银杏内酯B通过PI3K/AKT信号通路抑制MH7A人成纤维样滑膜细胞增殖及其促细胞凋亡

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作者 刘璘琛 徐晓龑 +6 位作者 孙春萌 俞济荣 施青 孙君君 逄丹丹 卫斐然 刘兴 《中国药科大学学报》 北大核心 2025年第2期216-224,共9页

探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对MH7A人成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的增殖抑制作用及其潜在机制。采用20μg/L肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-a,TNF-α)刺激MH7A构建关节炎细胞模型。经不同浓度GB作... 探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对MH7A人成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的增殖抑制作用及其潜在机制。采用20μg/L肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-a,TNF-α)刺激MH7A构建关节炎细胞模型。经不同浓度GB作用于MH7A细胞后,CCK-8法检测细胞活力;Transwell实验检测细胞侵袭力;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹分别检测基因转录和蛋白表达量。与对照组相比,GB对细胞活力的抑制作用呈现出一定的浓度和时间依赖性;GB显著抑制细胞侵袭力、增加细胞凋亡率和G_(0)/G_(1)期比例;GB显著上调细胞Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)和p21 mRNA和下降Bcl-2、髓系白血病1(myeloid cell leukemia 1,Mcl-1)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB;又称AKT)、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphati-dylinositol 3-kinase,PI3K)、Cyclin D1和细胞周期调节蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)mRNA转录水平;同时,GB显著上调Bax、p21和Cleaved-caspase 3蛋白和下调Bcl-2、Mcl-1、p-AKT、p-PI3K、Cyclin D1和CDK4蛋白表达量,且伴有p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和Bcl-2/Bax比值的降低。综上,GB通过抑制PI3K/AKT信号通路,阻滞MH7A细胞G_(1)期向S期转化、抑制细胞活力和侵袭力,并诱导MH7A人成纤维样滑膜细胞凋亡。 展开更多

关键词 银杏内酯B 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B 类风湿性关节炎 mh7a细胞 凋亡

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卡帕塞替尼对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MH7A增殖、迁移、侵袭、凋亡及自噬的影响实验研究

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作者 高敏婵 王鹏 +4 位作者 胡泽瑞 葛王舒琦 江澳 张鑫 赵存喜 《陕西医学杂志》 2025年第6期742-747,共6页

目的:探讨蛋白激酶B(AKT)抑制剂卡帕塞替尼(AZD5363)对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞MH7A增殖、迁移和侵袭、凋亡以及自噬的影响。方法:将MH7A细胞随机分为对照组(无药物干预)、低浓度组(含3μmol/L AZD5363高糖培养基培养)、中浓度... 目的:探讨蛋白激酶B(AKT)抑制剂卡帕塞替尼(AZD5363)对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞MH7A增殖、迁移和侵袭、凋亡以及自噬的影响。方法:将MH7A细胞随机分为对照组(无药物干预)、低浓度组(含3μmol/L AZD5363高糖培养基培养)、中浓度组(含6μmol/L AZD5363高糖培养基培养)和高浓度组(含9μmol/L AZD5363高糖培养基培养)。采用CCK-8法检测细胞增殖情况;采用流式细胞术和Transwell实验检测细胞凋亡、迁移和侵袭情况;采用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(Bax)]、细胞迁移与侵袭相关蛋白[基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和MMP-2]、自噬相关蛋白[自噬相关基因5(ATG5)、自噬相关蛋白7(ATG7)、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3Ⅱ/Ⅰ)、螯合体1(p62)]以及AKT、磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达。结果:MH7A细胞经过不同浓度AZD5363处理后,与对照组比较,随着药物浓度增加,细胞活力降低,细胞凋亡率增加,细胞迁移和侵袭率降低,Bcl2、MMP-1、MMP-2、ATG5、ATG7及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低,Bax、p62蛋白表达升高(均P<0.05)。结论:AZD5363可以明显抑制MH7A细胞增殖、迁移、侵袭及自噬,同时显著促进其凋亡。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 卡帕塞替尼 mh7a细胞 增殖 迁移 侵袭 凋亡 自噬

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Mdivi-1对MH7A细胞增殖及氧化应激的影响

3

作者 王晓艳 陈祝锋 《中华实用诊断与治疗杂志》 2025年第8期683-686,共4页

目的观察类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞系MH7A细胞在不同浓度Mdivi-1作用下的增殖情况,探讨Mdivi-1对MH7A细胞增殖及氧化应激的影响。方法对数生长期MH7A细胞采用质量分数0.1%DMSO及10、20、40、80、100μmol/L Mdivi-1处理24 h,采用CC... 目的观察类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞系MH7A细胞在不同浓度Mdivi-1作用下的增殖情况,探讨Mdivi-1对MH7A细胞增殖及氧化应激的影响。方法对数生长期MH7A细胞采用质量分数0.1%DMSO及10、20、40、80、100μmol/L Mdivi-1处理24 h,采用CCK-8法检测细胞增殖吸光度(OD)值,根据最低细胞增殖OD值筛选Mdivi-1浓度进行后续实验。对数生长期MH7A细胞分为对照组和Mdivi-1组,分别采用质量分数0.1%DMSO、100μmol/L Mdivi-1处理24 h,采用实时荧光定量PCR法检测抗氧化应激标志物核因子-E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)mRNA相对表达量。结果质量分数0.1%DMSO及10、20、40、80、100μmol/L Mdivi-1处理24 h后,MH7A细胞增殖OD值(1.59±0.54、1.53±0.48、1.36±0.81、1.12±0.43、0.88±0.25、0.78±0.39)比较差异有统计学意义(F=43.865,P<0.001),20、40、80、100μmol/L Mdivi-1处理的MH7A细胞增殖OD值均低于质量分数0.1%DMSO及10μmol/L Mdivi-1处理的细胞,且依次降低(P<0.05),质量分数0.1%DMSO处理的细胞增殖OD值与10μmol/L Mdivi-1处理的细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。100μmol/L Mdivi-1处理的细胞增殖OD值最低,选择100μmol/L Mdivi-1进行后续实验。处理24 h后,Mdivi-1组Nrf2、NQO1 mRNA相对表达量(1.49±0.32、4.03±1.30)均高于对照组(0.45±0.27、0.49±0.26)(t=-3.134,P=0.035;t=-4.441,P=0.011),HO-1 mRNA相对表达量(0.53±0.29)与对照组(0.45±0.28)比较差异无统计学意义(t=-0.263,P=0.805)。结论Mdivi-1可抑制MH7A细胞增殖活性,且呈剂量依赖性,可能与Mdivi-1通过调节线粒体功能、激活细胞抗氧化应激反应有关。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 Mdivi-1 mh7a细胞 细胞增殖 氧化应激 血红素加氧酶-1 核因子-E2相关因子 醌氧化还原酶1

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白屈菜红碱通过调控MAPK/NF-κB信号通路对LPS诱导的MH7A细胞的影响

4

作者 牛建均 刘春艳 +4 位作者 文琴琴 晏朝操 曾凡勇 田永松 张永红 《贵州医药》 2025年第9期1353-1356,1362,共5页

目的研究白屈菜红碱对脂多糖(LPS)诱导的类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞MH7A细胞的MAPK/NF-κB通路表达的影响,探讨白屈菜红碱治疗RA的作用机制。方法采用LPS对MH7A细胞进行刺激,再用白屈菜红碱对刺激后的MH7A细胞进行干预,并随机分... 目的研究白屈菜红碱对脂多糖(LPS)诱导的类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞MH7A细胞的MAPK/NF-κB通路表达的影响,探讨白屈菜红碱治疗RA的作用机制。方法采用LPS对MH7A细胞进行刺激,再用白屈菜红碱对刺激后的MH7A细胞进行干预,并随机分为正常组、模型组、阳性组、白屈菜红碱(高、中、低)剂量组。收集上述各组细胞,ELISA检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量,RT-qPCR、Western blot检测各组细胞中ERK1/2、p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA及蛋白的表达。结果与正常组比较,LPS处理后细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的含量明显上升(P<0.01),ERK1/2、p38MAPK、NF-κB p65 mRNA及蛋白的表达显著升高(P<0.01);与模型组相比,阳性药物和白屈菜红碱组均改善上述指标变化。结论抑制MAPK/NF-κB通路相关因子在成纤维样滑膜细胞中的表达应是白屈菜红碱治疗RA的作用机制之一。 展开更多

关键词 白屈菜红碱 类风湿关节炎 mh7a细胞 MAPK/NF-κB

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苗药黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类部位对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞MH7A增殖及炎症因子分泌的影响 被引量：22

5

作者 王霞 杨健 +5 位作者 宋菲 董莉 刘亭 郑林 马雪 李勇军 《中国药房》 CAS 北大核心 2017年第28期3949-3952,共4页

目的:研究苗药黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类部位(CADF)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞MH7A增殖及炎症因子分泌的影响,探讨CADF抗RA的作用机制。方法:将MH7A细胞分为空白组、TNF-α模型组、甲氨蝶呤组... 目的:研究苗药黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类部位(CADF)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞MH7A增殖及炎症因子分泌的影响,探讨CADF抗RA的作用机制。方法:将MH7A细胞分为空白组、TNF-α模型组、甲氨蝶呤组(阳性对照,20 mg/L)和CADF不同质量浓度组(50、100、200、400 mg/L),除空白组外,其余各组均以50μg/L TNF-α刺激活化MH7A细胞。以TNF-α与相应药物的混合液共同作用24 h后,检测细胞的增殖情况和培养液中一氧化氮(NO)、前列腺素E_2(PGE_2)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的含量。结果:与空白组比较,TNF-α模型组细胞增殖活性显著增强(P<0.01),培养液中NO、PGE2、IL-1β、IL-6含量显著增加(P<0.01);与TNF-α模型组比较,各给药组细胞的增殖均受到显著抑制(P<0.05或P<0.01),培养液中NO、PGE2、IL-1β、IL-6含量均显著减少(P<0.01),且与CADF具有一定的量效关系。结论:CADF可通过抑制TNF-α诱导的MH7A细胞增殖,减少炎症因子NO、PGE2、IL-1β、IL-6的分泌,从而发挥其抗RA的作用。 展开更多

关键词 苗药 黑骨藤 咖啡酰基奎宁酸类部位 人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞mh7a 炎症因子

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宽叶荨麻中化学成分对MH7A细胞增殖和凋亡的影响 被引量：4

6

作者 彭倩 于大永 +3 位作者 史丽颖 冯宝民 唐玲 王永奇 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2013年第3期172-174,共3页

目的:探讨从具有抗类风湿关节炎作用的宽叶荨麻中分离到的9个化学成分对人类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖的影响。方法:分别以从宽叶荨麻中分离得到的9个化学成分(0～400 mg.L-1):RoseosideⅡ(C1),(6S,9R)-3-氧-α-紫罗兰醇-β-D... 目的:探讨从具有抗类风湿关节炎作用的宽叶荨麻中分离到的9个化学成分对人类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖的影响。方法:分别以从宽叶荨麻中分离得到的9个化学成分(0～400 mg.L-1):RoseosideⅡ(C1),(6S,9R)-3-氧-α-紫罗兰醇-β-D-葡萄糖苷(C2),(6R,9R)-3-氧-α-紫罗兰醇-β-D-葡萄糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷(C3),芹菜素-6,8-二-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(C4),木樨草素-7-O-新橙皮糖苷(C5),木樨草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(C6),芦丁(C7),异落叶松脂素-9-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(C8),5α,6β-二羟基-胡萝卜苷(C9)处理MH7A细胞(2.5×104/mL),24 h后采用MTT法检测细胞增殖率,并通过测定DNA片段化检测细胞凋亡率。结果:在被检测的9个化合物中,化合物5α,6β-二羟基-胡萝卜苷显示了较强的抑制MH7A细胞增殖的作用,其IC50值为140 mg.L-1。DNA片段化分析结果表明,其能显著诱导MH7A细胞凋亡。结论:宽叶荨麻中化学成分5α,6β-二羟基-胡萝卜苷能够显著抑制MH7A细胞增殖并能诱导MH7A细胞凋亡。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 宽叶荨麻 化学成分 mh7a细胞

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附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖和miR-155表达的影响 被引量：12

7

作者 覃万莉 徐玉洁 +6 位作者 潘真真 李小翚 王振华 宋健平 徐勤 黄新安 李常青 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第14期29-35,共7页

目的:观察附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖的影响,研究附子汤对miR-155表达的影响并进一步探讨其抗类风湿性关节炎的作用机制。方法:体外培养MH7A细胞,设空白组、附子汤高剂量组(25 g·L^(-1))、低剂量组(12.5 g·... 目的:观察附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖的影响,研究附子汤对miR-155表达的影响并进一步探讨其抗类风湿性关节炎的作用机制。方法:体外培养MH7A细胞,设空白组、附子汤高剂量组(25 g·L^(-1))、低剂量组(12.5 g·L^(-1))和硫酸羟氯喹阳性药组(0.00625 g·L^(-1)),采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)试剂盒法检测细胞增殖,流式细胞术检测MH7A细胞周期的改变;应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测药物处理后miR-155及其下游基因含SH2结构域的肌醇5-磷酸酶-1(SHIP-1)、蛋白激酶B3(Akt3)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、Akt3和mTOR的蛋白表达。结果:附子汤体外在质量浓度6.25 g·L^(-1)以上时,能明显抑制MH7A增殖,且呈明显的量-效关系和时-效关系。与空白组比较,附子汤高、低剂量组G2/M期细胞比例均明显增加(P<0.05),高剂量组G0/G1期细胞比例明显降低(P<0.05),其细胞周期的阻滞作用呈明显的量效关系。与空白组比较,附子汤高、低剂量组miR-155的表达均明显下调(P<0.05);附子汤高剂量组SHIP1 mRNA表达明显上调、Akt3 mRNA表达明显下调(P<0.05),附子汤高、低剂量组mTOR mRNA表达均明显下调(P<0.05)。与空白组比较,附子汤高、低剂量组的PI3K、Akt3和mTOR的蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论:附子汤对MH7A细胞增殖具有显著的抑制作用,作用机制与下调miR-155的表达,从而促进SHIP-1的表达,抑制其下游PI3K/Akt3/mTOR信号通路的基因表达有关。 展开更多

关键词 附子汤 类风湿性关节炎 mh7a细胞 MIR-155 肌醇5-磷酸酶-1(SHIP-1) 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B3(Akt3)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路

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甘草查尔酮A通过调控MAPK信号通路抑制MH7A细胞增殖并诱导凋亡 被引量：15

8

作者 郭婉怡 袁蓓 +1 位作者 汪倩 苏晓慧 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第24期68-74,共7页

目的:探讨甘草查尔酮A(licochalcone A,LCA)对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)增殖和凋亡以及相关炎性因子的影响,并揭示丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与LCA调控MH7A细胞增殖和凋亡的关系。方法:培养MH7A细胞,将细胞分为空白... 目的:探讨甘草查尔酮A(licochalcone A,LCA)对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)增殖和凋亡以及相关炎性因子的影响,并揭示丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与LCA调控MH7A细胞增殖和凋亡的关系。方法:培养MH7A细胞,将细胞分为空白组,LCA各浓度给药组(10,20,40μmol·L^-1);采用噻唑蓝(MTT)比色法和DAPI染色检测MH7A细胞增殖情况;PI染色和流式细胞仪检测MH7A细胞周期,Annexin V/PI染色后流式细胞仪检测MH7A细胞凋亡情况。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测LCA对炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LCA对MAPK信号通路关键蛋白的影响,同时应用细胞外信号调节激酶(ERK)特异性抑制剂PD98059处理,观察磷酸化(p)-ERK和IL-1β蛋白表达水平。结果:与空白组比较,LCA能剂量依赖性抑制MH7A细胞增殖,活细胞数量显著减少(P<0.01),而进入细胞周期早期凋亡的细胞数量显著增多(P<0.01)。此外,与肿瘤坏死因子-α(TNF-α,10μg·L^-1)组比较,LCA能剂量依赖性逆转TNF-α导致的炎症因子IL-1βmRNA表达的升高(P<0.01)。与空白组比较,LCA能剂量依赖性的促进MAPK信号通路中关键蛋白ERK,氨基末端激酶(JNK)和p38的磷酸化表达(P<0.01)。与PD98059组比较,ERK的剂量依赖性磷酸化作用被抵消,同时LCA 10,20μmol·L^-1对IL-1β的抑制作用消失。结论:LCA能抑制MH7A细胞增殖和诱导其凋亡,可能与其促进MAPK通路相关蛋白磷酸化的表达继而抑制炎症因子的表达有关。 展开更多

关键词 甘草查尔酮A 类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(mh7a) 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路 细胞凋亡 白细胞介素(IL)-1β

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刺山柑正丁醇部位对MH7A细胞增殖、凋亡的作用 被引量：4

9

作者 金渭荃 包晓玮 +2 位作者 朱东亮 白栋文 刘晓禄 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期578-581,共4页

目的研究刺山柑正丁醇部位对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系MH7A细胞增殖和凋亡的影响,以及对MMP-1、MMP-9、MMP-13、p-JNK及p-STAT3蛋白表达的影响。方法采用CCK-8法检测MH7A细胞增殖抑制率,使用流式细胞术检测MH7A凋亡,采用Western blo... 目的研究刺山柑正丁醇部位对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系MH7A细胞增殖和凋亡的影响,以及对MMP-1、MMP-9、MMP-13、p-JNK及p-STAT3蛋白表达的影响。方法采用CCK-8法检测MH7A细胞增殖抑制率,使用流式细胞术检测MH7A凋亡,采用Western blot法检测MMP-1、MMP-9、MMP-13、p-JNK及p-STAT3蛋白表达。结果刺山柑正丁醇部位能抑制MH7A细胞增殖率(P<0.01),并能诱导细胞凋亡(P<0.01),降低MMP-1、MMP-9、MMP-13、p-JNK及p-STAT3蛋白表达。结论刺山柑正丁醇部位可抑制MH7A细胞增殖,诱导细胞凋亡,可能通过p-JNK和p-STAT3信号通路进行调节。 展开更多

关键词 刺山柑 mh7a 增殖 凋亡 JNK STAT3

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枫杨提取物对MH7A细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究 被引量：6

10

作者 武璐璐 王翔鹏 +3 位作者 张全书 朱健 袁林 向阳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期653-658,共6页

目的:观察枫杨不同提取物对人类风湿关节炎成纤维滑膜细胞MH7A增殖和凋亡的影响,初步探讨其诱导MH7A细胞凋亡的可能机制。方法:制备枫杨乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇提取物后分别作用于MH7A细胞,检测其增殖情况。取增殖抑制作... 目的:观察枫杨不同提取物对人类风湿关节炎成纤维滑膜细胞MH7A增殖和凋亡的影响,初步探讨其诱导MH7A细胞凋亡的可能机制。方法:制备枫杨乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇提取物后分别作用于MH7A细胞,检测其增殖情况。取增殖抑制作用最好的提取物作用于MH7A细胞,检测其凋亡情况,Caspase-3和Caspase-9的酶活性; Cyt-C、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bcl-2和BAX的蛋白表达,P53、BAX、BAK、Bcl-2和Bcl-xL的mRNA表达。结果:与枫杨石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇提取物相比,枫杨乙醇提取物可明显抑制MH7A细胞增殖,诱导其凋亡,使细胞内Caspase-3和Caspase-9的酶活性升高,Cyt-C、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和BAX的蛋白表达升高,Bcl-2的蛋白表达下降; P53、BAX、BAK的mRNA表达升高,Bcl-2、Bcl-xL的mRNA表达降低。结论:枫杨乙醇提取物可明显抑制MH7A细胞增殖,诱导其凋亡,并调控Cyt-C、P53、Caspase家族、Bcl-2家族相关蛋白的表达。因此推测该提取物可能通过影响线粒体凋亡途径诱导人类风湿关节炎成纤维滑膜细胞MH7A的凋亡,抑制其增殖。 展开更多

关键词 湖北枫杨 类风湿关节炎 mh7a细胞 凋亡 增殖

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基于MH7A细胞迁移、凋亡及NLRP3炎性小体探讨金铁锁总皂苷治疗类风湿关节炎的作用机制 被引量：7

11

作者 何志明 程建军 +3 位作者 钱子刚 韦迎春 崔萌 陈海丰 《中药材》 CAS 北大核心 2021年第9期2173-2178,共6页

目的:探讨金铁锁总皂苷对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)增殖、迁移、凋亡及相关炎性因子的影响及其机制。方法:培养MH7A细胞,给予不同浓度的金铁锁总皂苷(0.05、0.10、0.15μg/mL)干预后,采用Annexin V/PI染色后流式细胞仪检测MH7... 目的:探讨金铁锁总皂苷对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)增殖、迁移、凋亡及相关炎性因子的影响及其机制。方法:培养MH7A细胞,给予不同浓度的金铁锁总皂苷(0.05、0.10、0.15μg/mL)干预后,采用Annexin V/PI染色后流式细胞仪检测MH7A细胞凋亡;细胞划痕法测定MH7A细胞迁移;接着将细胞分为空白对照组、模型组、mcc950(1μmol/L)阳性对照组及金铁锁总皂苷各浓度(0.05、0.10、0.15μg/mL)组,采用MTS比色法检测MH7A细胞增殖;蛋白免疫印迹法、免疫荧光、q-PCR检测各组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA及蛋白表达;ELISA试剂盒及q-PCR检测炎性因子IL-1β、IL-18、IL-6炎性因子的释放及mRNA表达。结果:与空白对照组比较,金铁锁总皂苷呈浓度依赖性显著升高MH7A细胞凋亡率(P<0.01);中、高浓度金铁锁能显著抑制MH7A细胞迁移(P<0.01)。与模型组比较,不同浓度金铁锁总皂苷能显著降低TNF-α导致的炎症因子IL-1β、IL-18、IL-6的释放及其mRNA表达,并能抑制TNF-α诱导的MH7A细胞内NLRP3、ASC mRNA及蛋白表达(P<0.01)。结论:金铁锁总皂苷能抑制NLRP3炎性小体激活,其机制可能与抑制MH7A细胞的增殖、迁移和诱导其凋亡有关。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 mh7a细胞 金铁锁总皂苷 凋亡 炎症

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化合物Q-1对TNF-α诱导的MH7A细胞增殖的抑制作用及其意义 被引量：3

12

作者 伍沙沙 王延 +2 位作者 徐婷 刘晓龙 钱海兵 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1554-1558,共5页

目的基于NF-κB和MAPK信号通路,探讨化合物Q-1对MH7A的作用及机制。方法选用人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞株(MH7A)作为实验对象,采用CCK-8法测定化合物Q-1对MH7A细胞增殖的影响;Transwell法检测化合物Q-1对MH7A细胞迁移能力的影响;T... 目的基于NF-κB和MAPK信号通路,探讨化合物Q-1对MH7A的作用及机制。方法选用人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞株(MH7A)作为实验对象,采用CCK-8法测定化合物Q-1对MH7A细胞增殖的影响;Transwell法检测化合物Q-1对MH7A细胞迁移能力的影响;TNF-α溶液作为诱导剂,ELISA测定细胞上清液中TNF-α、IL-6的含量;Western Blot测定细胞中p65、p-p65、IκBα、p-IκBα、p38、p-p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白的表达。结果(1)不同浓度化合物Q-1明显抑制MH7A细胞活力;(2)化合物Q-1明显抑制MH7A细胞的迁移;(3)化合物Q-1明显降低细胞上清液中的TNF-α、IL-6含量;(4)化合物Q-1可明显下调TNF-α引起的p65、p-p65、p-IκBα、p38、p-p38蛋白表达水平,对IκBα、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白无明显影响。结论化合物Q-1可明显抑制MH7A细胞增殖,减少细胞上清液中炎症因子TNF-α、IL-6的表达,下调由TNF-α引起的p65、p-p65、IκBα、p-IκBα、p38、p-p38蛋白表达,可能的作用机制与NF-κB和p38MAPK信号通路有关。 展开更多

关键词 化合物Q-1 mh7a 类风湿关节炎 TNF-Α NF-ΚB信号通路 MAPK信号通路

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采用慢病毒载体干扰TRAF2表达的MH7A细胞稳转株的构建及意义

13

作者 陈露颖 蒋励萍 +5 位作者 王伟康 左书俊 蒯佳婕 马旸 韩陈陈 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第2期193-199,共7页

目的 用慢病毒载体构建干扰肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)表达的类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞株MH7A细胞稳转株,研究TNF-α-TRAF2信号在MH7A异常增殖的作用。方法 根据人TRAF2的基因序列和shRNA序列设计原则,设计并合成3对TRAF2-sh... 目的 用慢病毒载体构建干扰肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)表达的类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞株MH7A细胞稳转株,研究TNF-α-TRAF2信号在MH7A异常增殖的作用。方法 根据人TRAF2的基因序列和shRNA序列设计原则,设计并合成3对TRAF2-shRNA干扰序列,通过PCR对引物进行退火,通过双酶切PLKO.1-puro获得线性载体,将线性化载体与退火后引物通过Solution I连接,连接产物导入感受态细胞,涂板,挑取阳性菌落进行测序。构建3种不同的PLKO.1-TRAF2-shRNA慢病毒重组质粒,借助慢病毒包装质粒对对数生长期的HEK 293T细胞进行慢病毒包装,收集病毒液感染MH7A细胞,同时使用嘌呤霉素对TRAF2低表达的MH7A稳转株进行筛选。使用CCK-8法、Western blot、qPCR检测MH7A中肿瘤坏死因子TNF-α诱导TRAF2低表达的MH7A增殖功能及下游信号TRAF2、P65蛋白表达和mRNA水平。结果 成功构建了PLKO.1-TRAF2-shRNA(1)、PLKO.1-TRAF2-shRNA(2)和PLKO.1-TRAF2-shRNA(3)慢病毒载体质粒和对照组慢病毒载体质粒PLKO.1-puro,将3个TRAF2-shRNA慢病毒载体质粒和对照组慢病毒载体质粒PLKO.1-puro分别与慢病毒包装质粒导入HEK 293T获得病毒液,将病毒液感染MH7A细胞后,经嘌呤霉素(2.00μg/ml)筛选,2 d得到MH7A稳转株;qPCR和Western blot结果显示,PLKO.1-TRAF2-shRNA(1) MH7A细胞稳转株中TRAF2 mRNA和蛋白的表达较阴性对照组明显下降;CCK-8和Western blot结果表明,MH7A中TRAF2敲低后,TNF-α诱导的TRAF2低表达的MH7A细胞增殖和P65的磷酸化水平明显下降。结论 成功构建了PLKO.1-TRAF2-shRNA(1) MH7A细胞稳转株,研究TNF-α-TRAF2信号活化介导RA滑膜细胞异常增殖中的作用。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 mh7a 肿瘤坏死因子受体相关因子2 慢病毒载体

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梣酮对LPS介导MH7A细胞增殖和迁移的影响 被引量：2

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作者 左瑞庭 王西彬 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1806-1810,共5页

目的研究梣酮对LPS介导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系MH7A增殖和迁移的影响。方法 MH7A细胞随机分为对照组、LPS组及梣酮低、中、高剂量组(10、20、50μmol/L),各梣酮组预给药后LPS诱导MH7A细胞24 h。然后,CCK-8法检测细胞活性,试剂盒... 目的研究梣酮对LPS介导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系MH7A增殖和迁移的影响。方法 MH7A细胞随机分为对照组、LPS组及梣酮低、中、高剂量组(10、20、50μmol/L),各梣酮组预给药后LPS诱导MH7A细胞24 h。然后,CCK-8法检测细胞活性,试剂盒法检测LDH释放,BrdU掺入法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移,Western blot法检测MMP1、MMP9、MMP13、p-JNK、p-STAT3蛋白表达。结果梣酮对MH7A细胞活性、LDH释放无明显影响(P>0.05)。与LPS组比较,梣酮组显著抑制细胞增殖、侵袭和迁移(P<0.05),显著降低MMP1、MMP9、MMP13、p-JNK、p-STAT3蛋白表达(P<0.05),并呈剂量依赖性。结论梣酮可抑制LPS介导MH7A细胞增殖和迁移,可能是通过调控JNK、STAT3信号通路实现的。 展开更多

关键词 梣酮 mh7a细胞 增殖 迁移

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桔梗皂苷D对MH7A细胞增殖和凋亡的影响及机制 被引量：2

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作者 王菊 李龙 曾家顺 《贵州医科大学学报》 CAS 2020年第10期1149-1155,共7页

目的:观察桔梗皂苷D(PD)对人类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞MH7A增殖和凋亡的影响及机制。方法:体外培养MH7A细胞,用不同浓度(5、10、15、20、25及30 mg/L)PD分别作用于MH7A细胞24 h,同时设置不含PDD的空白对照组,采用CCK-8实验检测P... 目的:观察桔梗皂苷D(PD)对人类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞MH7A增殖和凋亡的影响及机制。方法:体外培养MH7A细胞,用不同浓度(5、10、15、20、25及30 mg/L)PD分别作用于MH7A细胞24 h,同时设置不含PDD的空白对照组,采用CCK-8实验检测PD对MH7A细胞增殖的影响;取有效增殖抑制的最低药物浓度作用于MH7A细胞,用Annexin V-FITC/PI双染色法流式细胞术检测PD对MH7A细胞凋亡的影响、PI单染法流式细胞术检测PD对MH7A细胞周期分布的影响、Western blotting法检测PD对MH7A细胞中Bax、Bcl-2和Caspase-9蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,PD在5 mg/L浓度以上时,随着药物浓度的增加,MH7A细胞增殖率均降低、细胞凋亡率增加、G0/G1期细胞比例增加,差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,PD药物各浓度组Caspase-9蛋白和Bax蛋白相对表达量升高,以10及15 mg/L组升高显著,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);PD药物各浓度组细胞内Bcl-2蛋白相对表达量均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:PD能抑制MH7A细胞增殖和诱导其凋亡,推测其作用机制可能是将MH7A细胞阻滞在G0/G1期和调控线粒体凋亡途径相关蛋白的表达。 展开更多

关键词 关节炎 类风湿 细胞增殖 细胞凋亡 桔梗皂苷D mh7a细胞

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红刺老苞醇提物对MH7A细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制 被引量：1

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作者 郝润璇 刘道忠 +3 位作者 唐江漾 冯佳 夏燕 袁林 《湖北民族大学学报（医学版）》 2024年第2期7-10,共4页

目的通过PI3K/Akt信号通路,探讨红刺老苞对类风湿关节炎的作用机制。方法在滑膜细胞(MH7A)中添加LPS建立类风湿关节炎(RA)模型,通过CCK-8法筛选药物浓度;实验分为空白对照组、模型组、红刺老苞高剂量组、红刺老苞中剂量组、红刺老苞低... 目的通过PI3K/Akt信号通路,探讨红刺老苞对类风湿关节炎的作用机制。方法在滑膜细胞(MH7A)中添加LPS建立类风湿关节炎(RA)模型,通过CCK-8法筛选药物浓度;实验分为空白对照组、模型组、红刺老苞高剂量组、红刺老苞中剂量组、红刺老苞低剂量组;取不同浓度的红刺老苞醇提物作用于MH7A细胞;用流式细胞术检测细胞凋亡的情况;ELISA法检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β的水平;Western-blot法检测PI3K、p-AKT、Becline1蛋白的表达。结果经不同浓度红刺老苞醇提物(750、650、550μg/mL)处理后,细胞凋亡率随药物浓度上升而增加,凋亡率分别为(3.07±0.03)%、(5.27+0.30)%、(8.04+0.02)%;与对照组相比,模型组细胞上清中IL-1β、TNF-α含量明显升高(P<0.05),而红刺老苞高、中、低剂量组IL-1β、TNF-α水平较模型组明显降低(P<0.05);模型组PI3K、P-AKT蛋白表达较对照组相比明显升高(P<0.05),Becline1表达量降低(P<0.05);与模型组比较,红刺老苞高、中、低剂量组PI3K、p-AKT蛋白表达明显降低(P<0.05),Becline1表达量升高(P<0.05)。结论红刺老苞醇提物能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进自噬,抑制RA滑膜细胞增殖及炎性因子的表达。 展开更多

关键词 刺老苞醇提物 mh7a细胞 PI3K/AKT/MTOR

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网络药理学、分子对接结合实验验证探讨飞蛾藤治疗类风湿关节炎的作用机制 被引量：2

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作者 叶晨昱 李宁 +4 位作者 陈音孜 曲彤 胡静 陈志永 任慧 《药学学报》 北大核心 2025年第1期117-129,共13页

通过网络药理学和分子对接技术,结合体外实验验证探究飞蛾藤(Porana racemosa Roxb.,PRA)治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的作用机制,为飞蛾藤治疗RA提供现代药理学依据。通过Swiss Target Prediction数据库预测已解析飞蛾... 通过网络药理学和分子对接技术,结合体外实验验证探究飞蛾藤(Porana racemosa Roxb.,PRA)治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的作用机制,为飞蛾藤治疗RA提供现代药理学依据。通过Swiss Target Prediction数据库预测已解析飞蛾藤中化学成分的潜在靶点;采用OMIM、GeneCards、TTD、Disgenet数据库检索RA的疾病靶点;利用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白相互作用(PPI)网络和药材-成分-靶点网络;使用DAVID数据库进行GO(gene ontology)功能富集和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路分析,并利用分子对接软件对飞蛾藤潜在活性成分与核心靶点进行对接;最后选取MH7A细胞进行细胞活力、划痕愈合、关键基因mRNA表达水平分析等实验,以探索飞蛾藤及其潜在活性成分对MH7A细胞增殖、迁移、凋亡的影响。该研究共筛选出飞蛾藤潜在活性成分靶点628个,RA靶点1890个,交集靶点235个,筛选出飞蛾藤治疗RA的主要潜在活性成分是咖啡酸乙酯、N-对反式香豆酰酪胺、亚麻酸甲酯等,核心靶点涉及肿瘤坏死因子(TNF)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)等,富集分析确定了1200个GO功能富集条目和166条信号通路;分子对接结果显示,N-对反式香豆酰酪胺和咖啡酸乙酯与TNF、MMP9、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(CASP3)、PTGS2、B淋巴细胞瘤2(BCL2)均具有较好的结合活性;体外实验显示,飞蛾藤、咖啡酸乙酯和N-对反式香豆酰酪胺均可抑制MH7A细胞增殖、迁移和侵袭能力,上调凋亡相关基因CASP3 mRNA的表达,下调MMP9、PTGS2、BCL2 mRNA的表达,还能下调磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)mRNA和PI3K、p-AKT蛋白的表达。该研究初步揭示了飞蛾藤治疗RA可能与抑制MH7A细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,调控PI3K/AKT信号通路等有关。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 飞蛾藤 网络药理学 分子对接 凋亡 mh7a细胞

原文传递

蕲蛇抗类风湿性关节炎多肽粗提物制备及其体外药效研究

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作者 吴宇婷 田芳 +3 位作者 马志国 张英 曹晖 吴孟华 《中成药》 北大核心 2025年第6期1966-1971,共6页

目的 制备蕲蛇抗类风湿性关节炎多肽粗提物,并考察其体外药效。方法 筛选蛋白酶种类、用量和酶解时间。生物酶解法制备粗提物,测定肽分子量分布并分析其序列,预测其活性,检测粗提物对人类风湿性关节炎成纤维细胞(MH7A)活性及IL-1β、IL-... 目的 制备蕲蛇抗类风湿性关节炎多肽粗提物,并考察其体外药效。方法 筛选蛋白酶种类、用量和酶解时间。生物酶解法制备粗提物,测定肽分子量分布并分析其序列,预测其活性,检测粗提物对人类风湿性关节炎成纤维细胞(MH7A)活性及IL-1β、IL-6 mRNA、蛋白表达的影响。结果 菠萝蛋白酶用量为4%,酶解时间为4 h时,酶解效果最优。多肽分子量分布60%以上小于3 kD。肽段有154条,主要来自原肌球蛋白α-4链样蛋白、骨骼肌、原肌球蛋白β链等,约50%具有较强的抗炎活性,并可能存在ACE抑制、DPP-IV抑制及抗氧化活性。粗提物在0.16、0.32 mg/mL质量浓度下可降低TNF-α诱导的MH7A细胞活性(P<0.01),0.08、0.16、0.32 mg/mL质量浓度下可降低IL-1β、IL-6 mRNA及蛋白表达(P<0.01)。结论 菠萝蛋白酶制备的蕲蛇抗类风湿关节炎多肽粗提物可大幅提高小分子量肽段占比,抑制TNF-α诱导的MH7A细胞增殖,促进细胞凋亡及促炎因子表达,可为该药材临床给药的“减量增效”提供数据支撑。 展开更多

关键词 蕲蛇 多肽粗提物 抗类风湿关节炎活性 生物酶解法 人类风湿性关节炎成纤维细胞(mh7a) IL-1β IL-6 减量增效

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USP7-1N-1抑制类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞过度增殖、炎症及运动

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作者 林小兴 陈添 +2 位作者 何俊杰 洪永伯 杨磊 《南开大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期55-60,共6页

类风湿关节炎(RA)是一种众所周知的系统性自身免疫性疾病,为进一步揭示机制,筛选出关键致病基因和靶点,需多角度开展研究.USP7是一种重要的去泛素化酶,在多种疾病中的作用已逐渐被揭示,但在类风湿关节炎中的具体作用和机制尚不清楚.本... 类风湿关节炎(RA)是一种众所周知的系统性自身免疫性疾病,为进一步揭示机制,筛选出关键致病基因和靶点,需多角度开展研究.USP7是一种重要的去泛素化酶,在多种疾病中的作用已逐渐被揭示,但在类风湿关节炎中的具体作用和机制尚不清楚.本研究旨在探讨USP7-1N-1对RA成纤维细胞样滑膜细胞增殖、炎症、运动的影响及其机制.应用免疫印迹和q PCR检测IL-1β诱导成纤维细胞样滑膜细胞USP7的表达,进一步应用CCK-8、Edu、流式细胞术检测USP7-1N-1对细胞增殖能力的影响;应用ELISA和免疫印迹研究USP7-1N-1对炎症反应的影响;应用Transwell实验揭示USP7-1N-1对细胞迁移与侵袭的影响;并且通过免疫印迹实验揭示USP7-1N-1对NF-κB通路的影响.结果发现,USP7在IL-1β诱导的成纤维细胞样滑膜细胞RA模型中高表达,并且发现USP7-1N-1能抑制MH7A细胞的生长.同时,USP7-1N-1也能抑制MH7A细胞的炎症反应.本研究进一步发现,USP7-1N-1能抑制MH7A细胞的迁移及侵袭.因此,本研究证实USP7-1N-1可通过NF-κB轴抑制成纤维细胞样滑膜细胞的生长与炎症,故而利用其可对RA进行潜在的治疗. 展开更多

关键词 类风湿关节炎 USP7 mh7a 炎症反应 NF-ΚB

原文传递

黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类化合物体外抗类风湿性关节炎机制研究 被引量：31

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作者 王霞 蒋礼 +5 位作者 何燕玲 郑林 刘亭 董莉 马雪 李勇军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1362-1367,共6页

目的探讨黑骨藤中分离得到的8个咖啡酰基奎宁酸类单体化合物抑制人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)增殖的作用,并对其活性较好的2个化合物进行可能的分子机制研究。方法采用50μg·L^(-1) TNF-α活化MH7A细胞。MTS法测定8个... 目的探讨黑骨藤中分离得到的8个咖啡酰基奎宁酸类单体化合物抑制人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)增殖的作用,并对其活性较好的2个化合物进行可能的分子机制研究。方法采用50μg·L^(-1) TNF-α活化MH7A细胞。MTS法测定8个单体化合物对MH7A细胞增殖的影响;ELISA法测定细胞上清液中IL-1β、PGE_2含量;Griess试剂法测定NO的含量;Western blot检测各组细胞中COX-2、iNOS、NF-κB及MAPK通路相关蛋白表达。结果与TNF-α模型组比较,8个单体化合物均可不同程度抑制MH7A细胞的增殖和细胞因子的分泌(P<0.05,P<0.01),在200μmol·L^(-1)浓度下,3-O-咖啡酰基奎宁酸(3-CQA)作用最明显,其次是1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸(1,3-DCQA);Western blot结果表明,3-CQA和1,3-DCQA均能明显降低COX-2、iNOS、NF-κB p65、p-IκB的蛋白水平,以及MAPK信号通路相关蛋白ERK、JNK、p38的磷酸化程度(P<0.01)。结论黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类化合物具有较好的抗类风湿性关节炎活性,其作用机制可能与抑制MAPK信号通路的激活,降低NF-κB活性,抑制下游炎症因子表达,进而减轻炎症反应有关。 展开更多

关键词 黑骨藤 类风湿性关节炎 mh7a细胞 咖啡酰基奎宁酸 细胞因子 NF-κB/MAPK信号通路 机制

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