCR-飞行质谱系统 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 核酸检测

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副溶血弧菌检测方法研究进展 被引量：5

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作者 李红娜 袁飞 +3 位作者 周伟娥 罗云敬 张峰 李绍辉 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期371-374,共4页

副溶血弧菌是海产品中常见致病菌,可引起恶心、呕吐、腹痛、腹泻等疾病。由于我国是海产品消费大国,所以必须建立快速、准确、灵敏的方法监测海产品中的副溶血弧菌。目前主要应用分子生物学方法和分析化学方法,从细胞水平和分子水平来... 副溶血弧菌是海产品中常见致病菌,可引起恶心、呕吐、腹痛、腹泻等疾病。由于我国是海产品消费大国,所以必须建立快速、准确、灵敏的方法监测海产品中的副溶血弧菌。目前主要应用分子生物学方法和分析化学方法,从细胞水平和分子水平来检测副溶血弧菌,主要包括实时荧光定量PCR和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF MS),这两种方法可以对副溶血弧菌进行准确定性和定量,是检测食品中副溶血弧菌的快速、特异、灵敏的方法,可用来评估和监管海产品污染副溶血弧菌的风险,保证人们的饮食安全。 展开更多

关键词 食品安全 副溶血弧菌 实时荧光定量聚合酶链式反应 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱

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一株人血源猪链球菌的分离鉴定与毒力基因检测 被引量：11

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作者 吕燕宁 李洁 +3 位作者 杜轶威 黎新宇 王全意 陈丽娟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期599-603,共5页

目的对北京某医院就诊的一例疑似人感染猪链球菌病患者的血液来源菌株进行鉴定与毒力因子检测分析。方法将患者血液分离菌株接种哥伦比亚血琼脂平板,经革兰氏染色镜检、血清凝集试验、VITEK 2Compact微生物分析仪以及基质辅助激光解析... 目的对北京某医院就诊的一例疑似人感染猪链球菌病患者的血液来源菌株进行鉴定与毒力因子检测分析。方法将患者血液分离菌株接种哥伦比亚血琼脂平板,经革兰氏染色镜检、血清凝集试验、VITEK 2Compact微生物分析仪以及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测后,再用PCR技术检测猪链球菌种特异性基因(16S rRNA)和猪链球菌2型特异性荚膜多糖编码基因(cps2J)以及多个毒力基因:溶菌酶释放相关蛋白(mrp)、溶血素(sly)、细胞外蛋白因子(ef)、谷氨酸脱氢酶(gdh)、纤粘连蛋白结合蛋白(fbps)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh)的编码基因和毒力相关基因orf2。结果传统细菌鉴定方法和蛋白质谱技术以及核酸检测方法将这株患者血源性细菌分离株鉴定为猪链球菌2型,该菌株的毒力基因cps2J、sly、ef、gdh、fbps、gapdh和orf2的PCR检测均为阳性,mrp基因为阴性。结论该株人血源细菌分离株为猪链球菌2型sly+/ef+/mrp强毒株。 展开更多

关键词 猪链球菌 VITEK MALDI-TOF-MS 毒力基因 聚合酶链反应

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一起不明原因群体性肺部感染的病原体分离及鉴定 被引量：1

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作者 石一 张义 +9 位作者 张铮 史伟 马国柱 刘长宏 雷金娥 马琳 曹磊 张志成 刘峰 刘东立 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期57-60,共4页

目的调查了解一起不明原因群体性肺部感染的病原菌。方法通过流行病学分析,运用荧光定量PCR、ELISA、胶体金、VITEK2生化鉴定以及MALDI-TOF-MS飞行时间质谱技术对可疑菌进行鉴定,并将分离到的可疑菌与病例血清进行凝集试验。结果从环境... 目的调查了解一起不明原因群体性肺部感染的病原菌。方法通过流行病学分析,运用荧光定量PCR、ELISA、胶体金、VITEK2生化鉴定以及MALDI-TOF-MS飞行时间质谱技术对可疑菌进行鉴定,并将分离到的可疑菌与病例血清进行凝集试验。结果从环境标本中分离到2株浅白隐球菌,并与病例血清发生特异性凝集。结论此次肺部感染可能与浅白色隐球菌感染有关。 展开更多

关键词 肺炎 浅白隐球菌 PCR MALDI-TOF-MS 血清凝集

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3种方法对鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌的鉴定 被引量：3

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作者 康琳 高姗 +5 位作者 周阳 辛文文 杨浩 方瑶 毛旭虎 王景林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1205-1209,共5页

目的用3种检测方法对同源性较高的鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌进行鉴定,比较该3种检测方法的鉴定效果。方法分别利用基于MALDI-TOF-MS的蛋白指纹图谱方法、双重荧光定量PCR方法和16S rRNA基因序列分析方法对5株鼻疽伯克霍尔... 目的用3种检测方法对同源性较高的鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌进行鉴定,比较该3种检测方法的鉴定效果。方法分别利用基于MALDI-TOF-MS的蛋白指纹图谱方法、双重荧光定量PCR方法和16S rRNA基因序列分析方法对5株鼻疽伯克霍尔德菌和5株类鼻疽伯克霍尔德菌进行鉴定,综合判断鉴定结果,并与传统的形态学和生化鉴定结果比较,寻找更适合于该两种菌的鉴定方法。结果在10株受试菌株中,2株排除是鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌的可能,剩余8株之中,MALDI-TOF-MS方法正确鉴定了6株,双重荧光定量PCR方法正确鉴定了8株,16S rRNA基因序列分析方法正确鉴定4株。结论 MALDI-TOF-MS的蛋白指纹图谱方法和双重荧光定量PCR方法对鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌具有很好的鉴定能力,16S rRNA基因序列分析方法不适合用于该2种菌的鉴定。 展开更多

关键词 鼻疽伯克霍尔德菌 类鼻疽伯克霍尔德菌 MALDI-TOF-MS FQ-PCR 16S RRNA基因序列分析

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NM23-H1、DJ1和TIM1在低分化鼻咽鳞癌组织和CNE2细胞株中共同表达 被引量：5

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作者 冯雪萍 陈主初 +10 位作者 肖志强 杨海燕 诸葛勤 朱果 杨轶轩 李明 李萃 李茂玉 李峰 张鹏飞 肖健云 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期338-346,共9页

鼻咽癌为一种好发于鼻咽项前壁及咽隐窝的头颈肿瘤,98%属低分化鳞癌.鼻咽癌就诊的患者中约75%已有颈淋巴结转移,颅神经受累(Ⅱ～Ⅵ,Ⅸ～Ⅻ)也较易发生.CNE2为一种低分化鼻咽鳞癌细胞系,其生物学行为具有低分化鼻咽鳞癌的一些共同特点.... 鼻咽癌为一种好发于鼻咽项前壁及咽隐窝的头颈肿瘤,98%属低分化鳞癌.鼻咽癌就诊的患者中约75%已有颈淋巴结转移,颅神经受累(Ⅱ～Ⅵ,Ⅸ～Ⅻ)也较易发生.CNE2为一种低分化鼻咽鳞癌细胞系,其生物学行为具有低分化鼻咽鳞癌的一些共同特点.选择恶性程度高的鼻咽癌组织(Ⅳ期,低分化鼻咽鳞癌)和恶性程度高的低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2为研究样本,应用双向凝胶电泳技术获得了6例分辨率较高、重复性较好的低分化鼻咽鳞癌组织和CNE2细胞系双向凝胶电泳图谱,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,分析了145个蛋白质斑点(组织66个点,细胞株79个点),共鉴定出了74种蛋白质,其中瘤基因DJ1、转移相关基因NM23-H1和磷酸丙糖激酶异构酶1(TIM1)3种蛋白质,在CNE2细胞系和该6例低分化鼻咽鳞癌组织中均共同表达.并进一步应用RT-PCR法检测低分化鼻咽鳞癌细胞系CNE2和12例低分化鼻咽鳞癌组织三者mRNA的表达:在细胞系CNE2和3例Ⅳ期低分化鼻咽鳞癌病人的组织中三者全表达,3例Ⅲ期及6例Ⅱ期也各有1例为全表达,而在正常对照的6例慢性鼻咽炎组织中未检测到三者的同时表达且有一例为全阴性,NM23-H1、DJ1和TIM1三者的mRNA在Ⅲ、Ⅳ期低分化鼻咽鳞癌组织共同表达,与正常对照组织相比,发现两者有显著性差异(x2=10.214,P<0.005).NM23-H1、DJ1和TIM1三者的共同表达,可能与低分化鼻咽鳞癌的发生发展有关. 展开更多

关键词 低分化鼻咽鳞癌 2-DE MALDI—TOF—MS 蛋白质组 RT—PCR

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检测胎儿弯曲菌三种亚种的多重PCR方法建立及初步应用 被引量：1

8

作者 侯水平 周勇 +5 位作者 和鹏 陶霞 王安娜 胡玉山 吴新伟 张晶 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1094-1100,共7页

目的 建立一种检测胎儿弯曲菌胎儿亚种、性病亚种和龟亚种的多重PCR检测方法。方法 使用针对胎儿弯曲菌、性病亚种和龟亚种的特异性引物,优化反应体系及反应条件,使用38株菌株(18株胎儿弯曲菌和20株非胎儿弯曲菌)验证其特异性,并将该方... 目的 建立一种检测胎儿弯曲菌胎儿亚种、性病亚种和龟亚种的多重PCR检测方法。方法 使用针对胎儿弯曲菌、性病亚种和龟亚种的特异性引物,优化反应体系及反应条件,使用38株菌株(18株胎儿弯曲菌和20株非胎儿弯曲菌)验证其特异性,并将该方法应用于53份爬行动物粪便筛查。结果 针对3种亚种均可扩增相应的片段,胎儿亚种只有1条359 bp大小的条带、性病亚种有2条分别为359 bp和156 bp大小的条带,龟亚种有2条分别为359 bp和266 bp大小的条带。优化后的最佳扩增条件:退火温度58℃,引物MG3f和Cf359r浓度为0.1μmol/L,ISC2mf和ISC2mr、CoA266f和CoA266r的浓度0.2μmol/L。对胎儿亚种、性病亚种和龟亚种的检出限分别为0.40 ng/μL、0.39 ng/μL和0.47 ng/μL。使用18株胎儿弯曲菌和20株非胎儿弯曲菌其特异性为100%。对53份爬行动物粪便进行筛查中有1份龟亚种阳性并分离出了相应的菌株。结论 本研究建立的多重PCR方法能利用1个反应体系同时鉴别3种亚种,从而为菌株快速鉴定、流行病学调查和溯源研究提供技术支持。 展开更多

关键词 胎儿弯曲菌 多重PCR 检测方法 飞行时间质谱

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长双歧杆菌NCC2705葡萄糖与果糖代谢的比较蛋白质组学 被引量：3

9

作者 孙忠科 卜歆 +5 位作者 何湘 姜铮 王芳 赵红庆 刘大伟 袁静 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1401-1406,共6页

为揭示长双歧杆菌NCC2705(Bifidobacterium longum NCC2705)果糖代谢途径,建立其果糖发酵模型。以本实验室前期构建的长双歧杆菌NCC2705菌株蛋白质参考图谱为基础,进行了果糖和葡萄糖生长的菌体比较蛋白质组学研究,利用MALDI-TOF和ESI-M... 为揭示长双歧杆菌NCC2705(Bifidobacterium longum NCC2705)果糖代谢途径,建立其果糖发酵模型。以本实验室前期构建的长双歧杆菌NCC2705菌株蛋白质参考图谱为基础,进行了果糖和葡萄糖生长的菌体比较蛋白质组学研究,利用MALDI-TOF和ESI-MS/MS鉴定差异蛋白,进一步通过半定量RT-PCR验证二者显著差异表达蛋白。果糖生长的菌体蛋白中鉴定到了所有葡萄糖降解途径中的酶和蛋白质,另外鉴定到3倍以上差异蛋白点9个,其对应的5个蛋白在果糖发酵中上调。半定量RT-PCR验证显著差异蛋白,显示在果糖发酵中具有高水平表达是ABC转运系统的果糖特异性-结合蛋白BL0033和ATP结合蛋白BL0034。果糖的发酵时间和浓度梯度试验显示诱导时间越长、浓度越高,BL0033的表达量越高。第一,比较蛋白谱证明果糖和葡萄糖以相同途径降解。第二,BL0033的表达是受果糖诱导的,果糖的吸收可能是通过一个特殊的转运系统,即ABC转运系统将果糖从胞外转运到胞内,其中BL0033和BL0034共同作为系统元件扮演了重要角色。 展开更多

关键词 比较蛋白质组 果糖代谢 半定量RT-PCR MALDI-TOF/ESI-MS/MS 果糖特异性-结合蛋白BL0033

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致病性沙门菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：6

10

作者 武鑫 张宇霞 +2 位作者 史晗 曾巧英 李儒 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期270-274,共5页

为建立一种灵敏、特异、快速地检测食品中致病性沙门菌的方法,针对沙门菌致病性菌株特有的invA基因设计引物,PCR扩增目的片段,构建重组质粒pMD19-T-inv285,将其作为标准品进行real-time PCR反应体系的优化和标准曲线的绘制,并进行灵敏... 为建立一种灵敏、特异、快速地检测食品中致病性沙门菌的方法,针对沙门菌致病性菌株特有的invA基因设计引物,PCR扩增目的片段,构建重组质粒pMD19-T-inv285,将其作为标准品进行real-time PCR反应体系的优化和标准曲线的绘制,并进行灵敏度、特异性及稳定性检测;同时用该方法对90份肉品样品进行检测。结果显示,建立的致病性沙门菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的标准曲线方程为y=-3.397 1 x+27.313,相关系数r2=0.999 6。该方法的灵敏度为5×100copies/μL,是普通PCR(5×102 copies/μL)的100倍。对10种常见食源性细菌的检测结果均为阴性;组内和组间重复试验的变异系数均低于1%。对90份肉品样品的检出率(6/90,6.67%)显著高于快速MALDI-TOF-MS法和传统的细菌分离鉴定方法(均为3/90,3.33%)。结果表明,本试验建立的致病性沙门菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR灵敏度高,且特异、稳定,适用于食品中致病性沙门菌的快速检测。 展开更多

关键词 沙门菌 实时荧光定量PCR MALDI-TOF-MS

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家蚕经菊酯类农药诱导后脂肪体蛋白的表达谱及烯醇酶基因的组织转录活性

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作者 王举梅 葛君 +1 位作者 李兵 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期256-261,共6页

为了从蛋白质水平探讨家蚕对菊酯类农药的抗性机制,采用双向电泳结合基质辅助质量飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,分析家蚕5龄幼虫经氯氰菊酯诱导前后脂肪体蛋白的表达特征。采用ImageMaster6.0软件分析表明,对照组共检测到432个蛋白点... 为了从蛋白质水平探讨家蚕对菊酯类农药的抗性机制,采用双向电泳结合基质辅助质量飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,分析家蚕5龄幼虫经氯氰菊酯诱导前后脂肪体蛋白的表达特征。采用ImageMaster6.0软件分析表明,对照组共检测到432个蛋白点,诱导实验组检测到369个蛋白点,其中能匹配的蛋白点有342对,匹配率为76.68%。对特征蛋白进行MALDI-TOF-MS分析鉴定的蛋白包括烯醇酶、线粒体醛脱氢酶、伴侣素、肌动蛋白、gag-like蛋白。烯醇酶(enolase)是糖酵解过程中极为重要的酶类。采用半定量RT-PCR对经氯氰菊酯诱导后的家蚕脑、中肠、丝腺、脂肪体、精巢、马氏管、血液等7个组织器官的烯醇酶基因进行表达分析,结果表明,烯醇酶基因转录水平在7个组织器官中都呈现下调趋势,分别下调了13.79%、10.71%、22.48%、7.40%、27.00%、11.50%、14.52%,其中脂肪体的烯醇酶基因表达和蛋白的表达下调一致。受菊酯类农药诱导的影响,家蚕5龄幼虫脂肪体蛋白的数目减少,烯醇酶基因在各组织器官减量表达,提示可能与蚕体的基础生理代谢受到抑制有关。 展开更多

关键词 菊酯农药 家蚕 脂肪体蛋白 烯醇酶 基因表达 基质辅助质量飞行质谱 半定量RT—PCR

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微生物饲料添加剂中丁酸梭菌的测定方法比较研究 被引量：3

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作者 姜芹 孙冰清 +4 位作者 张妤 吴雨珊 顾欣 张文刚 黄士新 《饲料研究》 CAS 北大核心 2023年第13期122-125,共4页

试验旨在建立快速准确测定微生物饲料添加剂中丁酸梭菌的方法,分别对不同计数培养基和菌株鉴定方法进行比较,并开展实际样品测定。结果显示,丁酸梭菌在亚硫酸铁琼脂、TSC琼脂和TSN琼脂中均可生长,但亚硫酸铁琼脂培养基的计数结果最高;... 试验旨在建立快速准确测定微生物饲料添加剂中丁酸梭菌的方法,分别对不同计数培养基和菌株鉴定方法进行比较,并开展实际样品测定。结果显示,丁酸梭菌在亚硫酸铁琼脂、TSC琼脂和TSN琼脂中均可生长,但亚硫酸铁琼脂培养基的计数结果最高;微量生化鉴定管、16S rRNA扩增测序、荧光定量PCR及基质辅助激光解析电离质谱(MALDI-TOF MS)均能鉴定丁酸梭菌,但荧光定量PCR方法最快速、准确、适用范围广;2批次市售样品分别含丁酸梭菌9.1×10^(8)、1.2×10^(9)CFU/g,典型菌落荧光定量PCR鉴定结果阳性。研究表明,亚硫酸铁琼脂培养基平板计数法结合荧光定量PCR可对微生物饲料添加剂中的丁酸梭菌进行快速有效的测定。 展开更多

关键词 丁酸梭菌 活菌计数 生化鉴定 荧光定量PCR 基质辅助激光解析电离质谱

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家蚕石蚕突变(st)近等基因系与其回交亲本的表皮蛋白质组学差异分析

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作者 杜畅 汪婉琳 +2 位作者 王学杨 张彦 徐家萍 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期486-491,共6页

以家蚕石蚕突变(st)近等基因系C8和其回交亲本C108(正常体型)的5龄幼虫表皮组织为材料,运用双向电泳(2-DE)技术分析家蚕st突变体与正常蚕体的表皮蛋白质组成差异。从2-DE图谱中选取表达差异较明显的蛋白点,用基质辅助激光解析飞行时间质... 以家蚕石蚕突变(st)近等基因系C8和其回交亲本C108(正常体型)的5龄幼虫表皮组织为材料,运用双向电泳(2-DE)技术分析家蚕st突变体与正常蚕体的表皮蛋白质组成差异。从2-DE图谱中选取表达差异较明显的蛋白点,用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)成功鉴定出13种蛋白质,其中酶类相关蛋白质占50%以上。通过Real-time PCR检测这些酶类蛋白质基因在C8和C108的5龄幼虫表皮组织的转录水平,发现谷胱甘肽S-转移酶σ1(GSTs1)、磷酸甘油酸变位酶(Pglym)、磷酸丙糖异构酶(TPi)3个酶类蛋白质基因的转录水平差异显著,其中Pglym和TPi在C8表皮中的转录水平明显高于在C108表皮中的转录水平,而GSTs1在C108表皮中的转录水平相对较高。初步推测这些差异蛋白质可能与st突变体形成和导致蚕体硬实的性状有关。 展开更多

关键词 家蚕 石蚕突变体 差异蛋白质 双向电泳 基质辅助激光解析飞行时间质谱 基因转录 荧光定量PCR

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对虾急性肝胰腺坏死综合征不同检测方法结果分析 被引量：5

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作者 郭书林 尤颖哲 +7 位作者 陈何东 王艺红 陈信忠 丁亦男 龚艳清 杨俊萍 陈长乐 陈炳颖 《中国动物检疫》 CAS 2020年第1期87-90,共4页

急性肝胰腺坏死综合征(acute hepatopancreas necrosis disease,AHPND)是一种危害大、新出现的对虾疫病。目前认为该病由一种副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)引起。本试验通过生化鉴定、血清学分型、MALDI-TOF-MS鉴定以及文... 急性肝胰腺坏死综合征(acute hepatopancreas necrosis disease,AHPND)是一种危害大、新出现的对虾疫病。目前认为该病由一种副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)引起。本试验通过生化鉴定、血清学分型、MALDI-TOF-MS鉴定以及文献建立的PCR方法,在福建省南美白对虾养殖场,对分离于AHPND病虾肝胰腺的VP进行了检测。通过VITEK-2鉴定出81株VP分离株。从中选取9株分别进行MALDI-TOF-MS鉴定、PCR检测和血清学分型,发现这9株分离菌株均与MALDI-TOF-MS数据库中的VP匹配。其中:4株PCR检测为阳性,被鉴定为AHPND VP,其血清型包括O1:KUT和O1:K68;另5株PCR检测为阴性,血清型包括O1:KUT、O3:K6和O1:K68。试验表明:AHPND VP分离株存在不同血清型,可通过MALDI-TOF-MS进行菌种鉴定;MALDI-TOF-MS与PCR结合使用,可以准确、快速鉴定AHPND VP,这有利于开展AHPND的病原学分析、流行病学调查以及诊断和监测。 展开更多

关键词 急性肝胰腺坏死综合症 副溶血性弧菌 MALDI-TOF-MS PCR 血清型 鉴定

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鸡粪便来源大肠杆菌的质谱法快速鉴定及聚类分析 被引量：2

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作者 张玲 常江 +3 位作者 曹刘杰 杨华 夏效东 唐标 《中国家禽》 北大核心 2018年第20期23-27,共5页

为了比较PCR和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法鉴定大肠杆菌的一致性,研究分别利用这两种方法对从浙江省12个不同地区养鸡场初步分离得到的大肠杆菌进行鉴定。结果显示:利用MALDI-TOF MS鉴定大肠杆菌的准确率为99.1... 为了比较PCR和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法鉴定大肠杆菌的一致性,研究分别利用这两种方法对从浙江省12个不同地区养鸡场初步分离得到的大肠杆菌进行鉴定。结果显示:利用MALDI-TOF MS鉴定大肠杆菌的准确率为99.1%,PCR鉴定准确率为100%,但MALDI-TOF MS较PCR能够进行更快速的鉴定。利用MALDI-TOF MS对大肠杆菌分离株进行的聚类分析可以将分离株分为两种类型。研究表明,MALDI-TOF MS法能够快速、高效地完成对大肠杆菌的鉴定,并且能够进行聚类分析。 展开更多

关键词 大肠杆菌 PCR 快速鉴定 MALDI—TOF MS 聚类分析

原文传递

8株河北羊源产气荚膜梭菌的快速鉴定及毒素型分析 被引量：3

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作者 王金凤 姜彦芬 +4 位作者 刘立兵 李睿文 孙晓霞 袁万哲 王建昌 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2021年第8期1043-1049,共7页

为实现对羊源产气荚膜梭菌(C.perfringens)的快速鉴定和毒素型分析,本研究基于基质激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对分离自河北省部分地区的8株绵羊源产气荚膜梭菌进行快速鉴定,并通过多重PCR方法对分离株cpa、cpb、etx、iap... 为实现对羊源产气荚膜梭菌(C.perfringens)的快速鉴定和毒素型分析,本研究基于基质激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对分离自河北省部分地区的8株绵羊源产气荚膜梭菌进行快速鉴定,并通过多重PCR方法对分离株cpa、cpb、etx、iap毒素基因进行检测。结果表明,MALDI-TOF MS能够在30 min内实现对8株产气荚膜梭菌的种水平上的鉴定,所需鉴定时间少于VITEK2 compact传统生化方法(约6 h)。所有产气荚膜梭菌分离株均为A型。本研究对于羊源产气荚膜梭菌的快速鉴定、毒素分型和毒素基因分析具有一定意义,为河北省羊产气荚膜梭菌病防治提供了一定的科学依据。 展开更多

关键词 产气荚膜梭菌 基质激光解吸电离飞行时间质谱 快速鉴定 多重PCR 毒素基因

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ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS进行K-ras基因分型 被引量：1

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作者 刘忠臣 郑薇薇 李庆阁 《中国肿瘤》 CAS 2005年第4期256-260,共5页

[目的]建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[方法]采用ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS两种方法,以自行构建的质粒DNA为模板,建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[结果]在相同的扩增条件下,采用A... [目的]建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[方法]采用ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS两种方法,以自行构建的质粒DNA为模板,建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[结果]在相同的扩增条件下,采用ARMS实时PCR方法,第一个位点的野生型和突变型的ΔCt值至少为,但第8二个位点野生型和突变型的ΔCt值仅为1～2左右。第二个位点改用MALDI鄄TOF-MS分型方法,采用一条公用引物和dATP,ddTTP,ddCTP和ddGTP的混和物,12密码子第二位点基因分型可以准确检测。[结论]ARMS实时PCR方法分析速度快,操作简便,但它需要合适的反应条件及高质量模板。MALDI-TOF-MS分型方法虽然步骤较多,但准确度高,反应体系稳定并具有高通量潜力。 展开更多

关键词 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 扩增阻碍突变系统方法 实时PCR 基因分型 K-RAS基因 基因突变

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白砂糖中出芽短梗霉的鉴定及溯源 被引量：2

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作者 黄结 覃思 《中国酿造》 CAS 北大核心 2017年第9期78-81,共4页

在制糖干燥包装车间中找到白砂糖出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的污染来源,建立白砂糖污染微生物的溯源方法。采用传统形态学、聚合酶链式反应(PCR)技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术结合的溯源方法,在... 在制糖干燥包装车间中找到白砂糖出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的污染来源,建立白砂糖污染微生物的溯源方法。采用传统形态学、聚合酶链式反应(PCR)技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术结合的溯源方法,在制糖干燥包装车间的生产线上进行样品污染菌出芽短梗霉的溯源。在车间的白砂糖、通风口空气、排风口空气、鼓风机表面、干燥机表面等均分离出出芽短梗霉,这几株菌的特异性DNA序列和蛋白质指纹图谱相似度极高。白砂糖与车间环境之间存在交叉污染,需加强该车间的清洁及消毒灭菌工作,需在该车间的通风口和排放口配置高效过滤网。构建以传统形态学、PCR技术和MALDI-TOF MS技术结合的白砂糖微生物溯源方法,为制糖企业有针对性地采取有效控制措施提供实验基础和理论依据。 展开更多

关键词 白砂糖 出芽魁梗霉 PCR MALDI-TOFMS 溯源

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食品中副溶血性弧菌检测能力验证结果与分析 被引量：2

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作者 陈玥 梁颖思 周露 《质量安全与检验检测》 2021年第4期24-27,30,共5页

为通过参加中国检验检疫科学研究院测试评价中心提供的食品中副溶血性弧菌(定性)能力验证活动,提高实验室副溶血性弧菌的检测能力,增强实验室的竞争力,本文按照GB 4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》进... 为通过参加中国检验检疫科学研究院测试评价中心提供的食品中副溶血性弧菌(定性)能力验证活动,提高实验室副溶血性弧菌的检测能力,增强实验室的竞争力,本文按照GB 4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》进行副溶血性弧菌定性检测,同时使用Real-time PCR和MALDI-TOF MS快速检测分析分离出的可疑菌落。样品编号为20-S871的检出副溶血性弧菌,20-T923的未检出副溶血性弧菌,本次能力验证结果满意。通过此次能力验证,使本实验室副溶血性弧菌的检测能力得到了有效提高。本次实验过程中,以国标法检测同时,辅以Real-time PCR和MALDI-TOF MS进行鉴定,保证检测结果的准确性,为菌株检测提供了参考方法。 展开更多

关键词 食品 副溶血性弧菌 能力验证 检测 PCR MALDI-TOF MS

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