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Establishment and Optimization of Rye-specific PCR Reaction System 被引量:3
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作者 任如意 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第2期201-204,共4页
[Objective] The aim was to establish the optimal rye-specific PCR reaction system for rye.[Method] The ordinary wheat "Chinese Spring",S165,rye,octoploid triticale and hexaploid triticale were used as materials to c... [Objective] The aim was to establish the optimal rye-specific PCR reaction system for rye.[Method] The ordinary wheat "Chinese Spring",S165,rye,octoploid triticale and hexaploid triticale were used as materials to carry out study on the effect of the amount of template DNA,primers,dNTPs,Mg2+ concentrations,Taq DNA polymerase and annealing temperature on the rye-specific PCR reaction system of rye.[Result] The genomic DNA extracted by modified CTAB DNA extraction method showed high quality,which was satisfied for the PCR reaction template.The rye-specific PCR reaction system was 25 μl,including 10 × buffer solution,1.5 mmol/L MgCl2,200 μmol/L dNTP,40 ng primers,40-60 ng DNA template and 1 U Taq DNA polymerase.[Conclusion] The optimal rye-specific PCR reaction system was established,which provided basis for the identification of exogenous germplasm of rye in wheat background. 展开更多
关键词 RYE pcr reaction system OPTIMIZATION
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基于PCR技术的食品微生物安全检测方法研究 被引量:1
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作者 高庚渠 《食品安全导刊》 2025年第16期130-132,共3页
开展食品微生物检测不仅有利于减少食品安全事件发生,还可提高产品质量,推动食品行业可持续发展。聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)作为一种高效灵敏的分子生物学检测方法,具有特异性强、检测迅速及操作简单的优势。本文... 开展食品微生物检测不仅有利于减少食品安全事件发生,还可提高产品质量,推动食品行业可持续发展。聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)作为一种高效灵敏的分子生物学检测方法,具有特异性强、检测迅速及操作简单的优势。本文基于PCR技术在食品微生物安全检测中的应用现状展开研究,并探讨PCR技术在食品安全检测中的应用策略。分析认为,PCR技术在食品微生物安全检测中的应用仍存在样本处理复杂、引物与探针设计相对不足、检测技术类型较为单一等问题。基于此,提出优化样本处理方法、加强引物与探针设计、优化检测技术等策略,以期为保障食品微生物安全提供理论支持。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应(pcr) 食品微生物安全检测 食源性致病菌 食品安全
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集成流体与温度控制的液滴型数字PCR微流控芯片设计与应用
3
作者 何春华 姚金辉 +3 位作者 聂磊 廖广兰 史铁林 刘智勇 《中国机械工程》 北大核心 2025年第10期2359-2368,共10页
数字聚合酶链式反应(dPCR)因高灵敏度、高准确度以及绝对定量的特点,成为分子生物学和临床诊断领域的重要工具,但仍面临集成度不高、样本使用量大及流体控制难等问题。设计了一种集成快速阀门系统和自动加热系统的液滴型dPCR微流控芯片... 数字聚合酶链式反应(dPCR)因高灵敏度、高准确度以及绝对定量的特点,成为分子生物学和临床诊断领域的重要工具,但仍面临集成度不高、样本使用量大及流体控制难等问题。设计了一种集成快速阀门系统和自动加热系统的液滴型dPCR微流控芯片,同时优化了该芯片的制备工艺。研究结果表明,该芯片能够高效、均匀地生成液滴,最大生成频率达5.132 kHz,液滴直径变异系数(CV)值仅为1.67%;形变阀可在0.1 s内快速实现流体通断;集成的片上循环加热系统可实现1.2℃/s的温度升降,温度误差在±0.6℃以内;改进PDMS配方还可有效防止流体蒸发;液滴识别算法准确率高达99.7%。 展开更多
关键词 微流控芯片 微液滴 数字聚合酶链式反应 形变阀 集成化
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金莲花ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选
4
作者 董梦涵 马蒙璐 +1 位作者 王瑞康 张芹 《北方园艺》 北大核心 2025年第17期10-18,共9页
以金莲花为试材,采用单因素水平筛选和正交实验方法,组合出最佳反应体系,系统分析了4个关键因素对体系的影响,包括DNA浓度、Mix酶用量、引物浓度、反应循环次数,并进行引物及其退火温度的确定,建立金莲花的ISSR-PCR反应体系,以期为金莲... 以金莲花为试材,采用单因素水平筛选和正交实验方法,组合出最佳反应体系,系统分析了4个关键因素对体系的影响,包括DNA浓度、Mix酶用量、引物浓度、反应循环次数,并进行引物及其退火温度的确定,建立金莲花的ISSR-PCR反应体系,以期为金莲花种质资源创新和遗传多样性分析提供参考依据。结果表明:四因素对反应体系的影响依次为PCR循环次数>DNA浓度>Mix酶用量>引物浓度。最佳反应体系为DNA浓度35 ng·μL^(-1),引物浓度9μmol·L^(-1),Mix酶用量9μL。反应程序为94℃预变性5 min,94℃变性30 s,退火时间45 s,72℃延伸45 s,33个循环,72℃终延伸7 min,4℃保存。建立了金莲花ISSR分子标记最佳反应体系并筛选出26条ISSR引物,可应用于后续的种质资源研究工作。 展开更多
关键词 金莲花 ISSR-pcr 引物筛选 反应体系
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鸽疱疹病毒gB基因SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用
5
作者 李鹏 苏和 +4 位作者 韩慧敏 孟海 王昊 王凤雪 温永俊 《中国家禽》 北大核心 2025年第3期93-99,共7页
为建立检测鸽疱疹病毒(PiHV)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)方法,研究根据PiHV gB基因的高度保守区域设计特异性引物,构建质粒作为标准品建立PiHV qPCR检测方法,并进行敏感性和特异性试验。结果显示:建立的PiHV qPCR方法最低DNA检出... 为建立检测鸽疱疹病毒(PiHV)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)方法,研究根据PiHV gB基因的高度保守区域设计特异性引物,构建质粒作为标准品建立PiHV qPCR检测方法,并进行敏感性和特异性试验。结果显示:建立的PiHV qPCR方法最低DNA检出浓度为8.62×10^(2)拷贝/μL,敏感性比普通PCR方法高100倍,可特异性区分鸽疱疹病毒与其他多种常见感染鸽的细菌和病毒,其批内变异系数小于1%,批间变异系数小于2%;应用该方法对呼和浩特市及周边地区赛鸽公棚和鸽养殖场采集的30份疑似病鸽肝脏样品进行检测,可快速准确地检出样品中的PiHV,并且检出率比普通PCR方法高。研究表明,建立的PiHV qPCR检测方法特异性强,敏感性较高,能够应用于赛鸽、肉鸽等的鸽疱疹病毒快速检测。 展开更多
关键词 鸽疱疹病毒 SYBR Green 荧光定量pcr 聚合酶链式反应 GB基因
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金花菌ISSR-PCR反应体系的建立与优化
6
作者 吴凤 张莉娟 +5 位作者 李冬桂 秦玉燕 罗义灿 陈羽烨 李鸿 吕丽兰 《农业研究与应用》 2025年第1期9-18,共10页
【目的】金花菌是黑茶中的一类潜在益生真菌,能赋予茶叶独特的味道,并具备补充人体所需维生素和矿物质、生津止渴、分解油腻、降脂减肥等多种保健作用,是评价茯砖茶和六堡茶品质的重要指标之一。本研究分析了金花菌的遗传多样性及遗传结... 【目的】金花菌是黑茶中的一类潜在益生真菌,能赋予茶叶独特的味道,并具备补充人体所需维生素和矿物质、生津止渴、分解油腻、降脂减肥等多种保健作用,是评价茯砖茶和六堡茶品质的重要指标之一。本研究分析了金花菌的遗传多样性及遗传结构,建立并优化金花菌ISSR-PCR反应体系,旨在为进一步利用ISSR分子标记技术系统研究金花菌遗传多样性及其种内种间亲缘关系提供方法。【方法】以冠突曲霉(Aspergillus cristatum)的DNA作为模板,采用单因素实验对影响ISSR-PCR反应体系的模板DNA用量、引物用量、PCR Mix用量以及ISSR-PCR循环次数等4个因素进行优化,结果用4个金花菌种A.cristatum、谢瓦氏曲霉(Aspergillus chevalieri)、假灰绿曲霉(Aspergillus pseudoglaucus)、Aspergillus cibarius的菌株对反应体系进行稳定性验证。【结果】建立了金花菌ISSR-PCR最优反应体系,其组成包括50 ng/μL的模板DNA 0.3μL、10μmol/μL的引物0.8μL、2×SanTaq PCR Mix用量9.0μL,ddH_(2)O 9.9μL,总体积20μL。ISSR-PCR反应条件:94.0℃预变性5 min;94.0℃变性30 s,退火30 s,72.0℃延伸2 min,循环次数为35次;72.0℃终延伸10 min。使用4株不同的金花菌对所获ISSR-PCR最优反应体系进行稳定性验证,表明其具有高多态性和可重复性。采用此最优反应体系筛选出11条多态性和重复性高可适用于金花菌遗传多样性分析的ISSR引物并确定其退火温度。【结论】本研究建立并优化了金花菌的ISSR-PCR反应体系,结果具有高多态性和可重复性,为后续金花菌遗传多样性分析提供了新方法。 展开更多
关键词 金花菌 ISSR-pcr 单因素实验 反应体系
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PMA-qPCR定量检测饮用水中铜绿假单胞菌的方法
7
作者 张瑞停 王园媛 +2 位作者 邢方潇 张晓 张岚 《净水技术》 2025年第5期206-215,共10页
【目的】为预防水源性疾病暴发和保障水质安全,建立快速、准确的检测水中活性病原菌的方法至关重要。鉴于生活饮用水细菌含量较低,建立一种适用于大体积饮用水中铜绿假单胞菌检测的富集浓缩及叠氮溴化丙锭-定量聚合酶链式反应(PMA-qPCR... 【目的】为预防水源性疾病暴发和保障水质安全,建立快速、准确的检测水中活性病原菌的方法至关重要。鉴于生活饮用水细菌含量较低,建立一种适用于大体积饮用水中铜绿假单胞菌检测的富集浓缩及叠氮溴化丙锭-定量聚合酶链式反应(PMA-qPCR)方法。【方法】通过调整涡旋振荡时长,计算加标回收率,优化富集浓缩方法;采用L_(16)(4^(3))正交试验筛选能够有效去除铜绿假单胞菌死菌脱氧核糖核酸的PMA处理条件的最佳组合,并进行验证。【结果】通过膜过滤法将10 L饮用水中的铜绿假单胞菌富集至膜上后,采用涡旋振荡(转速为3000 r/min,振荡时间为15 min,重复2次)及离心(8000 g,10 min)的方式将膜上的细菌洗脱至1 mL磷酸盐缓冲液(PBS)中。该方法在50 min内完成且回收率可达80.95%±7.43%。PMA-qPCR法的最优PMA处理条件:PMA浓度为30μmol/L、黑暗中孵育时间为20 min、光暴露时间为20 min。该方法与平板计数法的检测结果一致,可有效抑制死菌DNA的扩增。活菌数与PMA-qPCR扩增循环数为1×10^(2)~1×10^(6)CFU/mL时呈现良好的线性关系(R2=0.99),建立的标准曲线方程(y=-3.541x+44.11)可定量检测活菌数量。PMA-qPCR法定量限为1×10^(2)CFU/mL,且结合富集的方式,灵敏度可被提高1×10^(4)倍。【结论】该研究建立的检测方法适用于10 L大体积饮用水中铜绿假单胞菌活菌的定量分析,为后续深入研究提供了有效的技术手段。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 叠氮溴化丙锭(PMA) 荧光定量聚合酶链式反应(pcr) 活菌计数 饮用水
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单管闭管多重PCR检测技术的发展
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作者 胡婷婷 张云龙 邹秉杰 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第8期1115-1126,共12页
核酸检测技术因快速、灵敏和特异等特点,在病原体检测等领域广泛应用。因疾病相关的核酸标志物众多,多重核酸检测需求渐增。多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)可对多种靶标同时扩增,但扩增后分析过程存在开管易污染和... 核酸检测技术因快速、灵敏和特异等特点,在病原体检测等领域广泛应用。因疾病相关的核酸标志物众多,多重核酸检测需求渐增。多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)可对多种靶标同时扩增,但扩增后分析过程存在开管易污染和技术要求高等问题。随着检测技术的不断进步,一系列简便和可靠且无需开管处理的单管多重PCR检测技术相继出现。常见的技术有基于荧光探针的单管闭管多重PCR检测方法,主要利用不同荧光标记对多种靶标进行区分,与不同的特异性酶切反应结合,能够实现肿瘤罕见突变的多重检测以及单核苷酸特异性分型。此外,基于熔解温度差异的单色熔解曲线分析方法,在单个荧光通道内实现了多靶标并行检测,若在多个荧光通道内进行则称为多色熔解曲线分析方法,可将检测靶标数量提升至数十种,显著突破了荧光通道数量对检测重数的限制。同时,利用荧光标记进行不同组合的荧光编码方法,也为单管闭管多重PCR检测提供了新的思路,包括编码同一靶标对应的不同荧光标记产生信号的先后顺序、利用2种荧光标记组合识别特定靶标、控制不同靶标荧光信号幅度等方式,也能够提高检测重数。本文从原理、应用及方法优缺点等多个维度出发,对近年来单管闭管多重PCR检测技术的研究进展进行概括并展望,为此后的科研探索与应用提供有价值的参考。 展开更多
关键词 核酸检测 多重核酸检测 聚合酶链式反应 单管反应 检测方法
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PCR双向开启硫黄素T/G四链体探针无标记检测牛奶中沙门氏菌方法研究
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作者 尚慧杰 徐建国 +2 位作者 彭育勃 陈伟 姚丽 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第5期677-681,687,共6页
文章提出一种基于聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的硫黄素T(ThT)/G-四链体探针无标记检测牛奶中沙门氏菌(Salmonella)方法。以沙门氏菌的invA基因为检测目标,设计特异性发卡引物,通过PCR和特异功能的G-四链体实现对沙... 文章提出一种基于聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的硫黄素T(ThT)/G-四链体探针无标记检测牛奶中沙门氏菌(Salmonella)方法。以沙门氏菌的invA基因为检测目标,设计特异性发卡引物,通过PCR和特异功能的G-四链体实现对沙门氏菌的检测。结果表明,该检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高。在最优反应体系下,沙门氏菌的浓度与信号输出值具有良好的线性关系,其回归方程为Y=27.149X+0.292,R^(2)=0.981,其线性范围为10^(2)~10^(6) CFU/mL。纯菌样品和实际样品都能在细菌浓度为10^(2) CFU/mL时检测出信号,表明该方法具有抗基质效应。研究结果为食源性致病菌的检测提供了一种新的思路。 展开更多
关键词 G-四链体 硫黄素T 沙门氏菌 无标记检测 聚合酶链式反应(pcr)
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PCR效率振荡与金纳米粒子浓度的光量子机理
10
作者 方欢欢 陈永聪 《上海大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期646-656,共11页
纳米材料在聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术中的广泛应用为改进生物医学领域的检测方法开辟了新途径.已有实验揭示了PCR效率与pM区金纳米粒子浓度间的振荡行为,其产生或与带电胶体粒子间的长程库仑作用和纳米颗粒电... 纳米材料在聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术中的广泛应用为改进生物医学领域的检测方法开辟了新途径.已有实验揭示了PCR效率与pM区金纳米粒子浓度间的振荡行为,其产生或与带电胶体粒子间的长程库仑作用和纳米颗粒电子态的量子尺寸效应相关联.通过蒙特卡洛模拟可以发现,溶液中金纳米粒子的径向分布函数随着电荷的增加逐步呈现出峰值特征,从而引发光子在溶液中瑞利散射的相干行为,影响PCR反应过程中释放光子的再利用效率.研究结果表明,振荡周期与下游反应光子的波长吻合,同时其能量与金纳米粒子费米能级附近的能级宽度相匹配.而金纳米粒子可以吸收并储存于其内部的电子态,通过再释放促进PCR上游反应进程,并通过电子的玻尔兹曼分布来弥补所需能量的不足部分.该研究有望推动PCR特有的精确探测手段在量子生物科技领域的应用. 展开更多
关键词 金纳米粒子 聚合酶链式反应 长程库仑作用 瑞利相干散射 量子尺寸效应
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PCR技术在食品微生物检测中的应用与优化
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作者 王静 张兴吉 《现代食品》 2025年第15期134-136,共3页
随着食品安全问题的凸显,快速、准确检测食品微生物污染成为保障公众健康的关键。聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术因其高灵敏度、高特异性和快速性,在食品微生物检测中展现出显著优势。本文围绕PCR技术类型及其适用... 随着食品安全问题的凸显,快速、准确检测食品微生物污染成为保障公众健康的关键。聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术因其高灵敏度、高特异性和快速性,在食品微生物检测中展现出显著优势。本文围绕PCR技术类型及其适用性,分析其在病原菌检测、腐败菌与发酵菌检测、转基因成分检测中的应用,提出切实有效的优化策略,并在此基础上就PCR技术在应用中的常见问题与解决方案进行了简要论述。 展开更多
关键词 食品安全 聚合酶链式反应(pcr) 微生物检测 应用路径
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PCR技术在乳制品细菌检测中的应用研究
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作者 张翼飞 丁博 《食品安全导刊》 2025年第25期153-155,共3页
本文聚焦聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)在乳制品细菌检测中的应用,简要概括其在致病菌、腐败菌、发酵菌等不同菌群检测中的应用,同时提出技术创新、标准化建设、人才培养及多技术联用等促进PCR技术在乳制品细菌检测中... 本文聚焦聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)在乳制品细菌检测中的应用,简要概括其在致病菌、腐败菌、发酵菌等不同菌群检测中的应用,同时提出技术创新、标准化建设、人才培养及多技术联用等促进PCR技术在乳制品细菌检测中应用的建议,以期为乳制品质量安全控制提供技术支持。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应(pcr) 乳制品 细菌检测 检测标准 技术联用
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多重荧光PCR在食品耐药菌检测中的应用
13
作者 焦斐 张飞 肖旭华 《食品安全导刊》 2025年第30期74-77,共4页
目的:针对食品中耐药菌污染威胁公共卫生安全、传统检测方法存在检测周期长及效率低等局限,建立多重荧光聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术检测体系同时检测多个耐药基因的方法,以提升检测效率。方法:以金黄色葡萄球... 目的:针对食品中耐药菌污染威胁公共卫生安全、传统检测方法存在检测周期长及效率低等局限,建立多重荧光聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术检测体系同时检测多个耐药基因的方法,以提升检测效率。方法:以金黄色葡萄球菌与大肠杆菌等主要食源性耐药菌为研究对象,设计特异性引物探针并建立多重荧光PCR检测体系,经反应体系优化,对肉制品、乳制品以及水产品等样品开展检测验证。结果:方法检出限达10^(2)CFU·mL^(-1),特异性良好,检测时间缩短为4~6 h,表明该方法具有良好的实际适用性,准确率在95%以上。结论:该技术能够克服传统方法耗时长与通量低的缺陷,为食品安全监管提供了快速准确的检测手段。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应(pcr) 耐药菌 快速检测 耐药基因 食品安全
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低温乳制品中金黄色葡萄球菌实时荧光PCR检测方法的建立和应用
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作者 陶文靖 焦凤莲 +3 位作者 岳丽莎 黄宇 安宏祥 陈晓瑞 《食品安全导刊》 2025年第31期112-118,122,共8页
本文为低温乳制品快速放行建立了一种金黄色葡萄球菌实时荧光聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)快速检测方法体系,可以实现在24 h内完成增菌和快速检测,并在实时荧光PCR反应中增加了内标基因扩增,可监控PCR扩增反应是否受... 本文为低温乳制品快速放行建立了一种金黄色葡萄球菌实时荧光聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)快速检测方法体系,可以实现在24 h内完成增菌和快速检测,并在实时荧光PCR反应中增加了内标基因扩增,可监控PCR扩增反应是否受到抑制。依据国际标准ISO 16140-2:2016,以《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》(GB 4789.10—2016)第一法为参比方法,对方法的特异性、灵敏度、与参比方法的一致性指标进行了验证;方法在乳制品企业进行了实际应用。结果表明,该方法具良好的特异性,检出限为1 CFU/25 g(mL);人工污染样品和实际样本的检测结果表明,该方法与GB 4789.10—2016方法具有很好的一致性,相对准确度为100%;当方法结果为阴性时,扩增内标结果正常,对反应过程起到了监测作用。综上,本研究建立的方法可以用于低温乳制品中金黄色葡萄球菌快速定性检测。 展开更多
关键词 实时荧光聚合酶链式反应(pcr) 扩增内标 低温乳制品 金黄色葡萄球菌
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实时荧光定量PCR技术在天等辣椒酱常见致病菌检测中的应用与综合效益评估
15
作者 丁洪锋 《食品安全导刊》 2025年第30期101-105,共5页
目的:评估实时荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)在天等辣椒酱常见致病菌检测中应用的综合效益。方法:从2024年1—12月广西壮族自治区天等县生产的3个批次天等辣椒酱中随机抽取900份样本,采用随机数表法分为对照组... 目的:评估实时荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)在天等辣椒酱常见致病菌检测中应用的综合效益。方法:从2024年1—12月广西壮族自治区天等县生产的3个批次天等辣椒酱中随机抽取900份样本,采用随机数表法分为对照组(传统培养法,450份)和研究组(实时荧光定量PCR法,450份),比较两组的时间成本(样本前处理时间、检测总耗时、结果报告时间)、经济成本(单次检测耗材费用、设备维护成本、人力投入成本)、操作流程(人工操作时间、自动化步骤占比)、质量监控指标(检测完成率、数据记录完整性)、微生物学指标(沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、单核细胞增生李斯特菌等的检出率)。结果:研究组样本前处理时间、检测总耗时、结果报告时间均短于对照组(p<0.05);研究组单次检测耗材费用、设备维护成本高于对照组,人力投入成本低于对照组(p<0.05);研究组人工操作时间短于对照组,自动化步骤占比大于对照组(p<0.05);研究组检测完成率、数据记录完整性大于对照组(p<0.05);研究组的致病菌检出率为13.33%(60/450),对照组为12.00%(54/450),两组的检出率对比无显著差异(p>0.05)。结论:实时荧光定量PCR法虽然单次检测耗材和设备维护成本较高,但能显著缩短检测时间、降低人力成本、提高自动化程度和检测质量,具有显著的综合效益,适合在辣椒酱规模化生产中推广应用。食品企业在关键质量控制环节应优先采用实时荧光定量PCR法,并通过规模化检测来降低单位成本,同时将传统方法作为复核手段,以实现质量与效益的最优平衡。 展开更多
关键词 实时荧光定量聚合酶链式反应(pcr) 传统培养法 辣椒酱 致病菌检测 综合效益
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基于数字PCR平台的肺炎支原体耐药突变检测试剂盒与tNGS在肺炎支原体常见耐药突变检测中的效能对比
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作者 王逍潇 张鑫强 +5 位作者 赵云虎 江小珍 陈宗威 王子霞 陈秀贤 顾兵 《中国医学装备》 2025年第11期61-64,共4页
目的:基于MicroDrop微滴式数字聚合酶链式反应(PCR)平台的肺炎支原体鉴定及常见耐药突变检测试剂盒与高通量测序的病原靶向测序(tNGS)方法在肺炎支原体常见耐药突变检测的效能对比研究。方法:收集2023至2024年广东省人民医院肺炎住院患... 目的:基于MicroDrop微滴式数字聚合酶链式反应(PCR)平台的肺炎支原体鉴定及常见耐药突变检测试剂盒与高通量测序的病原靶向测序(tNGS)方法在肺炎支原体常见耐药突变检测的效能对比研究。方法:收集2023至2024年广东省人民医院肺炎住院患者的300份临床呼吸道样本,采用肺炎支原体耐药突变检测试剂盒和tNGS方法对耐药突变基因进行检测,对结果不一致的样本用Sanger测序法进行验证。结果:300份肺炎支原体阳性样本经肺炎支原体耐药突变检测试剂盒和tNGS方法平行检测的检出率分别为87.00%和78.67%,检测结果较为一致(Kappa=0.711);在25份结果不一致的样本中,采用Sanger测序法进行验证,结果显示低频基因突变的样本中,试剂盒仍保持可靠的检出能力,然而tNGS方法存在漏检,因此试剂检测低频突变能力更优。结论:基于数字PCR的肺炎支原体耐药突变检测试剂盒在检测低频突变样本的检出率高于tNGS方法,该方法有助于提高检测结果的准确性,为临床诊治提供快速精准的耐药基因检测手段。 展开更多
关键词 MicroDrop微滴式数字 聚合酶链式反应(pcr) 肺炎支原体常见耐药突变 耐药突变检测试剂盒 Sanger测序法 病原靶向测序(tNGS)法 低频突变
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基于PCR-RFLP方法对酸枣仁和理枣仁真伪鉴别研究
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作者 赖晶 马莉雅 +6 位作者 靳婉君 蔺瑞丽 史小亚 马潇 宋平顺 张明童 何小英 《药物分析杂志》 北大核心 2025年第11期1955-1965,共11页
目的:建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,以实现酸枣仁及其常见伪品理枣仁的快速鉴别。方法:对酸枣仁和理枣仁的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列进行限制性酶切位点分析,筛选出酸枣仁限制性酶切位点PaeR7I(C^TCGA... 目的:建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,以实现酸枣仁及其常见伪品理枣仁的快速鉴别。方法:对酸枣仁和理枣仁的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列进行限制性酶切位点分析,筛选出酸枣仁限制性酶切位点PaeR7I(C^TCGAG),以及理枣仁限制性酶切位点Hpy188I(TCN^GA),设计PCR-RFLP引物,并优化PCR-RFLP反应的关键参数,包括退火温度、循环数、底物量及酶切时间。结果:建立了酸枣仁、理枣仁的PCR-RFLP鉴别方法,在最佳反应条件下[退火温度为58~60℃、30个循环、鉴别引物(10μmol·L^(-1))各0.5μL],经PaeR7I酶酶切后,酸枣仁产生2条特异性DNA条带,理枣仁则无此条带;经Hpy188I酶酶切后,理枣仁产生2条特异性DNA条带,酸枣仁则无此条带。该方法具有良好的专属性,灵敏度高,可检测出掺有5%的理枣仁。结论:建立的PCR-RFLP法稳定性好,准确度高,可有效鉴别酸枣仁及其掺伪品理枣仁,为解决酸枣仁的质量控制问题提供了可靠的技术手段。 展开更多
关键词 酸枣仁 理枣仁 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 鉴别
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影响多重PCR扩增效果的因素 被引量:131
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作者 黄银花 胡晓湘 +4 位作者 徐慰倬 高宇 冯继东 孙汉 李宁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期65-68,共4页
不同循环参数、PCR缓冲液及反应体积的对比实验表明,循环参数中退火温度和时间、延伸时间及PCR缓冲液的成分影响多重PCR的扩增效果,而反应体积、循环次数对其扩增效果影响较小。
关键词 多重pcr 扩增效果 循环效果 pcr缓冲液 反应体积
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茶树ISSR-PCR反应体系的建立 被引量:37
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作者 姚明哲 王新超 +1 位作者 陈亮 杨亚军 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期172-176,206,共6页
通过优化影响茶树 ISSR-PCR 的主要参数,确立了适用于茶树的 ISSR 反应体系和扩增条件。结果表明在 20 μl 反应体系中,模板 DNA、引物、Mg++、dNTP 和 Taq DNA 聚合酶五种主要成分的最适浓度分别为 10ng、150 nmol/L、1.5 mmol/L、150 ... 通过优化影响茶树 ISSR-PCR 的主要参数,确立了适用于茶树的 ISSR 反应体系和扩增条件。结果表明在 20 μl 反应体系中,模板 DNA、引物、Mg++、dNTP 和 Taq DNA 聚合酶五种主要成分的最适浓度分别为 10ng、150 nmol/L、1.5 mmol/L、150 μmol/L、0.5 U。在扩增过程中,引物的适宜退火温度比其 Tm 值平均高 4.5℃,扩增出足量产物至少需要 30 个热循环。利用该优化反应体系和扩增条件,对 13 份不同茶树种质资源进行ISSR-PCR 扩增,扩增产物的多态性为 77.6%。引物 TRI18 构建的 ISSR 指纹图谱,可以区分 13 份茶树资源中的 12 份,分辨率达 92.3%。 展开更多
关键词 茶树 ISSR-pcr 模板DNA 引物 简单重复间序列 核苷酸
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油茶SRAP-PCR反应体系的建立和优化 被引量:16
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作者 孙佩光 奚如春 +2 位作者 钮世辉 骈瑞琪 陈晓阳 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1192-1199,共8页
为了建立油茶SRAP-PCR扩增体系,本研究使用单因素试验设计,对反应体系的Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP和引物浓度5个主要影响因子各设10个不同的水平梯度,筛选出适宜的因子范围;在此基础上,进一步采用L16(45)正交设计,对影响油茶SRAP-PCR... 为了建立油茶SRAP-PCR扩增体系,本研究使用单因素试验设计,对反应体系的Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP和引物浓度5个主要影响因子各设10个不同的水平梯度,筛选出适宜的因子范围;在此基础上,进一步采用L16(45)正交设计,对影响油茶SRAP-PCR反应体系的5个因素在4水平上进行优化,建立了油茶SRAP-PCR最佳反应体系,即25μL体积中包含模板DNA30ng,Mg2+2.8mmol/L,引物0.44μmol/L,dNTP0.2mmol/L和Taq酶1.0U。该SRAP-PCR体系的建立为油茶种质资源遗传多样性分析、品种鉴定及指纹图谱构建等研究提供了一个标准化的程序。 展开更多
关键词 油茶 SRAP-pcr 反应体系 正交设计
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