利用PiggyBac转座子技术构建NLRC5基因过表达BEAS-2B细胞系及其功能研究

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作者 孙丹妮 刘欣悦 +7 位作者 饶子凡 杜岚 张湘琳 刘梓谕 侯诗源 沈星 刘蓉蓉 吴兴安 《空军军医大学学报》 2025年第4期526-532,共7页

目的利用PiggyBac转座系统构建稳定表达NLRC5的BEAS-2B细胞系,为后续针对病毒抗原提呈功能的研究提供有力的工具。方法根据NLRC5基因信息扩增目的基因蛋白编码序列,构建目的基因NLRC5的转座子质粒,将辅助质粒和转座子质粒共转染至BEAS-2... 目的利用PiggyBac转座系统构建稳定表达NLRC5的BEAS-2B细胞系,为后续针对病毒抗原提呈功能的研究提供有力的工具。方法根据NLRC5基因信息扩增目的基因蛋白编码序列,构建目的基因NLRC5的转座子质粒,将辅助质粒和转座子质粒共转染至BEAS-2B细胞。嘌呤霉素筛选稳定转导的细胞后进行单克隆化,最后对获取的单克隆细胞在分子水平上进行过表达验证。结果成功构建一株NLRC5过表达的BEAS-2B细胞,且该细胞系可维持正常细胞活性与增殖能力。结论通过PiggyBac转座子技术实现了NLRC5的过表达,进而提高了MHC-Ⅰ分子基因的表达。通过对该基因的过表达从而研究NLRC5对MHC-Ⅰ抗原肽提呈途径的调控机制,为理解抗病毒免疫的复杂机制以及开发新的治疗策略提供有力支持。 展开更多

关键词 nlrc5 PIGGYBAC转座子 基因过表达 稳定转染细胞株

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细菌内毒素对鸡NLRC5受体及IFN基因转录的影响 被引量：9

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作者 常国斌 陈蓉 +6 位作者 栾德琴 张颖 刘向萍 马腾 戴爱琴 周伟 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1598-1604,共7页

本研究旨在探讨鸡NLRC5受体及IFN基因对不同细菌内毒素的诱导表达变化,为禽类NLRC5受体的分子功能及其参与先天免疫调控的作用机制提供理论依据。用不同浓度的(0、0.1、1.0、10.0μg.mL-1)来自致病性大肠杆菌(E.coli,EC)和肠炎沙门氏菌(... 本研究旨在探讨鸡NLRC5受体及IFN基因对不同细菌内毒素的诱导表达变化,为禽类NLRC5受体的分子功能及其参与先天免疫调控的作用机制提供理论依据。用不同浓度的(0、0.1、1.0、10.0μg.mL-1)来自致病性大肠杆菌(E.coli,EC)和肠炎沙门氏菌(S.enteriditis,SE)的2种内毒素(LPS)分别刺激鸡天然巨噬细胞系(HD11)2、4和6h,在不同的时间点收集细胞,提取总RNA,并设计相关引物,利用荧光定量PCR分析鸡NLRC5受体以及下游功能基因IFNA和IFNB的转录量变化,探讨HD11细胞对不同来源的细菌内毒素的免疫反应。研究表明:与对照组相比,1.0和10.0μg.mL-1的EC-LPS、SE-LPS均能诱导HD11细胞产生免疫应答,但0.1μg.mL-1组未能诱导成功;不同细菌LPS诱导的免疫应答时间不一致,经EC-LPS诱导的NLRC5和IFNB基因均在刺激后6h达到转录高峰,与2、4h差异显著(P<0.05),与对照组差异极显著(P<0.01);但IFNA基因在2、6h达到高峰,而在4h下降,呈"V"型转录趋势。SE-LPS诱导的NLRC5和IFNA、IFNB转录量随时间均保持一直上升的趋势,在6h达到高峰,且与对照组及2、4h差异显著(P<0.05)。结果表明NLRC5受体与IFNA和IFNB共同参与了细胞对细菌内毒素的免疫应答,NLRC5基因可能对鸡先天免疫功能具有调节作用。 展开更多

关键词 nlrc5 IFN 鸡 先天免疫 调节

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TLR2/NLRC5参与棕榈酸诱导的心肌细胞凋亡及相关机制研究 被引量：3

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作者 刘晓颖 蔡诗婷 +7 位作者 杨敏 萧定璋 谭红红 陈景 陈少贤 陈红梅 杨慧 余细勇 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2015年第7期763-768,共6页

目的:建立棕榈酸(palmitate acid,PA)诱导体外培养心肌细胞胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)及凋亡模型,检测Toll样受体2(TLR2)和NLRC5在此模型中的表达变化及研究相关的可能机制。方法:用500μmol/L终浓度的PA处理培养H9C2心肌细胞... 目的:建立棕榈酸(palmitate acid,PA)诱导体外培养心肌细胞胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)及凋亡模型,检测Toll样受体2(TLR2)和NLRC5在此模型中的表达变化及研究相关的可能机制。方法:用500μmol/L终浓度的PA处理培养H9C2心肌细胞后采用AnnexinⅤ/PI双染和流式细胞术分析细胞凋亡情况,并分别采用q-PCR及Western blot方法分析处理后细胞的胰岛素受体(InsR)、CD36、PGC-1α、TLR2、NLRC5、SIRT1、p-AMPK/AMPK的mRNA或蛋白表达变化。结果:与对照组比较,PA处理24 h后H9C2细胞的早、晚期和总凋亡率显著升高,分别为(7.55±3.80)%、(53.84±4.70)%和(61.39±8.54)%(P<0.05);处理6 h后心肌细胞的PGC-1αmRNA相对表达量开始下降(P<0.05),TLR2和NLRC5则显著升高(P<0.01),CD36mRNA相对表达量在PA处理14 h时升高(P<0.05);InsR、SIRT1和AMPK蛋白相对表达量从PA处理8 h时开始下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:TLR2/NLRC5参与PA诱导的心肌细胞IR和凋亡,并且可能与AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路的活性下降有关。 展开更多

关键词 脂毒性心肌损害 胰岛素抵抗 TLR2 nlrc5

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针刺调控NLRC5抑制NF-κB通路减轻SAMP8小鼠脑内神经炎症反应的研究 被引量：12

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作者 周雅然 张雪竹 沈鹏 《天津中医药》 CAS 2021年第1期71-76,共6页

[目的]观察针刺调控NLRC5抑制核转录因子-κB(NF-κB)通路减轻SAMP8脑内神经炎症反应的作用。[方法]将7月龄雄性快速老化鼠SAMP8及其同源正常对照小鼠SAMR1分为SAMR1组、SAMP8组和SAMP8针刺组。针刺组予以针刺治疗,采用“调神益智”针... [目的]观察针刺调控NLRC5抑制核转录因子-κB(NF-κB)通路减轻SAMP8脑内神经炎症反应的作用。[方法]将7月龄雄性快速老化鼠SAMP8及其同源正常对照小鼠SAMR1分为SAMR1组、SAMP8组和SAMP8针刺组。针刺组予以针刺治疗,采用“调神益智”针法进行治疗,取穴为水沟、内关和三阴交;针刺每日1次,持续30 d。采用Morris水迷宫检测认知能力;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测海马内p65、NF-κB抑制蛋白激酶(IκK)、NLRC5 mRNA及蛋白表达;酶联免疫吸附(ELISA)法检测海马内白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。[结果]与SAMR1组比较,SAMP8小鼠学习记忆功能明显受损,表现为在隐蔽及反向平台实验中逃避潜伏期较长(P<0.05);搜索平台所用策略较为僵化;在空间探索实验中,首次穿越原平台时间明显较长,穿越原平台次数较少,中环区域停留时间百分比较小(P<0.05)。脑内p-IκK、p-p65 mRNA及蛋白表达上升,而NLRC5 mRNA及蛋白表达下降;海马内IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著增高(P<0.01)。针刺治疗后,针刺组在隐蔽平台及反向平台实验中逃避潜伏期较SAMP8组明显缩短(P<0.05),且在空间探索实验中,首次穿越原平台时间、穿越原平台次数、中环区域停留时间百分比均明显改善(P<0.05)。针刺能明显下调SAMP8脑内p-IκK、p-p65 mRNA及蛋白表达,而提高NLRC5 mRNA及蛋白表达。针刺能够降低SAMP8海马内上述炎症因子水平,特别是IL-6降低明显。[结论]SAMP8鼠脑内存在炎症反应激活现象,针刺通过提高NLRC5来抑制NF-κB活化,减少炎症因子释放,降低脑内炎症反应,从而改善神经元存活微环境,进而改善SAMP8小鼠的认知障碍。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 针刺 炎症 nlrc5 核转录因子-ΚB

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狼山鸡NLRC5基因启动子区SNP及其在先天免疫中的效应分析 被引量：2

5

作者 刘向萍 郭晓敏 +7 位作者 李志腾 朱静 盛中伟 马腾 常国斌 窦新红 王克华 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期41-47,共7页

旨在通过检测狼山鸡NLRC5基因启动子区单核苷酸多态位点,确定不同基因型的遗传效应,并经过后代分离群体验证,以期筛选与先天免疫性状相关的遗传标记。本研究采用MALDI-TOF-MS技术对狼山鸡群体NLRC5基因启动子区SNPs位点进行扫描;同时测... 旨在通过检测狼山鸡NLRC5基因启动子区单核苷酸多态位点,确定不同基因型的遗传效应,并经过后代分离群体验证,以期筛选与先天免疫性状相关的遗传标记。本研究采用MALDI-TOF-MS技术对狼山鸡群体NLRC5基因启动子区SNPs位点进行扫描;同时测定部分免疫性状,分析不同基因型个体免疫性状的差异。结果发现,在g.628981处存在A/G突变,共AA、AG和GG 3种基因型,狼山鸡不同基因型免疫指标间存在显著差异,AA基因型个体的H/L值显著低于GG基因型个体,而胸腺指数、脾脏指数、淋巴细胞转化率和IgG含量均显著高于GG基因型个体(P<0.05);在F2代AA和GG两个分离群体中同样发现AA型个体各项性状值均优于GG型个体。结合NLRC5基因在胸腺与脾组织中转录水平的差异,表明AA基因型个体表现出较好的先天免疫性能,NLRC5基因g.628981(A/G)位点可作为先天免疫性状有效的遗传标记。 展开更多

关键词 鸡 nlrc5基因 多态性 先天免疫

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pEGFP-C2-NLRC5重组质粒的构建及其表达 被引量：2

6

作者 徐涛 彭云云 +5 位作者 李琳 黄成 张磊 金涌 吕雄文 李俊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第1期5-8,共4页

目的构建含NLRC5蛋白功能区的cDNA序列的真核表达载体pEGFP-C2-NLRC5,并检测其在肾成纤维细胞(COS-7)中的表达。方法采用RT-PCR法从人肝星状细胞(LX-2)中获得NLRC5蛋白功能区的cDNA序列片段,用EcoRⅠ和BamHⅠ双切酶将片段和载体pEGFP-C... 目的构建含NLRC5蛋白功能区的cDNA序列的真核表达载体pEGFP-C2-NLRC5,并检测其在肾成纤维细胞(COS-7)中的表达。方法采用RT-PCR法从人肝星状细胞(LX-2)中获得NLRC5蛋白功能区的cDNA序列片段,用EcoRⅠ和BamHⅠ双切酶将片段和载体pEGFP-C2双酶切后,酶切产物加入T4连接酶16℃连接过夜,构建真核表达载体pEGFP-C2-NLRC5。将构建成功的pEGFP-C2-NLRC5重组质粒经PCR,限制性内切酶酶切和测序鉴定后用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将其转染至COS-7细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,Western blot法鉴定融合蛋白表达。结果阳性克隆经双酶切法鉴定可见NLRC5基因片段。转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,而且主要分布在细胞质中,Western blot法也可检测到在74 ku处有一明显条带,其大小符合EGFP-NLRC5表达的蛋白(NLRC5蛋白大小约为47 ku,EGFP蛋白大小约为27 ku),表明融合蛋白可在哺乳动物细胞中成功表达。结论成功构建pEGFP-C2-NLRC5质粒,NLRC5蛋白可在COS-7细胞中成功表达。 展开更多

关键词 nlrc5 COS-7 基因表达 重组质粒 转染

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鸡NLRC5基因启动子多态性分析 被引量：2

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作者 郭晓敏 刘向萍 +8 位作者 常国斌 徐璐 马腾 王洪志 李志腾 陈静 万方 徐琪 陈国宏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1845-1849,共5页

为了研究NLRC5基因启动子区的SNP及其对启动子功能元件的影响,采用目标捕获测序和PCR产物直接测序的方法对27个鸡品种和2种细胞的NLRC5基因启动子区进行SNP检测,总共检测到37个SNP位点,其中斗鸡未发现SNP存在,SNP9存在于除斗鸡以外的其... 为了研究NLRC5基因启动子区的SNP及其对启动子功能元件的影响,采用目标捕获测序和PCR产物直接测序的方法对27个鸡品种和2种细胞的NLRC5基因启动子区进行SNP检测,总共检测到37个SNP位点,其中斗鸡未发现SNP存在,SNP9存在于除斗鸡以外的其他鸡种和细胞。生物信息学软件预测得到NLRC5基因启动子区转录因子结合位点和CpG岛,SNP位点对转录因子结合位点和CpG岛大小均有影响,表明NLRC5启动子区SNP可能通过不同方式影响基因表达调控。 展开更多

关键词 鸡 nlrc5基因 启动子 SNP

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NLRC5:一种新发现的天然免疫调节分子 被引量：2

8

作者 陈亚冰 兰道亮 +1 位作者 汤承 李键 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期436-440,共5页

为了加深对NLRC5分子结构与功能复杂性的理解,论述了NLRC5的分子结构、组织差异表达与定位、生物学功能。重点论述了NLRC5在抗病毒免疫过程、炎症小体形成以及MHCⅠ分子基因转录调节过程中的功能,以期为NLRC5与天然免疫的相关研究提供... 为了加深对NLRC5分子结构与功能复杂性的理解,论述了NLRC5的分子结构、组织差异表达与定位、生物学功能。重点论述了NLRC5在抗病毒免疫过程、炎症小体形成以及MHCⅠ分子基因转录调节过程中的功能,以期为NLRC5与天然免疫的相关研究提供参考。 展开更多

关键词 天然免疫 nlrc5 分子结构 表达与定位 功能

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肝细胞癌患者中NLRC5的表达及其临床意义 被引量：4

9

作者 汪欢 俞广进 熊奇如 《肝胆外科杂志》 2018年第2期149-153,共5页

目的探讨核苷酸结合结构域受体家族含CARD结构域-5(NLRC5)在肝细胞癌组织中表达情况及与临床病理特征、预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测94例肝细胞癌组织及其癌旁正常组织中NLRC5的表达;Western blot检测20例新鲜肝细胞癌组织及... 目的探讨核苷酸结合结构域受体家族含CARD结构域-5(NLRC5)在肝细胞癌组织中表达情况及与临床病理特征、预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测94例肝细胞癌组织及其癌旁正常组织中NLRC5的表达;Western blot检测20例新鲜肝细胞癌组织及其对应的癌旁正常组织中NLRC5的表达。结果 NLRC5在肝细胞癌组织中的阳性率(62.77%)显著高于癌旁正常组织(19.15%,P<0.01);NLRC5的表达与肝细胞癌分化程度、TNM分期、有无硬化有关(P<0.05),与患者年龄、性别、AFP值、肿瘤大小、HBV感染、肿瘤包膜是否完整无关(P>0.05)。肝细胞癌组织中蛋白相对表达量(0.280±0.049)明显高于相应癌旁正常组织中(0.038±0.009,P<0.01)。NLRC5阳性患者的3年生存期明显低于阴性患者(P<0.01),并且NLRC5为肝细胞癌预后的独立性危险因素。结论 NLRC5蛋白在肝细胞癌组织中高表达,且与患者的临床病理特征、预后等因素有关,可能在肝细胞癌发生、发展过程中起着重要作用,有望成为肝细胞癌新的肿瘤标志物和潜在的治疗靶点。 展开更多

关键词 肝细胞癌 nlrc5 免疫组化学 WESTERN BLOT 预后

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细菌内毒素对鸡NLRC5信号通路相关基因转录的影响 被引量：1

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作者 仇玲玲 马腾 +8 位作者 王洪志 徐璐 刘向萍 陈静 郭晓敏 李志腾 万方 常国斌 陈国宏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1594-1599,共6页

通过LPS刺激鸡成纤维细胞系(DF-1),分别在0、2、4、6、8、12、18和24h等8个时间点采集细胞,提取总RNA,并设计相关引物,应用荧光定量PCR方法检测NLRC5信号通路相关基因(NLRC5、NF-κB、MHC-I、IL-6、IL-18、STAT1、STAT3和TLR4)mRNA表达... 通过LPS刺激鸡成纤维细胞系(DF-1),分别在0、2、4、6、8、12、18和24h等8个时间点采集细胞,提取总RNA,并设计相关引物,应用荧光定量PCR方法检测NLRC5信号通路相关基因(NLRC5、NF-κB、MHC-I、IL-6、IL-18、STAT1、STAT3和TLR4)mRNA表达变化规律。结果显示,LPS刺激后,NF-κB、MHC-I、IL-6、IL-18和STAT3的转录水平均呈现先显著下降(P<0.05)后上升的趋势,NLRC5和TLR4先显著上升后下降的趋势(P<0.05),STAT1的mRNA转录水平无显著性变化(P>0.05)。研究表明LPS刺激能够引起鸡DF-1细胞产生免疫反应,鸡NLRC5对NF-κB的转录起负调控作用。 展开更多

关键词 鸡 细菌内毒素 nlrc5 信号通路 荧光定量PCR

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鼠源pEGFP-C2-NLRC5重组质粒的构建及其表达 被引量：1

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作者 李琳 彭云云 +2 位作者 黄成 徐涛 李俊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第2期145-148,共4页

目的构建鼠源pEGFP-C2-NLRC5表达质粒,并观察其在RAW264.7细胞中的表达。方法从小鼠巨噬细胞RAW264.7中获得NLRC5基因的cDNA,用EcoRⅠ和BamHⅠ限制性内切酶双酶切后连接至pEGFP-C2载体上。表达载体经PCR、限制性内切酶酶切和DNA序列分... 目的构建鼠源pEGFP-C2-NLRC5表达质粒,并观察其在RAW264.7细胞中的表达。方法从小鼠巨噬细胞RAW264.7中获得NLRC5基因的cDNA,用EcoRⅠ和BamHⅠ限制性内切酶双酶切后连接至pEGFP-C2载体上。表达载体经PCR、限制性内切酶酶切和DNA序列分析正确后转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,RT-PCR法鉴定其转录,Western blot法分析其蛋白表达。结果进行双酶切鉴定该质粒可见NLRC5DNA片段,转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法可检测到NLRC5基因的转录,Western blot法可检测到NLRC5蛋白表达。结论成功构建重组pEGFP-C2-NLRC5表达载体,NLRC5蛋白可与绿色荧光蛋白在RAW264.7细胞中融合表达。 展开更多

关键词 nlrc5 PEGFP-C2 RAW264 7 基因表达 蛋白表达 nlrc5 PEGFP-C2 RAW264 7

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REV感染对鸡NLRC5及其信号通路相关基因转录的影响 被引量：1

12

作者 刘向萍 仇玲玲 +2 位作者 郭晓敏 王克华 陈国宏 《中国家禽》 北大核心 2016年第16期12-16,共5页

为探讨鸡NLRC5信号通路相关基因在禽网状内皮组织增生病病毒(REV)刺激后转录水平的变化,通过REV刺激鸡胚成纤维细胞(CEF),在刺激后7天采集细胞,提取总RNA,并设计相关引物,应用荧光定量PCR方法检测NLRC5信号通路相关基因(NLRC5、MHC-I、I... 为探讨鸡NLRC5信号通路相关基因在禽网状内皮组织增生病病毒(REV)刺激后转录水平的变化,通过REV刺激鸡胚成纤维细胞(CEF),在刺激后7天采集细胞,提取总RNA,并设计相关引物,应用荧光定量PCR方法检测NLRC5信号通路相关基因(NLRC5、MHC-I、IL-6、IL-18、STAT1、STAT3、NF-κB)m RNA表达变化规律。结果表明:REV感染后MHC-I、IL-18、STAT1和STAT3的转录水平高于未刺激组,差异显著(P<0.05),NLRC5、IL-6和NF-κB转录水平低于未刺激组,差异不显著(P>0.05),研究初步证实REV刺激能够引起CEF产生免疫应答反应,且对NLRC5基因及其信号通路产生影响,REV可能通过抑制NLRC5基因表达来抑制机体先天性免疫。 展开更多

关键词 鸡 REV nlrc5 信号通路

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如皋鸡NLRC5基因外显子8多态性及其与部分免疫指标的关联分析 被引量：1

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作者 李芹 常国斌 +6 位作者 陈国宏 徐琪 窦套存 栾德琴 陈蓉 盛中伟 张颖 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1417-1420,共4页

采用PCR-SSCP技术对中国地方鸡种如皋鸡NLRC5基因外显子8多态性进行检测,结果检测到AA和AB2种基因型,基因型频率分别为0.867 9和0.132 1,X2适合性检验表明如皋鸡NLRC5基因外显子8等位基因的分布处于Hardy-Weinberg平衡状态。序列分析结... 采用PCR-SSCP技术对中国地方鸡种如皋鸡NLRC5基因外显子8多态性进行检测,结果检测到AA和AB2种基因型,基因型频率分别为0.867 9和0.132 1,X2适合性检验表明如皋鸡NLRC5基因外显子8等位基因的分布处于Hardy-Weinberg平衡状态。序列分析结果显示,NLRC5基因外显子8存在G43A同义突变。测定部分免疫指标,分析不同周龄如皋鸡个体免疫指标的差异以及12周龄如皋鸡2种基因型与免疫指标间的关联性,结果表明:IgM含量和IgG含量变化比较一致,随周龄不断降低;2周龄IgM含量显著高于4、6、8、10、12周龄(P<0.05);12、10、8周龄IgG含量极显著低于2、4、6周龄(P<0.01);淋巴细胞转化率在12周龄达到最大值为33.742%,极显著高于其他周龄(P<0.01);12周龄AA型个体的IgM和IgG含量、淋巴细胞转化率均高于AB型个体,但差异并不显著(P>0.05)。 展开更多

关键词 鸡 nlrc5基因 多态性 免疫指标

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鸡NLRC5启动子区转录调控序列的初步研究

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作者 张莘 郭晓敏 +6 位作者 常国斌 朱鹏飞 徐璐 仇玲玲 张扬 徐琪 陈国宏 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期395-400,共6页

为了探讨NLRC5启动子的潜在调控机制,将NLRC5基因启动子系列缺失片段插入到pGL3-basic载体,构建重组质粒,并转染DF1细胞系。通过双荧光素酶实验寻找核心调控区,然后用目标捕获测序检测27个鸡品种的NLRC5核心启动子区的SNPs,并利用TRANSF... 为了探讨NLRC5启动子的潜在调控机制,将NLRC5基因启动子系列缺失片段插入到pGL3-basic载体,构建重组质粒,并转染DF1细胞系。通过双荧光素酶实验寻找核心调控区,然后用目标捕获测序检测27个鸡品种的NLRC5核心启动子区的SNPs,并利用TRANSFAC,JASPAR和Meth Primer预测该区域的转录因子结合位点和CpG岛。结果显示,NLRC5启动子有2个核心区域,分别是1—617和1448—2108。第一个核心区域内存在3个SNPs,其中SNP1影响转录因子Hic1的结合序列,但SNPs对CpG岛不产生影响,表明NLRC5基因的启动子区的调控可能受不同因素的影响,但SNPs并不在甲基化的水平上影响启动子的活性。 展开更多

关键词 鸡 nlrc5启动子 SNPS 转录因子结合位点 CPG岛

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13个鸡品种NLRC5基因外显子8多态性分析 被引量：1

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作者 李芹 常国斌 +3 位作者 窦套存 栾德琴 盛中伟 陈国宏 《上海畜牧兽医通讯》 2012年第2期16-18,共3页

本研究采用PCR-SSCP方法对13个鸡品种的NLRC5基因外显子8的多态性进行了SNP检测,共检测到2个等位基因,2种基因型,其中北京油鸡、固始鸡、皖南三黄鸡、大骨鸡群体中检测到AA和AB两种基因型,其余群体中只检测出AA基因型。序列分析结果显示... 本研究采用PCR-SSCP方法对13个鸡品种的NLRC5基因外显子8的多态性进行了SNP检测,共检测到2个等位基因,2种基因型,其中北京油鸡、固始鸡、皖南三黄鸡、大骨鸡群体中检测到AA和AB两种基因型,其余群体中只检测出AA基因型。序列分析结果显示,在NLRC5基因外显子8的43bp处存在G/A突变,将该突变翻译为氨基酸仍然为缬氨酸,因此该突变是一个同义突变;卡方适合性检验结果显示:13个鸡品种均处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);根据群体遗传变异分析,13个鸡品种均处于低度多态或无多态(PIC<0.25)。本研究为NLRC5基因作为一种新兴研究的抗性基因是否能为鸡抗病性状选育工作的分子标记提供了初步的参考。 展开更多

关键词 鸡 nlrc5基因 多态性

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NLRC5对MHC1的表达调控 被引量：1

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作者 王文龙 邓存良 《中国伤残医学》 2014年第5期284-285,共2页

NOD样受体(NLRs)是一类重要的病原相关分子模式识别受体(PRR),能识别细胞内的病原体及危险信号从而启动固有免疫应答。NLRC5(NLR family,CARD domain containing 5)作为新近发现的NLRs家族重要一员,因其具有的调控固有免疫及适应性免疫... NOD样受体(NLRs)是一类重要的病原相关分子模式识别受体(PRR),能识别细胞内的病原体及危险信号从而启动固有免疫应答。NLRC5(NLR family,CARD domain containing 5)作为新近发现的NLRs家族重要一员,因其具有的调控固有免疫及适应性免疫的能力而受到各方的广泛关注。在此,就NLRC5对MHCⅠ(Class I Major Histocompatibility Complex)的调控研究作一综述。 展开更多

关键词 nlrc5 MHC1 表达调控

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猪NLRC5基因克隆及序列特征分析 被引量：7

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作者 杨琦玥 陈通 +2 位作者 李键 黄勇 兰道亮 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2016年第1期39-46,共8页

为了解猪天然免疫受体NLRC5基因特征,用人类、小鼠等物种NLRC5基因已知片段设计分段扩增的引物,同时运用RACE技术,克隆该序列并进行序列生物信息学分析.基因序列分析表明,克隆得到猪NLRC5基因c DNA全长为6638bp,基因开放阅读框为5538bp... 为了解猪天然免疫受体NLRC5基因特征,用人类、小鼠等物种NLRC5基因已知片段设计分段扩增的引物,同时运用RACE技术,克隆该序列并进行序列生物信息学分析.基因序列分析表明,克隆得到猪NLRC5基因c DNA全长为6638bp,基因开放阅读框为5538bp,共编码1846个氨基酸.蛋白质预测结果显示,NLRC5编码蛋白质整体表现为亲水性,蛋白质结构域分析结果显示,NLRC5具有典型的NACHT区及20个LRRs.同源性分析表明猪与牛、绵羊、猕猴、人等物种具有较高同源性,达到了80%左右,遗传进化树分析表明与牛和绵羊进化关系最近.进一步组织表达分析表明NLRC5基因除在淋巴结、脾脏等系统免疫器官中具有较高表达量,在肠淋巴结、胃、肺等黏膜器官中也有较高的转录水平.本研究结果说明猪NLRC5基因在长期进化中较为保守,尤其在哺乳动物间具有较高的保守性,在免疫反应中可能扮演着重要的角色.猪NLRC5基因序列的成功克隆为后续NLRC5在机体内免疫系统中的功能研究奠定了理论基础. 展开更多

关键词 nlrc5基因 猪 基因克隆 序列分析

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13个鸡品种NLRC5基因外显子8多态性分析

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作者 李芹 常国斌 窦套存 《中国畜牧兽医文摘》 2012年第11期218-218,共1页

本研究采用PCR-SSCP方法对13个鸡品种的NLRC5基因外显子8的多态性进行了SNP检测,共检测到2个等位基因,2种基因型,其中北京油鸡、固始鸡、皖南三黄鸡、大骨鸡群体中检测到AA和AB两种基因型,其余群体中只检测出AA基因型。序列分析结果显示... 本研究采用PCR-SSCP方法对13个鸡品种的NLRC5基因外显子8的多态性进行了SNP检测,共检测到2个等位基因,2种基因型,其中北京油鸡、固始鸡、皖南三黄鸡、大骨鸡群体中检测到AA和AB两种基因型,其余群体中只检测出AA基因型。序列分析结果显示,在NLRC5基因外显子8的43bp处存在G/A突变,将该突变翻译为氨基酸仍然为缬氨酸,因此该突变是一个同义突变; 展开更多

关键词 外显子 nlrc5 基因 多态性

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NLRC5抑制自噬促进子宫内膜癌细胞增殖的研究 被引量：6

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作者 姚顺 詹磊 +2 位作者 孙士莹 王文艳 卫兵 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第7期1022-1027,共6页

目的初步探究NLRC5对子宫内膜癌细胞AN3CA增殖的作用及其机制。方法选取20例子宫内膜癌患者手术切除的子宫内膜腺癌标本及门诊病理显示正常的子宫内膜标本20例,免疫组化实验检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织标本中NLRC5及自噬相关... 目的初步探究NLRC5对子宫内膜癌细胞AN3CA增殖的作用及其机制。方法选取20例子宫内膜癌患者手术切除的子宫内膜腺癌标本及门诊病理显示正常的子宫内膜标本20例,免疫组化实验检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织标本中NLRC5及自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达。Western blot及qRT-PCR法检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织标本及子宫内膜癌AN3CA细胞中NLRC5及自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达。CCK-8法检测AN3CA细胞增殖。结果子宫内膜癌组与正常子宫内膜组相比,NLRC5蛋白表达下调,自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达上调(P <0. 05);转染NLRC5质粒后,转染组与未转染组相比,自噬蛋白Beclin1、LC3的蛋白表达水平显著下调(P <0. 05);转染NLRC5质粒后,转染组与未转染组相比,转染组细胞增殖明显增加(P <0. 05);转染NLRC5质粒后并加自噬激动剂雷帕霉素,结果显示,转染NLRC5质粒组与未转染NLRC5质粒组相比,细胞增殖明显增加(P <0. 05);转染NLRC5质粒后同时加雷帕霉素组与只转染NLRC5质粒组相比,细胞自噬水平升高,但细胞增殖明显下降(P <0. 05)。结论 NLRC5可能通过抑制自噬进而促进子宫内膜癌细胞增殖。 展开更多

关键词 nlrc5 自噬 子宫内膜癌 细胞增殖

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NLRC5基因在SPF大白猪不同器官中的表达与分布 被引量：3

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作者 王有祺 刘英华 +4 位作者 马丽娜 李昌文 陈洪岩 高彩霞 于天飞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第15期23-27,32,共6页

为了研究NLRC5基因在SPF大白猪不同组织中的表达和分布,试验以稀释的标准重组质粒为模板绘制标准曲线,建立实时荧光定量PCR方法,检测SPF大白猪肺脏、颌下淋巴结、腹股沟淋巴结、脾脏、空肠、胃、小肠、直肠、肾脏、心脏、回肠、肝脏、... 为了研究NLRC5基因在SPF大白猪不同组织中的表达和分布,试验以稀释的标准重组质粒为模板绘制标准曲线,建立实时荧光定量PCR方法,检测SPF大白猪肺脏、颌下淋巴结、腹股沟淋巴结、脾脏、空肠、胃、小肠、直肠、肾脏、心脏、回肠、肝脏、结肠、盲肠、扁桃体、肠系膜淋巴结等16种器官中NLRC5基因mRNA的表达差异和分布,并用Western-blot方法检测16种器官中NLRC5基因编码蛋白表达差异和分布。结果表明:NLRC5基因在SPF大白猪16种器官中均能表达,mRNA和蛋白表达水平大体一致,其中在淋巴结、脾脏和扁桃体等免疫器官中的表达量均较高,在胃和肠道等具有黏膜免疫功能的器官中表达量次之,在心脏和肝脏等非免疫器官中的表达量相对较低。说明试验获得了SPF大白猪不同器官中NLRC5基因的天然表达量,并且在免疫器官和具有黏膜器官中有较高的表达。 展开更多

关键词 nlrc5基因 SPF 大白猪 器官 表达差异

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