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棉花GhDMT7基因对5-氮杂胞嘧啶核苷的响应机制 被引量：1
1
作者 杨志宁 陆许可 +19 位作者 范亚朋 孙玉平 喻欣 王亮 高永健 古丽加依那什·哈不力 古丽沙西·拿斯依 吾木尔·阿不都 黄慧 张梦豪 王立东 陈筱 肖磊 张鑫蕊 王帅 陈修贵 王俊娟 郭丽雪 高文伟 叶武威 《中国农业科技导报(中英文)》 北大核心 2025年第8期28-35,共8页
为探究5-氮杂胞嘧啶(5-azacytidine,5-azaC)对陆地棉(Gossypium hirsutum L.)GhDMT7基因表达及种子萌发的影响,分析了5-azac处理下GhDMT7的表达水平和棉花种子生长性状。克隆了GhDMT7基因,通过生物信息学分析发现,GhDMT7蛋白为稳定的亲... 为探究5-氮杂胞嘧啶(5-azacytidine,5-azaC)对陆地棉(Gossypium hirsutum L.)GhDMT7基因表达及种子萌发的影响,分析了5-azac处理下GhDMT7的表达水平和棉花种子生长性状。克隆了GhDMT7基因,通过生物信息学分析发现,GhDMT7蛋白为稳定的亲水性蛋白,无信号肽和跨膜结构。在盐胁迫条件下,棉花叶片中的丙二醛含量增加,表明膜损伤加剧。5-azaC对GhDMT7的表达呈剂量效应,低水平下轻微上调基因表达,高水平下则抑制表达,并降低5-甲基胞嘧啶(5mC)含量。此外,50μmol·L^(−1)的5-azaC处理显著提高了种子的发芽势和生长指标,对种子萌发起促进作用。以上研究结果为进一步研究GhDMT7在棉花生长发育中的功能奠定了基础,也为棉花耐盐新品种的培育提供了基因资源。 展开更多
关键词 陆地棉 DNA甲基转移酶 基因克隆 生物信息学分析 QRT-PCR
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中间球海胆脂肪酸结合蛋白fabp1基因的克隆与表达
2
作者 姚佳慧 王姮 +2 位作者 马晓芸 丁君 常亚青 《水产学杂志》 2025年第3期8-13,96,共7页
为探究海胆脂代谢机制,利用RACE方法克隆得到中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)脂肪酸结合蛋白家族中的fabp1基因的全序列,并利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术研究fabp1基因的组织分布和在胚胎发育过程中的表达水平。结果表明:f... 为探究海胆脂代谢机制,利用RACE方法克隆得到中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)脂肪酸结合蛋白家族中的fabp1基因的全序列,并利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术研究fabp1基因的组织分布和在胚胎发育过程中的表达水平。结果表明:fabp1基因的cDNA全长为1175 bp,开放阅读框(ORF)为390 bp,编码129个氨基酸,预测分子量为13.69 kDa。同源性检测和系统发育分析表明,中间球海胆fabp1基因与紫球海胆(S.purpuratus)fabp1基因序列同源性最高(98.44%)。fabp1基因在围口膜中的表达明显高于管足、体腔细胞和性腺。在胚胎发育过程中,fabp1基因的相对表达量从卵裂期开始呈上调趋势,在多细胞期达到峰值后开始下降。本结果为进一步阐明fabp1基因在海洋无脊椎动物中表达的分子机制提供基础,并为研究海胆的脂代谢和营养调控机制提供资料。 展开更多
关键词 中间球海胆 fabp1基因 荧光定量PCR 克隆 序列分析
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反应器形式及污泥形态对厌氧氨氧化菌群落结构的影响 被引量：6
3
作者 徐亚慧 刘苗苗 +3 位作者 张树军 张震南 李娟 刘新春 《中国科学院大学学报（中英文）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期67-73,84,共8页
通过构建克隆文库,对反应器类型和污泥形态对厌氧氨氧化(anammox)细菌的群落结构的影响进行探索.研究发现,反应器类型对anammox细菌群落结构影响不大,但其种泥来源对功能细菌的群落结构有一定影响.污泥形态对anammox细菌群落结构有着重... 通过构建克隆文库,对反应器类型和污泥形态对厌氧氨氧化(anammox)细菌的群落结构的影响进行探索.研究发现,反应器类型对anammox细菌群落结构影响不大,但其种泥来源对功能细菌的群落结构有一定影响.污泥形态对anammox细菌群落结构有着重要影响,絮体污泥中的anammox细菌以Candidatus Kuenenia为主;聚集态污泥中的anammox细菌则以Candidatus Brocadia为优势菌;在同时存在絮体污泥和生物膜的复合式反应器中,不同污泥形态中anammox细菌在接触时会发生迁移,但其优势菌种不发生变化. 展开更多
关键词 厌氧氨氧化细菌 颗粒污泥 絮体污泥 生物膜污泥 pcr-clone
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百合GARP家族鉴定和鳞片发育的基因克隆与表达
4
作者 刘佳鑫 武琼 +2 位作者 韩美玲 李超 杜方 《山西农业科学》 2025年第1期111-118,共8页
GARP是植物特异性转录因子家族,在植物生长发育和非生物胁迫响应中发挥关键作用。为全面了解百合GARP转录因子提供基础资料,为探索百合鳞片的生长发育机制奠定一定基础,基于二代、三代百合转录组数据,对其GARP家族成员进行鉴定和表达分... GARP是植物特异性转录因子家族,在植物生长发育和非生物胁迫响应中发挥关键作用。为全面了解百合GARP转录因子提供基础资料,为探索百合鳞片的生长发育机制奠定一定基础,基于二代、三代百合转录组数据,对其GARP家族成员进行鉴定和表达分析。结果表明,在转录组数据中共鉴定出34个GARP蛋白,均为亲水性蛋白,68%为酸性蛋白,94%为不稳定蛋白。系统进化树将百合GARPs分为5个亚家族:ARR-B、GLK、NIGT1/HRS1/HHO、PHR1/PHL1和KAN,进化分析发现,百合GARPs可能参与生长发育、生物钟调节、开花转化、激素运输、非生物胁迫等过程。对鳞片发育具有重要作用的ARR-B亚家族成员进行qRT-PCR分析,结果发现,LhGARP33、LhGARP30和LhGARP3可能对鳞茎发育起重要作用。LhGARP3和LhGARP30被成功克隆,氨基酸序列具有典型的ARR-Bs磷酸受体结构域(REC)及金属和磷酸化结合位点。空间表达分析了ARR-B I亚组在花、叶和鳞片中的表达模式,结果表明,LhGARP5在叶中的表达量最高,而LhGARP31在花中的表达量最高,LhGARP33、LhGARP30和LhGARP3的表达特征基本一致,均在鳞片中高表达,其可能作为关键基因在鳞片发育过程中发挥主要作用。 展开更多
关键词 百合 GARP家族 鳞片发育 实时荧光定量PCR 基因克隆
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红花檵木R2R3-MYB基因LcMYB113调控花青苷合成 被引量：1
5
作者 卢芃 荣朵艳 +2 位作者 廖晓珊 肖杨瑶 张邦跃 《广西植物》 北大核心 2025年第6期1137-1148,共12页
花青苷物质是影响红花檵木(Loropetalum chinense var.rubrum)观赏价值形成的关键因素之一。为探究红花檵木花青苷合成的分子机制,该研究从红花檵木中克隆了1个花青苷合成相关的R2R3-MYB基因,命名为LcMYB113(GenBank序列号:OR344758),... 花青苷物质是影响红花檵木(Loropetalum chinense var.rubrum)观赏价值形成的关键因素之一。为探究红花檵木花青苷合成的分子机制,该研究从红花檵木中克隆了1个花青苷合成相关的R2R3-MYB基因,命名为LcMYB113(GenBank序列号:OR344758),并初步分析了其生物信息学、红花檵木和白花檵木叶片中LcMYB113的表达水平、转基因烟草株系的表型及花青苷合成结构基因的表达。结果表明:(1)LcMYB113基因开放阅读框全长为789 bp,编码262个氨基酸,其N端含有R2R3 DNA结合域和bHLH转录因子的结合基序[D/E]Lx_(2)[R/K]x_(3)Lx_(6)Lx_(3)R,同时还具有花青苷正调控相关的2个特征基序ANDV和[K/R]P[Q/R]P[Q/R]。系统进化树分析显示,LcMYB113与牡丹的PsMYB58、葡萄的VvMYBA1等多种植物的花青苷特异调控R2R3-MYB转录因子的亲缘关系较近。(2)红花檵木叶片中的花青苷含量为白花檵木中的7.4倍,LcMYB113基因在红花檵木叶片中的相对表达量为白花檵木的101倍,表明LcMYB113基因的表达与花青苷含量趋势相一致。(3)通过构建基因过表达载体并转化烟草,烟草中过表达LcMYB113基因能够诱导转基因株系叶片和花朵中花青苷物质的积累,同时NtANS、NtDFR、NtCHS等多个花青苷生物合成结构基因在叶片中的相对表达量相比于野生型株系显著增加。该研究结果表明LcMYB113能够调控花青苷物质的合成,为红花檵木的叶色育种提供理论支持。 展开更多
关键词 红花檵木 花青苷 LcMYB113 基因克隆 实时荧光定量RT-PCR
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鸡柔嫩艾美耳球虫EtIMP1基因的克隆与表达载体的构建
6
作者 廖加磊 《福建畜牧兽医》 2025年第2期54-56,共3页
本研究对鸡柔嫩艾美耳球虫RNA进行提取及反转录,克隆鸡柔嫩艾美耳球虫IMP1基因,并将PCR产物连接于pEasy-Blunt-Simple载体中,PCR鉴定正确后送公司测序,进行序列分析。结果:成功克隆鸡柔嫩艾美耳球虫EtIMP1基因,其ORF长度为1 194 bp,并... 本研究对鸡柔嫩艾美耳球虫RNA进行提取及反转录,克隆鸡柔嫩艾美耳球虫IMP1基因,并将PCR产物连接于pEasy-Blunt-Simple载体中,PCR鉴定正确后送公司测序,进行序列分析。结果:成功克隆鸡柔嫩艾美耳球虫EtIMP1基因,其ORF长度为1 194 bp,并验证了其正确性;构建鸡柔嫩艾美耳球虫EtIMP1基因表达载体pEasy-Blunt-Simple-IMP1,并得到重组质粒,可为体外表达IMP1基因提供技术方法,也为疫苗候选基因的筛选奠定基础。 展开更多
关键词 鸡柔嫩艾美耳球虫 IMP1基因 克隆 表达载体 PCR
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鸢尾糖基转移酶基因ItUGT476克隆及原核表达分析
7
作者 周娇娇 李静 +4 位作者 张倩 明良山 樊启猛 季爱加 黄佳 《中药材》 北大核心 2025年第4期843-847,共5页
目的:克隆鸢尾Iris tectorum Maxim.糖基转移酶ItUGT476基因,掌握其生物信息学、组织表达和蛋白原核表达等信息。方法:以鸢尾转录组中ItUGT476基因序列设计特异性引物并进行PCR扩增,产物经测序后进行生物信息学分析;通过实时荧光定量PC... 目的:克隆鸢尾Iris tectorum Maxim.糖基转移酶ItUGT476基因,掌握其生物信息学、组织表达和蛋白原核表达等信息。方法:以鸢尾转录组中ItUGT476基因序列设计特异性引物并进行PCR扩增,产物经测序后进行生物信息学分析;通过实时荧光定量PCR检测ItUGT476基因在植物体内各组织的表达情况;利用同源重组技术构建pET-32a(+)-ItUGT476基因重组载体在大肠杆菌中表达蛋白。结果:ItUGT476基因的开放阅读框全长为1 437 bp,编码478个氨基酸。基因ItUGT476的表达量从高至低分别为根茎、叶片、花。进化树分析表明,ItUGT476编码蛋白与已知类黄酮UGTs聚在7-O-UGT分支上。原核表达显示,ItUGT476基因表达出72.10 kDa目的蛋白。结论:该研究从鸢尾中克隆出糖基转移酶基因ItUGT476,为后续该基因的功能表征以及鸢尾类黄酮生物合成途径作用机制的解析奠定必要的研究基础。 展开更多
关键词 鸢尾 糖基转移酶 基因克隆 蛋白原核表达 实时荧光定量PCR
原文传递
仿刺参AjCaspase3-p基因的克隆与表达分析
8
作者 王露瑶 张婵婵 +2 位作者 张晓静 海航瑜 马得友 《水产科学》 北大核心 2025年第4期582-591,共10页
为探究细胞凋亡关键效应基因Caspase-3基因在仿刺参变态过程中的作用,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得了1个仿刺参Caspase-3基因的全长cDNA,分析了其序列的生物信息学,用实时荧光定量PCR方法检测了其mRNA在成参各组织及幼虫不... 为探究细胞凋亡关键效应基因Caspase-3基因在仿刺参变态过程中的作用,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得了1个仿刺参Caspase-3基因的全长cDNA,分析了其序列的生物信息学,用实时荧光定量PCR方法检测了其mRNA在成参各组织及幼虫不同发育阶段的表达情况,利用胚胎整体原位杂交技术标记了该基因在变态期幼虫的空间分布。结果显示,鉴定出的基因cDNA全长为2007 bp,共编码508个氨基酸,Blastp比对发现与仿刺参基因组putative Caspase-3基因(PIK46501.1)相似度最高,故将其命名为AjCaspase3-p。序列特征分析显示,AjCaspase3-p含有Caspase家族特有的CASc结构域和半胱氨酸活性位点QACRG五肽保守序列。系统进化分析发现,该氨基酸序列与无脊椎动物Caspase-3聚在一起。实时荧光定量PCR结果表明:AjCaspase3-p基因在成参各组织中均表达,在体腔细胞中的表达量显著高于其他组织(P<0.05);在仿刺参早期发育各阶段都有表达,大耳幼体期开始显著升高,稚参期表达量最高(P<0.05)。mRNA表达定位显示,随着幼虫变态该基因的表达逐渐活跃,到稚参期强表达于触手、肠等组织,推测AjCaspase3-p基因可能通过维持机体内稳态保证仿刺参幼虫顺利完成变态。 展开更多
关键词 仿刺参 CASPASE-3 基因克隆 实时荧光定量PCR 原位杂交 幼虫变态
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崇明东滩夏冬季表层沉积物细菌多样性研究 被引量：24
9
作者 郑艳玲 侯立军 +4 位作者 陆敏 刘敏 谢冰 李勇 赵慧 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第2期300-310,共11页
以长江口崇明东滩高、中、低潮滩夏、冬两季表层沉积物中基因组DNA为模板,PCR扩增样品中细菌16S rRNA基因V3区片段,通过克隆、测序,构建相应基因文库.系统发育分析结果表明,崇明东滩高、中、低潮滩表层沉积物共包含12个主要门类的细菌:... 以长江口崇明东滩高、中、低潮滩夏、冬两季表层沉积物中基因组DNA为模板,PCR扩增样品中细菌16S rRNA基因V3区片段,通过克隆、测序,构建相应基因文库.系统发育分析结果表明,崇明东滩高、中、低潮滩表层沉积物共包含12个主要门类的细菌:变形菌门(Proteobacteria)(α-、β-、γ-、δ-和ε-亚群)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria)、酸杆菌门(Acidobacteria)、绿弯菌门(Chloroflexi)、厚壁菌门(Firmicutes)、螺旋体门(Spirochaetes)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、浮霉菌门(Planctomycetes)、绿菌门(Chlorobi)、网团菌门(Dictyoglomi)、硝化螺旋菌门(Nitrospirae),此外还存在大量未被认知的序列.中潮滩和低潮滩的优势菌为变形菌,高潮滩的优势菌为拟杆菌.DOTUR多样性分析结果表明,崇明中潮滩细菌多样性最高,低潮滩次之,高潮滩最低;夏季细菌多样性高于冬季.夏、冬两季细菌群落差异高潮滩最大,低潮滩次之,中潮滩最小. 展开更多
关键词 沉积物 细菌 多样性 16SrRNA PCR 克隆 长江口
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有齿食道口线虫ITS及5.8S DNA片段的PCR扩增、克隆及序列分析 被引量：14
10
作者 林瑞庆 陈丽莎 +5 位作者 翁亚彪 吴绍强 邹丰才 李明伟 宋慧群 朱兴全 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期639-642,共4页
运用 PCR 方法以保守引物 NC5 及 NC2 扩增了从广东阳江地区猪体分离的食道口线虫 rDNA 的内转录间隔区(ITS)及 5.8S 序列。将 PCR 扩增出的片段纯化后克隆至 pGEM-T Easy 载体,用 PCR 技术及酶切鉴定阳性菌落,对阳性菌落质粒 DNA 进行... 运用 PCR 方法以保守引物 NC5 及 NC2 扩增了从广东阳江地区猪体分离的食道口线虫 rDNA 的内转录间隔区(ITS)及 5.8S 序列。将 PCR 扩增出的片段纯化后克隆至 pGEM-T Easy 载体,用 PCR 技术及酶切鉴定阳性菌落,对阳性菌落质粒 DNA 进行测序。结果表明,扩增的片段大小为 828 bp,包含部分的 18S、28S 及全部的 ITS-1(362 bp)、5.8S(153 bp)及 ITS-2(217 bp)序列。序列比较表明,该食道口线虫为有齿食道口线虫。本研究在国际上首次报道了中国猪有齿食道口线虫的 ITS 及 5.8S 序列,为食道口线虫的分子生物学的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 阳性 菌落 PCR扩增 克隆 阳江地区 首次 DNA片段 食道口线虫 中国猪 猪体
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禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性 被引量：27
11
作者 陈化兰 于康震 +2 位作者 田国斌 唐秀英 卢景良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期555-558,共4页
禽流感病毒（ＡＩＶ）的表面结构蛋白血凝素（ＨＡ）是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的Ｈ７亚型ＡＩＶ的ＨＡ基因序列，设计合成了１对Ｈ７ＨＡ特异引物，以ＡＩＶＡ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９／（Ｈ７Ｎ... 禽流感病毒（ＡＩＶ）的表面结构蛋白血凝素（ＨＡ）是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的Ｈ７亚型ＡＩＶ的ＨＡ基因序列，设计合成了１对Ｈ７ＨＡ特异引物，以ＡＩＶＡ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９／（Ｈ７Ｎ１）（Ａ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ）核酸为模板，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增出１条１．７ｋｂｃＤＮＡ片段。将这一片段定向克隆到ｐＵＣ１８中，对其５′端及３′端部分序列测定后，确证其为ＨＡｃＤＮＡ。将ＨＡ基因置于ＳＶ４０启动子和增强子下游，构建了这一基因的真核表达质粒ｐＳＶＨ７。以此质粒１００μｇ肌肉注射免疫３周龄ＳＰＦ鸡６只，４周后以１００倍鸡胚感染剂量（ＥＩＤ）的ＨＡ基因同源病毒对所有鸡进行攻毒，１周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离；免疫后１～６周每周对所有鸡翅静脉采血，分离血清，检测ＨＩ抗体。结果，１００μｇ免疫组鸡病毒分离数为０／６，对照组为６／６；攻毒后１周免疫组鸡ＨＩ效价为１∶３２～１∶６４，对照组为１∶４～１∶１６。表明所构建的ＨＡ基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 RT-PCR 克隆 DNA疫苗
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硝酸盐对硝酸还原酶活性的诱导及硝酸还原酶基因的克隆 被引量：24
12
作者 王利群 王勇 +1 位作者 董英 王文兵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期632-635,共4页
硝酸盐在植物体内的积累过多已成为影响蔬菜品质并影响人类健康的重要因素。硝酸还原酶 (NR)是硝酸盐代谢中的关键酶 ,提高其活性有利于硝酸盐的降解。为了解植物不同组织中NR的活性 ,用活体测定法检测了经 5 0mmol L的KNO3诱导不同时... 硝酸盐在植物体内的积累过多已成为影响蔬菜品质并影响人类健康的重要因素。硝酸还原酶 (NR)是硝酸盐代谢中的关键酶 ,提高其活性有利于硝酸盐的降解。为了解植物不同组织中NR的活性 ,用活体测定法检测了经 5 0mmol L的KNO3诱导不同时间后的油菜、豌豆和番茄幼苗根茎叶中NR活性 ,同时为了明确外源诱导剂浓度与植物体内NR活性的关系 ,检测了经不同浓度KNO3诱导 2h后的矮脚黄、抗热 6 0 5、小白菜和番茄叶片中的NRA。结果表明 ,不同植物组织NR活性有很大差异 ,叶中NR活性较高 ,根其次 ,茎最低 ;不同植物的NR活性随诱导时间呈不同的变化趋势 ,相同植物不同组织的NR活性变化趋势相似 ;不同植物叶片NRA为最高时KNO3浓度不同。用30mmol L的KNO3诱导番茄苗 2h后 ,从番茄根和叶中提取总RNA ,用RT PCR方法获得NRcDNA ,全长 2 736bp ,编码911个氨基酸。 展开更多
关键词 硝酸盐 硝酸还原酶 基因克隆 序列分析 植物
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棉铃虫气味受体的克隆与组织特异性表达 被引量：17
13
作者 张帅 张永军 +2 位作者 苏宏华 高希武 郭予元 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期728-735,共8页
气味受体在昆虫识别外界气味过程中起重要作用,对其的研究可以帮助我们了解昆虫对气味识别的分子机制。本文通过RT-PCR技术,在棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中克隆得到11条气味受体序列(GenBank登录号:EU599565～EU599568,EU... 气味受体在昆虫识别外界气味过程中起重要作用,对其的研究可以帮助我们了解昆虫对气味识别的分子机制。本文通过RT-PCR技术,在棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中克隆得到11条气味受体序列(GenBank登录号:EU599565～EU599568,EU818702～EU818706,FJ393455)。序列分析结果表明,HarmOR2为非典型气味受体,其他为典型气味受体。进化树显示,HarmOR10与黑腹果蝇Drosophila melanogaster DOR46a进化关系较近,而HarmOR4与果蝇味觉受体聚类在一起。棉铃虫其余气味受体与烟芽夜蛾Heliothis virescens气味受体单独或几个一起处于与黑腹果蝇气味受体进化关系较远的聚类中,而且彼此聚类关系较远。使用半定量RT-PCR对这些气味受体的表达谱进行研究,结果表明:HarmOR2在棉铃虫触角和喙中表达,表达量在雌雄间相当。其他受体则在成虫触角中特异表达,其中HarmOR3,HarmOR13和HarmOR14仅在雄性触角内表达;雌性触角内HarmOR12和HarmOR20的表达量要高于雄性触角;其余气味受体雌雄触角间表达量则相当。 展开更多
关键词 棉铃虫 气味受体 RT-PCR 克隆 表达谱
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采用FISH、DGGE和Cloning对短程脱氮系统中硝化菌群的比较分析 被引量：23
14
作者 曾薇 杨庆 +4 位作者 张树军 马勇 刘秀红 彭永臻 李军 《环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期734-739,共6页
针对4种不同的实际污水短程生物脱氮系统（SBR大型中试反应器、UASB-A/O小型反应器、A/O中试反应器和SBR小型反应器）,采用Fish、PCR-DGGE和PCR-Cloning-Sequencing分子生物学方法对系统中硝化菌群AOB和NOB进行定性与定量化分析.Fish结... 针对4种不同的实际污水短程生物脱氮系统（SBR大型中试反应器、UASB-A/O小型反应器、A/O中试反应器和SBR小型反应器）,采用Fish、PCR-DGGE和PCR-Cloning-Sequencing分子生物学方法对系统中硝化菌群AOB和NOB进行定性与定量化分析.Fish结果表明,在4种短程脱氮系统中,AOB相比于NOB已成为明显的优势菌群,占总菌群的3%～12%;在SBR中试和小试反应器中没有检测出NOB;A/O中试反应器中存在极少量的Nitrospira（＜0.2%）,而UASB-A/O小型反应器中存在极少量的Nitrobacteria（＜0.2%）.PCR-DGGE结果表明SBR中试、A/O和UASB-A/O 3种短程脱氮系统中的AOB均以Nitrosomonas-like为主.SBR大型中试反应器中污泥样品的PCR-Cloning-Sequencing结果表明,所有的克隆相似于Nitrosomonas,其中60%以上的克隆相似于Nitrosomonas europaea. 展开更多
关键词 短程脱氮 AOB FISH PCR-DGGE PCR-Cloning-Sequencmg
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旋毛虫排泄分泌抗原p49基因的克隆 被引量：14
15
作者 宋思扬 郑忠辉 +3 位作者 黄耀坚 张伟光 蔡海松 苏文金 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期117-120,共4页
应用ＤＮＡ重组技术将编码旋毛虫肌幼虫４９ＫＤａ抗原的基因克隆于大肠杆菌中．设计特异的ＰＣＲ引物，用ＰＴ－ＰＣＲ技术直接从旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ中反转录并扩增出约１．１Ｋｂ的靶ＤＮＡ．用ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ酶解后将其克... 应用ＤＮＡ重组技术将编码旋毛虫肌幼虫４９ＫＤａ抗原的基因克隆于大肠杆菌中．设计特异的ＰＣＲ引物，用ＰＴ－ＰＣＲ技术直接从旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ中反转录并扩增出约１．１Ｋｂ的靶ＤＮＡ．用ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ酶解后将其克隆到质粒载体ｐＵＣ１９中，用Ｘ－ｇａｌ培养基筛选重组子．该重组子经相同的核酸内切酶水解获得约２．７Ｋｂ和１．１Ｋｂ两个片段，分别与ｐＵＣ１９和目的基因的大小相同，目的基因经序列分析并与文献报道的序列比较发现具有９７．８％的同源性． 展开更多
关键词 旋毛虫 p49基因 RT-PCR 克隆 排泄-分泌抗原
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H9N2亚型禽流感病毒HA基因的克隆及其DNA疫苗的动物免疫试验 被引量：15
16
作者 何宏轩 秦曦明 +4 位作者 张强哲 汤义 刘丽艳 郑昌学 段明星 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期163-166,共4页
血凝素 (HA)是决定禽流感病毒的毒力强弱和免疫原性的主要蛋白质 .根据已发表的H9亚型AIV的HA基因序列 ,设计合成了 1对H9HA特异引物 ,以AIVA/Chicken/Henan/ 1 / 1 999/ (H9N2 )核酸为模板 ,通过RT PCR扩增出 1条 1 6kbcDNA片段 .将H... 血凝素 (HA)是决定禽流感病毒的毒力强弱和免疫原性的主要蛋白质 .根据已发表的H9亚型AIV的HA基因序列 ,设计合成了 1对H9HA特异引物 ,以AIVA/Chicken/Henan/ 1 / 1 999/ (H9N2 )核酸为模板 ,通过RT PCR扩增出 1条 1 6kbcDNA片段 .将HA基因插入pVAX1中 ,构建了真核表达质粒pVAX H9.采用活体电击法免疫 3周龄SPF鸡 1 0只 ,剂量为 5 0 μg/只 ,3周后加强免疫一次 ,5周后以 1 0 0倍鸡胚感染剂量 (EID)的HA基因同源病毒对所有鸡进行攻毒 .其间每周检测抗体水平变化 ,6周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离 .结果为攻毒后免疫组鸡HI效价为 9log2～ 1 0log2 ,对照组为 2log2～ 4log2 ;免疫组病毒分离数为 0 / 1 0 ,对照组为 1 0 / 1 0 . 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 RT-PCR 克隆 DNA疫苗
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柑桔黄龙病病原DNA片段的克隆及序列分析 被引量：28
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作者 孔维文 邓晓玲 +1 位作者 梁志慧 唐伟文 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期71-75,共5页
本研究利用聚合酶链式反应技术 (PCR) ,合成了中国柑桔黄龙病病原的一段 DNA片段。将此片段插入到 p UC18的 Eco RI位点 ,并转化进大肠杆菌 (Escherichia coli)的 DH5α菌株中。通过 PCR鉴定 ,限制性内切酶 (Eco RI)酶切分析及核苷酸序... 本研究利用聚合酶链式反应技术 (PCR) ,合成了中国柑桔黄龙病病原的一段 DNA片段。将此片段插入到 p UC18的 Eco RI位点 ,并转化进大肠杆菌 (Escherichia coli)的 DH5α菌株中。通过 PCR鉴定 ,限制性内切酶 (Eco RI)酶切分析及核苷酸序列分析 ,均表明克隆成功。序列分析结果显示 ,克隆片段与已知相应序列间同源性达 98.6 %。该研究为制备柑桔黄龙病病原 DNA分子探针奠定了基础。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 克隆 序列分析 PCR技术 病原
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李矮缩病毒RT-PCR方法建立及检测应用 被引量：16
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作者 侯义龙 杨俊玲 李春敏 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期425-427,共3页
以感病和健康指示植物GF305的总RNA为模板,进行cDNA的合成和PCR扩增,结果从感病材料中扩增出与预期的172bp大小一致的目的片段,而健康的材料无此扩增产物。对此PCR扩增产物克隆测序,进一步佐证了RT-PCR检测结果。经过多次试验验证该检... 以感病和健康指示植物GF305的总RNA为模板,进行cDNA的合成和PCR扩增,结果从感病材料中扩增出与预期的172bp大小一致的目的片段,而健康的材料无此扩增产物。对此PCR扩增产物克隆测序,进一步佐证了RT-PCR检测结果。经过多次试验验证该检测体系,都可得到很好的重演性,从而建立了李矮缩病毒快速、灵敏、准确的RT-PCR检测技术,并进行了实际应用。 展开更多
关键词 矮缩病 RT-PCR检测技术 指示植物 扩增产物 PCR扩增 病毒 RT-PCR方法 健康 GF 灵敏
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荔波连蕊茶GA2ox1基因的克隆及表达分析 被引量：18
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作者 肖政 李纪元 +2 位作者 范正琪 李辛雷 殷恒福 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2016年第1期41-47,共7页
[目的]GA2氧化酶是赤霉素生物合成代谢过程中关键酶之一,GA2ox家族基因常被用于植物矮化基因工程育种。[方法]根据植物GA2氧化酶基因编码区的保守序列设计引物,以山茶属荔波连蕊茶嫩枝为材料,提取总RNA,进行RT-PCR。采用RACE技术扩增获... [目的]GA2氧化酶是赤霉素生物合成代谢过程中关键酶之一,GA2ox家族基因常被用于植物矮化基因工程育种。[方法]根据植物GA2氧化酶基因编码区的保守序列设计引物,以山茶属荔波连蕊茶嫩枝为材料,提取总RNA,进行RT-PCR。采用RACE技术扩增获得1 371 bp的GA2ox基因全长c DNA序列,命名为Cl GA2ox1(Gen Bank登录号KJ502290)。[结果]序列分析表明,Cl GA2ox1放阅读框(ORF)为1 002 bp,编码333个氨基酸,5’非编码区59 bp,3’非编码区310 bp。预测的蛋白质分子量为37.31 k D,等电点为5.92,具有GA2ox超基因家族的保守结构域和特有的氨基酸残基。Cl GA2ox1蛋白与Gen Bank中收录的其它植物GA2ox蛋白氨基酸的相似性达到80%。构建系统进化树,结果显示山茶GA2氧化酶与烟草GA2ox蛋白的亲缘关系最为密切。实时定量PCR结果显示,该基因在荔波边蕊茶不同器官及发育不同时期的均有表达,表达量有所不同:Cl GA2ox1基因在2年生茎段中的表达量最高,在嫩枝和根中也有较高的表达,而在新抽生的嫩叶中最低。[结论]试验结果为进一步明确Cl GA2ox1基因的功能特征及揭示其参与调控植物生长的分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 荔波连蕊茶 GA2氧化酶:实时荧光定量PCR 克隆
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乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS1基因片段的克隆、测序与表达 被引量：9
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作者 王祥 陈焕春 +3 位作者 何启盖 吴斌 贾杏林 吴美洲 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期240-244,共5页
以流行性乙型脑炎病毒减弱毒株SA14 14 2的基因组RNA为模板 ,采用RT PCR技术扩增其 NS1基因的cDNA ,将其克隆到 pMD18 T载体中 ,得到克隆质粒pMD18 T NS1。pMD18 T NS1经 EcoRI和SalI酶切后 ,回收NS 1片段克隆到原核表达载体 pET 2 8a(+... 以流行性乙型脑炎病毒减弱毒株SA14 14 2的基因组RNA为模板 ,采用RT PCR技术扩增其 NS1基因的cDNA ,将其克隆到 pMD18 T载体中 ,得到克隆质粒pMD18 T NS1。pMD18 T NS1经 EcoRI和SalI酶切后 ,回收NS 1片段克隆到原核表达载体 pET 2 8a(+) EcoRI/SalI位点 ,构建了重组原核表达质粒 pET 2 8a(+) NS1。转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导获得高效表达 ,产物经SDS PAGE电泳结果显示 ,表达产物分子量约为 45kD。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 NS1基因 反转录-聚合酶链反应 克隆 表达
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