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光学蛋白芯片技术在噬菌体M13KO7检测中的应用
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作者 齐财 冯静 +3 位作者 王战会 孟永宏 阎锡蕴 靳刚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期856-860,共5页
将亲和素共价固定在表面改性后的硅片上,通过亲和素与生物素相互作用将生物素标记的噬菌体抗体GP3固定在亲和素膜层表面,当含有M13KO7噬菌体的样品经过抗体表面时,通过噬菌体与抗体之间的相互作用噬菌体就会被抗体捕获,生物学信号可以... 将亲和素共价固定在表面改性后的硅片上,通过亲和素与生物素相互作用将生物素标记的噬菌体抗体GP3固定在亲和素膜层表面,当含有M13KO7噬菌体的样品经过抗体表面时,通过噬菌体与抗体之间的相互作用噬菌体就会被抗体捕获,生物学信号可以通过芯片上的膜层厚度变化表现出来,这种膜层厚度变化可以被椭偏生物传感器技术识别。结果表明,GP3抗体在芯片表面形成了饱和的抗体膜层,厚度为6.9nm;M13KO7噬菌体与芯片上固定的抗体会发生特异性相互作用,噬菌体被抗体捕获后形成的复合物膜层厚度为17.5nm,并且随着噬菌体浓度升高膜层厚度增加,检测含有M13KO7噬菌体的样品灵敏度为109pfu/mL。与其它研究病毒与抗体相互作用方法相比光学蛋白芯片技术具有简便快捷、无需标记待检样品和结果直观等优点,为研究病毒与其抗体相互作用以及疾病早期临床诊断提供了一个新的方法。 展开更多
关键词 蛋白质芯片 生物传感器 噬菌体 GP3抗体
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构建无背景的选择性感染噬菌体
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作者 陈颖 李海 吴文言 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期484-486,共3页
目的构建一个选择性感染噬菌体(selectively infective phage,SIP)载体。方法删去M13KO7gIII基因的第2个甘氨酸丰富区,并在此位置插入3个内切酶识别位点,用于外源基因的插入,构建成重组噬菌体基因组BP-M13KO7。将重组噬菌体BP-M13KO7的... 目的构建一个选择性感染噬菌体(selectively infective phage,SIP)载体。方法删去M13KO7gIII基因的第2个甘氨酸丰富区,并在此位置插入3个内切酶识别位点,用于外源基因的插入,构建成重组噬菌体基因组BP-M13KO7。将重组噬菌体BP-M13KO7的培养液上清液感染XL1-Blue,检测其感染背景。结果重组噬菌体BP-M13KO7培养液上清液不具有感染性,完全消除了背景。结论通过将M13KO7gIII基因的第2个甘氨酸丰富区置换成3个内切酶识别位点,构建成的重组噬菌体无感染性背景。 展开更多
关键词 选择性感染噬菌体 m13ko7 甘氨酸丰富区
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检测B细胞成熟抗原的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR方法建立 被引量:1
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作者 康子茜 王加利 +3 位作者 和似琦 崔鑫铭 石冰洁 王建勋 《山东医药》 CAS 2022年第21期43-47,共5页
目的建立检测B细胞成熟抗原(BCMA)的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR(PDRT-IPCR)方法。方法采用无缝克隆技术将抗体ANTI-BCMA片段连接入噬菌体M13KO7中,构建重组噬菌体质粒M13KO7-ANTI-BCMA,保存于E.coli DH5α感受态细胞中,通过... 目的建立检测B细胞成熟抗原(BCMA)的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR(PDRT-IPCR)方法。方法采用无缝克隆技术将抗体ANTI-BCMA片段连接入噬菌体M13KO7中,构建重组噬菌体质粒M13KO7-ANTI-BCMA,保存于E.coli DH5α感受态细胞中,通过PEG/NaCl溶液低温沉降后获得重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA。采用Western Blotting法鉴定重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA是否展示抗BCMA单链抗体。以不同浓度的BCMA包被96孔高吸附酶标板,加入重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA,热裂解后,以裂解噬菌体的DNA作为扩增模板,进行实时荧光定量PCR,观察不同浓度BCMA的实时荧光定量PCR扩增曲线。运用OriginPro2021软件进行四参数Logistic拟合曲线,根据相关系数R^(2)确定线性范围,计算最低检测限。以重组噬菌体M13KO7-ANTI-CD19和噬菌体M13KO7为对照,验证PDRT-IPCR方法检测BCMA的特异性。结果抗BCMA单链抗体成功展示在重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA表面。随着BCMA包被浓度的降低,对应扩增曲线的CT值逐渐变大,PDRT-IPCR检测BCMA的线性范围为0.1 ng/mL~1000 ng/mL,R^(2)为0.9993,最低检测限为0.077 ng/mL。重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA与BCMA的结合是特异性的。结论本研究建立了检测BCMA的PDRT-IPCR方法,该检测方法具有检测限灵敏、线性范围宽、特异性高等特点。 展开更多
关键词 B细胞成熟抗原 噬菌体展示 实时荧光定量免疫PCR 噬菌体m13ko7 单链抗体 多发性骨髓瘤
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A Co-expression System Based on Phage and Phagemid to Select Cognate Antibody-antigen Pairs in vivo
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作者 胡学军 Zhang Zhichao +2 位作者 Yuan Xiaodong Bao Yongming An Lijia 《High Technology Letters》 EI CAS 2002年第2期5-9,共5页
A modified selectively infective phage (SIP) is developed to facilitate the selection of interacting antibody antigen pairs from a large single chain antibody (scFv) library in vivo. The system is constructed with a m... A modified selectively infective phage (SIP) is developed to facilitate the selection of interacting antibody antigen pairs from a large single chain antibody (scFv) library in vivo. The system is constructed with a modified helper phage M13KO7 and phagemid pCANTAB 5 E. The antigen fused to the C terminal of N1 N2 domain and the scFv to the N terminal of CT domain of the gIIIp of filamentous phage are encoded on the phage and phagemid vectors respectively. The phages produced by co transformants restore infectivity via interaction between antigen and antibody fusions in the cell periplasm. In a model system, the scFv fragment of the anti hemagglutinin 17/9 antibody and its corresponding antigen are detected in the presence of a 10 5 fold excess of a non interacting control pairs, which demonstrates this system to be very sensitive and facile to screen a large single chain antibody library. 展开更多
关键词 co expression m13ko7 selectively infective phage single chain Fv antibody interacting antibody antigen pairs
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