采用CTAB法提取经600mmol.L-1NaCl胁迫处理后的胡杨总RNA,利用SMART技术构建载体为λTriplEx2的盐胁迫条件下胡杨的表达型cDNA文库(SSL)。文库的滴度为1.2×106pfu.ml-1,重组率约为90.6%,扩增后的滴度为3×109pfu.ml-1,容量约为...采用CTAB法提取经600mmol.L-1NaCl胁迫处理后的胡杨总RNA,利用SMART技术构建载体为λTriplEx2的盐胁迫条件下胡杨的表达型cDNA文库(SSL)。文库的滴度为1.2×106pfu.ml-1,重组率约为90.6%,扩增后的滴度为3×109pfu.ml-1,容量约为2.4×1011。插入片段长度均大于400bp,平均长度约为790bp。从文库中随机挑选32个阳性克隆进行3′端测序,并将测序结果通过NCBI(National Center for Biotechnology Information)数据库进行比较,发现有23个EST序列与已知序列有明显的同源性,而其余的与NCBI中的已知序列相似性较低(e值>10-4),可能是未知基因。其中序列SSL061、SSL179与脱水素序列有较高的序列一致性。同时合成引物,通过PCR扩增文库的方法,从中筛选获得存在于植物细胞膜上并在植物受盐胁迫时起重要作用的nhx基因,进一步验证了文库的质量。展开更多
文摘采用CTAB法提取经600mmol.L-1NaCl胁迫处理后的胡杨总RNA,利用SMART技术构建载体为λTriplEx2的盐胁迫条件下胡杨的表达型cDNA文库(SSL)。文库的滴度为1.2×106pfu.ml-1,重组率约为90.6%,扩增后的滴度为3×109pfu.ml-1,容量约为2.4×1011。插入片段长度均大于400bp,平均长度约为790bp。从文库中随机挑选32个阳性克隆进行3′端测序,并将测序结果通过NCBI(National Center for Biotechnology Information)数据库进行比较,发现有23个EST序列与已知序列有明显的同源性,而其余的与NCBI中的已知序列相似性较低(e值>10-4),可能是未知基因。其中序列SSL061、SSL179与脱水素序列有较高的序列一致性。同时合成引物,通过PCR扩增文库的方法,从中筛选获得存在于植物细胞膜上并在植物受盐胁迫时起重要作用的nhx基因,进一步验证了文库的质量。
