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基于MALDI-MS和UHPLC-MS/MS的微量活细胞系蛋白质快速分析 被引量:1
1
作者 闫凌 《质谱学报》 北大核心 2025年第2期133-139,I0001,共8页
本研究结合基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)和超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)技术,系统地探索了功能化微型酶反应器在微量活细胞系蛋白质组快速分析中的应用,并对其分析效能进行全面评估。通过将功能化酶纳反应器封装于枪头... 本研究结合基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)和超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)技术,系统地探索了功能化微型酶反应器在微量活细胞系蛋白质组快速分析中的应用,并对其分析效能进行全面评估。通过将功能化酶纳反应器封装于枪头内,结合盐酸胍和双酶系统(胰酶与DNase I),实现了细胞裂解、蛋白质提取和酶解的一体化操作,显著提高了蛋白质提取和酶解效率。结果表明,该方法在处理微量细胞样品(1×10^(4)个细胞)时,蛋白质提取效率显著优于传统的过滤器辅助样品前处理(FASP)流程。活细胞样品在酶纳反应器中的反应时间仅需6 min,整个分析流程不超过1 h,展示了功能化酶纳反应器在高通量在线前处理方面的巨大潜力。本研究不仅为微量活细胞系蛋白质组的快速高通量分析提供了技术平台,还通过MALDI-MS与UHPLC-MS/MS整合策略实现了微量蛋白质组学前处理方法的全面评估与应用。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸电离质谱(maldi-ms) 超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS) 功能化微型酶反应器 蛋白质组学 微量活细胞 前处理
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糖的基质辅助激光解吸/电离质谱(MALDI-MS)研究 被引量:7
2
作者 郝春雁 马秀俐 +5 位作者 刘志强 季怡萍 刘淑莹 刘长城 孙允秀 刘举正 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1998年第7期1090-1094,共5页
通过糖类化合物3种常用基质MALDI-MS分析效果的比较以及寡糖和多糖正、负离子MALDI-MS谱的对比,找到了适合糖分析的基质2,5-DHB,探讨了糖类化合物激光解吸/电离条件下形成离子的过程,指出了Na+、K+离... 通过糖类化合物3种常用基质MALDI-MS分析效果的比较以及寡糖和多糖正、负离子MALDI-MS谱的对比,找到了适合糖分析的基质2,5-DHB,探讨了糖类化合物激光解吸/电离条件下形成离子的过程,指出了Na+、K+离子在寡糖分子量测定中的重要作用,借助柱层析分离手段,成功地测出了分子量大于10000的葡聚糖的分子量. 展开更多
关键词 maldi-ms 寡糖 多糖 分子量测定 葡聚糖 糖类
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基于MALDI-MS技术的新基质大黄酸在代谢组学研究中的应用 被引量:2
3
作者 叶慧 王赟 +5 位作者 王琳 徐小为 吴梦秋 曹国秀 梁艳 王广基 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期727-733,共7页
基质辅助激光解析电离质谱(MALDI-MS)是一项快速、高通量检测未知物质的新兴技术。然而,该技术对代谢物的检测分析往往被复杂的基质峰所干扰,限制了其在代谢组学领域的应用。研究发现,大黄酸能作为一种MALDI新基质用于阳离子模式下代谢... 基质辅助激光解析电离质谱(MALDI-MS)是一项快速、高通量检测未知物质的新兴技术。然而,该技术对代谢物的检测分析往往被复杂的基质峰所干扰,限制了其在代谢组学领域的应用。研究发现,大黄酸能作为一种MALDI新基质用于阳离子模式下代谢物的检测。首先运用大黄酸分析了生理学浓度下多种强、弱碱性代谢物的标准品,结果表明与传统基质比较,大黄酸能获得基本无基质峰干扰的质谱图。进一步将大黄酸运用于生物样本的分析,选取小鼠内容物作为模型样本,显示该基质可用于复杂生物样本的代谢组分析。最后考察大黄酸的MALDI质谱成像能力,表明该基质可成功运用于小鼠肠段切片的代谢组原位成像。研究表明,大黄酸作为一种新型MALDI基质,能可靠、高效地完成基于MALDI-MS的代谢物检测及原位成像分析,对MALDI-MS技术广泛运用于代谢组学研究具有推动作用。 展开更多
关键词 maldi-ms 质谱成像 基质 大黄酸 代谢组学
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提高MALDI-MS测量溶菌酶分子量灵敏度的研究 被引量:1
4
作者 石磊 王勇 +1 位作者 刘志强 刘淑莹 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第12期2247-2249,共3页
Sodium dodecyl sulfate(SDS) is a powerful solubilizing detergent which is often used during the separation of highly complex protein mixtures by one- or two-dimensional(2D) gel electrophoresis. Matrix-assisted laser d... Sodium dodecyl sulfate(SDS) is a powerful solubilizing detergent which is often used during the separation of highly complex protein mixtures by one- or two-dimensional(2D) gel electrophoresis. Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry(MALDI-MS) is a widely used technique for mass spectrometric analysis of some protein molecules compared to other techniques. But the presence of SDS or some salts usually leads to signal deterioration when using MALDI-MS. A method for using nitrocellulose membrane as the solid-phase carrier combined with n-octyl-β-D-glucopyranoside in the matrix highly enhances the sensitivity of the molecular mass determination of lysozyme. This technique has the advantage that the signal-to-noise of the molecular weight profile is improved compared with the mass spectrum and the profile is relatively easy to interpret. 展开更多
关键词 maldi-ms 测量 分子量 灵敏度 基质辅助激光解吸电离质谱 溶菌酶 硝酸纤维素膜
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MALDI-MS反应性基质选择性检测啤酒中低聚糖的创新实践
5
作者 姜丽艳 闫国栋 +1 位作者 玲玲 国新华 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2021年第6期67-71,共5页
糖类是啤酒中含量最丰富的营养物质之一,对啤酒泡沫的稳定性起着十分重要的作用。通过大学生创新训练项目开发并优化了MALDI-MS反应性基质用于选择性检测啤酒中低聚糖的新方法,具有响应信号强、特异性检测等优点。利用贴近生活的实验研... 糖类是啤酒中含量最丰富的营养物质之一,对啤酒泡沫的稳定性起着十分重要的作用。通过大学生创新训练项目开发并优化了MALDI-MS反应性基质用于选择性检测啤酒中低聚糖的新方法,具有响应信号强、特异性检测等优点。利用贴近生活的实验研究,激发了学生的学习热情和实验兴趣,提高了学生的创新能力和科研素养。 展开更多
关键词 maldi-ms 反应性基质 低聚糖 实践教学
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基于MALDI-MS的峰标签策略:一种能筛选并区分蛋白质天冬氨酸和谷氨酸体外甲基化修饰的方法
6
作者 陈国强 李智立 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期347-347,共1页
蛋白质赖氨酸和精氨酸甲基化修饰在蛋白质相互作用、信号转导以及胞内定位等方面具有重要的生物学功能。除了赖氨酸和精氨酸,天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)。
关键词 甲基化 天冬氨酸 谷氨酸 甲醇 蛋白酶体 maldi-ms
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MALDI-MS在各领域的应用概述 被引量:1
7
作者 秦园 陈祝军 《中国设备工程》 2018年第3期210-212,共3页
MALDI-MS是一种新型的检测技术手段,具有快速、准确、易于自动化和耗费少等优点。MALDI-MS相较于传统检测手段,样品不需要复杂的前处理;可对样品中的特定成份进行空间定位检测;对微生物鉴定能进行图像观测和实时数据分析,同时数据能批... MALDI-MS是一种新型的检测技术手段,具有快速、准确、易于自动化和耗费少等优点。MALDI-MS相较于传统检测手段,样品不需要复杂的前处理;可对样品中的特定成份进行空间定位检测;对微生物鉴定能进行图像观测和实时数据分析,同时数据能批量化处理和编辑等。这些技术优势使得MALDI-MS在食品、微生物检测和医学研究方面发挥着越来越重要的作用。MALDI-MS作为一种新技术仍有许多尚未解决的问题和有待提升的技术短板。本文就MALDI-MS在各领域的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 质谱 maldi-ms 食品 微生物 医学
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Direct MALDI-MS Analysis of Proteins Isolated by Liquid-phase Isoelectric Focusing Electrophoresis 被引量:1
8
作者 LüLei ZHANGXuan +3 位作者 WANGZhi SUNYa-dong LIUZhi-qiang LIUShu-ying 《Chemical Research in Chinese Universities》 SCIE CAS CSCD 2005年第4期436-438,共3页
A liquid-phase isoelectric focusing electrophoresis system(Rotofor) was used as the prefractionation tool for the sample preparation in the MALDI-MS analysis of a protein mixture. Each fraction collected was then dire... A liquid-phase isoelectric focusing electrophoresis system(Rotofor) was used as the prefractionation tool for the sample preparation in the MALDI-MS analysis of a protein mixture. Each fraction collected was then directly subjected to MALDI-TOF-MS analysis. By this approach, we are able to resolve two types of hemoglobins, A and C, which cannot be successfully separated by means of the traditional SDS-PAGE method. 展开更多
关键词 Liquid-phase isoelectric focusing electrophoresis maldi-ms analysis Hemoglobin A and C Cytochrome c
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MALDI-MS:蛋白组学研究的推动力
9
《实验与分析》 2009年第3期49-50,共2页
越来越多的蛋白质需要研究,蛋白组学专家感觉到需要加快速度了,而基质辅助激光解吸质谱(MALDI-MS)因此应运而生。Shimadzu,Thermo Fisher、Bruker Daltonics、Waters公司旗下的MALDI-MS产品,都将加速蛋白组学的研究。
关键词 maldi-ms 蛋白组学 基质辅助激光解吸 FISHER 蛋白质需要
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西洋参多糖PPQI-1~4的分离和表征 被引量:8
10
作者 马秀俐 赵德超 +3 位作者 孙允秀 刘举正 郝春艳 刘树莹 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期165-167,共3页
为研究生物活性西洋参多糖的性质 ,采取热水提取乙醇分级沉淀、葡聚糖凝胶分离等手段从西洋参根中分得 4个纯多糖 (PPQI- 1~ 4)。基质辅助激光解吸电离质谱 (MAL DI- MS)测定分子量 ,乙酰化衍生结合GC分析测定糖组成。甲基化结合 GC- M... 为研究生物活性西洋参多糖的性质 ,采取热水提取乙醇分级沉淀、葡聚糖凝胶分离等手段从西洋参根中分得 4个纯多糖 (PPQI- 1~ 4)。基质辅助激光解吸电离质谱 (MAL DI- MS)测定分子量 ,乙酰化衍生结合GC分析测定糖组成。甲基化结合 GC- MS分析测定糖苷键连接位点。结果表明 ,这 4个多糖化合物都是杂多糖 ,分别由不同比例的阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、糖醛酸组成 ,糖醛酸含量为 30 %~ 6 0 % ,分子量范围 2~ 展开更多
关键词 西洋参 多糖 maldi-ms GC-MS 中药
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基于ICP-MS的蛋白质定量方法 被引量:4
11
作者 郑令娜 王萌 +3 位作者 王华建 李建军 丰伟悦 柴之芳 《化学进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第11期2199-2206,共8页
蛋白质组学已经成为生命科学研究中最为活跃的领域之一。研究蛋白质的生物功能,不但需要高通量地鉴定蛋白质,还需要定量分析动态变化的蛋白质,即定量蛋白质组学研究。蛋白质的定量研究有助于发现新的生物功能,并可以用于疾病的预警和药... 蛋白质组学已经成为生命科学研究中最为活跃的领域之一。研究蛋白质的生物功能,不但需要高通量地鉴定蛋白质,还需要定量分析动态变化的蛋白质,即定量蛋白质组学研究。蛋白质的定量研究有助于发现新的生物功能,并可以用于疾病的预警和药物靶点的发现。现有的定量蛋白质组学研究主要利用同位素标记结合生物质谱(电喷雾电离质谱ESI-MS,基质辅助激光解吸电离质谱MALDI-MS)技术而实现。近年来电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)作为ESI-MS和MALDI-MS的补充,越来越多地应用于蛋白质的定量分析,特别是蛋白质的绝对定量分析。ICP-MS是检测生物分子中痕量元素的理想工具,具有灵敏度高、动态范围广、不易受基体的影响等优点。本文将讨论基于ICP-MS的分析方法及其在蛋白质定量分析和免疫分析中的部分成功应用。 展开更多
关键词 ICP-MS ESI-MS maldi-ms 蛋白质定量 元素标记 免疫分析
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基体辅助激光解吸质谱法(MALDI-MS)在生物化学中的应用 被引量:6
12
作者 赵善楷 钟峰 张晓红 《质谱学报》 EI CAS CSCD 1996年第2期1-7,共7页
本文叙述应用自行研制的激光微探针飞行时间质谱仪及采用近年发展起来的基体辅助激光解吸的新方法对多种已知蛋白质的分子量进行测量,表明此法比一般的常规方法具有速度快(10分钟1个样品)、准确度高(±1%~0.1%)、灵... 本文叙述应用自行研制的激光微探针飞行时间质谱仪及采用近年发展起来的基体辅助激光解吸的新方法对多种已知蛋白质的分子量进行测量,表明此法比一般的常规方法具有速度快(10分钟1个样品)、准确度高(±1%~0.1%)、灵敏度高(10-12~10-15mol)等优点。同时我们结合SDS-PAGE等生化方法,对蛋白质、多肽、伴花生蛋白酶和合成多聚物的分子量进行测定,也取得了令人满意的结果。 展开更多
关键词 质谱法 大分子 生物化学 分子量 maldi-ms
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高效氯氰菊酯对斑马鱼胚胎毒性的研究 被引量:7
13
作者 王健 刘丽丽 +3 位作者 余凯敏 李国超 吴巍 闫艳春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期223-229,共7页
高效氯氰菊酯是一种Ⅱ型拟除虫菊酯类农药,对鱼类及其它水生生物具有高毒,且在其它食物中也可检测到它的残留,高效氯氰菊酯的残留对人类的健康同样具有不容忽视的影响。为了解高效氯氰菊酯对鱼、对人类的毒性机制,选用0.05、0.1、0.2、... 高效氯氰菊酯是一种Ⅱ型拟除虫菊酯类农药,对鱼类及其它水生生物具有高毒,且在其它食物中也可检测到它的残留,高效氯氰菊酯的残留对人类的健康同样具有不容忽视的影响。为了解高效氯氰菊酯对鱼、对人类的毒性机制,选用0.05、0.1、0.2、0.6、1 mg/L五个梯度浓度的高效氯氰菊酯溶液,对斑马鱼胚胎进行毒性处理,在显微镜下观察其对斑马鱼发育形态变化和孵化率等影响。发现高效氯氰菊酯农药对斑马鱼胚胎有严重的致畸效应,这种致畸性呈现剂量依赖性。使用0.1 mol/L浓度的高效氯氰菊酯农药对斑马鱼胚胎进行处理,进行早期胚胎发育的毒性研究。采用荧光差异双向凝胶电泳(2-D DIGE)-质谱相结合的方法,鉴定出11个差异表达蛋白质。这些蛋白质与细胞骨架、应激反应和新陈代谢有关。这些研究结果为进一步研究高效氯氰菊酯对动物的毒性机制提供了基本信息。 展开更多
关键词 斑马鱼 胚胎 β-高效氯氰菊酯 DIGE 质谱
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兔肝金属硫蛋白亚型异构体的高效液相色谱分离与ESI-MS,MALDI-TOF-MS鉴定 被引量:8
14
作者 赵锐 纪建国 +2 位作者 袁洪生 管华诗 茹炳根 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第6期1086-1090,共5页
由于金属硫蛋白 (MT)基因的多态性 ,决定不同亚型的 MT异构体的存在 ,MT亚型异构体的结构是MT功能研究的基础 .通过离子交换柱可将 MT分成 MT-1和 MT-2两个异构体 ,用不同条件的反相高效液相色谱 (RP-HPLC)可将 MT-1和 MT-2分成不同的... 由于金属硫蛋白 (MT)基因的多态性 ,决定不同亚型的 MT异构体的存在 ,MT亚型异构体的结构是MT功能研究的基础 .通过离子交换柱可将 MT分成 MT-1和 MT-2两个异构体 ,用不同条件的反相高效液相色谱 (RP-HPLC)可将 MT-1和 MT-2分成不同的亚型异构体 ,并利用 MALDI-TOF MS和 LC-ESI-MS对比确定了它们的分子量 .结果表明 ,兔肝 MT在不同的 p H条件下分离得到不同分子量的亚型异构体 .在酸性条件下 ,MT-1可分为 2个主要亚型异构体 ,分子量分别为 61 49.0和 62 44.5 ,而 MT-2主要分为 3个亚型异构体 ,分子量分别为 61 49.0 ,62 44.0和 61 2 7.0 . MT-1和 MT-2有 2个亚型异构体分子量相同的异构体存在 .在酸性条件下 ,MT-1的 2个异构体及 MT-2分子量为 61 2 7的亚型异构体可稳定存在 . 展开更多
关键词 高效液相色谱 分离 鉴定 金属硫蛋白 亚型异构体 电喷雾离子化质谱 基质辅助激光解析飞行时间质谱
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质谱技术在临床检验中的研究及应用进展 被引量:1
15
作者 刘桂红 黎蔚波 +2 位作者 林惠霞 冯双喜 张建华 《中国医学装备》 2025年第6期163-169,共7页
质谱技术是临床检验领域的核心技术之一,具有高灵敏度、高特异度及多组分同时分析的优势,在代谢物检测、蛋白质组学分析等方面极具潜力,为复杂疾病的早期诊断与个性化治疗提供新路径。近年来,质谱技术在临床检验领域的研究呈现迅猛发展... 质谱技术是临床检验领域的核心技术之一,具有高灵敏度、高特异度及多组分同时分析的优势,在代谢物检测、蛋白质组学分析等方面极具潜力,为复杂疾病的早期诊断与个性化治疗提供新路径。近年来,质谱技术在临床检验领域的研究呈现迅猛发展态势。本研究系统梳理包括质谱成像(MSI)技术、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术、电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)技术、飞行时间质谱流式细胞(CyTOF)技术以及液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术在内的质谱技术在临床检验中的应用现状与研究进展,聚焦其在疾病诊断、疗效评估及预后判断等方面的实际应用,剖析当前技术面临的瓶颈与问题;基于前沿技术动态,探讨质谱技术与新兴生物信息学、微流控等技术融合的创新方向,以期为推动质谱技术在临床检验中的标准化、智能化发展提供理论依据与实践参考,助力其在临床诊疗中推广应用。 展开更多
关键词 临床检验 质谱成像(MSI)技术 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术 电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)技术 飞行时间质谱流式细胞(CyTOF)技术 液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术
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肝癌转移相关的核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的研究 被引量:5
16
作者 代智 刘银坤 +8 位作者 崔杰峰 冯钜涛 宋海燕 陈洁 孙瑞霞 李娜 申华莉 张予 杨芃原 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第5期442-448,共7页
通过比较研究不同转移潜能肝癌细胞系中核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的差别,筛查与转移相关的重要糖蛋白.用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、双向电泳(2-DE)和凝集素印迹技术联合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分... 通过比较研究不同转移潜能肝癌细胞系中核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的差别,筛查与转移相关的重要糖蛋白.用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、双向电泳(2-DE)和凝集素印迹技术联合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析,建立3种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97L和MHCC97H的核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱.比较研究发现,不同转移潜能肝癌细胞呈现不同的SDS-PAGE/LCA凝集素印迹图谱,MHCC-97H和MHCC-97L在35~45 ku和45~60 ku间出现了Hep3B未见的条带.在核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱中,Hep3B、MHCC97L和MHCC97H分别平均检测到(55±7)个蛋白质点(n=3),(60±6)个蛋白质点(n=3),(61±4)个蛋白质点(n=3);以各自双向电泳图谱为参考胶,Hep3B、MHCC97L和MHCC97H分别与其匹配的平均匹配点数为(25±3)个(n=3),(30±4)个(n=3),(28±3)个(n=3).该图谱中,与Hep3B相比,MHCC97L有13个点未匹配,其中9个点为Hep3B(-)/MHCC97L(+);MHCC97H有9个点未匹配,其中6个点为Hep3B(-)/MHCC97H(+),MALDI-TOF-MS/MS可鉴定出Annexin1、Keratin 8等12种差异蛋白质.这些结果证实了不同转移潜能的肝癌细胞有明显的核心岩藻基化糖蛋白差异性表达.提示肝癌转移可能与这些差异糖蛋白及其核心岩藻糖基化有关. 展开更多
关键词 肝癌细胞 核心岩藻糖蛋白 基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱 扁豆凝集素 糖蛋白质组学
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西洋参多糖PPQI-1~4理化性质的研究 被引量:6
17
作者 马秀俐 郝春艳 +3 位作者 李耀先 孙允秀 刘举正 刘树莹 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第12期946-948,共3页
AIM: To study the characteristics of the four bioactive pure polysaccharides of Panax quiquefolium L. (PPQI 1~4). METHODS: The polysaccharides were extracted with hot water and grade precipitated with ethanol. They w... AIM: To study the characteristics of the four bioactive pure polysaccharides of Panax quiquefolium L. (PPQI 1~4). METHODS: The polysaccharides were extracted with hot water and grade precipitated with ethanol. They were further purified with Sephadex DEAE A50 and Sephadex G200 chromatography. The molecular weights of the polysaccharides were determined with matrix assisted laser desorption/ionization mass spectrometry (MALDI MS). The sugar compositions were analyzed with GC. The linkage positions of the component sugars were determined by methylation and GC MS. RESULTS: The four polysaccharides are all uronic acid containing heteropolysaccharides with the component sugars of arabinose, galactose and glucose in different molar ratios. The uronic acid contents are within 30%~60%. Their molecular weights are in the range of 2×10 4~7×10 4 u. CONCLUSION: The four new bioactive polysaccharides are all uronic acid containing heteropolysaccharides. 展开更多
关键词 西洋参多糖 PPQI-1-4 理化性质
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沙门菌MALDI-TOF-MS标准菌库的建立及应用研究 被引量:15
18
作者 胡骁 林肖惠 +3 位作者 佟巍 张丽 张国辉 赵化冰 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期40-46,共7页
目的利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)构建标准沙门菌株数据库。方法利用MALDI-TOF-MS对21株标准沙门菌进行质谱数据采集,建立标准菌株数据库。相关菌株质谱数据通过菌株在相同培养环境不同培养时间下所得质谱数据... 目的利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)构建标准沙门菌株数据库。方法利用MALDI-TOF-MS对21株标准沙门菌进行质谱数据采集,建立标准菌株数据库。相关菌株质谱数据通过菌株在相同培养环境不同培养时间下所得质谱数据进行优化。通过血清型鉴定方法筛选出200株野生沙门菌,并利用自建数据库和现有数据库对200株野生沙门菌进行MALDI-TOF-MS检测,对自建数据库进行评价。结果 Bruker原有数据库、自建数据库及合并数据库对200株野生沙门菌鉴定,阳性率分别为87.5%、97.0%、97.5%。21株标准沙门菌株数据库按亲缘关系远近可分为3大类。主成分分析发现不同菌种之间质谱数据有一定的差异,个别菌种在不同培养条件下培养,质谱数据变化不明显。结论本研究建立的标准菌库对野生沙门菌的鉴定准确性高,适用于实际检测。研究结果丰富了已有的数据库,同时也为其他细菌菌库的建立提供了很好的借鉴。 展开更多
关键词 沙门菌 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 鉴定 菌库建立
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基于基质辅助激光解吸-电离质谱的磷脂分析和成像的基质体系与制样方法 被引量:2
19
作者 周丽华 陈安珣 +1 位作者 赵肃清 于会娟 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第4期289-301,共13页
由于磷脂在神经传递和生物膜功能方面的重要作用,磷脂分析已成为目前脂质组学研究的热点,而基质辅助激光解吸-电离成像质谱(MALDI-IMS)是磷脂分析和成像的先进技术。针对磷脂特点,优化基质溶液组成并建立合适的基质制样与覆盖方法是最... 由于磷脂在神经传递和生物膜功能方面的重要作用,磷脂分析已成为目前脂质组学研究的热点,而基质辅助激光解吸-电离成像质谱(MALDI-IMS)是磷脂分析和成像的先进技术。针对磷脂特点,优化基质溶液组成并建立合适的基质制样与覆盖方法是最关键的环节。为了建立具有高真空稳定性(稳定存在2h以上)、耐高频率激光辐射、无基质峰干扰、分布均匀且不引起分析物位移、能全面解吸-电离不同结构与浓度的磷脂,并准确表征其空间分布情况的基质体系,不少研究者进行了大量的研究。本工作从基质类型变化出发,综述了近10年来MALDI-IMS用于生物组织磷脂分析和成像的基质体系及制样方法,并对其发展前景进行了展望。 展开更多
关键词 磷脂 基质辅助激光解吸-电离质谱(maldi-ms) 基质 成像 制样
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PCR-核酸飞行时间质谱系统检测新型冠状病毒方法的建立及应用研究 被引量:14
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作者 王俊 张栋 +4 位作者 陈晴晴 俞俊岭 杨奕 乔亮 孙永 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2020年第35期4430-4435,4442,共7页
背景新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在全球暴发,实验室检测结果是疾病诊断的重要依据,检测方法的灵敏度和特异度是影响实验结果的关键因素,现实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)核酸检测方法是COVID-19确诊的通用方法,但其检测灵敏度有方法局限... 背景新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在全球暴发,实验室检测结果是疾病诊断的重要依据,检测方法的灵敏度和特异度是影响实验结果的关键因素,现实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)核酸检测方法是COVID-19确诊的通用方法,但其检测灵敏度有方法局限性,依赖标本病毒含量。通过对PCR-核酸飞行时间质谱检测方法的优化,从而提高对低新型冠状病毒(SARS-CoV-2)含量病例检测的灵敏度,可为现有方法做有效补充。目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)原理,在Clin-ToFⅡ飞行时间质谱系统上,建立PCR-核酸飞行时间质谱(PCR-TOF MS)系统检测SARS-CoV-2的方法,并评估其实际应用价值。方法2020年2—3月于上海市临床检验中心室间质评阳性样本40份、阴性样本7份,国家卫生健康委员会室间质评阳性样本41份、阴性样本33份,本实验室购买阳性质粒及稀释样本32份,健康人样本28份,空白对照超纯水5份,共186份样本作为建立PCR-TOF MS系统数据。于2020年1—2月收集安徽省内临床送检到安徽省疾病预防控制中心的疑似COVID-19患者上呼吸道样本80份(咽拭子样本55份、痰液样本25份)及健康人群样本20份(均为咽拭子样本)作为评估PCR-TOF MS系统效果的数据。建立PCR-TOF MS系统试验体系步骤,包括PCR扩增、虾碱性磷酸酶(SAP)消化、单碱基延伸和质谱检测;并基于阳性质粒优化模版量,根据186份样本检测质谱峰的信噪比(SNP)确定该方法在SARS-CoV-2检测时的判读标准。对80份疑似SARS-CoV-2样本和20份健康人群样本进行检测分析,并与实时荧光定量PCR法进行对比。结果通过对PCR-TOF MS模板条件的优化,模版量6μl时,扩增产物可获得典型的质谱峰图。建立的PCR-TOF MS反应体系可以对SARS-CoV-2核酸的开放读码框1ab(ORF1ab)基因和核壳蛋白(N)基因进行有效扩增检测。本研究PCR-TOF MS方法对临床疑似病例样本的检出率为90.00%,高于实时荧光定量PCR法的75.00%,同时,结果显示,实时荧光定量PCR法检出中含有25.00%的可疑结果,而PCR-TOF MS则无可疑结果。对于痰液和咽拭子两种样本的检出率,PCR-TOF MS法分别为100.00%和85.45%,高于荧光定量PCR法的64.00%和43.64%。阴性样本两种方法均未检出。结论通过PCR技术与飞行时间质谱技术的结合,使得检测SARS-CoV-2目标片段指数级扩大,从而提高样本的检测灵敏度。MALDI-TOF MS技术通过对离子分子量的检测分析,具有较高的准确性和特异性,同时证实了痰液样本优于咽拭子样本。该方法可作为实时荧光定量PCR法的补充和协同,在一定程度上有利于弥补假阴性的问题,从而降低临床漏诊率,提高检测效率,为疫情的研判缩短时间。 展开更多
关键词 新型冠状病毒肺炎 新型冠状病毒 PCR-飞行质谱系统 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 核酸检测
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