目的获取小鼠IFIT1(Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats 1)特异性多克隆抗体。方法扩增培养高效表达IFIT1的重组子pMAL-C2X-IFIT1,超声破碎后的细胞上清过Amylose Pre-packed column亲和层析柱,将所得纯化的融...目的获取小鼠IFIT1(Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats 1)特异性多克隆抗体。方法扩增培养高效表达IFIT1的重组子pMAL-C2X-IFIT1,超声破碎后的细胞上清过Amylose Pre-packed column亲和层析柱,将所得纯化的融合蛋白MBP-IFIT1作为抗原,添加福氏佐机剂后免疫兔,收集抗血清,用Western blot和ELISA方法测定抗血清特异性反应和效价。结果纯化的MBP-IFIT1可诱导兔产生特异性免疫应答,所得抗体能够特异性识别融合蛋白中的IFIT1,ELISA结果显示其效价为1∶12800。结论MBP-IFIT1具有良好的抗原性,以该融合蛋白为抗原免疫兔成功制备出IFIT1特异性多克隆抗体。展开更多
目的检测干扰素诱导蛋白IFIT1(interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1)在小鼠各器官组织的表达状况,并在此基础上探讨颈交感神经阻滞(SB)对烧伤后早期小鼠肝脏IFIT1表达的影响。方法雄性C57/129小鼠50只,分为对照...目的检测干扰素诱导蛋白IFIT1(interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1)在小鼠各器官组织的表达状况,并在此基础上探讨颈交感神经阻滞(SB)对烧伤后早期小鼠肝脏IFIT1表达的影响。方法雄性C57/129小鼠50只,分为对照组和SB治疗组,TBSA15%～20%Ⅲ度小鼠烧伤模型,分别于烧伤前、烧伤后1、6、12h和24h取肝组织,采用免疫印迹法(Western blot)观察IFIT1的蛋白表达情况,同时提取正常小鼠心、肝、脾、肺、肾、小肠、淋巴细胞和骨骼肌组织RNA,以RT-PCR检测IFIT1表达情况。结果RT-PCR结果显示IFIT1在正常小鼠各组织均有表达,但组织间的表达量存在差异。Western blot结果表明对照组烧伤后肝组织IFIT1表达显著增高(P<0.01),烧伤后SB治疗组IFIT1表达量较对照组相应时相点降低非常显著(P<0.01)。结论IFIT1在小鼠体内广泛表达。SB对严重创伤的治疗作用可能是通过抑制肝内IFIT1表达来实现的。展开更多
目的：观察小鼠心、肝、脾、肺、肾等器官干扰素诱导蛋白IFIT1（Interferon—induced protein with tetratfieopetide repeats1）的表达情况，探讨颈交感神经阻滞（cervical sympathetic block，SB）对烧伤后早期小鼠各器官IFIT1表达状...目的：观察小鼠心、肝、脾、肺、肾等器官干扰素诱导蛋白IFIT1（Interferon—induced protein with tetratfieopetide repeats1）的表达情况，探讨颈交感神经阻滞（cervical sympathetic block，SB）对烧伤后早期小鼠各器官IFIT1表达状况的影响．方法：将雄性昆明小鼠18只随机分为正常对照组、烧伤组和颈交感神经阻滞（SB）治疗组、烧伤组和SB治疗组采用体表总面积（Total body surface area，TBSA）15％-20％Ⅲ度小鼠烧伤模型，SB治疗组于烧伤后即刻进行双侧颈交感神经阻滞，各组分别于4h后取心、肝、脾、肺、肾组织，提取RNA，以RT—PCR检测IFIT1表达情况．结果：RT—PCR显示IFIT1在各组的各器官均有表达，并存在差异．烧伤组IFIT1在心、肝、脾表达低于正常组，同时在肺、肾表达高于正常组，差异显著（P〈0．01）．SB治疗组IFIT1的表达均低于正常组（P〈0．01）；同时，SB治疗组IFIT1在心、肝、肺、肾的表达也低于烧伤组（P〈0．01）．另外，在各组内的不同器官的IFIT1表达量存在差异（P〈0．05）．结论：烧伤后早期小鼠各器官IFIT1表达有不同的变化，可能与不同器官在烧伤应激反应过程中损伤程度不同有关．SB可显著降低各器官IFIT1的表达．展开更多
目的：观察小鼠应激相关蛋白IFIT1（Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1）和JAB1（c-Jun平activation共处五项原则domain-binding protein 1）在肝脏的表达的细胞定位及氯胺酮对烧伤后早期肝脏IFIT1和JAB1表达...目的：观察小鼠应激相关蛋白IFIT1（Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1）和JAB1（c-Jun平activation共处五项原则domain-binding protein 1）在肝脏的表达的细胞定位及氯胺酮对烧伤后早期肝脏IFIT1和JAB1表达的影响，初步探讨氯胺酮调节炎症反应的分子机制。方法：将15只健康C57／129小鼠随机分为3组（n=5），正常对照组、烧伤组、烧伤＋氯胺酮组。采用TBSA 15～20％Ⅲ度小鼠烧伤模型；氯胺酮10mg／kg，肌肉注射，烧伤15min给予。分别于烧伤后4h脱臼处死，取肝。采用免疫印迹法（Western blot）察各组肝IFIT1和JAB1的表达情况。取正常对照组肝组织作病理切片，行免疫组织化学方法对IFIT1和JAB1的表达做细胞定位。结果：烧伤组IFIT1表达较正常对照组显著增高（P〈0．01）．烧伤组JAB1表达较正常对照组显著降低（P〈0．01）：氯胺酮治疗组IFIT1表达较正常对照组、烧伤对照组显著降低（P〈0．01）．氯胺酮治疗组JAB1表达较正常对照组显著降低（P〈0．05）、较烧伤组显著升高（P〈0．05）。免疫组织化学方法显示．IFIT1在肝细胞胞浆表达为阳性．JAB1在肝细胞胞浆和胞核均表达为阳性。结论：烧伤早期小鼠肝组织IFIT1表达增高而JJAB1表达降低，氯胺酮可降低烧伤早期小鼠肝组织IFIT1的高表达，增高JAB1表达；氯胺酮可通过调控严重烧伤应激中IFIT1和JAB1的表达而在全身炎性反应综合症（Systemic inflammatory response syndrome SIRS）中发挥作用。展开更多
目的探讨IFIT1(interferon-induced protein with tetratricopetide repeats 1)在放射损伤与感染应激中表达的特点和意义。方法采用5μg/mL的脂多糖(LPS)刺激Raw264.7、3T3和10T1/2细胞株5 h后,收集细胞,提取RNA,行RT-PCR观察IFIT1的表...目的探讨IFIT1(interferon-induced protein with tetratricopetide repeats 1)在放射损伤与感染应激中表达的特点和意义。方法采用5μg/mL的脂多糖(LPS)刺激Raw264.7、3T3和10T1/2细胞株5 h后,收集细胞,提取RNA,行RT-PCR观察IFIT1的表达情况,同时设定空白对照组。另外,将20只C57/BL6小鼠随机分为4组,采用12 Gray60Co一次性全身照射,分别于0 h、1 h、4 h和12 h脱颈处死取肝组织,用Western blot测定肝组织IFIT1表达变化。结果 Raw264.7、3T3和10T1/2细胞株经LPS刺激5 h后,均能诱导IFIT1表达,空白对照组表达为阴性。C57/BL6小鼠放射性损伤后,1 h IFIT1/Actin开始增高,12 h达最高,呈上升趋势,差异有极显著性统计学意义(P<0.01)。结论 LPS可刺激多种细胞株表达IFIT1,提示IFIT1可能参与创伤后毒血症的发生和发展;放射损伤早期能引起小鼠肝组织IFIT1的显著增高。展开更多
为了研究干扰素刺激基因1(Interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 1,IFIT1)在蓝舌病病毒1型(Bluetongue virus serotype 1,BTV1)感染复制过程中的作用,首先利用实时定量PCR检测到BTV1感染绵羊睾丸细胞后IFIT1基因...为了研究干扰素刺激基因1(Interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 1,IFIT1)在蓝舌病病毒1型(Bluetongue virus serotype 1,BTV1)感染复制过程中的作用,首先利用实时定量PCR检测到BTV1感染绵羊睾丸细胞后IFIT1基因的转录水平明显升高,利用RT-PCR方法扩增获得羊IFIT1基因,测序后进行生物信息学分析,将其克隆到质粒载体pcDNA3.1/(+)上,构建重组表达质粒pcDNA3.1-OV-IFIT1,将其转染BHK-21细胞,观察到IFIT1基因在细胞内的成功表达,然后利用BTV1感染质粒pcDNA3.1-OV-IFIT1转染的细胞,从病毒的mRNA转录、蛋白表达和病毒滴度的变化评价IFIT1对BTV1复制的影响。结果显示,IFIT1在细胞中的过表达可显著抑制BTV1复制,相反,敲低IFIT1的表达可促进BTV1的复制。本研究首次报道了干扰素刺激基因IFIT1在BTV1感染复制过程中的作用,这将有助于揭示BTV1和宿主细胞IFIT1的相互作用机制,同时也为抗病毒药物研发提供了理论指导。展开更多
目的探讨干扰素诱导蛋白5(interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 5,IFIT5)在肝癌组织中的表达、临床意义及可能的分子机制。方法收集2013年在西安交通大学第一附属医院确诊的97例肝癌患者的肿瘤组织和癌旁组织。...目的探讨干扰素诱导蛋白5(interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 5,IFIT5)在肝癌组织中的表达、临床意义及可能的分子机制。方法收集2013年在西安交通大学第一附属医院确诊的97例肝癌患者的肿瘤组织和癌旁组织。实时定量PCR、Western blot及免疫组化检测IFIT5在肝癌及癌旁组织中的表达水平,并分析IFIT5表达水平与临床病理指标的关系及生存率。Transwell实验检测IFIT5对HCC细胞的侵袭及迁移作用,Western blot法检测IFIT5对HCC细胞EMT的影响。结果IFIT5在肝癌组织中表达水平显著高于相应癌旁组织(P<0.05);肝癌组织IFIT5高表达与TNM分期(P=0.018)及血管侵犯(P=0.009)显著相关;高表达IFIT5患者5年生存率明显高于低表达组(P<0.05);IFIT5可显著促进HCC细胞的侵袭及迁移(P<0.05);IFIT5促进HCC细胞EMT的发生(P<0.05)。结论IFIT5在肝癌组织中表达升高,其高表达与肝癌恶性临床病理特征有关,IFIT5能够通过调控HCC细胞EMT促进其侵袭和迁移。展开更多
为了筛选鸡IFIT5基因潜在的、具有生物学功能的nsSNPs(nonsense Single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点和UTR-SNPs(untranslated regions-SNPs)位点。利用5种SNPs在线工具对nsSNPs进行分析预测有害位点;使用SWISS-MODEL,Pymol,Cons...为了筛选鸡IFIT5基因潜在的、具有生物学功能的nsSNPs(nonsense Single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点和UTR-SNPs(untranslated regions-SNPs)位点。利用5种SNPs在线工具对nsSNPs进行分析预测有害位点;使用SWISS-MODEL,Pymol,Consurf server等软件对有害nsSNPs位点进行蛋白质的空间结构,氨基酸的氢键变化,及保守型等进行相关分析。此外,对UTR-SNPs位点使用UTRScan分析预测其结合模式元件是否改变。结果表明:从IFIT5基因的nsSNPs位点筛选出来的6个有害nsSNPs位点(L220I,L223M,L223V,Y375C,E391G和Y414D)都为潜在性功能位点,其中E391G位点最可能影响蛋白的结构和功能。从UTR-SNPs筛选出9个位于uORF的位点可能影响IFIT5基因的转录模式。展开更多
文摘目的获取小鼠IFIT1(Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats 1)特异性多克隆抗体。方法扩增培养高效表达IFIT1的重组子pMAL-C2X-IFIT1,超声破碎后的细胞上清过Amylose Pre-packed column亲和层析柱,将所得纯化的融合蛋白MBP-IFIT1作为抗原,添加福氏佐机剂后免疫兔,收集抗血清,用Western blot和ELISA方法测定抗血清特异性反应和效价。结果纯化的MBP-IFIT1可诱导兔产生特异性免疫应答,所得抗体能够特异性识别融合蛋白中的IFIT1,ELISA结果显示其效价为1∶12800。结论MBP-IFIT1具有良好的抗原性,以该融合蛋白为抗原免疫兔成功制备出IFIT1特异性多克隆抗体。
文摘目的检测干扰素诱导蛋白IFIT1(interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1)在小鼠各器官组织的表达状况,并在此基础上探讨颈交感神经阻滞(SB)对烧伤后早期小鼠肝脏IFIT1表达的影响。方法雄性C57/129小鼠50只,分为对照组和SB治疗组,TBSA15%～20%Ⅲ度小鼠烧伤模型,分别于烧伤前、烧伤后1、6、12h和24h取肝组织,采用免疫印迹法(Western blot)观察IFIT1的蛋白表达情况,同时提取正常小鼠心、肝、脾、肺、肾、小肠、淋巴细胞和骨骼肌组织RNA,以RT-PCR检测IFIT1表达情况。结果RT-PCR结果显示IFIT1在正常小鼠各组织均有表达,但组织间的表达量存在差异。Western blot结果表明对照组烧伤后肝组织IFIT1表达显著增高(P<0.01),烧伤后SB治疗组IFIT1表达量较对照组相应时相点降低非常显著(P<0.01)。结论IFIT1在小鼠体内广泛表达。SB对严重创伤的治疗作用可能是通过抑制肝内IFIT1表达来实现的。
文摘目的：观察小鼠心、肝、脾、肺、肾等器官干扰素诱导蛋白IFIT1（Interferon—induced protein with tetratfieopetide repeats1）的表达情况，探讨颈交感神经阻滞（cervical sympathetic block，SB）对烧伤后早期小鼠各器官IFIT1表达状况的影响．方法：将雄性昆明小鼠18只随机分为正常对照组、烧伤组和颈交感神经阻滞（SB）治疗组、烧伤组和SB治疗组采用体表总面积（Total body surface area，TBSA）15％-20％Ⅲ度小鼠烧伤模型，SB治疗组于烧伤后即刻进行双侧颈交感神经阻滞，各组分别于4h后取心、肝、脾、肺、肾组织，提取RNA，以RT—PCR检测IFIT1表达情况．结果：RT—PCR显示IFIT1在各组的各器官均有表达，并存在差异．烧伤组IFIT1在心、肝、脾表达低于正常组，同时在肺、肾表达高于正常组，差异显著（P〈0．01）．SB治疗组IFIT1的表达均低于正常组（P〈0．01）；同时，SB治疗组IFIT1在心、肝、肺、肾的表达也低于烧伤组（P〈0．01）．另外，在各组内的不同器官的IFIT1表达量存在差异（P〈0．05）．结论：烧伤后早期小鼠各器官IFIT1表达有不同的变化，可能与不同器官在烧伤应激反应过程中损伤程度不同有关．SB可显著降低各器官IFIT1的表达．
文摘目的：观察小鼠应激相关蛋白IFIT1（Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1）和JAB1（c-Jun平activation共处五项原则domain-binding protein 1）在肝脏的表达的细胞定位及氯胺酮对烧伤后早期肝脏IFIT1和JAB1表达的影响，初步探讨氯胺酮调节炎症反应的分子机制。方法：将15只健康C57／129小鼠随机分为3组（n=5），正常对照组、烧伤组、烧伤＋氯胺酮组。采用TBSA 15～20％Ⅲ度小鼠烧伤模型；氯胺酮10mg／kg，肌肉注射，烧伤15min给予。分别于烧伤后4h脱臼处死，取肝。采用免疫印迹法（Western blot）察各组肝IFIT1和JAB1的表达情况。取正常对照组肝组织作病理切片，行免疫组织化学方法对IFIT1和JAB1的表达做细胞定位。结果：烧伤组IFIT1表达较正常对照组显著增高（P〈0．01）．烧伤组JAB1表达较正常对照组显著降低（P〈0．01）：氯胺酮治疗组IFIT1表达较正常对照组、烧伤对照组显著降低（P〈0．01）．氯胺酮治疗组JAB1表达较正常对照组显著降低（P〈0．05）、较烧伤组显著升高（P〈0．05）。免疫组织化学方法显示．IFIT1在肝细胞胞浆表达为阳性．JAB1在肝细胞胞浆和胞核均表达为阳性。结论：烧伤早期小鼠肝组织IFIT1表达增高而JJAB1表达降低，氯胺酮可降低烧伤早期小鼠肝组织IFIT1的高表达，增高JAB1表达；氯胺酮可通过调控严重烧伤应激中IFIT1和JAB1的表达而在全身炎性反应综合症（Systemic inflammatory response syndrome SIRS）中发挥作用。
文摘为了研究干扰素刺激基因1(Interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 1,IFIT1)在蓝舌病病毒1型(Bluetongue virus serotype 1,BTV1)感染复制过程中的作用,首先利用实时定量PCR检测到BTV1感染绵羊睾丸细胞后IFIT1基因的转录水平明显升高,利用RT-PCR方法扩增获得羊IFIT1基因,测序后进行生物信息学分析,将其克隆到质粒载体pcDNA3.1/(+)上,构建重组表达质粒pcDNA3.1-OV-IFIT1,将其转染BHK-21细胞,观察到IFIT1基因在细胞内的成功表达,然后利用BTV1感染质粒pcDNA3.1-OV-IFIT1转染的细胞,从病毒的mRNA转录、蛋白表达和病毒滴度的变化评价IFIT1对BTV1复制的影响。结果显示,IFIT1在细胞中的过表达可显著抑制BTV1复制,相反,敲低IFIT1的表达可促进BTV1的复制。本研究首次报道了干扰素刺激基因IFIT1在BTV1感染复制过程中的作用,这将有助于揭示BTV1和宿主细胞IFIT1的相互作用机制,同时也为抗病毒药物研发提供了理论指导。
文摘目的探讨干扰素诱导蛋白5(interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 5,IFIT5)在肝癌组织中的表达、临床意义及可能的分子机制。方法收集2013年在西安交通大学第一附属医院确诊的97例肝癌患者的肿瘤组织和癌旁组织。实时定量PCR、Western blot及免疫组化检测IFIT5在肝癌及癌旁组织中的表达水平,并分析IFIT5表达水平与临床病理指标的关系及生存率。Transwell实验检测IFIT5对HCC细胞的侵袭及迁移作用,Western blot法检测IFIT5对HCC细胞EMT的影响。结果IFIT5在肝癌组织中表达水平显著高于相应癌旁组织(P<0.05);肝癌组织IFIT5高表达与TNM分期(P=0.018)及血管侵犯(P=0.009)显著相关;高表达IFIT5患者5年生存率明显高于低表达组(P<0.05);IFIT5可显著促进HCC细胞的侵袭及迁移(P<0.05);IFIT5促进HCC细胞EMT的发生(P<0.05)。结论IFIT5在肝癌组织中表达升高,其高表达与肝癌恶性临床病理特征有关,IFIT5能够通过调控HCC细胞EMT促进其侵袭和迁移。
