目的研究人二倍体细胞KMB17表面与肠道病毒EV71感染相关的受体Toll样受体4(TLR4)、血小板衍生生长因子受体α多肽(pDGFR-αR1)的表达情况,以及细胞周期、细胞代次、EV71感染对这两种受体表达的影响。方法使用荧光标记的特异抗体:PE-TLR4...目的研究人二倍体细胞KMB17表面与肠道病毒EV71感染相关的受体Toll样受体4(TLR4)、血小板衍生生长因子受体α多肽(pDGFR-αR1)的表达情况,以及细胞周期、细胞代次、EV71感染对这两种受体表达的影响。方法使用荧光标记的特异抗体:PE-TLR4、FITC-PDGFR-αR1标记不同细胞代次、处于不同细胞周期时段的KMB17细胞,应用流式细胞仪检测表达这两种受体蛋白的阳性细胞率,以及EV71感染前后,阳性细胞率的变化。使用NCBI primer blast设计TLR4、PDGFR-αR1特异的引物,提取不同细胞代次、细胞周期时段KMB17细胞的RNA,使用real-timePCR检测这些受体蛋白特异mRNA的量。结果 KMB17细胞在使用血清饥饿法进行G0/G1同步化后约22h进入S期,在36h进入G2期,在48h左右完成分裂。PDGFR-αR1、TLR4平均阳性细胞的比例分别为4.47%和11.82%;通过流式细胞仪检测,在G0/G1期,PDGFR-αR1、TLR4的平均阳性细胞比例分别为4%和8.9%;在S期,分别为2.6%和9%;在G2/M期,分别为4.4%和13.5%;EV71病毒感染后,PDGFR-αR1阳性的细胞比率由2.6%上升至4.0%,TLR4阳性细胞比率分别为11.6%和12.8%。结论人二倍体细胞KMB17表面表达肠道病毒相关的受体TLR4和PDGFR-αR1,表达PDGFR-αR1的阳性细胞较TLR4少,不同代次的KMB17细胞这2种受体阳性细胞比例的差异不大,PDGFR-αR1阳性细胞在G0期较多,TLR4阳性细胞在G2/M期较多;EV71病毒感染后,PDGFR-αR1、TLR4阳性细胞的比率变化不大,表明这两种受体分子在KMB17细胞表面表达较稳定,不受EV71感染的影响。展开更多
目的鉴定本所自主建立的人用疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17的正确性。方法用染色体核型检查法和短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因分型法对本所疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17进行鉴定。将疫苗生产用KMB17细胞经秋水仙素处...目的鉴定本所自主建立的人用疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17的正确性。方法用染色体核型检查法和短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因分型法对本所疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17进行鉴定。将疫苗生产用KMB17细胞经秋水仙素处理,积累中期相染色体后,低渗条件下释放出染色体,吉姆萨染料染色制片,镜检,观察染色体结构,精确计数100个细胞的染色体数目;选取人源细胞的20个STR位点对KMB17细胞进行DNA分型,并将获得的STR图谱与ATCC和DSMZ数据库进行比对分析。结果高倍镜下观察可见,样品细胞染色体组结构正常,无缺失和突变;精确计数100个细胞中,染色体数为46的细胞数有84个,无染色单体和染色体断裂细胞,无结构异常细胞,亚二倍体细胞14个,超二倍体细胞数2个。STR基因分型获得的特征性图谱清晰,未出现三单位基因,在ATCC和DSMZ数据库中均未找到与其细胞分型完全匹配的细胞株。结论本所自主建立的疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17的细胞染色体结构和数目均正常,不存在污染和交叉污染,为正确细胞株。展开更多
文摘目的研究人二倍体细胞KMB17表面与肠道病毒EV71感染相关的受体Toll样受体4(TLR4)、血小板衍生生长因子受体α多肽(pDGFR-αR1)的表达情况,以及细胞周期、细胞代次、EV71感染对这两种受体表达的影响。方法使用荧光标记的特异抗体:PE-TLR4、FITC-PDGFR-αR1标记不同细胞代次、处于不同细胞周期时段的KMB17细胞,应用流式细胞仪检测表达这两种受体蛋白的阳性细胞率,以及EV71感染前后,阳性细胞率的变化。使用NCBI primer blast设计TLR4、PDGFR-αR1特异的引物,提取不同细胞代次、细胞周期时段KMB17细胞的RNA,使用real-timePCR检测这些受体蛋白特异mRNA的量。结果 KMB17细胞在使用血清饥饿法进行G0/G1同步化后约22h进入S期,在36h进入G2期,在48h左右完成分裂。PDGFR-αR1、TLR4平均阳性细胞的比例分别为4.47%和11.82%;通过流式细胞仪检测,在G0/G1期,PDGFR-αR1、TLR4的平均阳性细胞比例分别为4%和8.9%;在S期,分别为2.6%和9%;在G2/M期,分别为4.4%和13.5%;EV71病毒感染后,PDGFR-αR1阳性的细胞比率由2.6%上升至4.0%,TLR4阳性细胞比率分别为11.6%和12.8%。结论人二倍体细胞KMB17表面表达肠道病毒相关的受体TLR4和PDGFR-αR1,表达PDGFR-αR1的阳性细胞较TLR4少,不同代次的KMB17细胞这2种受体阳性细胞比例的差异不大,PDGFR-αR1阳性细胞在G0期较多,TLR4阳性细胞在G2/M期较多;EV71病毒感染后,PDGFR-αR1、TLR4阳性细胞的比率变化不大,表明这两种受体分子在KMB17细胞表面表达较稳定,不受EV71感染的影响。
文摘目的鉴定本所自主建立的人用疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17的正确性。方法用染色体核型检查法和短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因分型法对本所疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17进行鉴定。将疫苗生产用KMB17细胞经秋水仙素处理,积累中期相染色体后,低渗条件下释放出染色体,吉姆萨染料染色制片,镜检,观察染色体结构,精确计数100个细胞的染色体数目;选取人源细胞的20个STR位点对KMB17细胞进行DNA分型,并将获得的STR图谱与ATCC和DSMZ数据库进行比对分析。结果高倍镜下观察可见,样品细胞染色体组结构正常,无缺失和突变;精确计数100个细胞中,染色体数为46的细胞数有84个,无染色单体和染色体断裂细胞,无结构异常细胞,亚二倍体细胞14个,超二倍体细胞数2个。STR基因分型获得的特征性图谱清晰,未出现三单位基因,在ATCC和DSMZ数据库中均未找到与其细胞分型完全匹配的细胞株。结论本所自主建立的疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17的细胞染色体结构和数目均正常,不存在污染和交叉污染,为正确细胞株。
