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猪CAST基因PCR-RFLPs与肉质相关性的分析 被引量：21
1
作者 程丰 赵云焕 +1 位作者 易本驰 陈斌 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第2期103-106,共4页
利用PCR-RFLP技术对新荣昌Ⅰ系猪(70头)的CAST基因进行多态分析,并就限制性酶切位点多态性与新荣昌Ⅰ系猪肉的嫩度、肉色、滴水损失、失水率、大理石纹和肌内脂肪含量等肉质性状之间的相关性进行了分析。结果表明,首次发现的CAST/MspⅠ... 利用PCR-RFLP技术对新荣昌Ⅰ系猪(70头)的CAST基因进行多态分析,并就限制性酶切位点多态性与新荣昌Ⅰ系猪肉的嫩度、肉色、滴水损失、失水率、大理石纹和肌内脂肪含量等肉质性状之间的相关性进行了分析。结果表明,首次发现的CAST/MspⅠ酶切位点中,DD基因型与肌脂含量IMP(%)存在显著正相关;CAST-RsaI酶切位点中,EF基因型与失水率LMR(%)存在显著负相关。 展开更多
关键词 猪 钙蛋白酶抑制蛋白基因 pcr—RFLP 肉质性状 分子标记
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PCR-RFLPs检测法在无氟烷隐性基因皮特兰猪建群中的应用 被引量：12
2
作者 谈永松 张似青 +3 位作者 张忠明 何玉英 刘红林 王林云 《上海农业学报》 CSCD 2001年第3期34-37,共4页
采用PCR RFLPs法对上海市农业科学院畜牧兽医研究所试验猪场的皮特兰猪进行氟烷基因检测 ,结果表明 ,在 4 0头皮特兰猪中 ,检测到具有NN氟烷基因型的猪 1头 ,具有Nn基因型的 9头 ,其余的为nn型 ,试验结果提示 ,采用此法对皮特兰猪的氟... 采用PCR RFLPs法对上海市农业科学院畜牧兽医研究所试验猪场的皮特兰猪进行氟烷基因检测 ,结果表明 ,在 4 0头皮特兰猪中 ,检测到具有NN氟烷基因型的猪 1头 ,具有Nn基因型的 9头 ,其余的为nn型 ,试验结果提示 ,采用此法对皮特兰猪的氟烷基因进行检测不但可行 。 展开更多
关键词 皮特兰猪 pcr-rflps氟烷基因 检测方法 无氟烷隐性基因群 选育
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不同品种猪生长激素基因的PCR-RFLPs分析 被引量：4
3
作者 俞沛初 华修国 郭传甲 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第2期221-224,共4页
采用PCR-RFLPs技术,对香猪、上海白猪、大约克夏猪生长激素基因-119～+715区域共834bp片段的扩增产物分别用ApaI、DraI、MspI三种限制性内切酶检测酶切位点的多态性。结果显示:ApaI酶切时,三个品种的猪都产生了3种基因型(AA、BB和AB),B... 采用PCR-RFLPs技术,对香猪、上海白猪、大约克夏猪生长激素基因-119～+715区域共834bp片段的扩增产物分别用ApaI、DraI、MspI三种限制性内切酶检测酶切位点的多态性。结果显示:ApaI酶切时,三个品种的猪都产生了3种基因型(AA、BB和AB),BB基因型的频率以大约克夏猪最高,AB基因型的频率以香猪最高,三个猪种间基因型频率、等位基因频率的差异不显著(P>0.05);DraI酶切时,各品种猪均未呈现酶切位点的多态性;MspI酶切时,仅大约克夏猪表现出2种基因型(CC、CD),香猪、上海白猪未产生酶切位点多态性。结论:AB基因型的频率以香猪为最高,它可能是小型猪的有利基因型;在香猪和上海白猪中DraI和MspI酶切位点的多态性比较贫乏。 展开更多
关键词 猪 生长激素基因 pGH GENE pcr-rflps
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滩羊生长激素基因PCR-RFLPs反应体系的优化 被引量：1
4
作者 于洪川 魏智清 +3 位作者 张振汉 陈如熙 杜立新 龚伟宏 《宁夏农学院学报》 2003年第1期29-30,33,共3页
以宁夏滩羊基因组DNA为模板 ,研究影响滩羊PCR -RFLPs扩增的因素 ,实验结果表明 :特异性引物的浓度、Mg2 + 浓度、模板DNA的完整性 ,浓度、纯度、TaqDNA聚合酶、变性温度、退火温度和循环次数等诸多因素对PCR -RFLPs扩增影响较大。为此... 以宁夏滩羊基因组DNA为模板 ,研究影响滩羊PCR -RFLPs扩增的因素 ,实验结果表明 :特异性引物的浓度、Mg2 + 浓度、模板DNA的完整性 ,浓度、纯度、TaqDNA聚合酶、变性温度、退火温度和循环次数等诸多因素对PCR -RFLPs扩增影响较大。为此我们对PCR -RFLPs的反应体系和反应程序进行了研究和浓度梯度对比试验 ,建立了滩羊GH基因PCR 展开更多
关键词 滩羊 生长激素 pcr—RFLPs 反应体系 优化 反应程序
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猪肠道病毒和猪捷申病毒双重荧光RT-PCR检测方法的建立
5
作者 莫玲 于新友 +5 位作者 吕素芳 毕艳丽 张颖 李天芝 Ashenafi Kiros Wubshet 王文秀 《动物医学进展》 北大核心 2026年第2期49-53,共5页
为建立同时检测猪肠道病毒(PEV)和猪捷申病毒(PTV)的荧光RT-PCR方法,根据NCBI中PEV VP1(NCBI AF363453)和PTV VP1(NCBI GQ293092)基因序列,分别设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和扩增程序,建立了一种无需提取核酸即可同时检测PEV... 为建立同时检测猪肠道病毒(PEV)和猪捷申病毒(PTV)的荧光RT-PCR方法,根据NCBI中PEV VP1(NCBI AF363453)和PTV VP1(NCBI GQ293092)基因序列,分别设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和扩增程序,建立了一种无需提取核酸即可同时检测PEV和PTV的双重荧光RT-PCR检测方法,对该方法的特异性、敏感性及重复性进行评估,并对临床样品进行检测。结果表明,20μL体系中各引物和探针最适加入量为:PEV-F 0.8μL、PEV-R 1.3μL、PEV-P 0.6μL、PTV-F 1.2μL、PTV-R 1.4μL和PTV-P 0.7μL,优化后的扩增程序为:90℃3 min;60℃反转录5 min;95℃5 s,52℃退火延伸20 s(此处收集荧光),共计40个循环。该对猪常见病原均无扩增,对PEV和PTV检测敏感性分别为5.13 TCID 50/100μL和3.47 TCID 50/100μL,对135份临床样品检测结果与传统核酸提取法结果一致。成功建立了PEV和PTV的免提取核酸双重荧光RT-PCR方法,特异性好,敏感性高,可用于临床两种疑似病例的快速检测。 展开更多
关键词 猪肠道病毒 猪捷申病毒 免提取核酸 荧光pcr
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猪GH基因全序列PCR-RFLPs研究 被引量：3
6
作者 帅素容 李学伟 邢晋祎 《四川农业大学学报》 CSCD 2003年第4期334-337,共4页
实验利用PCR-RFLPs技术分析了大约克猪和长白猪GH基因的BstⅪ和HhaⅠ两种内切酶酶切位点多态性。结果表明,在所检约克夏猪和长白猪两个品种中,pGH基因全序列内仅有1个BstⅪ酶切位点,未发现BstⅪ酶切位点多态性;pGH基因全序列中存在丰富... 实验利用PCR-RFLPs技术分析了大约克猪和长白猪GH基因的BstⅪ和HhaⅠ两种内切酶酶切位点多态性。结果表明,在所检约克夏猪和长白猪两个品种中,pGH基因全序列内仅有1个BstⅪ酶切位点,未发现BstⅪ酶切位点多态性;pGH基因全序列中存在丰富的HhaⅠ酶切位点多态性,约克夏猪中有10种带型,长白猪中检出了8种带型,其中B带型频率最高,长白猪中为41 67%,约克夏猪中占31 11%,二者差异极显著(P<0 01)。其他各带型频率分布在两品种间差异不显著。 展开更多
关键词 猪 生长激素基因 pcr-rflps GH基因 大约克猪 长白猪
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应用PCR-RFLPs进行甲型血友病的产前基因诊断 被引量：1
7
作者 金春莲 林常坤 +5 位作者 姜力 张学 张鸣镝 孙开来 廖洁 池兴荷 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 1993年第S1期5-8,共4页
应用PCR—RHLPs技术,检测FⅧ基因内18外显子3′侧BCl 1位点和内含子22xba Ⅰ位点的RFLPs,分析缺陷FⅧ基因的连锁状况,在东北地区首次完成2例甲型血友病家系的产前基因诊断。
关键词 甲型血友病 聚合酶链式反应 产前基因诊断
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猪RYR1基因三种PCR-RFLPs检测方法的比较 被引量：2
8
作者 杜立新 王爱华 +1 位作者 姜运良 章岩 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2000年第4期8-10,共3页
猪应激综合症是猪在应激因子 (如运输、转栏、高温、预防注射和配种等 )的作用下诱发的一种综合症 ,其发生主要是由于RYR1基因的点突变造成的。本研究对RYR1基因的三种PCR -RFLPs检测方法进行了比较 ,分别利用三种方法对 60头猪的检测... 猪应激综合症是猪在应激因子 (如运输、转栏、高温、预防注射和配种等 )的作用下诱发的一种综合症 ,其发生主要是由于RYR1基因的点突变造成的。本研究对RYR1基因的三种PCR -RFLPs检测方法进行了比较 ,分别利用三种方法对 60头猪的检测结果证明 :三者具有相同的准确性。但是三引物法和四引物法较二引物法所需的时间更少 。 展开更多
关键词 RYR1基因 pcr-rflps 检测方法 猪应激综合征
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山东地方绵羊MHC-DRB3基因PCR-RFLPs反应体系的优化 被引量：5
9
作者 尚友国 宋美玲 王建民 《草食家畜》 2005年第2期17-19,共3页
本文探讨了影响山东地方绵羊MHC-DRB3基因PCR-RFLPs扩增的因素,实验结果表明:抗凝剂、模板的浓度、纯度、Mg2+的浓度、引物的浓度、变性温度、Taq聚合酶、退火温度等因素对扩增结果的影响,为此我们对影响扩增结果的各个因素和反应程序... 本文探讨了影响山东地方绵羊MHC-DRB3基因PCR-RFLPs扩增的因素,实验结果表明:抗凝剂、模板的浓度、纯度、Mg2+的浓度、引物的浓度、变性温度、Taq聚合酶、退火温度等因素对扩增结果的影响,为此我们对影响扩增结果的各个因素和反应程序进行了研究和浓度梯度的对比试验,建立了绵羊MHC-DRB3基因PCR-RFLPs的最佳反应体系和反应程序。 展开更多
关键词 MHC 基因 绵羊 山东 pcr-rflps 优化 最佳反应体系 反应程序 MG^2+ 变性温度 退火温度 对比试验 浓度梯度 抗凝剂 聚合酶 TAQ
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DHAV-3弱毒活疫苗株(HB80株)与野毒株鉴别检测的RT-PCR-RFLP方法的建立
10
作者 傅秋玲 万春和 +13 位作者 焦文龙 韩相敏 程龙飞 陈珍 赖志 陈红梅 梁齐章 江南松 刘荣昌 施少华 陈翠腾 苏敬良 黄瑜 傅光华 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期691-696,共6页
为建立一种能快速、简便、准确鉴别检测我国鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)野毒株与弱毒活疫苗HB80株的方法,本研究根据DHAV-3野毒株及HB80株的2A基因序列差异片段设计并合成一对特异性引物,经反应条件的优化,初步建立了鉴别检测我国DHAV-3野毒... 为建立一种能快速、简便、准确鉴别检测我国鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)野毒株与弱毒活疫苗HB80株的方法,本研究根据DHAV-3野毒株及HB80株的2A基因序列差异片段设计并合成一对特异性引物,经反应条件的优化,初步建立了鉴别检测我国DHAV-3野毒株与HB80株的反转录聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(RTPCR-RFLP)方法。利用该方法检测DHAV-3野毒株和疫苗株,以及DHAV-1、鸭3型星状病毒、H9亚型禽流感病毒、禽坦布苏病毒、鸭瘟病毒、鸭3型腺病毒、鸭呼肠孤病毒和番鸭细小病毒,结果显示该方法仅能特异性扩增DHAV-3(包括野毒株和疫苗株)的682 bp片段,且仅DHAV-3野毒株的RT-PCR产物(682 bp片段)能够被Apa I酶切为444 bp和238 bp两个片段。将DHAV-3的RNA 10倍倍比稀释(1.7×10^(6)拷贝/μL~1.7×10^(1)拷贝/μL)后作为模板,利用该方法检测,结果显示该方法能够检出DHAV-3 RNA的最低浓度为170拷贝/μL。重复性结果显示,该方法对3个不同浓度DHAV-3野毒株和HB80株RNA的检测结果均一致。利用该方法和常规RT-PCR方法同时对疑似临床鸭肝炎组织、实验感染DHAV-3野毒株(HB株)和免疫DHAV-3活疫苗株鸭组织等10^(1)份样品检测,结果显示两者检测结果的符合率为100%。本研究首次建立了能特异性鉴别检测DHAV-3野毒株与我国弱毒活疫苗株的RT-PCR-RFLP方法,为我国鸭DHAV-3感染的防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 鸭3型甲肝病毒 野毒株 弱毒疫苗株 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法 鉴别
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dPCR方法动态监测T790M突变在EGFR阳性非小细胞肺癌耐药治疗中的指导作用
11
作者 姚铠涛 曾小芸 +3 位作者 连逸恺 林建雄 王双玲 魏丹娜 《分子诊断与治疗杂志》 2026年第1期131-134,共4页
目的本研究旨在探讨使用数字PCR(dPCR)方法动态监测血浆EGFR T790M突变的可行性,并评估基于血浆T790M突变检测的早期干预是否可作为EGFR突变非小细胞肺癌患者EGFR-TKI转换治疗的最佳时机。方法初筛2021年7月至2023年12月在汕头大学医学... 目的本研究旨在探讨使用数字PCR(dPCR)方法动态监测血浆EGFR T790M突变的可行性,并评估基于血浆T790M突变检测的早期干预是否可作为EGFR突变非小细胞肺癌患者EGFR-TKI转换治疗的最佳时机。方法初筛2021年7月至2023年12月在汕头大学医学院第二附属医院75例接受埃克替尼治疗的EGFR阳性Ⅳ期NSCLC患者,T790M突变率为53.3%,最终纳入40例患者。试验组(n=18)在血浆检测到T790M突变后更换第三代EGFR-TKI治疗,对照组(n=22)在影像学进展及T790M突变后更换EGFR-TKI治疗。比较两组的临床疗效、无进展生存期(PFS)及不良反应。结果试验组的客观缓解率(ORR)为72.2%,对照组为68.2%,两组差异无统计学意义(P>0.05)。试验组的疾病控制率(DCR)为94.4%,对照组为81.9%,差异无统计学意义(P>0.05)。试验组的中位PFS显著长于对照组,差异有统计学意义(14.8个月vs 10.3个月,P=0.024)。两组的不良反应均为1~2级,皮疹、腹泻及肝功能异常的发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用dPCR动态监测血浆EGFR T790M突变,可较影像学更早识别一代EGFR-TKI耐药,从而及时转换三代EGFR-TKI治疗,延缓疾病进展,是一种经济且临床可行的策略。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 EGFR T790M 数字pcr 三代酪氨酸激酶抑制剂
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利用猪毛PCR-RFLPs方法检测氟烷基因
12
作者 曹建国 赵芳根 +3 位作者 邵雪忠 方美英 陆咏梅 庄泉均 《上海农业学报》 CSCD 1998年第4期23-26,共4页
利用猪毛PCR－RFLPs方法检测“皮枫”、长（丹）、“长（丹）×皮枫”、“大约克×皮枫”、枫泾、“长（丹）×上”、“皮杜×长上”不同组合148头猪的氟烷基因，其基因型频率NN41头，占27．7％；Nn82头，占55．4％；u... 利用猪毛PCR－RFLPs方法检测“皮枫”、长（丹）、“长（丹）×皮枫”、“大约克×皮枫”、枫泾、“长（丹）×上”、“皮杜×长上”不同组合148头猪的氟烷基因，其基因型频率NN41头，占27．7％；Nn82头，占55．4％；un25头，占16．9％。相关试验表明，氟烷基因杂合子比率高的杂交组合，具有生长速度快、胴体瘦肉率高、肉质良好的优点。此法检测成本低、速度快、准确性高，能检出氟烷基因阴性、阳性或杂合子，可有效地防止氟烷基因纯合子在商品猪中出现，加快猪种的改良步伐。 展开更多
关键词 猪毛 P-R法 氟烷基因 检测 猪应激综合症
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猴痘病毒荧光定量PCR检测方法的建立
13
作者 孙健 赵柏林 《山东畜牧兽医》 2026年第1期8-12,共5页
猴痘病毒(Monkeypox virus,MPXV)作为一种重要的人畜共患病毒,其在全球范围内传播和蔓延引起了广泛关注,尤其是在近年来的疫情中,及时有效的检测方法显得尤为重要。为建立一种快速诊断MPXV的检测方法,根据2022年公布的MPXV的靶基因片段F... 猴痘病毒(Monkeypox virus,MPXV)作为一种重要的人畜共患病毒,其在全球范围内传播和蔓延引起了广泛关注,尤其是在近年来的疫情中,及时有效的检测方法显得尤为重要。为建立一种快速诊断MPXV的检测方法,根据2022年公布的MPXV的靶基因片段F3L(462 bp,GenBank登录号AF380138.1)保守区域,设计了1对特异性的引物和1条探针,建立了猴痘病毒荧光定量PCR检测方法。结果显示,本方法仅能有效检测MPXV,与牛结节皮肤病病毒、非洲猪瘟病毒VP72片段质粒、圆环病毒Ⅱ型标准品均无交叉反应;对重组质粒标准品的最低检测限为5.1 copies/μL;批内与批间的重复试验变异系数均小于6%。结果表明,本试验方法具有较强的敏感性、特异性和稳定性,可以用于猴痘病毒的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 猴痘病毒 荧光定量 pcr 检测方法
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机场道面承载能力ACR-PCR评价方法及其改进方向
14
作者 袁捷 李杰 +2 位作者 马鲁宽 凌建明 姜昌山 《同济大学学报(自然科学版)》 北大核心 2026年第2期255-263,共9页
道面承载能力评价是保障飞机安全运行的重要工作之一。在回顾飞机分类号-道面分类号(aircraft classification number-pavement classification number,ACN-PCN)评价方法基本原理并总结其局限性的基础上,阐述了飞机分类等级-道面分类等... 道面承载能力评价是保障飞机安全运行的重要工作之一。在回顾飞机分类号-道面分类号(aircraft classification number-pavement classification number,ACN-PCN)评价方法基本原理并总结其局限性的基础上,阐述了飞机分类等级-道面分类等级(aircraft classification rating-pavement classification rating,ACR-PCR)评价方法的优化内容;明确了ACR和PCR的计算方法,并通过算例对比分析了2种方法,同时提出了改进方向。结果表明,ACR-PCR评价方法优化了标准道面结构、当量单轮胎压等参数,更新了道面结构破坏模式的控制准则及力学响应计算方法,实现了与现行设计方法的统一;ACR值不能简单地用10倍的ACN值表示,并且ACR-PCR评价方法对刚性道面承载能力提出了更高要求;建议在优化标准结构的基础上,提出针对无机结合料稳定类基层道面的ACR计算方法以及刚性道面上加铺层复合道面承载能力ACR-PCR评价方法。 展开更多
关键词 机场工程 机场道面 承载能力 ACR-pcr评价方法
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猪兰尼定受体基因的PCR-RFLPS检测
15
作者 徐恒 沈斌 +3 位作者 高荣 刘世贵 陈晓辉 吕学斌 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期112-114,共3页
从血样中提取２０头种猪的基因组ＤＮＡ，利用合成的特异性引物，进行ＰＣＲ扩增，得到了含兰尼定受体基因第１８４３碱基的６５９ｂｐＤＮＡ片段，利用ＨｈａⅠ酶切和电泳检测了兰尼定受体基因的变异．结果表明：在２０头猪中，基因型... 从血样中提取２０头种猪的基因组ＤＮＡ，利用合成的特异性引物，进行ＰＣＲ扩增，得到了含兰尼定受体基因第１８４３碱基的６５９ｂｐＤＮＡ片段，利用ＨｈａⅠ酶切和电泳检测了兰尼定受体基因的变异．结果表明：在２０头猪中，基因型为Ｎｎ的杂合子猪４头，占２０％；基因型为ＮＮ的兰尼定受体基因正常猪１６头，占８０％；未检测到兰尼定受体基因突变纯合子．作者的研究证实利用ＰＣＲＲＦＬＰＳ技术检测兰尼定受体基因型具有快速、准确的特点，可为种猪品质的选定提供可靠数据． 展开更多
关键词 兰尼定受体基 pcr-rflps 猪 恶性高热综合征
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基于直接PCR的转基因种子纯度快速检测方法
16
作者 翟杉杉 李俊 +4 位作者 肖芳 李允静 武玉花 高鸿飞 吴刚 《中国油料作物学报》 北大核心 2026年第1期168-181,共14页
种子纯度检测对于保证种子质量,提高作物产量具有重要意义。建立快速、准确、低成本的转基因种子纯度检测技术将为推进生物育种产业化发展提供有力支撑。本研究基于直接PCR技术提出了一种转基因种子纯度快速检测方案,包括:(1)利用自主... 种子纯度检测对于保证种子质量,提高作物产量具有重要意义。建立快速、准确、低成本的转基因种子纯度检测技术将为推进生物育种产业化发展提供有力支撑。本研究基于直接PCR技术提出了一种转基因种子纯度快速检测方案,包括:(1)利用自主研发的快速提取试剂,在常温下实现单粒种子研磨、提取同步进行,2分钟内一步式实现核酸提取,提取液无需纯化、直接作为模板进行实时荧光PCR扩增;(2)配制PCR反应体系;(3)样品分板;(4)高通量检测;(5)种子纯度计算。利用本方法对3种转基因大豆中黄6106、DBN9004、SHZD3201种子样品进行纯度检测,15份样品从制样到结果鉴定一个工作日内全部完成。该方法简化了现有纯度检测技术的操作步骤,显著缩短了分析时间,为转基因种子纯度检测提供了一种可靠的单粒快速检测新方法。 展开更多
关键词 转基因种子 纯度检测 DNA快速提取 直接pcr
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槲树不同器官及盐胁迫下qRT-PCR的内参基因筛选及验证
17
作者 蒋萌 白晓宁 +4 位作者 王文波 赵亚洲 胡增辉 苏淑钗 冷平生 《中南林业科技大学学报》 北大核心 2026年第1期211-220,234,共11页
[目的]筛选在不同器官及盐胁迫下表达稳定的槲树内参基因,验证所选内参基因在qRT-PCR中的适用性和稳定性,为精准评价槲树目标基因表达量提供理论依据。[方法]从槲树盐胁迫转录组中筛选出10个高表达传统管家基因作为候选内参基因(TUBA、T... [目的]筛选在不同器官及盐胁迫下表达稳定的槲树内参基因,验证所选内参基因在qRT-PCR中的适用性和稳定性,为精准评价槲树目标基因表达量提供理论依据。[方法]从槲树盐胁迫转录组中筛选出10个高表达传统管家基因作为候选内参基因(TUBA、TUBA、GAPDH、Actin、EIF2B5、UBE2W、ADCK、EEF1B、UBE2J1和EIF5A),采用geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder软件和ΔCt程序对候选基因在槲树中的表达稳定性进行分析。以槲树6个器官(根、茎、叶、叶芽、花序、种子)及盐胁迫下4个不同处理时期(CK、3 h、24 h、96 h)的叶片为样品,通过qRT-PCR技术,结合候选内参基因,验证过氧化氢酶基因QdCAT2在槲树不同器官及盐胁迫下的表达模式以及候选内参基因的表达稳定性。[结果]10个候选内参基因中,EIF5A和UBE2W的表达稳定性最高,综合排名位居前列,EIF2B5为最不稳定内参基因。QdCAT2基因在槲树叶片中表达量最高,且随着盐胁迫时间的延长,表达量呈先升高后降低的趋势,在处理3 h后达到高峰,使用EIF5A、UBE2W及EIF5A+UBE2W组合作为内参基因得到的相对表达结果基本一致,表明EIF5A和UBE2W为槲树各器官及盐胁迫最适合的内参基因。[结论]成功筛选出了2个稳定内参基因,并验证了EIF5A、UBE2W及EIF5A+UBE2W组合均适合作为槲树不同器官及盐胁迫下qRT-PCR的内参基因,为槲树不同器官及盐胁迫下基因表达分析提供了参考,并为后续槲树分子生物学研究奠定理论基础。 展开更多
关键词 槲树 实时荧光定量pcr 内参基因筛选 盐胁迫 表达分析
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基于边缘无浆体msp4基因的PCR检测方法的建立及应用
18
作者 廖培淇 朱子奇 +4 位作者 苏中华 甘富斌 李俊强 陈远才 张龙现 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期77-82,共6页
为建立特异、敏感、快速的边缘无浆体PCR检测方法,以其msp4基因的保守区为靶标设计一对特异性引物。优化PCR反应条件后,进行了敏感性、特异性、重复性试验及临床样品检测。结果显示,所建立的方法能够特异性检测边缘无浆体核酸,而与其他... 为建立特异、敏感、快速的边缘无浆体PCR检测方法,以其msp4基因的保守区为靶标设计一对特异性引物。优化PCR反应条件后,进行了敏感性、特异性、重复性试验及临床样品检测。结果显示,所建立的方法能够特异性检测边缘无浆体核酸,而与其他动物常见血液原虫无交叉反应;该方法的检测下限为380 fg/μL,拷贝数为126拷贝/反应;批内、批间试验结果表明,该方法具有良好的重复性和稳定性;对120份牦牛血液临床样本检测结果表明,该方法检测边缘无浆体阳性率为54.1%(65/120),高于文献报道方法检测结果37.5%(45/120),表明该方法具有良好的敏感性和准确性。成功建立了一种敏感、特异、快速的边缘无浆体PCR检测方法,为我国牛无浆体病的流行病学调查和诊断防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 边缘无浆体 msp4基因 pcr 牛无浆体病
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暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及其杂交F_(1)代的荧光PCR鉴定技术的建立
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作者 赵昕 车帅 +4 位作者 王焕 孙侦龙 尤颖哲 柳淑芳 庄志猛 《渔业科学进展》 北大核心 2026年第1期37-47,共11页
暗纹东方鲀(Takifugu obscurus♀)×红鳍东方鲀(T.rubripes♂)的杂交F_(1)代具备双亲诸多优良性状,市场前景较好。但杂交F_(1)代的形态特征与其亲本难以区分,为河鲀种质资源保护和开发利用带来了困扰,迫切需要开发有效的分子鉴定方... 暗纹东方鲀(Takifugu obscurus♀)×红鳍东方鲀(T.rubripes♂)的杂交F_(1)代具备双亲诸多优良性状,市场前景较好。但杂交F_(1)代的形态特征与其亲本难以区分,为河鲀种质资源保护和开发利用带来了困扰,迫切需要开发有效的分子鉴定方法对杂交F_(1)代及其亲本进行精准判别。为实现杂交F_(1)代及其亲本的快速准确鉴定,本研究根据核基因SH3PX3多态性SNP位点,设计荧光PCR扩增引物及探针,优化了荧光PCR参数,建立了暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及其杂交F_(1)代的荧光PCR鉴定方法,并对该方法进行了验证。结果显示:杂交F_(1)代的COI序列与母本暗纹东方鲀的序列相似度为100%,在NJ进化树中聚为一支,无法实现杂交F_(1)代和母本的区分;SH3PX3基因荧光PCR体系最佳退火温度为48℃;荧光PCR扩增后,暗纹东方鲀仅FAM通道有Ct值,ΔCt值大于20,红鳍东方鲀FAM信号通道比HEX通道的Ct值高2~5,杂交F_(1)代的FAM通道与HEX通道的Ct值接近,二者之差小于2;基于上述方法对17份暗纹东方鲀、21份红鳍东方鲀和53份杂交F_(1)代样品进行验证,鉴定准确率为100%。本研究建立的荧光PCR鉴定方法不仅具有结果准确、易判读等优点,还避免了测序等繁琐流程,可实现高通量检测,显著提高了检测效率,为河鲀种质资源鉴定与保护、杂交育种和遗传多样性研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 暗纹东方鲀 红鳍东方鲀 杂交F_(1)代 SH3PX3基因 荧光pcr 物种鉴定
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猪圆环病毒2型微滴数字PCR检测方法的建立及临床应用
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作者 刘武函 唐小明 +8 位作者 彭志 张坤 谢怡灵 范仲鑫 王卫国 尚玲 张梦凡 杨青 胡巧云 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期120-125,共6页
为建立一种特异性强、敏感性高、重复性好的猪圆环病毒2型(PCV-2)微滴数字PCR检测方法,试验基于PCV-2 ORF1保守区域设计引物和探针,通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度及特异性、敏感性和重复性试验建立微滴数字PCR方法,并采用该方法... 为建立一种特异性强、敏感性高、重复性好的猪圆环病毒2型(PCV-2)微滴数字PCR检测方法,试验基于PCV-2 ORF1保守区域设计引物和探针,通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度及特异性、敏感性和重复性试验建立微滴数字PCR方法,并采用该方法对90份临床样本进行检测。结果表明:建立的PCV-2微滴数字PCR检测方法的最佳引物和探针浓度分别为18μmol/L和9μmol/L,退火温度为61℃;能特异性检出PCV-2,与多种常见猪病原[猪圆环病毒3型(PCV-3)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)]无交叉反应;最低检测限为3.48 copies/μL;重复性试验中扩增后的拷贝数组内与组间变异系数范围分别在0.91%~6.13%和1.44%~8.53%之间,均小于10%。90份临床样本中,建立的微滴数字PCR方法检出PCV-2阳性样本43份,检出率为47.78%,经统计微滴数字PCR方法检出的阳性样本包含了实时荧光定量PCR方法检出的所有阳性样本,与实时荧光定量PCR方法的符合率为88.89%。说明本研究建立的PCV-2微滴数字PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,适用于临床样本(特别是低病毒载量样本)的检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 微滴数字pcr 病毒检测 检测方法 特异性试验 敏感性试验 重复性试验
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