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Ce^(Ⅳ)掺杂g-C_(3)N_(4)增强电化学发光靶向检测invA毒力基因
1
作者 杨旭莲 刘欣玲 +5 位作者 张红 蒋健 彭林 娄语芯 钟嘉 毛俐 《分析测试学报》 北大核心 2026年第1期127-134,共8页
沙门菌是一种高致病食源性病原菌,invA基因是沙门菌的高保守毒力基因,检测invA基因对沙门菌的快速、准确检测具有重要意义。该文研究构建了PANI-g-C_(3)N_(4)-Ce^(Ⅳ)纳米复合材料的阴极电化学发光(ECL)传感基底,利用滚环扩增(RCA)invA... 沙门菌是一种高致病食源性病原菌,invA基因是沙门菌的高保守毒力基因,检测invA基因对沙门菌的快速、准确检测具有重要意义。该文研究构建了PANI-g-C_(3)N_(4)-Ce^(Ⅳ)纳米复合材料的阴极电化学发光(ECL)传感基底,利用滚环扩增(RCA)invA基因互补序列,适配金纳米粒子标记响应探针,增强阴极ECL信号,用于靶向检测invA沙门毒力基因,并对传感器组装过程、实验条件进行优化,评价其分析性能。结果显示,该传感器的检测线性范围为10 amol/L~1μmol/L,线性方程为I=2131+840lgc(r^(2)=0.9943),检出限低至3.3 amol/L,加标回收率为96.6%~111%。该传感器对实际肉类食品沙门菌样本检测结果与基因测序结果一致,在公共卫生现场食品安全检测领域具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 沙门菌 inva基因 电化学发光 PANI-g-C_(3)N_(4)-Ce^(Ⅳ) 滚环扩增(RCA)
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沙门氏菌的invA基因序列分析与分子检测 被引量：60
2
作者 陈金顶 索青利 +1 位作者 廖明 辛朝安 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期868-871,共4页
目的采用聚合酶链反应和DNA序列分析,了解沙门氏菌侵袭蛋白A(invasionproteinA,invA)基因核苷酸序列有何差异,建立沙门氏菌的分子快速检测方法。方法根据沙门氏菌的invA基因核苷酸序列设计一对引物,应用聚合酶链反应技术,分别对3种沙门... 目的采用聚合酶链反应和DNA序列分析,了解沙门氏菌侵袭蛋白A(invasionproteinA,invA)基因核苷酸序列有何差异,建立沙门氏菌的分子快速检测方法。方法根据沙门氏菌的invA基因核苷酸序列设计一对引物,应用聚合酶链反应技术,分别对3种沙门氏菌标准菌株的invA基因及6种非沙门氏菌株进行PCR扩增,并将扩增的片段进行克隆及序列分析。结果3种沙门氏菌标准菌株PCR均扩增出283bp的特异条带,非沙门氏菌皆无特异带扩增;DNA序列分析证实,沙门氏菌的invA基因核苷酸序列比较保守。结论本研究建立的检测沙门氏菌方法具有较高的特异性与灵敏性,invA基因的序列分析为进一步研究沙门氏菌不同分离株的流行病学、遗传学与分子致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 沙门氏菌 inva基因 DNA序列分析 分子检测
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肉制品中沙门氏菌invA基因实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：27
3
作者 杜雄伟 李叶 +2 位作者 冮洁 胡文忠 武晓松 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期68-70,80,共4页
针对沙门氏菌invA基因设计一对特异引物,建立SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性检测。结果表明,所建立的沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法,特异性良好,组间组内重复性良好,沙门氏菌检测下线为101CFU/mL... 针对沙门氏菌invA基因设计一对特异引物,建立SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性检测。结果表明,所建立的沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法,特异性良好,组间组内重复性良好,沙门氏菌检测下线为101CFU/mL。本研究建立了沙门氏菌特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR检测方法,为沙门氏菌的快速诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 沙门氏菌 inva基因 荧光定量PCR
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沙门菌invA基因LAMP快速检测法的建立和初步应用 被引量：21
4
作者 王敏雅 徐明汉 +1 位作者 潘宏伟 王志刚 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第10期1971-1973,1981,共4页
目的:建立适合基层检验部门使用的快速检测沙门菌LAMP法。方法:在65℃普通恒温水浴中、60 min扩增沙门菌invA基因片段,目测或电泳快速检测沙门菌。分别对环介导等温扩增(LAMP)反应影响较大的温度、Betaine浓度等进行优化,并对实验室保存... 目的:建立适合基层检验部门使用的快速检测沙门菌LAMP法。方法:在65℃普通恒温水浴中、60 min扩增沙门菌invA基因片段,目测或电泳快速检测沙门菌。分别对环介导等温扩增(LAMP)反应影响较大的温度、Betaine浓度等进行优化,并对实验室保存的28种沙门菌不同血清型共34株和其他9种肠杆菌科细菌进行检测;对部分沙门菌进行污染血清直接LAMP模拟检测。结果:28种不同血清型的沙门菌LAMP检测都呈阳性,其它9种肠杆菌科细菌均为阴性;血清模拟实验与菌株直接DNA提取LAMP检测结果一致。结论:LAMP法能够快速、特异地检测沙门菌,且不需要昂贵的仪器,适合基层检验部门使用。 展开更多
关键词 沙门菌 LAMP法 inva基因 快速测定
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沙门氏菌invA基因重组质粒标准的构建 被引量：4
5
作者 李正义 梁成珠 +4 位作者 贾俊涛 姜英辉 孙涛 王宇 雷质文 《食品安全质量检测学报》 CAS 2014年第7期2119-2124,共6页
目的研制沙门氏菌invA基因重组质粒,为分子生物学方法快速检测沙门氏菌提供质粒标准。方法通过PCR扩增目的片段,连接至pMD 18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,测序方法证实目的片段已成功重组,荧光定量PCR方法定性检测分析,采用PicoGreen DNA... 目的研制沙门氏菌invA基因重组质粒,为分子生物学方法快速检测沙门氏菌提供质粒标准。方法通过PCR扩增目的片段,连接至pMD 18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,测序方法证实目的片段已成功重组,荧光定量PCR方法定性检测分析,采用PicoGreen DNA分子荧光定量方法对标准质粒分子进行定值。结果 invA基因目的片段成功重组至pMD 18-T载体上,荧光定量PCR结果显示制备重组质粒标准为沙门氏菌核酸标准,重组质粒标准的浓度为2.9μg/mL。结论成功构建沙门氏菌invA基因重组质粒,为快速检测沙门氏菌奠定了基础。 展开更多
关键词 沙门氏菌 重组质粒 inva基因
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鸡白痢沙门氏菌invA基因的克隆与原核表达 被引量：2
6
作者 刘志科 张秋雨 +8 位作者 杨宁宁 徐锦凤 徐明国 荆明龙 吴文星 曹旭东 任艳 石峰 陈创夫 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第8期9-15,共7页
【目的】克隆鸡白痢沙门氏菌侵袭蛋白A(invA)基因并进行原核表达,分析重组蛋白invA的抗原性,为沙门氏菌快速诊断试纸条和新型表位疫苗的研发提供理论依据。【方法】以鸡白痢沙门氏菌野毒株为供试菌,克隆其invA基因,对invA基因编码的蛋... 【目的】克隆鸡白痢沙门氏菌侵袭蛋白A(invA)基因并进行原核表达,分析重组蛋白invA的抗原性,为沙门氏菌快速诊断试纸条和新型表位疫苗的研发提供理论依据。【方法】以鸡白痢沙门氏菌野毒株为供试菌,克隆其invA基因,对invA基因编码的蛋白进行生物信息学分析。将invA基因克隆到pET-30a原核表达载体上,构建原核重组表达质粒pET-30a-invA,将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析,检测其目的蛋白的表达情况和免疫反应特性。【结果】成功获得了1 143bp的完整的invA基因,编码381个氨基酸。生物信息学分析结果表明,invA基因编码的蛋白有17个抗原决定簇,其跨膜区域明显,92-105位氨基酸为low complexity典型结构域。构建获得了原核重组表达质粒pET-30a-invA,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了约51ku的invA融合蛋白;Western-blot检测结果显示,该融合蛋白具有良好的免疫反应性。【结论】成功克隆出了1 143bp大小invA基因,明确了其编码蛋白的生物信息,其诱导表达后获得免疫反应性良好的重组蛋白。 展开更多
关键词 鸡白痢沙门氏菌 inva基因 原核表达 生物信息学分析 免疫反应性
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分子信标探针技术检测沙门菌invA基因 被引量：4
7
作者 万成松 李俊艾 罗军 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第11期1257-1259,共3页
目的研究沙门菌的分子信标基因检测方法。方法在PCR反应体系中加入分子信标探针,探针的5'端标记6-fluorescine(6-FAM),3'端标记4-(dimethylaminophenylazo)benzoic acid (DABCYL),对沙门菌invA基因PCR产物进行荧光检测。结果肠... 目的研究沙门菌的分子信标基因检测方法。方法在PCR反应体系中加入分子信标探针,探针的5'端标记6-fluorescine(6-FAM),3'端标记4-(dimethylaminophenylazo)benzoic acid (DABCYL),对沙门菌invA基因PCR产物进行荧光检测。结果肠炎沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、伤寒沙门菌“H”、伤寒沙门菌和肠侵袭型大肠杆菌的荧光值分别为161.6、104.5、85.9、83.1、94.8、46.1,Ax值(样本荧光值-空白对照荧光值)分别为121.3、64.2、45.6、42.8、54.5、5.8,沙门菌的Ax值均大于21,结果阳性,与琼脂糖电泳分析结果一致。结论分子信标探针技术可以准确、快速、简便进行沙门菌invA基因检测。 展开更多
关键词 分子信标探针技术 基因检测 沙门菌 inva基因
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环丙沙星对沙门菌毒力岛基因invA影响的分析 被引量：4
8
作者 王玉平 李俊萍 +1 位作者 陈亚 吴永宁 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第13期2318-2320,共3页
目的:分析沙门菌毒力岛基因invA在不同血清型的基因变异和耐环丙沙星菌株中基因突变情况,及环丙沙星对沙门菌生长能力的影响。方法:用微量肉汤稀释法测定6个血清型的40株沙门菌的环丙沙星MIC;采用多阶段筛选法对敏感菌株诱导环丙沙星耐... 目的:分析沙门菌毒力岛基因invA在不同血清型的基因变异和耐环丙沙星菌株中基因突变情况,及环丙沙星对沙门菌生长能力的影响。方法:用微量肉汤稀释法测定6个血清型的40株沙门菌的环丙沙星MIC;采用多阶段筛选法对敏感菌株诱导环丙沙星耐药株;对invA基因进行测序比对,分析其基因变异和突变情况;测定诱导前后沙门菌的生长曲线。结果:不同血清型的沙门菌其invA基因序列存在不同程度的变异,但均属于沉默突变;环丙沙星耐药株未发现invA基因突变或缺失;环丙沙星诱导后沙门菌的生长能力明显减弱(P<0.001)。结论:invA基因在不同血清型的变异,说明沙门菌的毒力仍在进化中;环丙沙星未引起invA基因的突变或缺失,但可使沙门菌的生长能力下降。 展开更多
关键词 沙门菌毒力岛 inva基因 基因突变 环丙沙星
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喹诺酮对沙门菌毒力基因hilA和invA的mRNA表达水平的影响 被引量：2
9
作者 王玉平 沈建忠 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第8期1244-1246,共3页
目的:研究喹诺酮对沙门菌毒力岛基因hilA和invA的mRNA表达水平的影响。方法:用多阶段诱导方式体外筛选耐喹诺酮沙门菌株,用荧光定量PCR方法测定喹诺酮敏感株和耐药株的hilA和invA基因的mRNA表达水平。结果:与喹诺酮敏感株相比,喹诺酮耐... 目的:研究喹诺酮对沙门菌毒力岛基因hilA和invA的mRNA表达水平的影响。方法:用多阶段诱导方式体外筛选耐喹诺酮沙门菌株,用荧光定量PCR方法测定喹诺酮敏感株和耐药株的hilA和invA基因的mRNA表达水平。结果:与喹诺酮敏感株相比,喹诺酮耐药株的hilA和invA的mRNA的表达水平显著降低(P<0.01)。结论:喹诺酮可导致沙门菌毒力相关基因表达水平降低,这意味着喹诺酮耐药株毒力和致病性的降低。 展开更多
关键词 喹诺酮类 实时荧光定量PCR inva基因 hilA基因 基因表达
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福建省沙门菌病invA与spvB基因分布状况的研究 被引量：3
10
作者 杨劲松 陈爱平 +2 位作者 陈建辉 谢一俊 徐海滨 《海峡预防医学杂志》 CAS 2009年第1期53-55,共3页
[目的]了解福建省沙门菌临床分离株invA与spvB基因的分布特点,为掌握我省沙门菌病分子流行病学特征提供依据。[方法]采集2006、2007年沙门菌临床分离株137株,煮沸裂解法提取DNA后对invA和spvB基因进行PCR检测。[结果]invA和spvB基因的... [目的]了解福建省沙门菌临床分离株invA与spvB基因的分布特点,为掌握我省沙门菌病分子流行病学特征提供依据。[方法]采集2006、2007年沙门菌临床分离株137株,煮沸裂解法提取DNA后对invA和spvB基因进行PCR检测。[结果]invA和spvB基因的阳性率分别为99.3%和24.8%;spvB基因在腹泻病例中的阳性率高于在发热病例中的阳性率,在非伤寒病例株的阳性率显著高于伤寒、副伤寒病例株的阳性率。[结论]invA基因可作为沙门菌病快速诊断基因,spvB基因在非伤寒、伤寒及副伤寒沙门菌血清型中均有不同程度地存在。 展开更多
关键词 沙门菌 inva基因 spvB基因 分布 PCR
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大肠杆菌-钩端螺旋体重组穿梭质粒pGKINVA的构建及重组钩体的筛选
11
作者 朱庆平 鲍朗 +1 位作者 张会东 赵明才 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期81-83,共3页
目的构建大肠杆菌-钩体穿梭质粒pGK INVA,并重组于钩体PatocⅠ株,为进一步确定钩体invA基因的功能奠定基础。方法将invA基因克隆于pGK b le24载体,PCR、限制性内切酶双酶切及测序鉴定重组穿梭质粒pGK INVA。质粒pGK INVA经电穿孔法转化... 目的构建大肠杆菌-钩体穿梭质粒pGK INVA,并重组于钩体PatocⅠ株,为进一步确定钩体invA基因的功能奠定基础。方法将invA基因克隆于pGK b le24载体,PCR、限制性内切酶双酶切及测序鉴定重组穿梭质粒pGK INVA。质粒pGK INVA经电穿孔法转化无毒钩体PatocⅠ株,并筛选重组钩体菌株。结果从钩体基因组中克隆出长558 bp的invA基因,定向插入pGK b le24构建重组穿梭质粒pGK INVA,抗生素及蓝/白斑筛选和测序鉴定并获得正确的重组质粒后,电穿孔法转化钩体PatocⅠ株,在K orthof固体培养基生长并抗生素筛选、PCR鉴定出重组钩体菌株。结论成功构建重组大肠杆菌-钩端螺旋体穿梭质粒pGK INVA,并筛选出2个重组钩体菌株,将有助于进一步阐明invA基因在钩体体内中的功能分析。 展开更多
关键词 inva基因 大肠杆菌-钩端螺旋体重组穿梭载体 钩端螺旋体
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鸡白痢沙门氏菌分离株invA基因的克隆与序列分析
12
作者 刘志科 张秋雨 +2 位作者 杨宁宁 徐明国 陈创夫 《绿洲农业科学与工程》 2017年第4期38-44,共7页
为了克隆新疆分离株invA基因,并更进-步探讨该基因的结构与功能.本试验以鸡白痢沙门氏菌新疆分离株为模板,通过PCR方法对invA基因进行克隆,并对其进行生物信息学分析.结果表明,PCR方法成功扩增出invA基因大小为1251bp的特异性目的条带,... 为了克隆新疆分离株invA基因,并更进-步探讨该基因的结构与功能.本试验以鸡白痢沙门氏菌新疆分离株为模板,通过PCR方法对invA基因进行克隆,并对其进行生物信息学分析.结果表明,PCR方法成功扩增出invA基因大小为1251bp的特异性目的条带,共编码417个氨基酸;该基因与鸡白痢沙门氏菌标准株的invA基因的核苷酸序列的同源性为99.8%,与其他物种invA基因的核苷酸序列的同源性为24.9%-54.0%;鸡白痢沙门氏菌新疆株invA基因所推导的氨基酸序列与参考株的同源性为99.77,与其他物种的invA基因所编码的氨基酸序列的同源性为22.0%-70.7%;该分离株invA蛋白预测的二级结构和三级结构以a-螺旋和折叠为主,为非分泌蛋白;从遗传进化树上可知,该鸡白痢沙门氏菌分离株invA基因的核苷酸序列与标准株在同一个进化分支上,与其他物种的invA基因的亲缘关系较远.该研究为新疆鸡白痢沙门氏菌的流行规律、遗传变异特征以及诊断试纸条的研究提供了依据. 展开更多
关键词 鸡白痢沙门氏菌 inva基因 克隆 生物信息学分析
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PCR扩增invA基因特异性检测沙门氏菌 被引量：30
13
作者 卢强 陈贵连 林万明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1994年第3期251-256,共6页
建立了扩增ｉｎｖＡ基因检测沙门氏菌的ＰＣＲ方法，对收集的５０个血清型１２３株沙门氏菌及７种２７株非沙门菌进行ＰＣＲ，２％琼脂糖电泳检查，结果所有沙门氏菌都扩增出了３００ｂｐ的特异性产物，非沙门氏菌都未扩增出此目的条带... 建立了扩增ｉｎｖＡ基因检测沙门氏菌的ＰＣＲ方法，对收集的５０个血清型１２３株沙门氏菌及７种２７株非沙门菌进行ＰＣＲ，２％琼脂糖电泳检查，结果所有沙门氏菌都扩增出了３００ｂｐ的特异性产物，非沙门氏菌都未扩增出此目的条带。产物的特性由ｓｌｏｔｂｌｏｔ杂交进一步证实。通过电泳判定结果，该法可检出扩增体系中１０ｐｇ染色体ＤＮＡ及１０＾２ｃｆｕ的纽波特沙门氏菌５００２９。 展开更多
关键词 inva基因 沙门氏菌 聚合酶链反应
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InvA-PCR应用于磐安县钩端螺旋体病检测的研究 被引量：1
14
作者 李钟梁 孙继明 +5 位作者 姜理平 应凯满 郑柏福 李夏 陈岚岚 张孟田 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2012年第10期2360-2363,共4页
目的:针对InvA-PCR方法检测钩端螺旋体病的研究。方法:根据侵袭蛋白A基因(InvA)与卫生行业标准推荐的引物G1/G2对比,进行特异性与灵敏度研究,并应用于磐安鼠标本钩端螺旋体PCR检测。对磐安县2009分离菌株进行钩端螺旋体InvA-PCR和LS-PC... 目的:针对InvA-PCR方法检测钩端螺旋体病的研究。方法:根据侵袭蛋白A基因(InvA)与卫生行业标准推荐的引物G1/G2对比,进行特异性与灵敏度研究,并应用于磐安鼠标本钩端螺旋体PCR检测。对磐安县2009分离菌株进行钩端螺旋体InvA-PCR和LS-PCR鉴定。结果:InvA-PCR具有较高的灵敏度和特异性,该引物可特异性扩增致病性钩端螺旋体DNA,对本实验所用的其他细菌不扩增。2009年分离的钩端螺旋体菌株进行PCR鉴定结果与血清学鉴定结果相符。对鼠标本进行InvA-PCR检测,InvA-PCR检测阳性率为5%。与卫生行业标准推荐的引物G1/G2对比,符合率为100%。结论:InvA-PCR检测方法可灵敏、特异地检测致病性钩端螺旋体,能正确有效地反应野生动物带毒率,为控制钩端螺旋体病提供依据。 展开更多
关键词 侵袭蛋白A基因 钩端螺旋体 聚合酶链反应
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InvA-PCR快速检测鼠肾标本中钩端螺旋体 被引量：1
15
作者 鲍庆汉 姜理平 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2012年第12期2908-2909,2912,共3页
目的:探讨InvA-PCR方法快速检测钩端螺旋体的应用价值。方法:对2009年淳安县106只鼠肾标本直接提取其DNA用invA-PCR法进行检测,同时对106只鼠肾标本进行分离培养和显微镜凝集试验(MAT)血清学鉴定。结果:106只鼠肾标本经InvA-PCR法检测,... 目的:探讨InvA-PCR方法快速检测钩端螺旋体的应用价值。方法:对2009年淳安县106只鼠肾标本直接提取其DNA用invA-PCR法进行检测,同时对106只鼠肾标本进行分离培养和显微镜凝集试验(MAT)血清学鉴定。结果:106只鼠肾标本经InvA-PCR法检测,9份标本钩端螺旋体invA基因呈阳性,阳性率为8.5%。106只鼠肾标本分离培养,分离到3株钩端螺旋体菌株,均为黄疸出血群,阳性率为2.8%。3份培养阳性标本InvA-PCR均阳性。结论:InvA-PCR方法操作方便、耗时短、特异性强、灵敏度高,可作为致病性钩端螺旋体可靠的快速诊断方法,可用于钩体病的流行病学调查和钩体病临床标本快速初筛。 展开更多
关键词 侵袭蛋白A基因 钩端螺旋体 聚合酶链反应
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问号钩端螺旋体毒力相关蛋白InvA转录和表达特征的研究 被引量：2
16
作者 罗依惠 陈铭 +2 位作者 李立伟 钱景 严杰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期24-28,共5页
目的确定我国不同基因种问号钩端螺旋体（简称钩体）参考标准株携带毒力相关基因invA的情况，了解问号钩体赖株感染细胞前后invA基因转录和表达水平的变化。方法采用PCR检测4个不同基因种问号钩体株及双曲钩体PatocI株invA基因。克隆问... 目的确定我国不同基因种问号钩端螺旋体（简称钩体）参考标准株携带毒力相关基因invA的情况，了解问号钩体赖株感染细胞前后invA基因转录和表达水平的变化。方法采用PCR检测4个不同基因种问号钩体株及双曲钩体PatocI株invA基因。克隆问号钩体全长irwA基因并测序，构建问号钩体黄疸出血群赖型赖株invA基因原核表达系统。Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组蛋白rInvA后免疫家兔获得抗血清，免疫双扩散法检测其效价。建立问号钩体赖株感染人胚肾上皮细胞HEK293模型，采用荧光定量RT—PCR和Westernblot分别检测问号钩体赖株感染HEK293细胞前后invA基因的转录和表达水平的变化。结果4个不同基因种的问号钩体株均含有invA基因，双曲钩体PatocI株则否。4株不同基因种的问号钩体irwA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99．33％～100％和98．66％～100％。所构建的原核表达系统能有效地表达rInvA。rInvA兔抗血清免疫双扩效价为1：16。问号钩体赖株感染HEK293细胞30min以后可大量黏附于细胞表面。问号钩体赖株感染HEK293细胞30min时，invA基因mRNA水平明显上调，45min时达到峰值，然后逐渐下降。问号钩体赖株感染HEK293细胞后45min和60min时可检出InvA蛋白，感染前及感染90min以后检测结果均为阴性。结论invA基因是致病性问号钩体所特有的基因。invA基因具有宿主细胞接触式表达及瞬时表达的特点，与问号钩体侵人宿主细胞密切相关。 展开更多
关键词 问号钩端螺旋体 侵入/感染 inva基因 转录/表达
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赖型钩端螺旋体毒力相关蛋白InvA的表达及其促细胞增殖效应 被引量：1
17
作者 朱庆平 鲍朗 +4 位作者 张会东 赵计林 龙洋 吴悦涵 赵明才 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期866-869,共4页
目的　在大肠杆菌中表达赖型钩端螺旋体毒力相关蛋白InvA ,并观察该蛋白对ANA 1细胞的增殖作用。方法　将invA基因克隆于pET32a(+)载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达带组氨酸标签的Trx InvA融合蛋白 ,经亲和层析获得纯化Trx InvA蛋白。... 目的　在大肠杆菌中表达赖型钩端螺旋体毒力相关蛋白InvA ,并观察该蛋白对ANA 1细胞的增殖作用。方法　将invA基因克隆于pET32a(+)载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达带组氨酸标签的Trx InvA融合蛋白 ,经亲和层析获得纯化Trx InvA蛋白。以不同浓度的Trx InvA融合蛋白作用于ANA 1细胞 ,以四氮唑复合物 [2 ,3 bis(2 methoxy 4 nitro sulfophenyl) 5 〔(Phenylamino)carbonyl〕 2H tetrazoiumhydrixide,XTT]法检测细胞增殖的变化 ,分析InvA蛋白的细胞功能。结果　成功构建pETIN VA原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达了相对分子质量 (Mr)约为 35× 10 3的Trx InvA融合蛋白 ,该蛋白能促进ANA 1细胞的增殖。结论　表达并纯化的Trx 展开更多
关键词 原核表达载体 细胞增殖 相关蛋白 ANA 钩端螺旋体 融合蛋白 大肠杆菌 纯化 亲和层析 基因克隆
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非创伤性充填技术配合氟保护漆治疗小儿龋齿的效果
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作者 周力 《妇儿健康导刊》 2025年第19期67-71,共5页
目的分析非创伤性充填技术配合氟保护漆治疗小儿龋齿的效果。方法选取2021年1月1日至2023年12月31日盐城市第三人民医院口腔科接诊的84例龋齿患儿作为研究对象,按照随机数字表法将其分为对照组与试验组,每组42例。对照组实施常规3M氟保... 目的分析非创伤性充填技术配合氟保护漆治疗小儿龋齿的效果。方法选取2021年1月1日至2023年12月31日盐城市第三人民医院口腔科接诊的84例龋齿患儿作为研究对象,按照随机数字表法将其分为对照组与试验组,每组42例。对照组实施常规3M氟保护漆涂布治疗,试验组采用非创伤性充填技术治疗后涂布3M氟保护漆,比较两组治疗总有效率、意外穿髓率、不良事件总发生率、咬合力、牙龈指数、探诊深度。结果试验组治疗总有效率高于对照组,意外穿髓率、不良事件总发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前的咬合力、牙龈指数、探诊深度比较无统计学差异(P>0.05);治疗后,两组咬合力均升高,牙龈指数、探诊深度均降低,且试验组咬合力高于对照组,牙龈指数、探诊深度低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论非创伤性充填技术配合氟保护漆治疗小儿龋齿的效果较好,能够降低意外穿髓率,减少不良事件,提高咬合力,保障口腔健康,值得推广。 展开更多
关键词 小儿龋齿 氟保护漆 非创伤性充填技术
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PIN1/PPARγ信号通路表达在宫颈癌细胞侵袭转移中的作用机制
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作者 刘艳 刘晓夏 +1 位作者 王冬花 周萍 《联勤军事医学》 2025年第7期551-559,共9页
目的 基于过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor, PPARγ)信号通路探讨肽基脯氨酰顺反式异构酶NIMA相互作用蛋白1(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase NIMA-interacting 1,PIN1)对宫颈癌细胞侵袭... 目的 基于过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor, PPARγ)信号通路探讨肽基脯氨酰顺反式异构酶NIMA相互作用蛋白1(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase NIMA-interacting 1,PIN1)对宫颈癌细胞侵袭转移的作用。方法 从作者医院妇产科病理数据库中随机抽取2021-01/2021-12月诊断为宫颈癌的鳞状细胞癌患者共105例,在患者知情同意的情况下采集2019-01/2020-12月新鲜的80例正常宫颈组织和72例早期宫颈癌组织样本进行研究。为了考察PIN1敲低对C33A细胞生物学功能的影响,将C33A细胞分为对照组(不作任何处理)、sh-NC组(转染sh-NC慢病毒)、sh-PIN1组(转染sh-PIN1慢病毒);为了考察PIN1上调对C33A细胞生物学功能的影响,将C33A细胞分为对照组(不作任何处理)、Vector组(转染Vector质粒)、PIN1组(转染PIN1质粒)。为了考察PIN1通过调节PPARγ对宫颈癌增殖和侵袭的影响,将C33A细胞分为对照组(不作任何处理)、sh-NC+Vector组(转染sh-NC和Vector)、sh-PIN1组(转染sh-PIN1慢病毒)、PPARγ组(转染PPARγ质粒)和sh-PIN1+PPARγ组(转染sh-PIN1慢病毒和PPARγ质粒)。通过Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)法分析PIN1在宫颈癌组织和细胞系中的表达水平,并分析了PIN1表达与临床病理特征的关系。采用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT)试验评估细胞活力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力。结果 PIN1 mRNA在宫颈癌组织和细胞系中表达增加(P均<0.05)。与PIN1低表达患者相比,PIN1高表达患者的总生存期(overall survival, OS)和无病生存期(disease-free survival, DFS)较短(P均<0.001)。PIN1表达、基质侵袭和盆腔淋巴结转移是鳞状细胞宫颈癌患者OS的独立危险因素(P<0.05),PIN1表达和间质侵犯是鳞状细胞宫颈癌患者DFS的独立危险因素(P<0.05)。与sh-NC组相比,sh-PIN1组光密度(optical density, OD)值和侵袭数目显著降低(P均<0.001);与Vector组相比,PIN1组OD值和侵袭数目显著增加(P均<0.01)。免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, co-IP)结果显示,PIN1和PPARγ相互作用,并且sh-PIN1+PPARγ组OD值和细胞侵袭数目均较sh-PIN1组显著增加(P均<0.05)。结论 PIN1可以作为早期宫颈癌患者的一种新的预后指标,其可能与宫颈癌细胞中PPARγ相互作用来发挥肿瘤促进作用。 展开更多
关键词 宫颈癌 过氧化物酶体增殖物激活受体 肽基脯氨酰顺反异构酶 侵袭转移
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市售鲜鸡蛋中沙门氏菌的分离鉴定及毒力岛基因检测 被引量：40
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作者 王晶钰 董睿 +6 位作者 王利勤 芮弦 陈婷 李成山 张三东 张彦明 郭抗抗 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第16期154-158,共5页
目的:监测市售鲜鸡蛋中沙门氏菌的污染情况,检测分离菌株的致病性及其毒力岛基因携带情况,了解沙门氏菌分离株毒力岛基因的携带与其致病力的相关性。方法:从陕西省不同地市的超市中随机购买鲜鸡蛋,无菌取其蛋壳膜分离沙门氏菌,聚合酶链... 目的:监测市售鲜鸡蛋中沙门氏菌的污染情况,检测分离菌株的致病性及其毒力岛基因携带情况,了解沙门氏菌分离株毒力岛基因的携带与其致病力的相关性。方法:从陕西省不同地市的超市中随机购买鲜鸡蛋,无菌取其蛋壳膜分离沙门氏菌,聚合酶链式反应方法扩增沙门氏菌菌属特异性invA基因鉴定分离株;对分离菌株进行无特定病原体(SPF)雏鸡的致病性试验,依据GenBank发表的基因序列,设计引物聚合酶链式反应检测沙门氏菌毒力岛(SPI)核心蛋白基因。结果:从陕西省55家超市1100枚鲜蛋中分离鉴定出30株沙门氏菌,分离率达2.73%;动物致病性实验表明,30株沙门氏菌中13株有致病力,其中强致病力菌株有7株,占23.3%;分离菌株的毒力岛基因携带率分别为:SPI-1 60%、SPI-2 73.3%、SPI-3 100%、SPI-4 90%、SPI-5 76.7%,毒力岛基因SPI-1+SPI-2的携带与细菌致病性有关。结论:市售鲜鸡蛋中沙门氏菌携带率为2.73%,分离菌株对动物具有一定的致病力,毒力岛基因SPI-1+SPI-2的携带与沙门氏菌的致病性呈正相关。 展开更多
关键词 沙门氏菌 inva基因 致病性 毒力岛基因 鸡蛋 蛋壳膜
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