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节律基因mPeriod2过表达对体外Lewis肺癌细胞γ射线敏感性的影响 被引量:5
1
作者 朱彬 何垠波 +5 位作者 李颖 陈兢 钟玥 尹华虎 李光明 王正荣 《航天医学与医学工程》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期253-256,共4页
目的评价mPeriod2(mPer2)基因转染后过表达对小鼠Lew is肺癌细胞(LLCs)60Coγ-射线放射敏感性的影响。方法采用脂质体介导方法将mPer2基因转染至LLC细胞,以空白组及空载体质粒pcD-NA3.1为对照,采用RT-PCR及流式细胞术检测mPer2基因在LL... 目的评价mPeriod2(mPer2)基因转染后过表达对小鼠Lew is肺癌细胞(LLCs)60Coγ-射线放射敏感性的影响。方法采用脂质体介导方法将mPer2基因转染至LLC细胞,以空白组及空载体质粒pcD-NA3.1为对照,采用RT-PCR及流式细胞术检测mPer2基因在LLC细胞中的表达,给予60Coγ-射线4Gy单次照射后,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡,采用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化、细胞集落形成实验检测细胞增殖及存活情况。结果60Coγ-射线照射后,与转染空载体质粒组及空白组比较,转染mPer2基因细胞表现为G2/M期阻滞,凋亡率下降(contro l:8.10±0.03;pcDNA3.1-vector:11.20±0.07;pcDNA3.1-mPer2:4.40±0.02;P<0.05),细胞克隆形成增加(contro l:14%;pcDNA3.1-vec-tor:11%;pcDNA3.1-mPer2:32%;P<0.01)及PCNA阳性表达增加(contro l:+,pcDNA3.1-vector:+,pcDNA3.1-mPer2:+++,P<0.05)。结论节律基因mPer2过表达使60Coγ-射线照射的小鼠Lew is肺癌细胞凋亡下降,细胞增殖明显,降低了该细胞对放射损伤的敏感性。 展开更多
关键词 时间生物学 节律基因 mper2基因 转染 放射敏感性
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节律基因mPer1对化疗药物阿霉素敏感性的影响 被引量:3
2
作者 段志青 朱小云 +5 位作者 张宇 汪宇辉 刘延友 郭慧玲 肖静 王正荣 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期925-928,共4页
目的评价小鼠乳腺癌EMT6细胞中节律基因mPer1过表达对化疗药物阿霉素(ADM)敏感性的影响。方法将pcDNA3.1(+)-mPer1质粒转染至EMT6细胞中(EMT6-mPer1组),以pcDNA3.1(+)质粒为对照(EMT6-vect组),通过RT-PCR、Western Blotting检测转染效率... 目的评价小鼠乳腺癌EMT6细胞中节律基因mPer1过表达对化疗药物阿霉素(ADM)敏感性的影响。方法将pcDNA3.1(+)-mPer1质粒转染至EMT6细胞中(EMT6-mPer1组),以pcDNA3.1(+)质粒为对照(EMT6-vect组),通过RT-PCR、Western Blotting检测转染效率;给予ADM处理,MTT法检测细胞生长情况,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化;RT-PCR检测凋亡相关基因mRNA的水平。结果在ADM处理后,与对照组比较,转染mPer1基因细胞表现为:S期比例增加,凋亡率升高〔EMT6-vect:(65.65±0.07)%;EMT6-mPer1:(72.35±0.57)%〕,细胞生长抑制率增加〔EMT6-vect:(42.18±5.73)%;EMT6-mPer1:(53.28±7.32%)〕及p53 mRNA表达量增加(EMT6-vect:0.48±0.08;EMT6-mPer1:1.18±0.02)。结论节律基因mPer1过表达可以提高该细胞对阿霉素的敏感性。 展开更多
关键词 节律基因 mper1 基因 阿霉素 药物敏感性
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褪黑素对培养的乳鼠心肌细胞内mPER1基因近日(昼夜)节律表达的影响 被引量:3
3
作者 周倍伊 陶大昌 +1 位作者 藤其志 王正荣 《航天医学与医学工程》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期448-449,共2页
目的通过对mPER1基因表达及褪黑素对其作用的分析 ,探讨体外培养乳鼠心肌细胞细胞搏动产生的近日 (昼夜 )节律机理。方法用免疫细胞化学技术连续 3d检测培养的乳鼠心肌细胞各时间点的mPER1基因表达 ,同时用褪黑素干涉作对照实验。结果mP... 目的通过对mPER1基因表达及褪黑素对其作用的分析 ,探讨体外培养乳鼠心肌细胞细胞搏动产生的近日 (昼夜 )节律机理。方法用免疫细胞化学技术连续 3d检测培养的乳鼠心肌细胞各时间点的mPER1基因表达 ,同时用褪黑素干涉作对照实验。结果mPER1基因以近日 (昼夜 )节律方式表达 ,其峰值相位平均为 1 5∶2 0 ,3d的平均周期为 2 3h。褪黑素对其周期及振幅无明显影响 ,但使mPER1基因表达峰值相位移至 1 7∶1 5。现在所观察到mPER1基因表达的近日 (昼夜 )节律现象与我们以前观察的心肌细胞搏动情况基本相同。结论mPER1基因其自激振荡过程是离体培养的乳鼠心肌细胞搏动呈近日 (昼夜 )节律的重要因素之一 ,褪黑素作为“授时因子” ,调控着mPER1基因表达。 展开更多
关键词 mper1表达 基因表达 昼夜节律 褪黑素 心肌细胞 免疫细胞化学 离体培养
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转染节律基因mPeriod2对小鼠正常细胞放射损伤的影响 被引量:1
4
作者 常莉 刘延友 +6 位作者 李颖 朱彬 华慧 汪羽辉 张菁 江舟 王正荣 《西部医学》 2007年第2期175-178,共4页
目的评价mPeriod2(mPer2)基因转染后过表达对小鼠肺成纤维细胞NIH3T3放射损伤的影响。方法采用脂质体介导法将mPer2基因转染入NIH3T3细胞中,以空质粒pcDNA3.1和空白组为对照,采用流式细胞术检测mPer2基因在NIH3T3细胞中的表达,经过^(60)... 目的评价mPeriod2(mPer2)基因转染后过表达对小鼠肺成纤维细胞NIH3T3放射损伤的影响。方法采用脂质体介导法将mPer2基因转染入NIH3T3细胞中,以空质粒pcDNA3.1和空白组为对照,采用流式细胞术检测mPer2基因在NIH3T3细胞中的表达,经过^(60)Co-γ射线放射处理后,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,采用平板克隆形成试验检测细胞增殖情况。结果射线照射后,与pcDNA3.1空质粒组和空白对照组相比,pcDNA3.1-mPer2转染组凋亡率下降,S期细胞所占比例增高,克隆形成率明显增高。结论节律基因mPer2过表达会使γ射线照射后的NIH3T3细胞凋亡下降,增殖加快,减弱了细胞的放射损伤。 展开更多
关键词 近日节律 mper2基因 转染 放射损伤
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节律基因mPER1对小鼠Lewis肺癌细胞迁移的影响 被引量:1
5
作者 赵京卉 汪宇辉 +5 位作者 刘延友 段志青 林丽 要然 朱小云 王正荣 《西部医学》 2007年第5期761-762,766,共3页
目的通过节律基因mPeriod1(mPer1)过表达,研究mPer1对小鼠Lewis肺癌细胞迁移的影响。方法采用脂质体介导法将mPer1基因转染入Lewis细胞。通过RT-PCR检测mPer1在Lewis细胞中的表达;采用Chemico公司QCM(tm)24-Well Colorimetric Cell Migr... 目的通过节律基因mPeriod1(mPer1)过表达,研究mPer1对小鼠Lewis肺癌细胞迁移的影响。方法采用脂质体介导法将mPer1基因转染入Lewis细胞。通过RT-PCR检测mPer1在Lewis细胞中的表达;采用Chemico公司QCM(tm)24-Well Colorimetric Cell Migration Assay检测细胞迁移的变化。结果与pcDNA3.1空质粒相比,pcDNA3.1-mPer1转染组mPer1表达增加,其迁移率与对照组比较明显下降。结论节律基因mPer1过表达能够抑制Lewis肺癌细胞的迁移。 展开更多
关键词 mper1基因 细胞迁移 Lewis细胞 近日节律
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MPTP对C57BL/6J小鼠脑时钟基因mPer1 mRNA表达的影响
6
作者 左晓虹 蔡彦宁 +2 位作者 于顺 刘姝 陈彪 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2009年第1期76-79,共4页
目的研究神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四羟基吡啶(MPTP)对小鼠脑组织中时钟基因mPer1mRNA表达的影响。方法将C57BL/6J小鼠用计算机辅助法随机分为MPTP组和对照组,MPTP组腹腔注射MPTP-HCl,对照组注射0.9%氯化钠注射液,连续5d,第11天连... 目的研究神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四羟基吡啶(MPTP)对小鼠脑组织中时钟基因mPer1mRNA表达的影响。方法将C57BL/6J小鼠用计算机辅助法随机分为MPTP组和对照组,MPTP组腹腔注射MPTP-HCl,对照组注射0.9%氯化钠注射液,连续5d,第11天连续24h按6个时间点取材。用HPLC-ECD检测纹状体中多巴胺(DA)含量,用实时定量RT-PCR检测纹状体和其余脑组织mPer1 mRNA水平。结果MPTP组纹状体DA水平较正常对照组减少了80%,并维持低水平长达10d;纹状体mPer1mRNA在24h内呈明显节律性变化,而其余脑组织mPer1 mRNA无明显节律性变化;MPTP处理导致纹状体和其余脑组织mPer1 mRNA水平增高及纹状体mPer1 mRNA表达高峰提前。结论MPTP引起小鼠纹状体时钟基因的表达水平和节律性发生改变,提示MPTP可能通过改变细胞内的节律控制中心而影响机体的生物节律。 展开更多
关键词 时钟基因 mper1 帕金森病 昼夜节律
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C57 BL/6J小鼠肝脏中mPer1基因CpG岛甲基化分析
7
作者 刘姝 蔡彦宁 陈彪 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1813-1816,1820,共5页
目的建立分析C57BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区甲基化状态的亚硫氢酸修饰法,检测mPer1表达峰、谷对应的甲基化状态。方法利用实时定量PCR方法检测mPer1基因表达时相特点,并利用亚硫氢酸修饰法对小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区域Cp... 目的建立分析C57BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区甲基化状态的亚硫氢酸修饰法,检测mPer1表达峰、谷对应的甲基化状态。方法利用实时定量PCR方法检测mPer1基因表达时相特点,并利用亚硫氢酸修饰法对小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区域CpG岛和E-box甲基化情况进行了研究。结果C57BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因表达有显著波动性,表达高峰位于ZT13,低谷位于ZT01。序列分析显示mPer1基因启动子区含有CpG岛,并且该CpG岛覆盖与mPer1波动性表达密切相关的顺式元件E-box1和E-box2。亚硫氢酸修饰测序结果显示,mPer1基因启动子区CpG岛和E-box均呈低甲基化或非甲基化状态。不同时间点mPer1基因CpG岛甲基化频率无显著变化(P=0.458)。结论肝脏中mPer1基因启动子区CpG岛和E-box均为开放状态,可以与时钟相关转录因子结合。甲基化不参与调节mPer1基因的节律性表达。 展开更多
关键词 mper1基因 E—box CPG岛 甲基化 实时定量PCR
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mPer2对小鼠B16黑色素瘤细胞增殖作用的影响
8
作者 陈兢 李华琦 +1 位作者 李浩 惠旭辉 《四川生理科学杂志》 2006年第4期163-164,共2页
目的:研究mPer2对小鼠黑色素瘤细胞B16增殖作用的影响。方法:将构建好的mPer2全长表达质粒(pcDNA3.1-mPer2)转染入小鼠黑色素瘤细胞B16中,并以pcDNA3.1空质粒转染为对照,通过平板克隆形成实验和MTT法检测两组细胞的增殖情况。结果:平板... 目的:研究mPer2对小鼠黑色素瘤细胞B16增殖作用的影响。方法:将构建好的mPer2全长表达质粒(pcDNA3.1-mPer2)转染入小鼠黑色素瘤细胞B16中,并以pcDNA3.1空质粒转染为对照,通过平板克隆形成实验和MTT法检测两组细胞的增殖情况。结果:平板克隆形成实验和MTT法检测结果均显示Period2转染组小鼠黑色素瘤细胞B16较空质粒对照组明显降低。结论:mPer2的高表达能显著性的抑制小鼠黑色素瘤细胞B16的生长。 展开更多
关键词 mper2 细胞增殖 B16细胞
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mper核酶基因表达载体的构建及动物模型检测
9
作者 何畅 屈艺 +2 位作者 尹华虎 王若菡 王正荣 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第S1期107-111,共5页
目的 探讨 per基因直接参与阿片类精神依赖性药物的心理和生理成瘾作用机制和寻找一种治疗心理和生理成瘾的基因戒毒新方法 .方法 针对小鼠mper设计锤头状核酶基因序列 ,利用基因重组技术构建mperribozyme的表达载体 ,并直接导入小鼠... 目的 探讨 per基因直接参与阿片类精神依赖性药物的心理和生理成瘾作用机制和寻找一种治疗心理和生理成瘾的基因戒毒新方法 .方法 针对小鼠mper设计锤头状核酶基因序列 ,利用基因重组技术构建mperribozyme的表达载体 ,并直接导入小鼠脑内 .以剂量递增法形成吗啡依赖模型 ,用纳洛酮催促戒断 .结果 重组质粒组小鼠的刻板跳跃 ,湿狗样抖动和打洞次数与空质粒组 ,生理盐水组相比明显减少 ,但并不抑制小鼠的体重下降 .结论 mperribozyme的表达载体能在小鼠脑内产生mperribozyme ,并发挥酶切作用 ,切割mper ,抑制大部分吗啡戒断症状 .意义 导入重组有mperribozymeDNA的质粒于体内阻断mper表达 ,从而达到治疗药物成瘾的方法是一种具有良好应用前景 ,并值得深入研究的戒毒疗法 . 展开更多
关键词 mper核酶 基因表达 构建 实验模型
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干扰Gnb21l对节律基因mPer1表达的影响
10
作者 谯邦兴 朱雨 +4 位作者 刘延友 邹晏 汪宇辉 江舟 王正荣 《西部医学》 2010年第5期805-807,共3页
目的研究干扰Gnb21l表达对节律基因mPer1表达的影响。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(Phorbol 12-Myristate 13-acetate,PMA)诱导NI H3T3细胞,使其节律基因稳定表达,然后用脂质体介导法将pGenesil-1/Gnb2l1质粒(实验组)及pGenesil-1... 目的研究干扰Gnb21l表达对节律基因mPer1表达的影响。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(Phorbol 12-Myristate 13-acetate,PMA)诱导NI H3T3细胞,使其节律基因稳定表达,然后用脂质体介导法将pGenesil-1/Gnb2l1质粒(实验组)及pGenesil-1/vector质粒(对照组)分别转染入NI H3T3细胞中,采用RT-PCR半定量技术检测不同时间点NTH3T3细胞中Gnb2l1及mPer1 mRNA的表达水平的变化情况。结果实验组比对照组的Gnb2l1以及mPer1 mRNA的表达量均明显降低(P<0.05),但经余弦分析比较两组的mPer1表达周期无明显改变。结论干扰Gnb2l1使节律基因mPer1表达量降低。 展开更多
关键词 节律基因 Gnb21l基因 mper1基因 转染
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NIH3T3细胞中miR-29b表达变化对mPer1和Egr2的影响
11
作者 徐涛 后望 +6 位作者 汪宇辉 成姝婷 刘延友 江舟 肖静 郭慧玲 王正荣 《西部医学》 2016年第7期900-903,共4页
目的探讨NIH3T3细胞中miR-29b对血清诱导的立早基因Egr2 mRNA表达的影响及其机制。方法将体外培养NIH3T3细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组。实验组用miR-29b转染,阴性对照组空转,而空白对照组则不做任何处理。RT-qPCR检测近日节... 目的探讨NIH3T3细胞中miR-29b对血清诱导的立早基因Egr2 mRNA表达的影响及其机制。方法将体外培养NIH3T3细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组。实验组用miR-29b转染,阴性对照组空转,而空白对照组则不做任何处理。RT-qPCR检测近日节律基因mPer1与立早基因Egr2 mRNA的表达水平。结果实验结果显示,mPer1和Egr2的表达均发生了较明显的变化。与阴性对照组相比,空白对照组中mPer1和Egr2的mRNA表达水平无明显差异;而实验组中mPer1的mRNA表达降低了42%,Egr2的mRNA表达升高了49%。结论 miR-29b能上调Egr2的表达,其途径可能是通过抑制NIH3T3细胞近日节律基因mPer1的表达实现。 展开更多
关键词 mper1 miR-29b Egr2 NIH3T3细胞
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mPer2在小鼠黑色素瘤细胞B16细胞凋亡中的作用研究
12
作者 李华琦 李浩 +1 位作者 惠旭辉 陈兢 《四川生理科学杂志》 2006年第4期161-163,共3页
目的:研究mPer2在小鼠黑色素瘤细胞B16细胞凋亡中的作用机制。方法:将构pcDNA3.1-mper2和pcDNA3.1空质粒分别转染入小鼠黑色素瘤细胞B16中。提取两组细胞的总RNA和总蛋白,利用特异引物和抗体,分别检测两组细胞中p53和c-Myc基因在RNA和... 目的:研究mPer2在小鼠黑色素瘤细胞B16细胞凋亡中的作用机制。方法:将构pcDNA3.1-mper2和pcDNA3.1空质粒分别转染入小鼠黑色素瘤细胞B16中。提取两组细胞的总RNA和总蛋白,利用特异引物和抗体,分别检测两组细胞中p53和c-Myc基因在RNA和蛋白水平表达的变化。结果:RT-PCR和蛋白印迹检测均显示与转染pcDNA3.1(+)空质粒相比,转染pcDNA3.1-mPer2入B16细胞后,p53的表达增高,而c-Myc表达降低。结论:mPer2可能通过抑制细胞癌基因c-Myc的表达,促进抑癌基因p53的表达,从而抑制B16细胞生长,诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 mper2 P53 C-MYC B16细胞 细胞凋亡
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HIV-1感染者体内MPER特异性抗体的分离鉴定
13
作者 李淇 李丹 +4 位作者 王硕 郝彦玲 李唤 任莉 王铮 《中国艾滋病性病》 CSCD 北大核心 2024年第12期1240-1246,共7页
目的利用流式细胞分选技术从1例HIV-1感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中分选出近膜外区(MPER)特异性记忆B细胞并获得MPER特异性单克隆抗体,对其结合能力及中和活性进行评价。方法使用生物素化MPER肽段结合流式单细胞分选技术获得MPER特... 目的利用流式细胞分选技术从1例HIV-1感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中分选出近膜外区(MPER)特异性记忆B细胞并获得MPER特异性单克隆抗体,对其结合能力及中和活性进行评价。方法使用生物素化MPER肽段结合流式单细胞分选技术获得MPER特异性记忆B细胞,并采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增出抗体的重、轻链可变区基因,克隆至相应的表达载体后共转染293F细胞表达抗体。利用ELISA、生物层干涉分析(BLI)、假病毒中和实验等评价抗体的结合能力和中和活性。结果成功表达出12株单克隆抗体,其中两株单克隆抗体504A2与504C1能够有效结合MPER肽段和跨膜蛋白gp41,且均具有一定的中和能力。单克隆抗体504A2能够中和假病毒SF162、MW965.26,504C1能够特异中和MPER嵌合假病毒HIV2 C1。结论本研究建立了MPER特异性单克隆抗体筛选方法,并成功获得2株具有一定中和能力的MPER特异性单克隆抗体,为后续HIV-1广谱中和抗体筛选、诊断试剂研发及疫苗设计提供技术支撑。 展开更多
关键词 1型艾滋病病毒 近膜外区 单个B细胞分选 单克隆抗体
原文传递
霍乱毒素B亚基展示HIV-1 gp41 MPER表位的研究
14
作者 未祥 张芝晴 +7 位作者 邵佳 黄芳 齐家龙 高双全 李少勇 李少伟 夏宁邵 顾颖 《中国生化药物杂志》 CAS 2017年第6期1-5,共5页
目的 评价霍乱毒素B亚基融合HIV-1 gp41 MPER表位的免疫效果.方法 利用霍乱毒素的B亚基(CTB)作为载体展示靶向于MPER的广谱中和抗体2F5和4E10的表位.表达纯化后的融合蛋白与弗氏佐剂混合乳化后免疫小鼠,免疫4次后对小鼠的血清进行综... 目的 评价霍乱毒素B亚基融合HIV-1 gp41 MPER表位的免疫效果.方法 利用霍乱毒素的B亚基(CTB)作为载体展示靶向于MPER的广谱中和抗体2F5和4E10的表位.表达纯化后的融合蛋白与弗氏佐剂混合乳化后免疫小鼠,免疫4次后对小鼠的血清进行综合评价.ELISA法评价融合蛋白的免疫原性;检测免疫血清中IgA类抗体分析小鼠黏膜免疫应答;对小鼠血清中的不同类型的抗体量进行分析,通过流式细胞仪检测PBMC细胞因子IFN-γ和IL-4用以分析小鼠免疫激活途径;病毒中和实验检测免疫血清对病毒感染细胞的抑制能力.结果 CTB作为载体蛋白具有很好的免疫原性,能够诱导免疫系统产生针对MPER表位的抗体,刺激小鼠产生黏膜免疫应答,诱导针对MPER表位的IgA抗体.同时,融合蛋白可以刺激机体的IgG1,IgG2a和IgG2b类抗体的产生和刺激小鼠体内的Th2类免疫途径.中和实验结果显示,CTB-4E10免疫后的血清可以抑制NL4-3病毒对细胞的感染.结论 CTB融合蛋白具有强免疫原性,可以刺激体液免疫反应,黏膜免疫反应和Th2类免疫途径,并且CTB-4E10蛋白免疫血清能够抑制NL4-3病毒感染细胞.本研究为HIV-1 gp41 MPER作为候选疫苗的探索奠定基础. 展开更多
关键词 霍乱毒素B亚基 免疫应答
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The development of HIV vaccines targeting gp41 membrane-proximal external region (MPER): challenges and prospects 被引量:3
15
作者 Huan Liu Xiaojie Su +2 位作者 Lulu Si Lu Lu Shibo Jiang 《Protein & Cell》 SCIE CAS CSCD 2018年第7期596-615,共20页
A human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) vaccine which is able to effectively prevent infection would be the most powerful method of extinguishing pandemic of the acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). Ye... A human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) vaccine which is able to effectively prevent infection would be the most powerful method of extinguishing pandemic of the acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). Yet, achieving such vaccine remains great challenges. The membrane-proximal external region (MPER) is a highly conserved region of the envelope glycoprotein (Env) gp41 subunit near the viral envelope surface, and it plays a key role in membrane fusion. It is also the target of some reported broadly neutralizing antibodies (bNAbs). Thus, MPER is deemed to be one of the most attractive vaccine targets. However, no one can induce these bNAbs by immunization with immunogens con- taining the MPER sequence(s). The few attempts at developing a vaccine have only resulted in the induction of neutralizing antibodies with quite low potency and limited breadth. Thus far, vaccine failure can be attrib- uted to various characteristics of MPER, such as those involving structure and immunology; therefore, we will focus on these and review the recent progress in the field from the following perspectives: (1) MPER structure and its role in membrane fusion, (2) the epitopes and neutralization mechanisms of MPER-specific bNAbs, as well as the limitations in eliciting neutralizing antibodies, and (3) different strategies for MPER vaccine design and current harvests. 展开更多
关键词 HIV-1 GP41 mper VACCINE neutralizing antibodies ADCC
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单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定 被引量:1
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作者 刘秀侠 杨雄 陈红英 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期177-183,共7页
为深入研究2F5和4E10抗体,构建了特异性识别HIV-1病毒MPER区域的2F5和4E10单链抗体的重组质粒,进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR扩增及基因重组技术,获得2F5-scFv和4E10-scFv基因,将其插入原核表达载体pET-28a(+)上,获得... 为深入研究2F5和4E10抗体,构建了特异性识别HIV-1病毒MPER区域的2F5和4E10单链抗体的重组质粒,进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR扩增及基因重组技术,获得2F5-scFv和4E10-scFv基因,将其插入原核表达载体pET-28a(+)上,获得表达质粒。转入大肠杆菌BL21(DE3)及Rosetta-gami2(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测发现,2F5-scFv和4E10-scFv在两种表达菌中均以包涵体形式存在,重组蛋白分子量分别约为27 kD、29 kD。变性条件下,利用镍离子螯合层析方法对包涵体蛋白进行纯化,经复性后获得可溶性单链抗体。ELISA检测表明,制备的单链抗体与原核和真核表达的MPER抗原都有特异性结合活性。 展开更多
关键词 HIV-1 GP41 mper 2F5 4E10 单链抗体
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PMA诱导小鼠Lewis肺癌细胞节律基因的表达
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作者 要然 刘延友 +5 位作者 张太明 赵京卉 朱晓云 张宇 汪宇辉 王正荣 《西部医学》 2008年第1期32-33,37,共3页
目的采用体外节律诱导剂以研究小鼠Lewis肺癌细胞近日节律基因的表达情况。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(PMA)刺激体外培养的小鼠Lewis肺癌细胞(LLC),RT-PCR检测不同时间点mPer1的mRNA表达水平。Real-time PCR和RT-PCR检测mClock... 目的采用体外节律诱导剂以研究小鼠Lewis肺癌细胞近日节律基因的表达情况。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(PMA)刺激体外培养的小鼠Lewis肺癌细胞(LLC),RT-PCR检测不同时间点mPer1的mRNA表达水平。Real-time PCR和RT-PCR检测mClock的mRNA表达水平。结果发现LLC细胞的节律基因mClock、mPer1存在近日节律振荡。结论经PMA诱导后,LLC细胞的节律基因存在近日节律振荡,为体外研究授时因子对近日节律的导引机制提供证据。 展开更多
关键词 近日节律 PMA mClock mper1 小鼠LEWIS肺癌细胞
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无线Ad Hoc网络的多径能量路由机制
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作者 刀学龙 龙华 +1 位作者 刘增力 邵玉斌 《玉溪师范学院学报》 2009年第4期33-40,共8页
结合网络整体的能耗动态变化情况,提出一种新的节点能耗模型(ECM模型),并基于多路径技术和ECM设计了一种新的多径能量路由协议(MPER协议).通过NS2对比仿真MPER协议和AODV协议,其结果为,MPER协议较AODV协议在能量的使用效率上有了较大的... 结合网络整体的能耗动态变化情况,提出一种新的节点能耗模型(ECM模型),并基于多路径技术和ECM设计了一种新的多径能量路由协议(MPER协议).通过NS2对比仿真MPER协议和AODV协议,其结果为,MPER协议较AODV协议在能量的使用效率上有了较大的提高,有效延长了网络生存时间,且在网络成功发送的数据包、网络延时以及分组投递率等方面都有了进一步的改善. 展开更多
关键词 AD HOC mper协议 多径 路由能耗
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HIV-1近膜端表位及其免疫原设计的研究进展 被引量:1
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作者 黄芳 李少伟 顾颖 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期1038-1041,共4页
HIV疫苗所研究的免疫原设计主要针对HIV包膜蛋白进行,其gp41近膜端(Membrane-proximal external region,MPER)被证实是高度保守的线性表位。已报道的广谱中和抗体2F5、4E10及10E8靶向于该表位,但由于MPER自身免疫原性较差,为提高其免疫... HIV疫苗所研究的免疫原设计主要针对HIV包膜蛋白进行,其gp41近膜端(Membrane-proximal external region,MPER)被证实是高度保守的线性表位。已报道的广谱中和抗体2F5、4E10及10E8靶向于该表位,但由于MPER自身免疫原性较差,为提高其免疫原性、更好激起机体体液免疫反应等考虑,进行MPER免疫原的设计以获得类似广谱中和抗体成为HIV-1研究的热点之一。本文对近年来MPER表位的研究及其免疫原的设计进行系统的综述,为后续在艾滋疫苗免疫原的设计上提供思路。 展开更多
关键词 HIV-1 mper 中和抗体 免疫原设计 综述
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高速钢激光相变强化组织的回火稳定性 被引量:1
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作者 陈传忠 于慧君 +4 位作者 耿浩然 周香林 于家洪 王世清 雷廷权 《材料研究学报》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第4期437-440,共4页
研究了 W18 Cr4 V 高速钢激光相变强化层的组织及其回火稳定性, 结果表明, 对于 W18 Cr4 V 高速钢, 激光相变强化后的组织明显细化, 其组织由马氏体、残余奥氏体及未溶碳化物组成; W, Cr, V 等强碳化物形... 研究了 W18 Cr4 V 高速钢激光相变强化层的组织及其回火稳定性, 结果表明, 对于 W18 Cr4 V 高速钢, 激光相变强化后的组织明显细化, 其组织由马氏体、残余奥氏体及未溶碳化物组成; W, Cr, V 等强碳化物形成元素在马氏体及残余奥氏体中固溶度的提高使强化层的回火稳定性有了明显的改善, 经640 ℃回火后强化层硬度达到最高值1003 H V0 .1 , 展开更多
关键词 高速钢 激光相变强化 组织 回火稳定性
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