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改造谷氨酸棒杆菌CmpLs转运系统促进L-谷氨酸合成 被引量:1
1
作者 左兴涛 钟沙沙 +7 位作者 蔡柠匀 石拓 张志丹 刘元涛 刘娇 王德培 陈久洲 郑平 《生物工程学报》 北大核心 2025年第1期271-287,共17页
L-谷氨酸的高效生产依赖于产物的快速外排,其转运系统和细胞膜壁结构的人工改造已成为近年来研究的热点。针对谷氨酸棒杆菌特殊的细胞壁结构和组分,本研究在一株能够组成型分泌L-谷氨酸的菌株SCgGC7中验证了CmpLs转运系统对L-谷氨酸合... L-谷氨酸的高效生产依赖于产物的快速外排,其转运系统和细胞膜壁结构的人工改造已成为近年来研究的热点。针对谷氨酸棒杆菌特殊的细胞壁结构和组分,本研究在一株能够组成型分泌L-谷氨酸的菌株SCgGC7中验证了CmpLs转运系统对L-谷氨酸合成及转运的影响。首先,构建了不同CmpLs转运蛋白的敲除菌株,明确了CmpL1和CmpL4敲除可以显著提高菌株的L-谷氨酸生产性能;其次,利用温敏发酵工艺在5 L发酵罐中对上述菌株进行了发酵测试,发现CmpL1和CmpL4敲除菌株可以叠加L-谷氨酸生产的温敏特性,进一步强化高温条件下L-谷氨酸的生产,其中CmpL1敲除菌株表现出更好的L-谷氨酸生产性能,产量和糖酸转化率分别比对照菌株提高了69.2%和55.3%,最后,对发酵终点样品进行了胞内和胞外代谢物组分析,明确了CmpLs转运系统的改造可以明显促进L-谷氨酸外排,强化L-谷氨酸合成和转运的代谢通量,并且发现CmpL1敲除菌株胞内三羧酸循环中间代谢物和L-谷氨酸下游代谢物的积累明显更少,与其更强的L-谷氨酸生产性能一致。不同CmpLs蛋白功能上的冗余和互补,不仅为谷氨酸工业菌株的稳定性改造和性能提升提供了理想的靶点,也为改造谷氨酸棒杆菌的细胞膜壁结构强化其他代谢产物的外排提供了新的靶点和策略。 展开更多
关键词 L-谷氨酸 谷氨酸棒杆菌 分枝菌酸 转运蛋白 生物合成
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数据流查询语言的研究与实现 被引量:3
2
作者 周杰 毛宇光 《计算机技术与发展》 2008年第1期14-16,21,共4页
分析了现有的数据流管理系统中的查询语言;举出了一个现实生活中数据流应用的例子;提出了数据流查询的应用场景。通过这个例子对数据流模型作了形式化的定义,并提出了如何通过窗口操作将流式数据转化为普通关系中的数据。最后提出了一... 分析了现有的数据流管理系统中的查询语言;举出了一个现实生活中数据流应用的例子;提出了数据流查询的应用场景。通过这个例子对数据流模型作了形式化的定义,并提出了如何通过窗口操作将流式数据转化为普通关系中的数据。最后提出了一种数据流查询语言MYCQL(My Continue Query Language),并给出了MYCQL中相关的文法,并借助Lex和Yacc工具实现了从查询语言生成语法分析树。 展开更多
关键词 数据流管理系统 窗口 mycol 文法
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红球菌PR-1菌株破乳性能研究 被引量:19
3
作者 马挺 梁凤来 +1 位作者 奚艳伟 刘如林 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1191-1196,共6页
利用乳化剂Span 80配制出一种稳定的煤油-水乳浊液作为模型乳浊液,进而从大港油田废水中筛选出1株破乳能力较强的红球菌PR-1.该菌株培养液在55℃下8h可以使模型乳浊液完全破乳,且在实验条件下比化学破乳剂DGF-01具有更强的破乳活性... 利用乳化剂Span 80配制出一种稳定的煤油-水乳浊液作为模型乳浊液,进而从大港油田废水中筛选出1株破乳能力较强的红球菌PR-1.该菌株培养液在55℃下8h可以使模型乳浊液完全破乳,且在实验条件下比化学破乳剂DGF-01具有更强的破乳活性.研究发现,乳浊液的破乳为线性增长过程,冻融和高压灭菌对其破乳能力没有影响,菌体细胞是破乳的主要活性成分,经超声波破碎及有机溶剂处理后其破乳活性显著降低.菌体表面有很强的疏水性,其对烃的枯附率为84%,碳链长度范围在C27~C54的枝菌酸类物质是保持菌体细胞完整性和疏水性的关键,其对细胞的破乳活性也至关重要.PR-1菌株发酵液用于原油乳状液的破乳具有操作方便,破乳率高,应用面广,无毒无害等优点,且能完全脱出J9-19原油乳状液中的水,因此可作为原油乳状液或油田采出水的破乳剂. 展开更多
关键词 红球菌 乳状液 生物破乳 枝菌酸 原油
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基于分枝菌酸的分枝杆菌反相高效液相色谱分型鉴定方法 被引量:8
4
作者 杜蓉 陈保文 +4 位作者 郭磊 李阳 谢剑炜 王国治 周宏兵 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期534-539,共6页
采用反相高效液相色谱法(HPLC)构建了49种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸指纹图谱库,并对分枝杆菌进行分型鉴定。菌株经培养(对于慢生长分枝杆菌培养3周,快生长分枝杆菌培养1周)后,取两植菌勺的量,皂化1h后,于4℃下储存。通过酸化方法提取... 采用反相高效液相色谱法(HPLC)构建了49种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸指纹图谱库,并对分枝杆菌进行分型鉴定。菌株经培养(对于慢生长分枝杆菌培养3周,快生长分枝杆菌培养1周)后,取两植菌勺的量,皂化1h后,于4℃下储存。通过酸化方法提取分枝菌酸,并用4-溴苯甲酰基溴衍生化,以HPLC分析分枝杆菌衍生物,并以其峰形的分布及峰的相对保留时间、相对峰高为指标对分枝杆菌进行分型鉴定。该法重现性良好,各峰保留时间的相对标准偏差为0.13%~1.07%。根据构建的49种《伯杰细菌鉴定手册》中所载入的分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸指纹谱库,发现不同菌种的分枝菌酸的指纹图谱分别具有单簇峰、双簇峰、三簇峰(含多簇峰)的特征。依据相对保留时间和相对峰高的不同,对49种分枝杆菌中的41种进行了分型。结果表明,所建立的反相HPLC法可快速准确地对分枝杆菌进行分型鉴定。 展开更多
关键词 反相高效液相色谱法 分枝菌酸 指纹图谱 分枝杆菌 分型 鉴定 结核分枝杆菌
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伪结核棒状杆菌毒力因子的研究进展 被引量:16
5
作者 周作勇 李和贤 +1 位作者 杨浩钺 王芝英 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1115-1119,共5页
人兽共患病原伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis)引起的慢性传染病干酪样淋巴结炎杆菌(Caseous lymphadenitis,CLA)呈全世界流行,极难防制。该病原感染致病的机理与其毒力因子密切相关,本文就伪结核棒状毒力因子研究... 人兽共患病原伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis)引起的慢性传染病干酪样淋巴结炎杆菌(Caseous lymphadenitis,CLA)呈全世界流行,极难防制。该病原感染致病的机理与其毒力因子密切相关,本文就伪结核棒状毒力因子研究情况进行综述,提出进一步鉴定和解析不同毒力因子在该病原感染致病中的作用及相互关系,对深入了解该病原的致病机制和候选疫苗研究具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 伪结核棒状杆菌 毒力因子 磷脂酶D 分枝菌酸
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分枝菌酸诱导巨噬细胞泡沫细胞化对细胞自噬的影响 被引量:5
6
作者 李黎 陈全 +2 位作者 喻岚 刘革力 张路渝 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2015年第6期846-851,共6页
研究分枝菌酸(mycolic acid,MA)诱导的巨噬细胞泡沫细胞化对巨噬细胞自噬的影响,探讨MA促巨噬细胞泡沫细胞化的机制。构建LC3真核表达质粒(p EGFP-LC3B),转染RAW264.7细胞后获得其稳定转染细胞株(RAW264.7/p EGFP-LC3B);用MA诱导RAW264.... 研究分枝菌酸(mycolic acid,MA)诱导的巨噬细胞泡沫细胞化对巨噬细胞自噬的影响,探讨MA促巨噬细胞泡沫细胞化的机制。构建LC3真核表达质粒(p EGFP-LC3B),转染RAW264.7细胞后获得其稳定转染细胞株(RAW264.7/p EGFP-LC3B);用MA诱导RAW264.7/p EGFP-LC3B获得RAW264.7/p EGFP-LC3B泡沫细胞。实验分为三组:RAW264.7细胞组、RAW264.7/p EGFP-LC3B细胞组及MA诱导的RAW264.7/p EGFP-LC3B泡沫细胞组。通过RT-PCR法检测各组细胞中自噬相关基因Becn1、LC3B的转录水平,Western blot法检测各组细胞自噬标志蛋白LC3B II/I的表达水平。RTPCR检测结果显示,RAW264.7/p EGFP-LC3B泡沫细胞组的Becn1基因及LC3B基因的转录水平明显较其他两组低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,RAW264.7/p EGFP-LC3B泡沫细胞组LC3B II/I比值明显较其他两组低(P<0.05)。由此可见,当巨噬细胞被MA诱导成为泡沫巨噬细胞后,其自噬功能显著降低。该研究证明,MA可能通过抑制巨噬细胞自噬,引起脂代谢失衡,进而发生巨噬细胞泡沫细胞化。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 分枝菌酸 巨噬细胞 泡沫细胞 自噬
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反相高效液相色谱法和16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的比较研究 被引量:2
7
作者 陈保文 都伟欣 +4 位作者 杜蓉 闫李侠 郭磊 杨蕾 王国治 《中国医药生物技术》 CSCD 2012年第4期263-269,共7页
目的比较反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的异同。方法将《伯杰细菌鉴定手册》中载入的49种分枝杆菌模式株接种于改良罗氏培养基上,置于最适温度下孵育。挑取生长良好且无污染的培养物,一部分经皂... 目的比较反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的异同。方法将《伯杰细菌鉴定手册》中载入的49种分枝杆菌模式株接种于改良罗氏培养基上,置于最适温度下孵育。挑取生长良好且无污染的培养物,一部分经皂化和酸化提取分枝菌酸并衍生后,采用反相高效液相色谱法进行分枝菌酸指纹图谱构建;另一部分经裂解和PCR扩增,获得DNA,纯化后,采用核酸分析仪进行16S rRNA序列测定。结果 49种分枝杆菌模式株中,采用RP-HPLC分析时,单簇峰的结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和胃分枝杆菌,双簇峰的爱知分枝杆菌和罗德岛分枝杆菌,三簇峰的南非分枝杆菌和母牛分枝杆菌共7种因各组内相对保留时间和相对峰高比值相近而难以进行鉴别;采用16S rRNA序列分析法分析时,产鼻疽分枝杆菌和塞内加尔分枝杆菌、溃疡分枝杆菌和海分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和胃分枝杆菌、龟亚分枝杆菌和龟脓分枝杆菌以及结核分枝杆菌复合群(结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌和非洲分枝杆菌)共12种因各组内基因序列相似性百分比为100%而难以进行鉴别。通过两种分型鉴别方法的比较,可见除结核分枝杆菌和牛分枝杆菌外,两种分型方法相互补充,可将49种分枝杆菌模式株中的47种进行明确鉴别。结论分枝菌酸RP-HPLC和16S rRNA序列分析法均为分枝杆菌的分型鉴定提供了准确和有效的技术方法。两种方法相互借鉴能准确地将大多数分枝杆菌鉴定到种。 展开更多
关键词 分枝杆菌属 分枝菌酸 色谱法 高压液相 细菌分型技术 序列分析 DNA 16S RRNA
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50种分枝杆菌标准株分枝菌酸指纹谱特征性研究 被引量:1
8
作者 王巨存 赵凤仪 +3 位作者 王学谦 陈保文 王国治 陆芸 《天津医药》 CAS 北大核心 2010年第10期833-836,共4页
目的:构建50种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸(MA)指纹图谱库,并对该库指纹图谱进行比较研究。方法:选择50种标准分枝杆菌,经过接种、培养、皂化及酸化,提取到MA。MA衍生化后,采用高效液相色谱法(HPLC)进行分析,得到相应的指纹图谱。依据... 目的:构建50种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸(MA)指纹图谱库,并对该库指纹图谱进行比较研究。方法:选择50种标准分枝杆菌,经过接种、培养、皂化及酸化,提取到MA。MA衍生化后,采用高效液相色谱法(HPLC)进行分析,得到相应的指纹图谱。依据谱图的峰族数、相对保留时间及相对峰高详细分析与比对其特征性,并对所选92个临床分离株用本法进行鉴定。结果:通过对分枝杆菌MA的色谱分析,构建了50种分枝杆菌标准菌株的MA指纹谱库。图谱可分为3组,即单族峰型、两族峰型、三族峰型。每组分别包括10、23及17种。在92个临床分离株中,有89株的鉴定结果与已知结果一致,一致率为96.74%。结论:本研究所构建的指纹图谱全部具有特征性,对分枝杆菌的种间鉴定具有一定的参考价值。 展开更多
关键词 分枝杆菌属 分枝菌酸 色谱法 高效液相 指纹图谱
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冠蛋白1参与分枝菌酸诱导巨噬细胞的泡沫化 被引量:1
9
作者 周芳妮 陈全 +2 位作者 周静瑶 刘革力 张路渝 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期451-456,共6页
目的研究巨噬细胞冠蛋白1(coronin-1)与分枝菌酸(MA)诱导巨噬细胞泡沫化的相关性及其可能机制。方法根据冠蛋白1表达水平的差异,实验分为RAW264.7-Cor.Plus、RAW264.7和RAW264.7-Cor.Minus三组。各组细胞经100μg/m L MA包被的聚苯乙烯... 目的研究巨噬细胞冠蛋白1(coronin-1)与分枝菌酸(MA)诱导巨噬细胞泡沫化的相关性及其可能机制。方法根据冠蛋白1表达水平的差异,实验分为RAW264.7-Cor.Plus、RAW264.7和RAW264.7-Cor.Minus三组。各组细胞经100μg/m L MA包被的聚苯乙烯微球作用24 h后提取总蛋白,用Western blot法检测细胞冠蛋白1的表达水平。分别用(0、25、50、75、100)μg/m L MA包被聚苯乙烯微球作为吞噬颗粒,在2μmol/L松胞菌素D(cty D)处理前、后,分别吞噬24 h^8 d,用总胆固醇(TC)酶法测定试剂盒、游离胆固醇(FC)酶法测定试剂盒分别检测各组细胞TC、FC,再通过胆固醇酯(CE)和CE/TC比值定量评估巨噬细胞泡沫化水平。将cty D处理细胞(RAW264.7-cty D、RAW264.7-cty D-MA)及其对照组分别用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽(FITC-phalloidin)染色,计算纤维型肌动蛋白(F-actin)重排率。结果各组细胞受MA诱导后,其冠蛋白1的表达量显著高于相应对照组,其表达量从高至低依次为RAW264.7-Cor.Plus、RAW264.7、RAW264.7-Cor.Minus。表达不同水平冠蛋白1的各组细胞的泡沫化水平与MA包被剂量和MA作用时间呈正比;冠蛋白1表达量最高的RAW264.7-Cor.Plus细胞泡沫化水平最高,冠蛋白1表达量最低的RAW264.7-Cor.Minus细胞泡沫化水平最低;cty D抑制巨噬细胞F-actin显著降低MA诱导的细胞泡沫化水平,但抑制F-actin对冠蛋白1与MA诱导细胞泡沫化的正相关性并无显著影响;经鬼笔环肽染色后,MA诱导组细胞的F-actin重排率显著高于非MA诱导的对照组细胞。结论 MA可诱导巨噬细胞冠蛋白1的表达,其表达水平与MA诱导的细胞泡沫化呈正相关,F-actin参与MA诱导的细胞泡沫化过程,但F-actin并非冠蛋白1调控MA诱导细胞泡沫化的关键和唯一途径。 展开更多
关键词 巨噬细胞 冠蛋白1(coronin-1) 分枝菌酸 泡沫细胞 纤维型肌动蛋白(F-actin)
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小鼠脑微血管内皮细胞与隐球菌作用前后基因表达谱分析 被引量:1
10
作者 钟彬 李平 +2 位作者 聂舒 朱红梅 温海 《中国真菌学杂志》 CSCD 2014年第4期203-206,共4页
目的比较小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd.3细胞与隐球菌作用前后基因表达谱的变化,为隐球菌的嗜中枢性研究提供新的线索。方法采用基因芯片法比较bEnd.3细胞与不同血清型隐球菌作用前后基因表达谱的变化,并进一步通过荧光定量PCR的方法对... 目的比较小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd.3细胞与隐球菌作用前后基因表达谱的变化,为隐球菌的嗜中枢性研究提供新的线索。方法采用基因芯片法比较bEnd.3细胞与不同血清型隐球菌作用前后基因表达谱的变化,并进一步通过荧光定量PCR的方法对某些重要基因的变化加以验证。结果我们对bEnd.3与隐球菌作用前后基因表达进行了对比,共获得差异基因383条,其中263条基因表达下降,120条基因表达上升,并根据比较结果选取了黏附分子CDH10及硒转运蛋白SELENBP1两个基因进行荧光定量PCR验证,结果与芯片结果一致。发现bEnd.3与隐球菌作用后CDH10表达明显下降,而SELENBP1表达明显上升。结论隐球菌能引起脑血管内皮细胞黏附分子CDH10表达下降及硒结合蛋白selenbp1表达上升,这可能与其侵袭血脑屏障有关。而SELENBP 1的表达上升可能与神经系统症状有关。 展开更多
关键词 脑微血管内皮细胞 基因芯片 新生隐球菌
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SMIS检测分枝菌酸在分枝杆菌菌种鉴定中的作用
11
作者 刘冠 宋媛媛 +4 位作者 姜广路 赵立平 毕志强 黄海荣 赵雁林 《结核病与胸部肿瘤》 2011年第2期88-93,共6页
目的评估用SMIS检测分枝菌酸在分枝杆菌菌种鉴定中的作用。方法收集北京市结核病胸部肿瘤研究所2007年1~12月的分枝杆菌118株,通过PNB培养基初筛,其中结核分枝杆菌复合群25株,非结核分枝杆菌93株。同时用测序方法和SMIS分析分枝菌... 目的评估用SMIS检测分枝菌酸在分枝杆菌菌种鉴定中的作用。方法收集北京市结核病胸部肿瘤研究所2007年1~12月的分枝杆菌118株,通过PNB培养基初筛,其中结核分枝杆菌复合群25株,非结核分枝杆菌93株。同时用测序方法和SMIS分析分枝菌酸方法鉴定118株分枝杆菌,以16SrDNA和16-23S rDNAITS测定作为菌种鉴定的标准,评估利用SMIS分离分枝菌酸鉴定分枝杆菌菌种的符合率及一致性;并验证以上两种方法鉴定结果分别与PNB初筛分结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌结果的符合率及一致性。结果SMIS与测序鉴定分枝杆菌相比的符合率为92%(108/118),其中结核分枝杆菌复合群鉴定的符合率为95%(35/37),非结核分枝杆菌为90%(73/81),Kappa分析显示两种方法鉴定结果的一致性很好(Kappa=0.96)。回顾验证初筛结果显示,SMIS与PNB培养基方法鉴定结果符合率90%(106/118),一致性较好(Kappa=0.73):测序方法与PNB培养基方法鉴定结果符合率也为90%(106/118),一致性较好(Kappa=0.74),但有11株测序和分枝菌酸菌种鉴定方法结果相同的结核分枝杆菌复合群与PNB实验结果不一致。结论利用分枝菌酸对临床分离的分枝杆菌进行菌种鉴定是一种快速、简便和准确的方法,对处置应急和突发公共卫生事件中的分枝杆菌菌种鉴定具有一定的参考价值,是分枝杆菌菌种多相鉴定策略的重要组成部分。 展开更多
关键词 分枝菌酸 分枝杆菌属 色谱法 高压液相
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分枝菌酸诱导巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定 被引量:3
12
作者 喻岚 陈全 +2 位作者 李黎 刘革力 张路渝 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期983-985,共3页
目的探讨分枝菌酸(MA)包被聚苯乙烯微球诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞泡沫细胞化的条件及特性。方法将RAW264.7细胞分为空白对照组和分别包被(0、25、50、75、100)μg/mL MA的聚苯乙烯微球实验组,分别将细胞与聚苯乙烯微球混匀、共同孵育24... 目的探讨分枝菌酸(MA)包被聚苯乙烯微球诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞泡沫细胞化的条件及特性。方法将RAW264.7细胞分为空白对照组和分别包被(0、25、50、75、100)μg/mL MA的聚苯乙烯微球实验组,分别将细胞与聚苯乙烯微球混匀、共同孵育24、48、72 h、5 d和8 d后,油红O染色后显微镜下观察细胞形态,采用总胆固醇试剂盒和游离胆固醇试剂盒测定各组泡沫细胞内胆固醇酯的含量,采用MTT法检测细胞增殖水平。结果当包被MA浓度为75μg/mL、吞噬时间为24 h时,RAW264.7能形成典型的泡沫细胞,其细胞内胆固醇酯相对含量为60.98%±1.32%;随着吞噬时间延长,形成泡沫细胞所需的MA的浓度逐渐递减;且随着细胞泡沫化程度增加,细胞增殖活力逐渐减弱。结论MA包被聚苯乙烯微球可快速诱导巨噬细胞形成泡沫细胞,MA浓度与细胞泡沫化程度呈正相关,且有时间依赖性。 展开更多
关键词 分枝菌酸 聚苯乙烯微球 巨噬细胞 胆固醇酯 泡沫细胞
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肺炎支原体及肺炎衣原体感染与儿童慢性咳嗽关系初探 被引量:5
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作者 高炜 《中国现代医生》 2010年第29期132-133,共2页
目的分析本地区儿童慢性咳嗽患者肺炎支原体(MP)及肺炎衣原体(CP)感染状况,探讨儿童慢性咳嗽与MP、CP感染的关系。方法收集我院儿科病房2005年3月~2008年9月诊治的慢性咳嗽患儿98例及对照组儿童30例。采用酶联免疫法检测MP-IgM及CP-Ig... 目的分析本地区儿童慢性咳嗽患者肺炎支原体(MP)及肺炎衣原体(CP)感染状况,探讨儿童慢性咳嗽与MP、CP感染的关系。方法收集我院儿科病房2005年3月~2008年9月诊治的慢性咳嗽患儿98例及对照组儿童30例。采用酶联免疫法检测MP-IgM及CP-IgM。结果慢性咳嗽MP-IgM阳性42例,阳性率42.9%;CP-IgM阳性17例,阳性率17.3%;MP-IgM及CP-IgM均为阳性5例(5.1%);与健康对照组相比有显著性差异(P<0.01)。结论小儿慢性咳嗽与MP、CP感染有密切关系。在对慢性咳嗽患儿寻找病因、对症治疗的同时,应常规进行MP-IgM及CP-IgM抗体筛查,,以便提供循证医学证据。 展开更多
关键词 慢性咳嗽 肺炎支原体 肺炎衣原体 儿童
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一种改良的分枝菌酸提取及其非放射性TLC检测方法 被引量:1
14
作者 徐思悦 狄玉昌 +3 位作者 迟明哲 胡酉炜 张潇 张雪莲 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3827-3837,共11页
分枝菌酸(mycolic acid,MA)是存在于分枝杆菌细胞壁中的独特长链脂肪酸,与分枝杆菌(mycobacterium)抵御不利环境、耐受抗生素和逃避宿主免疫密切相关,是较热门的抗结核药物筛选的靶点。MA的检测方法主要有放射性薄层层析(thin-layer chr... 分枝菌酸(mycolic acid,MA)是存在于分枝杆菌细胞壁中的独特长链脂肪酸,与分枝杆菌(mycobacterium)抵御不利环境、耐受抗生素和逃避宿主免疫密切相关,是较热门的抗结核药物筛选的靶点。MA的检测方法主要有放射性薄层层析(thin-layer chromatography,TLC)和液相色谱-质谱(liquid chromatograph mass spectrometer,LC-MS),受放射性元素使用资质和标准品等的限制,MA分析是分枝杆菌相关研究的一个难点。本研究采用一种普通薄层层析技术,并对使用四丁基氢氧化铵溶液水解酯化的分枝菌酸,将其甲酯化后再用无水乙醚萃取分枝菌酸甲酯的操作步骤进行改良,使分枝杆菌的MA提取及分析可在常规生物实验室中开展。研究通过比较不同分枝杆菌及不同生长时期的MA成分与亚型特征、检测靶向分枝菌酸合成通路的抗结核药物对细菌MA合成影响以及分枝杆菌突变株对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)H37Ra分枝菌酸合成影响等基础和应用研究的3个方面,进一步验证该方法在分枝杆菌MA分析中的实用性。结果表明该方法在不使用放射性元素和缺少标准品情况下可简便快速地分析MA及亚型特征,可广泛用于新型抗分枝杆菌药物筛选靶向分枝菌酸合成通路机制及基础研究中MA相关的分析和应用。 展开更多
关键词 分枝杆菌 分枝菌酸 薄层层析
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缺失分枝菌酸层提高谷氨酸棒状杆菌L-谷氨酸产量的研究
15
作者 李贺丹 张德志 +3 位作者 赵桂红 李姿含 胡晓清 王小元 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期31-40,共10页
谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum,C.glutamicum)的分枝菌酸层对维持细胞的通透性有重要作用,但是其合成需要消耗大量的底物和能源。作者通过敲除谷氨酸棒状杆菌ATCC13869中聚酮合酶编码基因pks13,构建了突变菌株Δpks13。与... 谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum,C.glutamicum)的分枝菌酸层对维持细胞的通透性有重要作用,但是其合成需要消耗大量的底物和能源。作者通过敲除谷氨酸棒状杆菌ATCC13869中聚酮合酶编码基因pks13,构建了突变菌株Δpks13。与野生型相比,突变菌Δpks13细胞体积变大、形状变圆且细胞壁结合松散容易脱落,但L-谷氨酸产量提高了8倍。薄层层析和液相色谱-质谱联用分析发现,Δpks13菌株细胞壁中的脂质主要为磷脂。实时荧光定量PCR分析发现,与野生型相比,Δpks13谷氨酸外排相关基因mscCG的转录水平上调,而α-酮戊二酸脱氢酶编码基因odhA和下游产物精氨酸合成相关基因(argB、argC、argD、argF、argG、argH、argJ)转录水平下调。这些基因转录水平的改变解释了Δpks13 L-谷氨酸产量提高的机制。 展开更多
关键词 谷氨酸棒状杆菌 分枝菌酸 L-谷氨酸
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靶向分枝菌酸生物合成的抗结核化合物研究进展 被引量:2
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作者 吕润秋 张维 于丽芳 《有机化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2021年第6期2249-2260,共12页
结核病近年来已超过艾滋病成为当今世界范围内致死率高的感染性疾病之一.结核病耐药问题严峻,耐多药结核病治愈率低、治疗方案复杂且周期长.抗耐药结核领域存在重大研究机遇,亟需发现与发展针对新靶点的新化学实体.分枝菌酸的生物合成... 结核病近年来已超过艾滋病成为当今世界范围内致死率高的感染性疾病之一.结核病耐药问题严峻,耐多药结核病治愈率低、治疗方案复杂且周期长.抗耐药结核领域存在重大研究机遇,亟需发现与发展针对新靶点的新化学实体.分枝菌酸的生物合成和转运途径富含抗结核药物的有效靶点,综述了靶向该途径的抑制剂,讨论了其作用机制、药代动力学性质等最新研究进展. 展开更多
关键词 耐药结核病 分枝菌酸的生物合成及转运途径 重要靶点 抑制剂
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分枝菌酸在分枝杆菌感染过程中的作用及相关抗结核药物靶点的研究进展 被引量:1
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作者 安芳芳 郑永标 +2 位作者 吴宇圳 张慧敏 王斐斐 《抗感染药学》 2022年第8期1089-1095,共7页
分枝菌酸作为高级支链脂肪酸,是维持分枝杆菌等微生物细胞壁骨架结构的重要物质,也是引起分枝杆菌感染宿主的主要化学因子,还在分枝杆菌的生物膜形成和体内免疫逃逸过程中发挥了重要作用。据此,科研人员以分枝菌酸合成中的关键酶为靶点... 分枝菌酸作为高级支链脂肪酸,是维持分枝杆菌等微生物细胞壁骨架结构的重要物质,也是引起分枝杆菌感染宿主的主要化学因子,还在分枝杆菌的生物膜形成和体内免疫逃逸过程中发挥了重要作用。据此,科研人员以分枝菌酸合成中的关键酶为靶点,筛选和开发出了一系列有活性的抗结核化合物。该文综述了分枝菌酸在分枝杆菌感染过程中的作用和相关作用靶点的研究进展,为新型抗结核药物的开发提供参考。 展开更多
关键词 分枝菌酸 分枝杆菌 药物靶点 研究进展
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结核分枝杆菌聚酮合成酶13抑制剂的研究进展 被引量:1
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作者 丁威 赵文婷 张东峰 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1768-1773,共6页
在结核分枝杆菌分枝菌酸的生物合成通路中,聚酮合成酶13(polyketide synthase 13,Pks13)起到最后一步的组装作用。通过抑制Pks13可以抑制分枝菌酸的合成,进而起到杀灭结核分枝杆菌的作用。目前已发现五类化学骨架不同的Pks13抑制剂,本... 在结核分枝杆菌分枝菌酸的生物合成通路中,聚酮合成酶13(polyketide synthase 13,Pks13)起到最后一步的组装作用。通过抑制Pks13可以抑制分枝菌酸的合成,进而起到杀灭结核分枝杆菌的作用。目前已发现五类化学骨架不同的Pks13抑制剂,本文将简要介绍这几类Pks13抑制剂的发现过程、作用机制以及不同抑制剂的构效关系。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 分枝菌酸 聚酮合成酶13抑制剂 作用机制 构效关系
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Preparation on the basis of Trichoderma asperellum in the system of biological protection of wheat from Fusarium ear scab 被引量:1
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作者 Kolombet L V Sokolov M S +2 位作者 Chuprina V P Schisler D A Samuels G J 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期394-395,共2页
During the last century, as the area of wheat grown under advanced grain husbandry has increased worldwide, so too has the importance of Fusarium ear scab (FES) (synonym, Fusarium head blight) caused by several specie... During the last century, as the area of wheat grown under advanced grain husbandry has increased worldwide, so too has the importance of Fusarium ear scab (FES) (synonym, Fusarium head blight) caused by several species of the fungus Fusarium. Yield losses due to FES can total 20%-40% and more depending on climatic conditions. During the last twenty years epidemics of FES in cereals have become chronic all over the world, including the United States and Russia. The most destructive of these were observed in 1982, 1986, 1990-1996 in USA and in the south of Russia in 1982, 1984, 1988, 1992. The harmful effect of FES is manifested not only in reduced grain yields, but also in the contamination of grains and grain products with mycotoxins, such as deoxynivalenol (DON) and its derivatives (3-alfa acetyl-DON, 15-alfa acetyl-DON), T-2 toxin and zearalenone. Standard means to control FES (cultural control methodologies, chemical pesticides, and FES resistant varieties) have little effect or are not practical and rarely reduce the accumulation of mycotoxins in grain. We have developed a new technique to reduce FES using biological preparations. The technique utilizes wheat seed pretreatment with a biofungicide “Mycol” in combination with spraying wheat plants during flowering with a yeast preparation. Technology for production of Mycol on the basis of Trichoderma asperellum strain GJS 03-35 (systematics by Samuels) has been developed. This strain shows hyperparasitic activity against a wide spectrum of plant pathogens, including Fusarium graminearum, a causative agent of FES in wheat. Experiments conducted in the United States demonstrated that spraying wheat plants during flowering with the patented yeast Cryptococcus nodaensis OH 182.9 (NRRL Y-30216) reliably reduces FES development. Tests of the Mycol preparation and the yeast OH 182.9 (EOD) have been performed on the spring wheat “Ivolga” in greenhouse conditions (the Moscow region) and on the winter wheat “Kupava” in field trials in the North Caucasian region. An isolate of F. graminearum was used to insure adequate levels of disease development in greenhouse and field experiments. FES disease severity and incidence, as well as mycotoxin accumulation in wheat grains was studied for single or combination treatments with the biological preparations. Mycol (in concentrations 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 kg/t of seeds) was used for wheat seed pretreatment. The yeast preparation EOD (2.0×107 cfu/mL) was applied by spraying wheat plants during flowering. Chemical pesticides (Raxyl, TMTD) and a biological preparation Agat-25K were used as alternative control seed treatments. In greenhouse experiments, inoculations of heads with either biological preparation 4 h prior to inoculation with conidia of F. graminearum significantly reduced FES severity. Application with Mycol reduced DON in wheat grains by 6 to 11 fold. EOD alone or, to a lesser extent, in combination was also highly effective in reducing DON content. For treatments consisting of Mycol and EOD, 1000 grain weights were equivalent or higher than for control plants (both infected, and not infected). Wheat seeds obtained from the plants protected by these biological preparations germinated rapidly and possessed high germination rates compared to the FES control. In field trials, Mycol treatments clearly reduced FES symptoms, apparently providing an immunizing effect against FES. Mycol reduced FES severity and enhanced yield of the wheat varieties used. The effect of Mycol used at a minimum test-dose (0.1 kg/t) was not so pronounced. The greatest reduction of FES development was observed at a dose of Mycol of 1.0 kg per 1 t of seeds used in combination with EOD spraying. Experimental results support the contention that the offered technology has good prospects in controlling wheat Fusarium ear scab. 展开更多
关键词 曲霉素 木霉素 镰刀霉 穗痂病 小麦 生物防治
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Rearrangement in the regulation of sigD gene expression promotes 4-hydroxyisoleucine production in Corynebacterium glutamicum
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作者 Chuhan Hu Feng Shi +1 位作者 Rui Chen Youhe Xiang 《Systems Microbiology and Biomanufacturing》 2025年第1期276-287,共12页
Corynebacterium glutamicum is widely used in the production of amino acids.C.glutamicum possesses seven sigma factors,among which SigD is responsible for the transcription of genes involved in the synthesis of mycolic... Corynebacterium glutamicum is widely used in the production of amino acids.C.glutamicum possesses seven sigma factors,among which SigD is responsible for the transcription of genes involved in the synthesis of mycolic acid(MA)and its derivatives,the unique cell envelope of C.glutamicum.To understand the influence of MA synthesis on amino acid production and membrane phenotype of C.glutamicum,the expression of sigD gene and some mycolyltransferase genes,i.e.,cmt1,cop1 and cmt2,were regulated by several growth-regulated promoters in this study.Except for 2 mutant strains of P_(cg3096)-sigD and P_(cg1633)-cop1,the growth and 4-hydroxyisoleucine(4-HIL)titer of most modified strains did not change significantly.But the 4-HIL titer of P_(odhI)-sigD strain increased by 20.73%(142.45±3.69 mM)compared to that of control strain(117.99±0.34 mM).After it was cultivated in bioreactor,4-HIL titer reached 372.56 mM.This may be caused by the increase of MA content,and 17%decrease of cell hydrophobicity and 12%increase of membrane permeability were observed at the exponential phase.In conclusion,we proved that rearrangements in regulation of sigD expression contributed to the improved fermentation performance of C.glutamicum and promoted 4-HIL production. 展开更多
关键词 Corynebacterium glutamicum SigD 4-Hydroxyisoleucine Promoter engineering mycolic acid
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