目的:探讨膀胱癌细胞中细胞色素c氧化酶亚基7A2(COX7A2)基因的表达,及其与顺铂联用对膀胱癌J82细胞增殖、凋亡及线粒体功能影响。方法:采用生物信息学方法分析COX7A2在膀胱癌患者中的表达,并在J82细胞中进行验证。功能实验分为对照组(...目的:探讨膀胱癌细胞中细胞色素c氧化酶亚基7A2(COX7A2)基因的表达,及其与顺铂联用对膀胱癌J82细胞增殖、凋亡及线粒体功能影响。方法:采用生物信息学方法分析COX7A2在膀胱癌患者中的表达,并在J82细胞中进行验证。功能实验分为对照组(仅转染阴性对照siNC)、siRNA组(仅转染COX7A2的siRNA)、对照组+顺铂组(先转染阴性对照后用顺铂处理)和siRNA+顺铂组(先敲低COX7A2后用顺铂处理)。CCK-8、Transwell迁移能力测试和克隆增殖实验检测对照组和siRNA组中J82细胞的增殖、迁移能力。采用相应试剂盒检测各组细胞的ATP水平、活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位(ΔΨm),以评估线粒体功能。流式细胞术检测各组细胞凋亡,以反映细胞的线粒体状态与对顺铂治疗的响应性关系。进一步通过癌症治疗响应基因标识数据库(CTR-DB),分析COX7A2与接受顺铂联合治疗的膀胱癌患者预后的关系。结果:生物信息学分析与生存曲线显示,COX7A2在膀胱癌患者中高表达并且与患者预后不良有关联。COX7A2在J82细胞中呈高表达(P<0.05)。在未经顺铂处理时,与对照组相比,siRNA组J82细胞增殖、迁移和克隆形成能力均显著下降(均P<0.001),而线粒体的ATP表达减少(P<0.01)、ROS表达量增多(P<0.0001)、MMP发生去极化(P<0.0001),凋亡水平增加(P<0.05);顺铂处理后,与对照组+顺铂相比,siRNA+顺铂组ATP表达减少(P<0.01)、ROS表达量增多(P<0.0001)、MMP发生去极化(P<0.0001),线粒体功能受损,凋亡水平增加(P<0.001)。CTR-DB数据库生信分析显示,5例接受顺铂+多柔比星+甲氨蝶呤+长春碱联合治疗的膀胱癌患者中,有应答者比无应答者COX7A2中位RNA表达量低(中位表达量:4501 vs 5009),12例铂类药物联合治疗的膀胱癌患者中有应答者比无应答者COX7A2中位RNA表达量低(中位表达量:2947 vs 3035),由于样本量有限,虽观察到趋势但无统计学意义。结论:敲低COX7A2可通过损伤线粒体功能,抑制膀胱癌细胞增殖与迁移,并可能由此增强细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性。展开更多
文摘目的:探讨膀胱癌细胞中细胞色素c氧化酶亚基7A2(COX7A2)基因的表达,及其与顺铂联用对膀胱癌J82细胞增殖、凋亡及线粒体功能影响。方法:采用生物信息学方法分析COX7A2在膀胱癌患者中的表达,并在J82细胞中进行验证。功能实验分为对照组(仅转染阴性对照siNC)、siRNA组(仅转染COX7A2的siRNA)、对照组+顺铂组(先转染阴性对照后用顺铂处理)和siRNA+顺铂组(先敲低COX7A2后用顺铂处理)。CCK-8、Transwell迁移能力测试和克隆增殖实验检测对照组和siRNA组中J82细胞的增殖、迁移能力。采用相应试剂盒检测各组细胞的ATP水平、活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位(ΔΨm),以评估线粒体功能。流式细胞术检测各组细胞凋亡,以反映细胞的线粒体状态与对顺铂治疗的响应性关系。进一步通过癌症治疗响应基因标识数据库(CTR-DB),分析COX7A2与接受顺铂联合治疗的膀胱癌患者预后的关系。结果:生物信息学分析与生存曲线显示,COX7A2在膀胱癌患者中高表达并且与患者预后不良有关联。COX7A2在J82细胞中呈高表达(P<0.05)。在未经顺铂处理时,与对照组相比,siRNA组J82细胞增殖、迁移和克隆形成能力均显著下降(均P<0.001),而线粒体的ATP表达减少(P<0.01)、ROS表达量增多(P<0.0001)、MMP发生去极化(P<0.0001),凋亡水平增加(P<0.05);顺铂处理后,与对照组+顺铂相比,siRNA+顺铂组ATP表达减少(P<0.01)、ROS表达量增多(P<0.0001)、MMP发生去极化(P<0.0001),线粒体功能受损,凋亡水平增加(P<0.001)。CTR-DB数据库生信分析显示,5例接受顺铂+多柔比星+甲氨蝶呤+长春碱联合治疗的膀胱癌患者中,有应答者比无应答者COX7A2中位RNA表达量低(中位表达量:4501 vs 5009),12例铂类药物联合治疗的膀胱癌患者中有应答者比无应答者COX7A2中位RNA表达量低(中位表达量:2947 vs 3035),由于样本量有限,虽观察到趋势但无统计学意义。结论:敲低COX7A2可通过损伤线粒体功能,抑制膀胱癌细胞增殖与迁移,并可能由此增强细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性。
