目的建立1种简便、有效的SYBR Green Ⅰ实时定量逆转录PCR（SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR）方法检测乳腺癌组织、癌旁乳腺组织人乳腺珠蛋白（hMAM）mRNA表达水平。方法对SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR检测乳腺癌细胞株MDA—MB—231表达hMAM mRN...目的建立1种简便、有效的SYBR Green Ⅰ实时定量逆转录PCR（SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR）方法检测乳腺癌组织、癌旁乳腺组织人乳腺珠蛋白（hMAM）mRNA表达水平。方法对SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR检测乳腺癌细胞株MDA—MB—231表达hMAM mRNA的反应条件进行优化，初步检验该方法的重复性、灵敏性。应用该方法检测11例健康志愿者外周血hMAM mRNA表达，检验该方法的特异性，并对10例乳腺癌组织、10例对应癌旁乳腺组织hMAM mRNA表达水平进行测定。结果SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR可重复栓出乳腺癌细胞株MDA—MB-231极低表达hMAM mRNA，CT值为34．45～34．67，变异系数（CV）=0．25％。健康志愿者外周血中hMAM mRNA均阴性。乳腺癌组织hMAM mRNA阳性率为80．0％（8／10），其中Ⅰ期1例（100．0％），其量为37800；Ⅱ期6例（100．0％），量为100．4（中位）；Ⅲ期1例（33．3％），量为2．94。结论建立的SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR方法具有简便、特异、重复性、灵敏度好、定量结果可靠、直观等优点，应用于乳腺癌组织和癌旁乳腺组织hMAM mRNA的定量检测是理想的。展开更多
目的:探讨生物学标志乳腺上皮小黏蛋白(small breast epithelial mucin,SBEM)、乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)和细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)检测乳腺癌外周血及淋巴结微转移的临床应用价值。方法:收集2012-04-13-2012-10-1...目的:探讨生物学标志乳腺上皮小黏蛋白(small breast epithelial mucin,SBEM)、乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)和细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)检测乳腺癌外周血及淋巴结微转移的临床应用价值。方法:收集2012-04-13-2012-10-10广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科首诊的患者外周血及组织标本。采用巢式PCR技术对47例乳腺癌患者和45例乳腺良性肿瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的mRNA进行检测;采用半定量PCR技术对10例乳腺癌组织及对应的癌旁组织,以及10例乳腺良性肿瘤患者组织mRMA进行检测;采用免疫组化技术对其中27例乳腺癌患者的109个淋巴结进行检测。结果:乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血SBEM表达率分别为82.98%(39/47)和62.22%(28/45),χ2=5.005,P=0.021;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血hMAM表达率分别为65.96%(31/47)和42.22%(19/45),差异有统计学意义,χ2=5.220,P=0.022;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血CK19表达率分别为89.36%(42/47)和80.00%(36/45),差异无统计学意义,χ2=1.562,P=0.211。免疫组化CK19在52个转移性淋巴结中强阳性表达,在57个常规病理检查未发现的转移性淋巴结中检出5个淋巴结存在转移灶;hMAM及SBEM在转移性淋巴结中表达比CK19弱,而且阳性细胞染色不均一。结论:SBEM、hMAM和CK19作为乳腺癌外周血微转移生物学标志具有较高的灵敏性,但缺乏特异性,联合检测可以提高特异性,对发现早期乳腺癌微转移有一定临床意义;CK19可用于检测乳腺癌腋窝淋巴结的微小转移灶。展开更多
目的：建立SYBR Green I实时定量逆转录PCR（Real-Ti me QuntitativeRT-PCR,Q-RT-PCR）技术定量检测人乳腺珠蛋白（human mammaglobin,hMAM）mRNA的技术,并应用于检测外周血hMAM mRNA,探讨其诊断乳腺癌患者外周血微转移的可行性及意义...目的：建立SYBR Green I实时定量逆转录PCR（Real-Ti me QuntitativeRT-PCR,Q-RT-PCR）技术定量检测人乳腺珠蛋白（human mammaglobin,hMAM）mRNA的技术,并应用于检测外周血hMAM mRNA,探讨其诊断乳腺癌患者外周血微转移的可行性及意义。方法：应用自行建立的SYBR Green I Q-RT-PCR检测技术,检测61例乳腺癌、33例乳腺良性肿瘤患者以及11例健康志愿者外周血hMAM mRNA的表达量,分析其表达水平与乳腺癌临床病理特征及ER、PR及HER-2表达的关系。结果：61例乳腺癌患者外周血中10例检出hMAM mRNA表达,其癌组织HER-2阳性者占8例,HER-2阴性组未见hMAM mRNA阳性表达。HER-2阳、阴性组间外周血hMAM mRNA表达,差异具有统计学意义,P=0.028;与其他临床、病理特征无相关性,P〉0.05。HER-2阳性患者外周血中hMAM mRNA表达量范围1.98×10^2-6.21×1^03,中位数4.0×10^2,在临床、病理特征间差异无统计学意义,P〉0.05。乳腺良性肿瘤及健康志愿者外周血hMAM mRNA均阴性。结论：SYBR GreenI Q-RT-PCR技术可定量检出乳腺癌患者外周血hMAM mRNA;乳腺癌患者外周血hMAM mRNA表达与其乳腺癌组织HER-2表达相关。定量检测hMAM mRNA可作为乳腺癌外周血微转移的重要方法。展开更多
文摘目的建立1种简便、有效的SYBR Green Ⅰ实时定量逆转录PCR（SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR）方法检测乳腺癌组织、癌旁乳腺组织人乳腺珠蛋白（hMAM）mRNA表达水平。方法对SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR检测乳腺癌细胞株MDA—MB—231表达hMAM mRNA的反应条件进行优化，初步检验该方法的重复性、灵敏性。应用该方法检测11例健康志愿者外周血hMAM mRNA表达，检验该方法的特异性，并对10例乳腺癌组织、10例对应癌旁乳腺组织hMAM mRNA表达水平进行测定。结果SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR可重复栓出乳腺癌细胞株MDA—MB-231极低表达hMAM mRNA，CT值为34．45～34．67，变异系数（CV）=0．25％。健康志愿者外周血中hMAM mRNA均阴性。乳腺癌组织hMAM mRNA阳性率为80．0％（8／10），其中Ⅰ期1例（100．0％），其量为37800；Ⅱ期6例（100．0％），量为100．4（中位）；Ⅲ期1例（33．3％），量为2．94。结论建立的SYBR Green Ⅰ Q—RT—PCR方法具有简便、特异、重复性、灵敏度好、定量结果可靠、直观等优点，应用于乳腺癌组织和癌旁乳腺组织hMAM mRNA的定量检测是理想的。
文摘目的:探讨生物学标志乳腺上皮小黏蛋白(small breast epithelial mucin,SBEM)、乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)和细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)检测乳腺癌外周血及淋巴结微转移的临床应用价值。方法:收集2012-04-13-2012-10-10广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科首诊的患者外周血及组织标本。采用巢式PCR技术对47例乳腺癌患者和45例乳腺良性肿瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的mRNA进行检测;采用半定量PCR技术对10例乳腺癌组织及对应的癌旁组织,以及10例乳腺良性肿瘤患者组织mRMA进行检测;采用免疫组化技术对其中27例乳腺癌患者的109个淋巴结进行检测。结果:乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血SBEM表达率分别为82.98%(39/47)和62.22%(28/45),χ2=5.005,P=0.021;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血hMAM表达率分别为65.96%(31/47)和42.22%(19/45),差异有统计学意义,χ2=5.220,P=0.022;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血CK19表达率分别为89.36%(42/47)和80.00%(36/45),差异无统计学意义,χ2=1.562,P=0.211。免疫组化CK19在52个转移性淋巴结中强阳性表达,在57个常规病理检查未发现的转移性淋巴结中检出5个淋巴结存在转移灶;hMAM及SBEM在转移性淋巴结中表达比CK19弱,而且阳性细胞染色不均一。结论:SBEM、hMAM和CK19作为乳腺癌外周血微转移生物学标志具有较高的灵敏性,但缺乏特异性,联合检测可以提高特异性,对发现早期乳腺癌微转移有一定临床意义;CK19可用于检测乳腺癌腋窝淋巴结的微小转移灶。
