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珍稀树种望天树ISSR-PCR反应体系的建立和优化 被引量：1
1
作者 黎婷演 李婷 +3 位作者 谢乐 梁小春 徐圆圆 杨梅 《西北林学院学报》 北大核心 2025年第4期127-135,146,共10页
为建立适合望天树的ISSR-PCR反应体系,以望天树嫩叶为试验材料,采用L_(16)(4^(5))正交试验设计对ISSR-PCR反应的5个因素即模板DNA浓度、Mg^(2+)浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶含量及引物浓度进行优化,建立适用于望天树的最佳ISSR-PCR... 为建立适合望天树的ISSR-PCR反应体系,以望天树嫩叶为试验材料,采用L_(16)(4^(5))正交试验设计对ISSR-PCR反应的5个因素即模板DNA浓度、Mg^(2+)浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶含量及引物浓度进行优化,建立适用于望天树的最佳ISSR-PCR反应体系,且在此基础上筛选出适合该反应体系的引物和最佳退火温度,最终以望天树5个家系为材料验证反应体系的稳定性。结果表明,望天树ISSR-PCR最佳反应体系(20μL)各组分终浓度为:模板DNA 90 ng,引物浓度0.3μmol/L,dNTPs浓度0.2 mmol/L,Mg^(2+)浓度2.5 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U;筛选出3条重复性好、条带清晰、多态性高的ISSR引物,且最佳引物(UBC864)的最适退火温度为56.9℃。采用优化后的反应体系及引物对5个望天树种源样品进行ISSR-PCR条带检测,结果表明上述反应体系稳定可靠。该ISSR-PCR优化体系和候选引物适用于望天树遗传多样性分析,可为望天树种质资源保护与利用研究工作奠定基础。 展开更多
关键词 望天树 issr-pcr 正交试验设计 体系优化 引物筛选
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基于ISSR-PCR技术鉴别半夏与虎掌南星
2
作者 孙一帆 白华 +4 位作者 张娣 闫岩 牛倩 程翔 王孟虎 《山西中医药大学学报》 2025年第6期623-630,共8页
目的:利用简单序列间重复序列-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)技术对半夏及其常见混伪品虎掌南星进行鉴别。方法:采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取半夏及虎掌南星的DNA,并对50种ISSR引物进行扩增、电泳,优化退火温度、模板量、引物量、... 目的:利用简单序列间重复序列-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)技术对半夏及其常见混伪品虎掌南星进行鉴别。方法:采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取半夏及虎掌南星的DNA,并对50种ISSR引物进行扩增、电泳,优化退火温度、模板量、引物量、循环次数及琼脂糖凝胶浓度,确定最佳引物及PCR反应体系和条件。从市场上收集半夏、虎掌南星各10个批次进行适应性考察。结果:引物ISSR-1为最佳引物,最佳退火温度、引物量、模板量、循环次数、琼脂糖凝胶浓度分别是48℃,1.5μl,1.5μl,35个循环,2.0%;市售10批次半夏中有2批次检测为虎掌南星,市售10批次虎掌南星中有1批次检测为半夏,这与性状鉴定保持一致。结论:基于引物ISSR-1能够准确鉴别半夏及其混伪品虎掌南星。 展开更多
关键词 半夏 虎掌南星 issr-pcr 混伪品 鉴别
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金莲花ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选
3
作者 董梦涵 马蒙璐 +1 位作者 王瑞康 张芹 《北方园艺》 北大核心 2025年第17期10-18,共9页
以金莲花为试材,采用单因素水平筛选和正交实验方法,组合出最佳反应体系,系统分析了4个关键因素对体系的影响,包括DNA浓度、Mix酶用量、引物浓度、反应循环次数,并进行引物及其退火温度的确定,建立金莲花的ISSR-PCR反应体系,以期为金莲... 以金莲花为试材,采用单因素水平筛选和正交实验方法,组合出最佳反应体系,系统分析了4个关键因素对体系的影响,包括DNA浓度、Mix酶用量、引物浓度、反应循环次数,并进行引物及其退火温度的确定,建立金莲花的ISSR-PCR反应体系,以期为金莲花种质资源创新和遗传多样性分析提供参考依据。结果表明:四因素对反应体系的影响依次为PCR循环次数>DNA浓度>Mix酶用量>引物浓度。最佳反应体系为DNA浓度35 ng·μL^(-1),引物浓度9μmol·L^(-1),Mix酶用量9μL。反应程序为94℃预变性5 min,94℃变性30 s,退火时间45 s,72℃延伸45 s,33个循环,72℃终延伸7 min,4℃保存。建立了金莲花ISSR分子标记最佳反应体系并筛选出26条ISSR引物,可应用于后续的种质资源研究工作。 展开更多
关键词 金莲花 issr-pcr 引物筛选 反应体系
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金花菌ISSR-PCR反应体系的建立与优化
4
作者 吴凤 张莉娟 +5 位作者 李冬桂 秦玉燕 罗义灿 陈羽烨 李鸿 吕丽兰 《农业研究与应用》 2025年第1期9-18,共10页
【目的】金花菌是黑茶中的一类潜在益生真菌,能赋予茶叶独特的味道,并具备补充人体所需维生素和矿物质、生津止渴、分解油腻、降脂减肥等多种保健作用,是评价茯砖茶和六堡茶品质的重要指标之一。本研究分析了金花菌的遗传多样性及遗传结... 【目的】金花菌是黑茶中的一类潜在益生真菌,能赋予茶叶独特的味道,并具备补充人体所需维生素和矿物质、生津止渴、分解油腻、降脂减肥等多种保健作用,是评价茯砖茶和六堡茶品质的重要指标之一。本研究分析了金花菌的遗传多样性及遗传结构,建立并优化金花菌ISSR-PCR反应体系,旨在为进一步利用ISSR分子标记技术系统研究金花菌遗传多样性及其种内种间亲缘关系提供方法。【方法】以冠突曲霉(Aspergillus cristatum)的DNA作为模板,采用单因素实验对影响ISSR-PCR反应体系的模板DNA用量、引物用量、PCR Mix用量以及ISSR-PCR循环次数等4个因素进行优化,结果用4个金花菌种A.cristatum、谢瓦氏曲霉(Aspergillus chevalieri)、假灰绿曲霉(Aspergillus pseudoglaucus)、Aspergillus cibarius的菌株对反应体系进行稳定性验证。【结果】建立了金花菌ISSR-PCR最优反应体系,其组成包括50 ng/μL的模板DNA 0.3μL、10μmol/μL的引物0.8μL、2×SanTaq PCR Mix用量9.0μL,ddH_(2)O 9.9μL,总体积20μL。ISSR-PCR反应条件:94.0℃预变性5 min;94.0℃变性30 s,退火30 s,72.0℃延伸2 min,循环次数为35次;72.0℃终延伸10 min。使用4株不同的金花菌对所获ISSR-PCR最优反应体系进行稳定性验证,表明其具有高多态性和可重复性。采用此最优反应体系筛选出11条多态性和重复性高可适用于金花菌遗传多样性分析的ISSR引物并确定其退火温度。【结论】本研究建立并优化了金花菌的ISSR-PCR反应体系,结果具有高多态性和可重复性,为后续金花菌遗传多样性分析提供了新方法。 展开更多
关键词 金花菌 issr-pcr 单因素实验 反应体系
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基于ISSR-PCR鉴别青葙子及其混伪品 被引量：1
5
作者 王孟虎 马进进 +7 位作者 刘冉冉 程鹤 范啸天 孟祥松 左亚锋 汤建 栗进才 孙一帆 《山西中医药大学学报》 2025年第3期265-270,共6页
目的:采用ISSR-PCR分子标记技术鉴定青葙子、鸡冠花子、绿穗苋子。方法:采用CTAB法提取样品DNA,利用核酸蛋白测定仪检测样品DNA的浓度和质量,根据ITS2通用引物进行扩增以验证样品DNA的质量。根据文献选择30条ISSR引物并进行PCR扩增和电... 目的:采用ISSR-PCR分子标记技术鉴定青葙子、鸡冠花子、绿穗苋子。方法:采用CTAB法提取样品DNA,利用核酸蛋白测定仪检测样品DNA的浓度和质量,根据ITS2通用引物进行扩增以验证样品DNA的质量。根据文献选择30条ISSR引物并进行PCR扩增和电泳,对退火温度、引物量、模板量、循环次数进行考察,从而确定ISSR-PCR扩增的最佳反应体系及条件。结果:筛选确定ISSR-3引物为最佳引物,青葙子在400 bp、750 bp左右均有一特异性条带,其中在400 bp处条带较为明亮;鸡冠花分别在100~250 bp,250 bp左右及1000~2000 bp之间均有特异性条带,其中250 bp处条带较为明亮;绿穗苋在250~500 bp之间无条带产生。通过对PCR扩增体系及条件进行优化获得最佳退火温度、引物量、模板量、循环次数分别为50.8℃,2μl,1μl,35次,经过实验选出有差异性条带的ISSR-3引物可用于鉴别青葙子、鸡冠花子、绿穗苋子。结论:ISSR-3引物在优化后的PCR反应体系及条件下可以准确鉴别青葙子及其混伪品。 展开更多
关键词 青葙子 issr-pcr 鉴别 混伪品
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利用正交设计优化水曲柳ISSR-PCR反应体系 被引量：116
6
作者 谢运海 夏德安 +1 位作者 姜静 林萍 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第3期445-450,共6页
利用正交设计L16(45)对水曲柳ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,PCR结果用统计软件MINITAB分析:①各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Taq酶量影响最大;②筛选出各反应因... 利用正交设计L16(45)对水曲柳ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,PCR结果用统计软件MINITAB分析:①各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Taq酶量影响最大;②筛选出各反应因素的最佳水平,建立水曲柳ISSR-PCR反应的最佳体系(20滋l)为:Taq酶1.0U,Mg2+2.0mmol/L,模板DNA50￣200ng,dNTP0.15mmol/L,引物0.3滋mol/L。最后,对水曲柳ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火,得到最佳退火温度为58.3℃。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术,研究水曲柳的地理变异提供一个标准化程序。 展开更多
关键词 PCR反应体系 水曲柳 设计优化 issr-pcr ISSR标记技术 MINITAB MG^2+ Taq酶 最佳反应体系 模板DNA 标准化程序 正交设计 DNTP 优化试验 统计软件 退火温度 优化系统 地理变异 水平 mol 引物 果用
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ISSR-PCR在石斛种间鉴别中的应用 被引量：73
7
作者 沈颖 徐程 +1 位作者 万小凤 张铭 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期423-427,共5页
目的 采用ISSR-PCR方法对石斛属9种植物进行鉴别,探讨不同种石斛在DNA分子水平上的差异。方法 选取10条由SSR组成的引物,对9种石斛进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析。结果 10条引物中有7条扩增出多态性条带。每条引物可检测的多态性位... 目的 采用ISSR-PCR方法对石斛属9种植物进行鉴别,探讨不同种石斛在DNA分子水平上的差异。方法 选取10条由SSR组成的引物,对9种石斛进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析。结果 10条引物中有7条扩增出多态性条带。每条引物可检测的多态性位点最少7个,最多14个,扩增片段大小为220-1260 bp。其中,引物UBC-807和UBC-864具有较高的多态性条带比率,均可以独立将所有被测种区分开来。结论ISSR-PCR作为一种简便、可靠的分子标记鉴定技术,可以作为石斛属种间鉴别的方法之一。 展开更多
关键词 石斛属 鉴别 引物 多态性位点 扩增片段 琼脂糖凝胶电泳 同种 issr-pcr 分子标记 鉴定技术
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紫椴ISSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量：78
8
作者 穆立蔷 刘赢男 +1 位作者 冯富娟 杨国亭 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期26-31,共6页
分别采用单因子试验和正交设计2种方法对影响紫椴ISSR-PCR反应体系的4个因素(Taq酶,Mg2+,dNTP,引物)在3个水平上进行优化试验。正交设计选用L9(34)方案,采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反... 分别采用单因子试验和正交设计2种方法对影响紫椴ISSR-PCR反应体系的4个因素(Taq酶,Mg2+,dNTP,引物)在3个水平上进行优化试验。正交设计选用L9(34)方案,采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响情况,找出最佳反应水平。2种方法所得影响因素最佳水平存在差异,通过综合比较与分析,最终建立了紫椴ISSR-PCR的最佳反应体系:在20μL的反应体系中,Taq酶1·0U,Mg2+2·0mmol·L-1,dNTP0·20mmol·L-1,引物0·4μmol·L-1,1×PCRbuffer,30ng模板DNA。在此基础上筛选出14个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。 展开更多
关键词 紫椴 issr-pcr 正交设计 单因子试验 梯度PCR
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利用正交设计优化小苍兰ISSR-PCR反应体系 被引量：38
9
作者 周凌瑜 吴晨炜 +2 位作者 唐东芹 宋会书 刘群录 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期402-407,共6页
通过L16(45)正交试验,研究了镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度这5个因素在4个水平上对ISSR-PCR的影响,建立了适合于小苍兰ISSR-PCR的反应体系。优化体系为:25μLPCR反应体系中含有1×Taq酶缓冲液(10 ... 通过L16(45)正交试验,研究了镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度这5个因素在4个水平上对ISSR-PCR的影响,建立了适合于小苍兰ISSR-PCR的反应体系。优化体系为:25μLPCR反应体系中含有1×Taq酶缓冲液(10 mmol.L-1KCl,8 mmol.L-1(NH4)2SO4,10 mmol.L-1Tris.HCl,pH9.0,0.05%NP-40),2 mmol.L-1MgCl2,0.06 U.μL-1Taq酶,0.4μmol.L-1引物,4.0 ng.μL-1模板DNA,dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.6 mmol.L-1。利用温度梯度PCR,确定了最适宜的退火温度为51.5℃。该优化体系的建立为下一步对小苍兰进行ISSR分子标记奠定了基础。 展开更多
关键词 issr-pcr 小苍兰 优化 正交设计
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茶树ISSR-PCR反应体系的建立 被引量：37
10
作者 姚明哲 王新超 +1 位作者 陈亮 杨亚军 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期172-176,206,共6页
通过优化影响茶树 ISSR-PCR 的主要参数,确立了适用于茶树的 ISSR 反应体系和扩增条件。结果表明在 20 μl 反应体系中,模板 DNA、引物、Mg++、dNTP 和 Taq DNA 聚合酶五种主要成分的最适浓度分别为 10ng、150 nmol/L、1.5 mmol/L、150 ... 通过优化影响茶树 ISSR-PCR 的主要参数,确立了适用于茶树的 ISSR 反应体系和扩增条件。结果表明在 20 μl 反应体系中,模板 DNA、引物、Mg++、dNTP 和 Taq DNA 聚合酶五种主要成分的最适浓度分别为 10ng、150 nmol/L、1.5 mmol/L、150 μmol/L、0.5 U。在扩增过程中,引物的适宜退火温度比其 Tm 值平均高 4.5℃,扩增出足量产物至少需要 30 个热循环。利用该优化反应体系和扩增条件,对 13 份不同茶树种质资源进行ISSR-PCR 扩增,扩增产物的多态性为 77.6%。引物 TRI18 构建的 ISSR 指纹图谱,可以区分 13 份茶树资源中的 12 份,分辨率达 92.3%。 展开更多
关键词 茶树 issr-pcr 模板DNA 引物 简单重复间序列 核苷酸
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乐昌含笑不同类型鉴定的ISSR-PCR分析 被引量：58
11
作者 邱英雄 傅承新 何云芳 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第6期49-52,共4页
利用inter -简单重复序列 (ISSR)标记对乐昌含笑 6种类型的遗传变异进行了研究 ,从 30个引物中筛选出 12个多态性引物用于正式扩增 ,共扩增出 134条DNA带 ,其中多态性DNA带 6 7条 ,占 5 0 % ,平均每个引物扩增的DNA带的数目为 11 16 7... 利用inter -简单重复序列 (ISSR)标记对乐昌含笑 6种类型的遗传变异进行了研究 ,从 30个引物中筛选出 12个多态性引物用于正式扩增 ,共扩增出 134条DNA带 ,其中多态性DNA带 6 7条 ,占 5 0 % ,平均每个引物扩增的DNA带的数目为 11 16 7条。其中引物ISSR16、ISSR19能区分全部类型。引物ISSR16、ISSR19和ISSR2在不同的类型中扩增出了一些特有条带 ,对乐昌含笑类型和品种鉴定以及检验品种的真实性方面非常有价值。本研究对ISSR分析技术的关键步骤进行了讨论 。 展开更多
关键词 乐昌含笑 类型 鉴定 issr-pcr 遗传变异
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油桐ISSR-PCR最佳反应体系的建立 被引量：25
12
作者 李鹏 汪阳东 +1 位作者 陈益存 张小平 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2008年第2期194-199,共6页
在油桐遗传多样性研究中,为了获得清晰可靠、重复性强的ISSR扩增结果,综合采用单因子试验和正交设计两种方法对影响油桐ISSR-PCR反应结果的4个因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、引物)进行优化试验。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影... 在油桐遗传多样性研究中,为了获得清晰可靠、重复性强的ISSR扩增结果,综合采用单因子试验和正交设计两种方法对影响油桐ISSR-PCR反应结果的4个因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、引物)进行优化试验。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响,找出最佳反应水平。正交设计选用L9(34)方案,采用直观分析获得影响因素最佳反应水平。通过综合比较分析,最终建立了油桐ISSR-PCR反应的最佳反应体系,即在20μL反应体系中,Taq DNA聚合酶1.0 U,Mg2+2.0 mmol.L-1,dNTP 0.20 mmol.L-1,引物0.4μmol.L-1,1×PCR缓冲液,40 ng模板DNA。 展开更多
关键词 油桐 issr-pcr 单因子试验 正交设计
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龙荔基因组DNA的提取及ISSR-PCR体系的建立与优化 被引量：15
13
作者 潘丽梅 朱建华 +2 位作者 秦献泉 彭宏祥 卢美英 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第1期145-149,共5页
应用改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA,探讨龙荔ISSR-PCR扩增反应体系的建立和优化。结果表明,经过改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA效果良好,所提取的DNA纯度较高,符合ISSR-PCR反应的要求;龙荔ISSR-PCR最佳反应体系（反应总体积20μl）：1&... 应用改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA,探讨龙荔ISSR-PCR扩增反应体系的建立和优化。结果表明,经过改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA效果良好,所提取的DNA纯度较高,符合ISSR-PCR反应的要求;龙荔ISSR-PCR最佳反应体系（反应总体积20μl）：1×Buffer缓冲液（含适量Mg^2＋）,1 UTaqDNA聚合酶,0.20 mmol/L dNTP,0.25μmol/L引物,DNA模板70-80 ng/μl,退火温度53-54℃。 展开更多
关键词 龙荔 DNA提取 issr-pcr 分子标记
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红花石蒜ISSR-PCR反应体系的建立 被引量：14
14
作者 杨志玲 冯刚利 +2 位作者 谭梓峰 栾启福 王承南 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2006年第4期509-512,共4页
以红花石蒜叶片基因组DNA为模板,分析了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+的浓度及Taq DNA聚合酶的用量对ISSR-PCR扩增结果的影响。建立了石蒜ISSR分析最优化的反应体系及应用程序:即25μL反应体系中,有20 ng模板DNA、0.5μmol.L-1随机引物、... 以红花石蒜叶片基因组DNA为模板,分析了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+的浓度及Taq DNA聚合酶的用量对ISSR-PCR扩增结果的影响。建立了石蒜ISSR分析最优化的反应体系及应用程序:即25μL反应体系中,有20 ng模板DNA、0.5μmol.L-1随机引物、150μmol.L-1dNTPs、2.0 mmol.L-1Mg2+、1.0 U Taq DNA聚合酶。反应程序为:94℃预变性5 m in;然后45个循环:每个循环94℃变性45 s,55℃退火60 s,72℃延伸2 m in;循环结束后72℃延伸7 m in。 展开更多
关键词 红花石蒜 叶片 issr-pcr
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利用RAPD-PCR与ISSR-PCR标记技术分析长江口刀鲚的群体遗传结构 被引量：28
15
作者 张媛 胡则辉 +1 位作者 周志刚 陈亚瞿 《上海水产大学学报》 CSCD 北大核心 2006年第4期390-397,共8页
利用RAPD-PCR及ISSR-PCR两种分子标记技术对长江出海口两年3个群体的52条刀鲚（Goiliaectenes）进行群体遗传结构的分析。在3个群体中，利用RAPD-PCR标记技术，15个10bp随机引物共检测到110条带，多态性为0．490～0．657，Shannon多样... 利用RAPD-PCR及ISSR-PCR两种分子标记技术对长江出海口两年3个群体的52条刀鲚（Goiliaectenes）进行群体遗传结构的分析。在3个群体中，利用RAPD-PCR标记技术，15个10bp随机引物共检测到110条带，多态性为0．490～0．657，Shannon多样性指数为18．63～22．38，Nei平均遗传距离为0．1195～0．1454；而利用11个ISSR引物所获得的相应结果分别为67、0．576～0．682、11．56～13．66以及0．117～0．147。相关性分析表明这两种技术所获得的上述数据呈正相关（r=0．95，P〈0．05）。AMOVA结果显示，3个群体按采集时间划分成的两年之间的遗传变异不超过总变异的1．1％，同一年内群体间的遗传变异也分别只占总变异的6．99％（RAPD）和2．75％（ISSR-PCR），群体内各个体之间的遗传变异占总变异的96％（P〈0．0001），说明两年内所采集的3个群体之间基本上没有产生遗传分化。基于样品之间的Nei遗传距离所构建的Neighborjohing聚类图也清楚地显示出没有按采样的时间产生群体的遗传分化。对各样品之间的Nei遗传距离及Neighbor-joining聚类图分别经Mantel检测及支序分析，发现ISSR-PCR技术所获得的结果与RAPD-PCR技术的结果不存在明显的正相关，但ISSR-PCR标记技术具有在待测样品中能检测到高多态性等优点。 展开更多
关键词 刀鲚 遗传多样性 遗传变异 RAPD issr-pcr AMOVA
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唐古特大黄ISSR-PCR反应条件的优化 被引量：17
16
作者 胡延萍 谢小龙 +2 位作者 王莉 杨建 李毅 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期112-116,共5页
利用单因素试验对影响唐古特大黄ISSR-PCR扩增的重要参数进行优化,以期建立其最佳反应条件。结果如下:20μL反应体系包括1.5×PCR buffer(15mmol/LTris-HCl,75mmol/LKCl),1.00mmol/LMgCl2,0.6UTaq DNA聚合酶,0.125mmol/LdNTP,0.5μm... 利用单因素试验对影响唐古特大黄ISSR-PCR扩增的重要参数进行优化,以期建立其最佳反应条件。结果如下:20μL反应体系包括1.5×PCR buffer(15mmol/LTris-HCl,75mmol/LKCl),1.00mmol/LMgCl2,0.6UTaq DNA聚合酶,0.125mmol/LdNTP,0.5μmol/L引物和30ng模板DNA;引物UBC888适宜的退火温度为57.4℃。ISSR反应条件的建立为利用分子标记技术研究唐古特大黄居群遗传多样性奠定了良好基础。 展开更多
关键词 唐古特大黄 issr-pcr 优化
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风信子ISSR-PCR体系的优化及引物筛选 被引量：19
17
作者 胡凤荣 王斐 +2 位作者 王志强 任翠 鲍仁蕾 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期139-144,共6页
以风信子基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用单因素试验方法,对影响PCR扩增体系中Mg2+浓度、dNTPs、模板DNA及引物浓度、Taq酶的用量5个因素进行研究,建立了风信子ISSR-PCR扩增最佳反应体系,即:20μL反应体系中分别加入2μL10×Buffe... 以风信子基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用单因素试验方法,对影响PCR扩增体系中Mg2+浓度、dNTPs、模板DNA及引物浓度、Taq酶的用量5个因素进行研究,建立了风信子ISSR-PCR扩增最佳反应体系,即:20μL反应体系中分别加入2μL10×Buffer、1.4μL Mg2+(25mmol/L)、1.5μL dNTPs(2.5mmol/L)、1.5μL引物(10pmol/μL),0.2μLTaq酶(5U/μL),1.2μL模板(30ng/μL),ddH2O补足体积。并以此体系对110条引物进行筛选,最终获得了多态性高,重复性好的引物12条。 展开更多
关键词 风信子 issr-pcr 引物筛选
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博白大果油茶ISSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量：20
18
作者 范海艳 曹福祥 +3 位作者 彭继庆 龙绛雪 邓明 司书斌 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期97-103,共7页
以博白大果油茶Camellia gigantocarpa Hu et Huang为材料,通过单因素实验设计和正交设计L18(35)对影响PCR反应体系的主要成分及PCR扩增程序进行优化。建立了稳定的、可重复的博白大果油茶ISSR-PCR扩增反应体系。在20μL的反应体系中,M... 以博白大果油茶Camellia gigantocarpa Hu et Huang为材料,通过单因素实验设计和正交设计L18(35)对影响PCR反应体系的主要成分及PCR扩增程序进行优化。建立了稳定的、可重复的博白大果油茶ISSR-PCR扩增反应体系。在20μL的反应体系中,Mg2+浓度为2.5mmol/L,模板DNA用量为20ng,Taq DNA聚合酶为1.75U,dNTPs浓度为0.25mmol/L,引物浓度为0.6mmol/L。反应程序为:94℃预变性4min,94℃变性30s,50℃退火45s,72℃延伸90s,35个循环,72℃延伸7min,4℃保存。 展开更多
关键词 博白大果油茶 单因素设计 issr-pcr 反应体系优化
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暴马丁香ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选 被引量：13
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作者 杨晓霞 郑健 +2 位作者 冷平生 王羽 王宇婷 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1018-1026,共9页
为建立暴马丁香ISSR-PCR最佳反应体系,本研究以暴马丁香基因组DNA为模板,首先通过单因子试验设计筛选出各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验,对暴马丁香ISSR-PCR反应有影响的模板DNA、dNTPs、Mg2+、Taq DNA聚合酶和引物浓度等... 为建立暴马丁香ISSR-PCR最佳反应体系,本研究以暴马丁香基因组DNA为模板,首先通过单因子试验设计筛选出各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验,对暴马丁香ISSR-PCR反应有影响的模板DNA、dNTPs、Mg2+、Taq DNA聚合酶和引物浓度等5种因素4个水平进行了优化试验。暴马丁香的ISSR-PCR最佳反应体系最终确定为:在25μL的反应体系中,DNA模板是40ng,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,引物浓度为0.4μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.5 U,dNTPs浓度为0.2 mmol/L。利用该体系从60条ISSR引物中筛选出了扩增条带清晰、多态性好的10条引物。这一体系的建立及多态性引物的筛选为以后利用ISSR分子标记技术进行暴马丁香的有关研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 暴马丁香 issr-pcr 单因子试验 正交设计 引物筛选
原文传递
茶树ISSR-PCR反应体系的正交优化 被引量：10
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作者 宁静 黄建安 +2 位作者 李娟 钟兴刚 朱旗 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期414-417,共4页
对茶树ISSR-PCR反应体系中的5因素(Taq酶浓度(U/(20μL))、Mg2+浓度(mmol/L)、模板DNA质量浓度(ng/(20μL))、dNTP浓度(mmol/L)、引物浓度(μmol/L))在4水平上进行正交优化试验,筛选出各因素的最佳水平,建立茶树最佳ISSR-PCR反应体系,... 对茶树ISSR-PCR反应体系中的5因素(Taq酶浓度(U/(20μL))、Mg2+浓度(mmol/L)、模板DNA质量浓度(ng/(20μL))、dNTP浓度(mmol/L)、引物浓度(μmol/L))在4水平上进行正交优化试验,筛选出各因素的最佳水平,建立茶树最佳ISSR-PCR反应体系,即20μL反应体系中,TaqDNA聚合酶为1.0U/(20μL),Mg2+为2.0mmol/L,模板为40ng/(20μL),dNTP为0.20mmol/L,引物为0.25μmol/L.对茶树ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火试验,确定引物ISSR1、UBC881的最适退火温度分别为52.4、59.0℃. 展开更多
关键词 茶树 issr-pcr 反应体系 正交设计
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