期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到138篇文章
< 1 2 … 7 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
长链非编码RNA在非综合征型唇腭裂中表达的研究
1
作者 韩雅丽 黄永清 《兰州大学学报(医学版)》 2025年第4期32-39,共8页
目的探讨非综合征型唇腭裂的长链非编码RNA(lncRNA)表达谱。方法收集3例宁夏回族自治区非综合征型唇腭裂患者和3例健康者的外周静脉血各5 mL,进行lncRNA差异性表达的芯片检测。通过数据分析,筛选出在非综合征型唇腭裂患者和正常对照组... 目的探讨非综合征型唇腭裂的长链非编码RNA(lncRNA)表达谱。方法收集3例宁夏回族自治区非综合征型唇腭裂患者和3例健康者的外周静脉血各5 mL,进行lncRNA差异性表达的芯片检测。通过数据分析,筛选出在非综合征型唇腭裂患者和正常对照组中的差异性表达lncRNA,根据生物信息学从中筛选出与非综合征型唇腭裂相关性程度较高的lncRNA:uc021thc.2、TCONS_00008144、uc001ysg.1、XR_108307.2、uc002sti.1。通过实时荧光定量PCR对筛选出的lncRNA在非综合征型唇腭裂患者和对照组的外周血以及组织中进一步验证其表达水平。结果基因芯片数据结果显示非综合征型唇腭裂患者外周血液中,lncRNA发生了差异性表达,差异倍率最高者可达9.5倍;选取的5个目的lncRNA经实时荧光定量PCR验证得出其在非综合征型唇腭裂外周血中表达水平明显高于对照组,除XR_108307.2在非综合征型唇腭裂患者与对照组组织中的表达水平无明显差异外,其余目的lncRNA在非综合征型唇腭裂组的裂隙缘组织中表达均上调。结论非综合征型唇腭裂患者外周血及裂隙缘组织与正常对照组相比,lncRNA表达谱发生了较大的变化,这些lncRNA可能在非综合征型唇腭裂发生和发展中发挥重要作用。 展开更多
关键词 非综合征型唇腭裂 长链非编码RNA 芯片检测 基因表达 实时荧光定量PCR
暂未订购
施肥模式对烟稻轮作土壤亚硝酸盐还原基因nirS和nirK丰度的影响
2
作者 苏先楚 张玉树 +4 位作者 郑祥洲 朱君康 王安琪 叶桂萍 林永新 《亚热带资源与环境学报》 2025年第3期89-96,共8页
为探究不同施肥模式对亚硝酸盐还原基因nirS和nirK丰度的影响,以福建省三明市将乐县古镛镇张公村烟稻轮作体系中的烟草季土壤为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术测定nirS和nirK的基因丰度。试验共设置6种施肥处理:CK(不施肥)、CF(传统... 为探究不同施肥模式对亚硝酸盐还原基因nirS和nirK丰度的影响,以福建省三明市将乐县古镛镇张公村烟稻轮作体系中的烟草季土壤为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术测定nirS和nirK的基因丰度。试验共设置6种施肥处理:CK(不施肥)、CF(传统施肥)、YH(优化施肥)、ZN(增氮施肥)、ZP(增磷施肥)和YJ(优化施肥+秸秆还田)。结果表明:与CK相比,不同施肥模式显著降低土壤pH并增加有效磷含量。土壤nirS基因丰度(5.13×10^(8)~8.26×10^(8)copies·g^(-1))显著高于nirK基因丰度(0.93×10^(8)~1.54×10^(8)copies·g^(-1))。与CK相比,CF、ZN和YJ处理显著降低nirS基因丰度,而CF、YH和ZP处理显著增加nirK基因丰度。皮尔森相关性分析表明,nirS基因丰度与pH显著正相关,nirK基因丰度与有效磷含量显著正相关。随机森林模型分析进一步指出,土壤有效磷含量是影响nirS和nirK基因丰度的关键因素。综上,不同施肥模式对烟草土壤中nirS和nirK基因丰度具有显著影响,其中土壤有效磷含量是主要调控因素,而pH对nirS基因丰度的作用亦不容忽视。 展开更多
关键词 烟稻轮作 长期施肥 反硝化微生物 定量PCR
在线阅读 下载PDF
PCR效率振荡与金纳米粒子浓度的光量子机理
3
作者 方欢欢 陈永聪 《上海大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期646-656,共11页
纳米材料在聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术中的广泛应用为改进生物医学领域的检测方法开辟了新途径.已有实验揭示了PCR效率与pM区金纳米粒子浓度间的振荡行为,其产生或与带电胶体粒子间的长程库仑作用和纳米颗粒电... 纳米材料在聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术中的广泛应用为改进生物医学领域的检测方法开辟了新途径.已有实验揭示了PCR效率与pM区金纳米粒子浓度间的振荡行为,其产生或与带电胶体粒子间的长程库仑作用和纳米颗粒电子态的量子尺寸效应相关联.通过蒙特卡洛模拟可以发现,溶液中金纳米粒子的径向分布函数随着电荷的增加逐步呈现出峰值特征,从而引发光子在溶液中瑞利散射的相干行为,影响PCR反应过程中释放光子的再利用效率.研究结果表明,振荡周期与下游反应光子的波长吻合,同时其能量与金纳米粒子费米能级附近的能级宽度相匹配.而金纳米粒子可以吸收并储存于其内部的电子态,通过再释放促进PCR上游反应进程,并通过电子的玻尔兹曼分布来弥补所需能量的不足部分.该研究有望推动PCR特有的精确探测手段在量子生物科技领域的应用. 展开更多
关键词 金纳米粒子 聚合酶链式反应 长程库仑作用 瑞利相干散射 量子尺寸效应
在线阅读 下载PDF
牛催乳素基因组及其cDNA全长序列的分子克隆和分析 被引量：30
4
作者 曹新 王强 +3 位作者 颜景斌 阳飞昆 黄淑帧 曾溢滔 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第9期768-773,共6页
通过LongPCR等技术首次克隆得到全长 9388bp的牛催乳素 (bPRL)基因组序列 (GenBank登录号AF4 2 6 315 ) ,其中包括bPRL基因全部 5个外显子和 4个内含子 ,5′端 85 4bp的上游调控区以及 3′端 6 9bp的UTR。AF4 2 6 315基因编码的蛋白质在... 通过LongPCR等技术首次克隆得到全长 9388bp的牛催乳素 (bPRL)基因组序列 (GenBank登录号AF4 2 6 315 ) ,其中包括bPRL基因全部 5个外显子和 4个内含子 ,5′端 85 4bp的上游调控区以及 3′端 6 9bp的UTR。AF4 2 6 315基因编码的蛋白质在GenBank中的序号为AAL2 80 75 ,由 2 2 9个氨基酸残基组成 ,1～ 30位氨基酸残基为信号肽序列 ,成熟的多肽含有 199个氨基酸残基。将bPRL基因组DNA真核表达载体转染COS 7细胞后通过RT PCR得到长度为80 4bp的bPRLcDNA序列 ,该序列涵盖了bPRL基因的全部ORF区 ,证明本研究所获得的bPRL基因组DNA具有转录的生物学功能。Blast搜索结果显示 ,GenBank数据库中收集有多条bPRL基因的mRNA和EST序列 ,各序列间存在多个SNP位点 ,主要分布于下游编码区和 3′端的UTR ,这些位点均未改变相应的氨基酸残基的性质 ,此外 。 展开更多
关键词 分子克隆 全长序列 长距离PCR 序列分析 牛催乳素基因组 CDNA
在线阅读 下载PDF
应用长PCR扩增蝗虫线粒体全基因组 被引量：19
5
作者 刘念 胡婧 黄原 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期61-65,共5页
介绍了用两对长PCR引物扩增蝗虫(Acridoidea)线粒体全基因组的方法。从NCBI的核酸数据库下载得到36种已测昆虫线粒体全基因组,选取cytochromeb(Cytb)c、ytochrome oxidase subunitⅡ(COⅡ)、cytochrome oxidase subunitⅠ(COⅠ)基因的... 介绍了用两对长PCR引物扩增蝗虫(Acridoidea)线粒体全基因组的方法。从NCBI的核酸数据库下载得到36种已测昆虫线粒体全基因组,选取cytochromeb(Cytb)c、ytochrome oxidase subunitⅡ(COⅡ)、cytochrome oxidase subunitⅠ(COⅠ)基因的保守区域设计两对引物。其中引物LP03和LP04从COⅠ向Cytb扩增;引物LPCytb和LPCOⅡ从Cytb向COⅡ扩增,两对引物扩增的片段之间有大约1 kb的重叠。应用这两对引物成功扩增出10种蝗虫的线粒体基因组。考虑到在设计引物过程中所选序列在其他昆虫中的保守性,它们应能在大部分昆虫线粒体基因组扩增中发挥作用。 展开更多
关键词 长PCR 引物 蝗虫 线粒体基因组
在线阅读 下载PDF
动物线粒体基因组测序方法的研究进展 被引量：8
6
作者 李天杰 曹延祥 +2 位作者 赵红翠 于洋 乔杰 《天津医药》 CAS 2016年第6期796-800,共5页
线粒体是具有独特DNA分子和完整遗传信息传递与表达系统的一类细胞器,参与能量代谢、信号转导、细胞凋亡等许多生命活动。线粒体DNA突变与线粒体疾病的发生密切相关,广泛应用于分子生物学、遗传学、法医学鉴定等各个方面。因此,线粒体... 线粒体是具有独特DNA分子和完整遗传信息传递与表达系统的一类细胞器,参与能量代谢、信号转导、细胞凋亡等许多生命活动。线粒体DNA突变与线粒体疾病的发生密切相关,广泛应用于分子生物学、遗传学、法医学鉴定等各个方面。因此,线粒体基因组测序对于其结构功能的研究有重要价值。本文综述了线粒体基因组测序方法的研究进展,重点是第一代基因测序技术、聚合酶链反应(PCR)技术、第二代基因测序技术,以及滚环扩增技术和线粒体间接测序,并对每种方法的优缺点进行了总结,归纳了线粒体假基因对线粒体基因组分析过程中的干扰和处理策略。 展开更多
关键词 基因组 线粒体 序列分析 DNA 基因扩增 第二代测序 线粒体假基因 长PCR
暂未订购
LA-PCR快速克隆传染性法氏囊病病毒基因组A节段全长cDNA方法的建立 被引量：4
7
作者 李建荣 宋厚辉 +4 位作者 于涟 黄耀伟 谢荣辉 周继勇 郑筱祥 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期438-441,共4页
从浙江省某鸡场暴发疑似传染性法氏囊病 (IBD)的法氏囊病料中分离到 1株致死率高达 70 %的强毒株 (IBDV-ZJ2 0 0 0 )。通过筛选 ,采用效果最理想的蛋白酶 K法从法氏囊中提取病毒基因组 RNA,经 L i Cl纯化后 ,优化各种反应参数和条件 ,... 从浙江省某鸡场暴发疑似传染性法氏囊病 (IBD)的法氏囊病料中分离到 1株致死率高达 70 %的强毒株 (IBDV-ZJ2 0 0 0 )。通过筛选 ,采用效果最理想的蛋白酶 K法从法氏囊中提取病毒基因组 RNA,经 L i Cl纯化后 ,优化各种反应参数和条件 ,建立了 L ong- accurate PCR(L A- PCR)一步直接扩增 IBDV A节段全长 c DNA的方法 ,得到一约 3.2 6 kb的片段。L A- PCR法能快速从病鸡法氏囊和细胞适应毒中扩增 A节段全长 c DNA,为研究各 IBDV毒株 A节段的结构和功能打下了基础。 展开更多
关键词 家畜病毒学 LA-PCR快速克隆 传染性法氏囊病 病毒 基因组 A节段 CDNA
在线阅读 下载PDF
Trametessp.AH28-2漆酶A的诱导合成及其基因5′-端调控区的克隆与分析 被引量：6
8
作者 洪宇植 肖亚中 +4 位作者 房伟 张书祥 查向东 李剑凤 周宏敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期547-552,共6页
Trametessp.AH28_2漆酶同工酶的合成需要铜离子的存在,较高浓度的Cu2+有利于漆酶合成。在以葡萄糖为碳源补加0·5mmol/LCu2+的培养基中生长时,发酵液漆酶活性为44·3u/L,同时补加4·0mmol/L邻甲苯胺时,漆酶酶活提高到71... Trametessp.AH28_2漆酶同工酶的合成需要铜离子的存在,较高浓度的Cu2+有利于漆酶合成。在以葡萄糖为碳源补加0·5mmol/LCu2+的培养基中生长时,发酵液漆酶活性为44·3u/L,同时补加4·0mmol/L邻甲苯胺时,漆酶酶活提高到71·0u/L;而在补加Cu2+和邻甲苯胺的纤维二糖培养基中,酶活上升至2584u/L,为葡萄糖培养基的36·4倍。邻甲苯胺和铜离子诱导产生的漆酶同工酶组分,均为漆酶A(LacA)。竞争性RT_PCR分析表明,漆酶A基因(lacA)转录本的累积伴随有发酵液漆酶活性的增加,邻甲苯胺对lacA的调控发生在转录水平。lacA结构基因长2110bp,含有10个内含子;lacA的cDNA序列为1560bp,编码520aa的漆酶蛋白,其氨基酸序列与其它真菌漆酶具有较高的相似性。采用改进的反向PCR技术,扩增得到的lacA5′_端调控区长1881bp,分析表明,该区域上分布有1个TATA框、7个CAAT框和多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括5个MRE元件、9个CreA结合位点、4个XRE元件、2个STRE元件和7个氮因子调控位点等。这些序列位点的存在部分地对应了菌株摇瓶发酵条件下lacA的表达规律。 展开更多
关键词 真菌漆酶 定量RT-PCR 长距离反向PCR 顺式作用元件
在线阅读 下载PDF
用长距PCR法构建恶性疟原虫cDNA表达文库 被引量：10
9
作者 傅作申 程远国 +7 位作者 张玉静 阮承迈 单成启 古稀波 陈知航 侯禹男 陈泽建 李英 《热带医学杂志》 CAS 2002年第3期225-229,共5页
目的　构建恶性疟原虫cDNA表达文库。方法　用Trizol试剂盒提取总RNA ,以经修饰的SMART寡聚核苷酸引物 CDSⅢ引物直接用总RNA选择性地反转录成单链cDNA ,再用长距PCR(LD)方法选择性地扩增出双链cDNA ,经蛋白酶K消化和酶切后 ,用玻璃奶... 目的　构建恶性疟原虫cDNA表达文库。方法　用Trizol试剂盒提取总RNA ,以经修饰的SMART寡聚核苷酸引物 CDSⅢ引物直接用总RNA选择性地反转录成单链cDNA ,再用长距PCR(LD)方法选择性地扩增出双链cDNA ,经蛋白酶K消化和酶切后 ,用玻璃奶试剂盒回收 2 0 0bp以上DNA片断 ,经与载体λTriplEX2连接和蛋白抽提物体外包装后 ,构建成cDNA文库并对文库进行了初步的鉴定。结果　构建了高滴度 ,高重组率的恶性疟原虫cDNA表达文库。结论　所构建的疟原虫cDNA文库适合进一步筛选抗疟原虫药物结合蛋白基因。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 长距PCR CDNA表达文库 玻璃奶试剂
暂未订购
长链PCR技术评价^(60)Co-γ射线灭活病毒的研究 被引量：5
10
作者 肖云贵 张艳宇 +5 位作者 陈明 赵晓明 马平 周锡鹏 吕丽萍 许金波 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2006年第5期368-371,共4页
目的探讨用长链PCR技术评价60Co-γ射线辐照灭活伪狂犬病毒(pseudorabies virusPRV),后残余病毒感染性的可行性。方法针对PRV糖蛋白gD基因前后的保守区设计预计产物长短不一的5对引物,用PCR扩增经不同剂量60Co-γ射线照射后的PRV核酸,... 目的探讨用长链PCR技术评价60Co-γ射线辐照灭活伪狂犬病毒(pseudorabies virusPRV),后残余病毒感染性的可行性。方法针对PRV糖蛋白gD基因前后的保守区设计预计产物长短不一的5对引物,用PCR扩增经不同剂量60Co-γ射线照射后的PRV核酸,并同时以细胞感染法做平行对照。结果60Co-γ射线辐射对PRV核酸的破坏有剂量依赖性,随着60Co-γ射线剂量的增加,PRV核酸被破坏程度增加,剂量≥20kGy时完全被灭活。5条不同长度PCR扩增产物中,只有长片段3.9kb的检出与细胞培养结果一致。结论γ射线对PRV核酸的损伤程度随γ射线剂量增加而增大;用长链PCR(3.9kb)来评价经60Co-γ射线辐照灭活病毒后残余病毒的感染性是可行的。 展开更多
关键词 Γ射线 病毒灭活 长链PCR感染性
在线阅读 下载PDF
鲢中华鳋线粒体基因组的基因组成及特征分析
11
作者 彭国祥 高谦 +3 位作者 宋英 赵琴平 罗宇良 聂品 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期177-183,共7页
研究旨在测定隶属桡足亚纲(Copepoda)杯口水蚤目(Poicilostom atoida)的寄生甲壳动物鲢中华鳋(Sinergasilus polycolpus)线粒体DNA(mtDNA)序列,分析其结构特征,为节肢动物系统进化研究积累资料。利用简并引物扩增鲢中华鳋Cytb和COI基因... 研究旨在测定隶属桡足亚纲(Copepoda)杯口水蚤目(Poicilostom atoida)的寄生甲壳动物鲢中华鳋(Sinergasilus polycolpus)线粒体DNA(mtDNA)序列,分析其结构特征,为节肢动物系统进化研究积累资料。利用简并引物扩增鲢中华鳋Cytb和COI基因片断,据此设计特异性引物Long-PCR扩增鲢中华鳋mtDNA序列,拼接后得到12917bp的序列(GenBank登录号为EU621723)。这段序列A、T、C、G碱基含量分别为35.0%、35.8%、14.0%和15.2%,GC-Skew和AT-Skew值分别为0.041和-0.011。通过序列同源性和结构分析,鉴定了35个基因,包括13个蛋白编码基因、21个tRNA基因和1个12SrRNA基因,推测未能扩增到的片段包含16S rRNA、tRNAArg和tRNAThr基因以及控制区序列。tRNA基因长度在54—63bp之间,均可折叠成典型的三叶草结构,但TψC臂长度变化较大,其中有三个缺少TψC臂。35个基因中,4个蛋白质编码基因和7个tRNA基因位于N链,其余的位于J链。基因间重叠有12处,重叠碱基量达159bp。进一步研究桡足类及相关类群线粒体基因组的遗传特征将有助于揭示和阐明桡足类系统发育关系。 展开更多
关键词 鲢中华鳋 桡足类 线粒体基因组 long-pcr扩增
在线阅读 下载PDF
长PCR技术及其在动物学研究中的应用 被引量：7
12
作者 叶维萍 黄原 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期105-109,共5页
长PCR(longPCR)技术自 1 994年发明以来 ,在生命科学发展中发挥了巨大的作用。长PCR技术与常规PCR有较大的区别。本文从长PCR技术的由来、长PCR技术对模板、引物和聚合酶的特殊要求及长PCR技术反应条件等方面进行了较全面的介绍。最后... 长PCR(longPCR)技术自 1 994年发明以来 ,在生命科学发展中发挥了巨大的作用。长PCR技术与常规PCR有较大的区别。本文从长PCR技术的由来、长PCR技术对模板、引物和聚合酶的特殊要求及长PCR技术反应条件等方面进行了较全面的介绍。最后介绍了近期发展的LR IPCR(longrange inversePCR ,长反向PCR)、内切酶介导性长PCR (endonuclease mediatedlongPCR)、longRT PCR以及LDD PCR。目前此技术在动物学研究中的应用主要在基因组测序和线粒体基因组研究、病理诊断、基因差异表达、病原微生物的研究、遗传多态性分析等领域。 展开更多
关键词 长PCR(long PCR) 双聚合酶系统 辅助溶剂 基因组测序 动物学
在线阅读 下载PDF
氯灭活水中脊髓灰质炎病毒机制的研究 被引量：4
13
作者 赵祖国 喻云梅 +2 位作者 金敏 王新为 李君文 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期491-494,共4页
目的探讨氯对脊髓灰质炎病毒核酸和衣壳蛋白的破坏在灭活病毒中的作用,并对病毒基因组受损区域进行定位,阐明氯灭活脊髓灰质炎病毒的机制。方法以不同剂量(0.1、0.5、1.0、1.5和2.0mg/L)的有效氯对脊髓灰质炎病毒作用不同时间(0、15、30... 目的探讨氯对脊髓灰质炎病毒核酸和衣壳蛋白的破坏在灭活病毒中的作用,并对病毒基因组受损区域进行定位,阐明氯灭活脊髓灰质炎病毒的机制。方法以不同剂量(0.1、0.5、1.0、1.5和2.0mg/L)的有效氯对脊髓灰质炎病毒作用不同时间(0、15、30、45和60min),采用大片断逐步步移PCR(long-overlapping PCR)分析氯对病毒全基因组的损伤,以ELISA技术分析氯对病毒衣壳蛋白的破坏,以细胞培养检测病毒感染性。结果脊髓灰质炎病毒各部分对氯的抵抗力强弱存在如下关系:病毒衣壳>基因组蛋白编码区>基因组5′端非编码区(noncoding region,NCR)>基因组3′端NCR>poly A尾;脊髓灰质炎病毒的polyA尾和3'端NCR破坏可造成病毒的感染性下降,但不能完全灭活病毒;5′端NCR的破坏与病毒感染性的消失一致,损伤区域主要位于富含二级结构的区域。结论氯主要通过破坏脊髓灰质炎病毒核酸而非衣壳蛋白灭活病毒;病毒基因组5′NCR内二级结构区域的破坏对脊髓灰质炎病毒具有致死效应。 展开更多
关键词 水 消毒 脊髓灰质炎病毒 氯 大片断逐步步移PCR 非编码区
暂未订购
以长链PCR为基础利用融合PCR扩增乙型脑炎病毒全长cDNA 被引量：2
14
作者 李静 俞永新 +2 位作者 安琪 杨力宏 孔艳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第12期1047-1050,1053,共5页
目的以长链PCR(Long-PCR)技术为基础,应用融合PCR方法扩增乙型脑炎病毒(JEV)全长基因组。方法根据GenBank中收录的JEV全长基因组序列设计引物,分别扩增JEVSA14-14-2株的5′和3′半长分子,在5′端上游引物中引入T7启动子核心序列。利用... 目的以长链PCR(Long-PCR)技术为基础,应用融合PCR方法扩增乙型脑炎病毒(JEV)全长基因组。方法根据GenBank中收录的JEV全长基因组序列设计引物,分别扩增JEVSA14-14-2株的5′和3′半长分子,在5′端上游引物中引入T7启动子核心序列。利用细胞培养增殖病毒,提取病毒RNA,逆转录后采用Long PCR方法得到JEV的5′和3′两个半长分子,在此基础上进行融合PCR,得到JEV全长cDNA分子,克隆入pGEMT-easy载体,酶切鉴定并测序。结果扩增出均6000bp的JEV的5′和3′两个半长分子及约11000bp的全长cDNA片段,其二级结构丰富的非编码区未发生缺失。JEV全长cDNA分子与GenBank中收录的相关毒株的的核苷酸序列同源性最高达99%,其氨基酸序列同源性最高达96.3%。其E蛋白基因与野毒株和减毒株进行比较,核苷酸序列同源性高达98%～99%,氨基酸序列也未出现较大差异。结论已获得了乙型脑炎病毒SA14-14-2株全长基因组,为进一步构建感染性克隆奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 全长CDNA 长链PCR 融合PCR
在线阅读 下载PDF
磷虾类线粒体基因组的特征和基因排列比较 被引量：2
15
作者 申欣 王海青 +1 位作者 王敏晓 刘斌 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2012年第2期49-55,共7页
利用长PCR扩增获得太平洋磷虾的线粒体DNA,结合鸟枪法和引物步移法测定太平洋磷虾的线粒体基因组。结果表明,太平洋磷虾线粒体基因组全长为16898bp,在最大非编码区中存在一个串联重复区域(4.7×154bp)。在15个主编码基因中,变异位... 利用长PCR扩增获得太平洋磷虾的线粒体DNA,结合鸟枪法和引物步移法测定太平洋磷虾的线粒体基因组。结果表明,太平洋磷虾线粒体基因组全长为16898bp,在最大非编码区中存在一个串联重复区域(4.7×154bp)。在15个主编码基因中,变异位点数最多的是nad5基因(319～321个),其次为nad4基因(284～285个)和cox1基因(232～233个)。因此,nad5基因和nad4基因可以作为候选的分子标记,用于分析磷虾类不同的物种和群体之间的生物多样性。对比泛甲壳动物的原始排列,太平洋磷虾和南极磷虾线粒体基因组共享3个转运RNA基因(tRNALeu(CUN)、tRNALeu(UUR)和tRNATrp)的易位。与太平洋磷虾线粒体基因组相比,南极磷虾线粒体基因组存在1个转运RNA基因(tRNAAsn)的重复和1个转运RNA基因(tRNAIle)的易位。太平洋磷虾和南极磷虾之间的基因排列并不完全一致,说明在磷虾类内部线粒体基因组的基因排列顺序并不保守。 展开更多
关键词 磷虾 长PCR 线粒体基因组 基因重排 分子标记
在线阅读 下载PDF
登革2型病毒全长基因组的长链RT-PCR法扩增 被引量：6
16
作者 贡树基 赵卫 +3 位作者 曹虹 张文炳 周浩 陈丽丹 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期429-430,共2页
目的采用长链RT-PCR技术扩增登革2型病毒新几内亚株(NGC)全长基因组。方法根据登革2型病毒NGC株基因组全序列设计引物,在上游引物中加入Sp6 RNA聚合酶启动子核心序列,下游引物中加入ClaⅠ内切酶位点。从病毒感染的乳鼠脑中提取RNA,采用... 目的采用长链RT-PCR技术扩增登革2型病毒新几内亚株(NGC)全长基因组。方法根据登革2型病毒NGC株基因组全序列设计引物,在上游引物中加入Sp6 RNA聚合酶启动子核心序列,下游引物中加入ClaⅠ内切酶位点。从病毒感染的乳鼠脑中提取RNA,采用长链RT-PCR技术进行扩增。以获得的PCR产物为模板分别扩增3个NGC株特异的基因片段。结果长链RT-PCR法扩增出约11 kb基因片段,经PCR法证实为登革2型病毒NGC株特异序列。结论通过长链RT-PCR技术,获得了登革2型病毒NGC株全长基因组,为进一步构建感染性克隆打下基础。 展开更多
关键词 登革2型病毒 全长CDNA 长链RT—PCR
暂未订购
牛催乳素基因组全序列的克隆及在真核细胞中的表达 被引量：4
17
作者 曹新 曾溢滔 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期112-115,共4页
目的:构建牛催乳素(bPRL)为目的基因转基因动物-乳腺生物反应器。方法:采用长距离PCR技术,首次从正常牛外周血细胞中克隆到全长9 388 bp的bPRL基因组序列,利用亚克隆的方法将bPRL基因组DNA克隆到真核表达载体pcD-NA3.1(+)上,构建出pcDNA... 目的:构建牛催乳素(bPRL)为目的基因转基因动物-乳腺生物反应器。方法:采用长距离PCR技术,首次从正常牛外周血细胞中克隆到全长9 388 bp的bPRL基因组序列,利用亚克隆的方法将bPRL基因组DNA克隆到真核表达载体pcD-NA3.1(+)上,构建出pcDNA3.1(+)/bPRL的重组表达载体,通过脂质体转染至非洲绿毛猴肾细胞株(COS-7),逆转录-PCR得到长度为804 bp扩增片段。结果:序列测定bPRL基因包括全部5个外显子和4个内含子,5’端854 bp的上游调控区以及3’端69 bp的非翻译区(UTR)。bPRL cDNA包含信号肽在内的全长序列。结论:克隆的bPRL基因组DNA序列在转录水平上具有生物学功能,在体外培养的真核细胞中能够进行正常表达,为进一步建立转基因动物-乳腺生物反应器奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 长距离PCR COS—7细胞 催乳素 真核细胞 克隆
在线阅读 下载PDF
萧氏松茎象线粒体基因组全序列测定与分析 被引量：2
18
作者 李国宏 尚娜 魏建荣 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1306-1314,共9页
象甲是鞘翅目中物种最丰富的类群,目前关于其线粒体基因组全序列的研究还未见报道。本研究利用长距PCR和引物步移法对萧氏松茎象Hylobitelus xiaoi Zhang线粒体基因组全序列进行了测定。结果显示:萧氏松茎象线粒体基因组序列全长16123bp... 象甲是鞘翅目中物种最丰富的类群,目前关于其线粒体基因组全序列的研究还未见报道。本研究利用长距PCR和引物步移法对萧氏松茎象Hylobitelus xiaoi Zhang线粒体基因组全序列进行了测定。结果显示:萧氏松茎象线粒体基因组序列全长16123bp(GenBank登录号为JX847496),共编码37个基因和1个非编码的控制区,基因次序与典型的六足动物线粒体基因排列一致,未发现基因重排现象。在基因组中两个值得注意的发现分别是:1)N链上存在1个额外的trnV-like序列,反密码子为GAC,长度为69bp,其中65bp与J链上的trnD重叠;2)trnSUCN和nad1之间存在1个长度为232bp的基因间隔区。全部13个蛋白质编码基因的起始密码子均为ATN,9个蛋白质编码基因的终止密码子为TAA,其余4个蛋白质编码基因中,nad1和cox2的终止密码子为TAG,nad4和nad5则以不完整的终止密码子T作为终止信号。除trnSAGN外,其余的tRNAs均可形成典型的三叶草结构。而trnSAGN的反密码子由TCT替代GCT,反密码子臂延长形成9bp(中间含1个碱基突起),TΨC臂由正常的5bp变为6bp,DHU臂缩短仅1bp,各个臂之间没有连接碱基。线粒体控制区中包括10处长度不少于5bp的poly-T(最长poly-T长度为14bp)和2处微卫星样重复序列(TA)6和(TA)9。本研究结果为探讨象甲总科在鞘翅目中的系统学地位及其与其他总科间的系统发生关系等问题提供了重要的分子生物学数据。 展开更多
关键词 鞘翅目 象甲总科 萧氏松茎象 线粒体基因组 长距PCR 引物步移法
原文传递
单环刺螠线粒体基因组全序列的获得——长PCR结合鸟枪法测序 被引量：3
19
作者 申欣 吴志刚 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期26-29,35,共5页
由于具有单基因所不可比拟的优势,线粒体基因组现已成为后生动物种群遗传和分子系统发育研究中一个重要的信息来源。本研究选取螠虫动物的代表物种——单环刺螠(Urechis unicinctus),详细阐述了利用长PCR方法扩增其线粒体DNA,获得约15 k... 由于具有单基因所不可比拟的优势,线粒体基因组现已成为后生动物种群遗传和分子系统发育研究中一个重要的信息来源。本研究选取螠虫动物的代表物种——单环刺螠(Urechis unicinctus),详细阐述了利用长PCR方法扩增其线粒体DNA,获得约15 kb的扩增产物,进而构建shotgun文库,最终成功获得单环刺螠线粒体基因组全序列的流程。本实验流程样品需求量少、设备要求低、简便快捷。 展开更多
关键词 线粒体基因组 长PCR 鸟枪法 单环刺螠(Urechis unicinctus)
在线阅读 下载PDF
一种简单快速的cDNA文库构建方法 被引量：2
20
作者 赵艳景 胡亚楠 +4 位作者 王颖 刘睿 叶波平 王旻 吴梧桐 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期268-271,共4页
目的:建立一种以LDPCR(longdistancePCR)为基础的cDNA文库的快速构建方法。方法:以鲨鱼再生肝组织为材料获得总RNA,用偶联有Oligo(dT)的磁珠纯化mRNA后,利用含BamHⅠ酶切位点的Oligo(dT)16引物在逆转录酶MMLV的作用下合成cDNA第一链,进... 目的:建立一种以LDPCR(longdistancePCR)为基础的cDNA文库的快速构建方法。方法:以鲨鱼再生肝组织为材料获得总RNA,用偶联有Oligo(dT)的磁珠纯化mRNA后,利用含BamHⅠ酶切位点的Oligo(dT)16引物在逆转录酶MMLV的作用下合成cDNA第一链,进而利用末端转移酶在合成的cDNA第一链的3′末端引入polydC尾;以含BamHⅠ酶切位点的Oligo(dT)16和含HindⅢ酶切位点的Oligo(dG)10为引物,利用LDPCR合成双链cDNA,双链cDNA经BamHⅠ和HindⅢ双酶切,通过T4DNA连接酶连接到经相同双酶切的pUC19载体后构建成cDNA文库,对文库的容量、重组率以及多样性进行分析。结果:通过本方法构建的cDNA文库容量约为5.84×105个/μgdscDNA,重组率为96.7%;对随机提取的30个克隆质粒的插入序列进行分析,共获得25个不同的cDNA序列,且未见重复序列。结论:本法构建的cDNA质粒文库具有快速、简单的特点,构建的文库质量符合要求,可用于大规模的功能基因分析。 展开更多
关键词 CDNA文库 长距离PCR 文库构建
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 7 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部