目的:运用基于同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)的蛋白质组学相关技术,探究诊断胆道肿瘤的潜在生物标志物。方法:从复旦大学附属中山医院青浦分院中心实验室样本库中随机抽取经...目的:运用基于同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)的蛋白质组学相关技术,探究诊断胆道肿瘤的潜在生物标志物。方法:从复旦大学附属中山医院青浦分院中心实验室样本库中随机抽取经病理确诊的胆道肿瘤(biliarytractcarcinoma,BTC)患者和良性胆道疾病(benignbiliary disease,BBD)患者的胆汁标本各4例,组内两两混合后,采用iTRAQ标记技术结合二维液相色谱串联质谱分析(two-dimensional liquid chromatography-tandem mass spectrometry,2D LC-MS/MS),进行蛋白质组定量分析。然后,筛选出BTC组与BBD组之间的差异表达蛋白,并对其进行生物信息学分析,包括KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路富集分析、GO(Gene Ontology)富集分析和蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析。从差异表达蛋白中选取表达丰度差异倍数最大的候选蛋白作为胆道肿瘤的潜在诊断生物标志物,并使用50例BTC患者和50例BBD患者的胆汁标本对该候选蛋白进行酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)验证以及受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析。结果:从4组BTC患者和BBD患者的胆汁标本中共筛选出12个差异表达的蛋白(FDR<1%),其中触珠蛋白(haptoglobin,Hp)和补体因子H(complementfactorH,CFH)作为蛋白互作网络中的枢纽蛋白,在BBD患者胆汁中的表达丰度明显上调。ELISA结果显示,Hp和CFH蛋白在各胆道肿瘤亚型患者的胆汁中均发生显著上调(P<0.01)。ROC曲线分析表明,胆汁Hp和CFH蛋白在胆道肿瘤诊断方面展现出显著的特异性和敏感度,且其诊断效果要明显优于血清蛋白CA19-9。结论:本研究采用iTRAQ标记技术联合2D LC-MS/MS,系统解析了BTC患者与BBD患者胆汁标本中蛋白质组的差异,鉴定出Hp和CFH蛋白作为核心差异表达蛋白,二者诊断胆道肿瘤的效能均显著优于血清蛋白CA19-9,可作为胆道肿瘤早期诊断的潜在生物标志物及治疗靶点。展开更多
目的:利用高速逆流色谱法(HSCCC法)对何首乌粗提物中蒽醌类成分进行分离纯化并进行结构鉴定研究。方法:通过测定分配系数,选择分离的溶剂体系;以三氯甲烷-甲醇-水(4∶3∶2)为溶剂系统,流动相的流速为2.0 m L·min-1,主机转速为900 r...目的:利用高速逆流色谱法(HSCCC法)对何首乌粗提物中蒽醌类成分进行分离纯化并进行结构鉴定研究。方法:通过测定分配系数,选择分离的溶剂体系;以三氯甲烷-甲醇-水(4∶3∶2)为溶剂系统,流动相的流速为2.0 m L·min-1,主机转速为900 r·min-1,检测波长254 nm,对何首乌粗提物中蒽醌类化合物进行分离;利用HPLC法测定化合物的纯度;利用ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR及参照文献报道确定化合物的结构。结果:从何首乌粗提物中分离鉴定得到了大黄素、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和羟基大黄素,其纯度分别为96.55%、96.33%、21.69%、71.57%。结论:应用HSCCC法,以三氯甲烷-甲醇-水(4∶3∶2)为溶剂系统,可以有效地从何首乌粗提物中分离出蒽醌类化合物。展开更多
文摘目的:利用高速逆流色谱法(HSCCC法)对何首乌粗提物中蒽醌类成分进行分离纯化并进行结构鉴定研究。方法:通过测定分配系数,选择分离的溶剂体系;以三氯甲烷-甲醇-水(4∶3∶2)为溶剂系统,流动相的流速为2.0 m L·min-1,主机转速为900 r·min-1,检测波长254 nm,对何首乌粗提物中蒽醌类化合物进行分离;利用HPLC法测定化合物的纯度;利用ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR及参照文献报道确定化合物的结构。结果:从何首乌粗提物中分离鉴定得到了大黄素、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和羟基大黄素,其纯度分别为96.55%、96.33%、21.69%、71.57%。结论:应用HSCCC法,以三氯甲烷-甲醇-水(4∶3∶2)为溶剂系统,可以有效地从何首乌粗提物中分离出蒽醌类化合物。
