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2018-2024年青岛地区儿童呼吸道感染HAdV流行病学及遗传学特征研究
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作者 孙睿 刘子然 +3 位作者 刘思彤 梁荣香 朱顺昕 汪照国 《病毒学报》 北大核心 2025年第1期128-134,共7页
阐明2018-2024年青岛地区儿童呼吸道感染人类腺病毒(Human adenoviruses,HAdVs)流行病学特征及基因特征。采用荧光RT-PCR法对2018-2024年间青岛地区儿童急性呼吸道感染病例咽拭子标本进行HAdV通用型检测,对阳性样本进行hexon基因测序,... 阐明2018-2024年青岛地区儿童呼吸道感染人类腺病毒(Human adenoviruses,HAdVs)流行病学特征及基因特征。采用荧光RT-PCR法对2018-2024年间青岛地区儿童急性呼吸道感染病例咽拭子标本进行HAdV通用型检测,对阳性样本进行hexon基因测序,同时对2023年10月-2024年6月HAdV暴发期间部分阳性样本fiber和penton base基因进行序列测定,采用Mega 11.0软件进行系统发育及分子特征分析。2018年至2023年9月共检出HAdV阳性样本140份,阳性率4.81%(140/2909)。5岁以下婴幼儿是主要感染人群,阳性占比为74.29%(104/140)。主要流行型别为HAdV-B3型(25.81%),HAdV-C2型(22.58%),HAdV-C1型(20.43%)和HAdV-B7型(10.75%)。2023年10月至2024年6月暴发期间共检出HAdV阳性样本133例,阳性率15.52%(133/857),主要流行型别是HAdV-B3型,占比达82.71%,6-12岁儿童为主要感染人群(51.13%)。2018到2023年9月,青岛地区儿童急性呼吸道感染中HAdV主要流行型别以HAdV-B3,HAdV-C1,HAdV-C2型为主,不同年份阳性占比有所不同,5岁以下婴幼儿为主要感染人群。2023年10月至2024年6月间,HAdV-B3暴发流行,6-12岁儿童为主要感染人群。 展开更多
关键词 hadv 急性呼吸道感染 儿童 流行特征 分型
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用抗合成多肽抗体分析呼吸道HAdV六邻体保守区抗原表位 被引量:3
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作者 辛若雷 包怡华 +1 位作者 张勤 张霆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期481-485,共5页
目的 分析人类腺病毒 (HAdV)六邻体保守区氨基酸序列 ,合成保守区多肽并制备抗多肽抗体 ,以确定型间共同的特异性表位。方法 用ClustalX、Antheprot等软件 ,对HAdV六邻体进行分析 ,确定保守区并分析其抗原性。合成抗原性多肽 ,免疫家... 目的 分析人类腺病毒 (HAdV)六邻体保守区氨基酸序列 ,合成保守区多肽并制备抗多肽抗体 ,以确定型间共同的特异性表位。方法 用ClustalX、Antheprot等软件 ,对HAdV六邻体进行分析 ,确定保守区并分析其抗原性。合成抗原性多肽 ,免疫家兔制备抗肽多克隆抗体。用间接免疫荧光法和Westernblot法 ,检测所制备的抗肽抗体与病毒抗原的反应性。结果 根据HAdV 2六邻体的保守区合成 9种肽段 ,分成 3组免疫家兔 ,共获得 3组抗肽抗体。所有的抗肽抗体在 1∶10 0 0稀释度时 ,与 3个型别的HAdV感染细胞裂解物中相对分子质量 (Mr)约为 116 0 0 0的六邻体亚单位具有特异性反应。抗肽抗体对HAdV感染细胞有特征性荧光染色。 3组抗肽抗体中 ,有 7个抗体与 3个型别的HAdV感染细胞均具有阳性染色反应。结论 合成的保守区多肽能够诱导抗肽抗体产生 ,诱导产生的抗体与HAdV 3、 4、 7具有免疫反应性。 展开更多
关键词 呼吸道 抗原表位 hadv 合成多肽 抗原性分析 抗肽抗体
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2022年深圳市5株肠道腺病毒41型(HAdV-41)的分子特征分析 被引量:2
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作者 周莎 张海龙 +7 位作者 陈龙 屈雅丽 黄小丽 刘婉秋 孟君 杨洪 朱贞 何雅青 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1578-1585,共8页
人腺病毒41型(Human adenovirus,HAdV-F41)是儿童胃肠炎的常见病因,但目前HAdV-F41的分子特征尚未得到详细研究。本研究选取2022年2-5月的5个儿童急性腹泻患者的粪便样本,进行高通量测序得到全基因组序列。5个深圳株与参考株Tak(DQ3153... 人腺病毒41型(Human adenovirus,HAdV-F41)是儿童胃肠炎的常见病因,但目前HAdV-F41的分子特征尚未得到详细研究。本研究选取2022年2-5月的5个儿童急性腹泻患者的粪便样本,进行高通量测序得到全基因组序列。5个深圳株与参考株Tak(DQ315364)的核苷酸序列同一性为97.5%~98.6%,在四个重要结构基因中无核苷酸的插入和缺失,有2株在Hexon基因可见ε抗原表位发生突变,可能使毒株出现免疫逃逸,出现显著突变的基因区域还有E2A、L4、L5和E4。从NCBI上下载37个完整的HAdV-41全基因组序列建立系统发育树。系统发育树主要分为四个进化分支,其中分支1和分支2是主要的流行分支,5株深圳株处于这两个分支上。在5株深圳株中未发现有明显重组现象。 展开更多
关键词 hadv-41 深圳 全基因组序列 分子特征
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小鼠抗人腺病毒55型六邻体(HAdV55 Hexon)蛋白单克隆抗体的制备 被引量:2
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作者 袁若栋 董阳超 +9 位作者 武福星 段甜 薛潘 张剑 袁明城 薛智丰 张海军 张欠欠 高小朋 雷迎峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期544-551,共8页
目的制备特异性小鼠抗人腺病毒55型六邻体蛋白(HAdV55 Hexon)单克隆抗体(mAb)。方法以化学合成HAdV 55、3、4、7、16、21的Hexon基因为模板,PCR扩增后分别构建原核表达质粒pET28a-HAdV55 Hexon与真核表达质粒pCAGGS-HAdV3、4、7、16、21... 目的制备特异性小鼠抗人腺病毒55型六邻体蛋白(HAdV55 Hexon)单克隆抗体(mAb)。方法以化学合成HAdV 55、3、4、7、16、21的Hexon基因为模板,PCR扩增后分别构建原核表达质粒pET28a-HAdV55 Hexon与真核表达质粒pCAGGS-HAdV3、4、7、16、21、55 Hexon;将pET28a-HAdV55 Hexon质粒转化至大肠杆菌(E.coli)感受态细胞BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,将纯化的包涵体经过变性与复性后利用切向流膜过滤系统获得纯化蛋白;将pCAGGS-HAdV55 Hexon用于拔罐免疫BALB/c小鼠,HAdV55 Hexon蛋白用于加强免疫,通过杂交瘤技术制备抗HAdV55 Hexon的mAb,并进行抗体效价测定、抗体亚类鉴定;对上述抗体利用pCAGGS-HAdV55 Hexon转染HEK293T细胞和BHK细胞分别进行Western blot法和免疫荧光法(IFA)以鉴定其特异性;选择其中效价高的两株抗体,进一步利用pCAGGS-HAdV3、4、7、16、21、55 Hexon转染细胞分别进行Western blot法和IFA做交叉反应性分析。结果成功构建pET28a-HAdV55 Hexon和pCAGGS-HAdV55 Hexon、3、4、7、16、21表达质粒;IPTG诱导pET28a-HAdV55 Hexon转化的BL21细菌,HAdV55 Hexon蛋白主要以包涵体形式表达,经过变性及复性后超滤得到纯化的HAdV55 Hexon蛋白;筛选得到6株可分泌HAdV55 Hexon mAb的杂交瘤细胞株,抗体亚类分析显示2株为IgG2a亚型,4株为IgG2b;获得与HAdV3 Hexon、HAdV4 Hexon、HAdV7 Hexon、HAdV16 Hexon、HAdV21 Hexon无交叉反应性的2株高效价的特异性HAdV55 Hexon抗体。结论获得的特异性小鼠抗HAdV55 Hexon的mAb为建立其抗原检测方法提供了实验基础。 展开更多
关键词 人腺病毒55型(hadv55) 六邻体蛋白(Hexon) 单克隆抗体(mAb)
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流感疫苗株为载体的重组HAdV疫苗候选株构建及免疫效果 被引量:1
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作者 高雅倩 高雅倩 +3 位作者 段跃强 邢丽 杨鹏辉 王希良 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1073-1077,共5页
目的以冷适应、减毒流感活疫苗株为载体,构建并拯救喷鼻重组HAd V疫苗候选株,并评价其免疫效果,为腺病毒候选疫苗研制提供实验数据。方法应用反向遗传学技术,以冷适应、减毒流感活疫苗A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)株为骨架,与季节性流感病... 目的以冷适应、减毒流感活疫苗株为载体,构建并拯救喷鼻重组HAd V疫苗候选株,并评价其免疫效果,为腺病毒候选疫苗研制提供实验数据。方法应用反向遗传学技术,以冷适应、减毒流感活疫苗A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)株为骨架,与季节性流感病毒A/California/07/209疫苗株的血凝素(haemagglutination,HA)及插入HAd V六邻体蛋白抗优势原表位的2个重复序列经改造的神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因构建流感病毒八质粒系统,转染COS-1/MDCK细胞筛选疫苗候选株并鉴定;制备的候选疫苗株滴鼻免疫Balb/c小鼠,通过中和抗体、s Ig A黏膜抗体及细胞因子的测定评价其免疫原性,并用野生HAd V-7病毒株攻击评价免疫保护效果。结果成功拯救获得重组HAd V疫苗候选株,命名为rg Flu/HAd V-Ca,其形态符合流感病毒典型特征,可有效表达HAd V病毒Hexon优势表位,且具有冷适应、减毒表型。小鼠免疫后可产生针对HAd V-7及H1N1流感病毒的特异性中和抗体,肺鼻灌洗液中可检测到针对HAd V-7中和抗体s Ig A抗体,并可检测到脾淋巴细胞分泌HAd V-7特异性细胞因子IFN-γ、IL-4;攻毒实验显示,rg Flu/HAd V-Ca疫苗候选株可有效降低小鼠肺病毒载量。结论重组冷适应、减毒HAd V活疫苗株rg Flu/HAd V-Ca具有良好的免疫效果,为腺病毒候选疫苗的研制提供了新思路。 展开更多
关键词 腺病毒 冷适应、减毒活疫苗 六邻体抗原表位 免疫效果
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2012—2019年中国未知HAdV病毒株分型及基因特征分析 被引量:1
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作者 马骁 刘万红 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2021年第6期581-585,共5页
目的分析11株来自中国尚未明确分型的HAdV病毒株完整基因组的基因特征并分型。方法从GenBank数据库中下载到67条已明确基因型的HAdV基因组序列和7条HAdV参照基因组序列,将这74条参照序列与11株未明确分型的HAdV病毒株基因组序列进行基... 目的分析11株来自中国尚未明确分型的HAdV病毒株完整基因组的基因特征并分型。方法从GenBank数据库中下载到67条已明确基因型的HAdV基因组序列和7条HAdV参照基因组序列,将这74条参照序列与11株未明确分型的HAdV病毒株基因组序列进行基因结构、基因同源性以及系统进化等分析,从而确定其分型。结果从系统进化分析结果预测出6株HAdV可能的分型,再由多序列比对分析进行验证。其中两株HAdV通过多序列比对结果发现与HAdV-B参照基因组序列之间的同源性为97.8%,属于B型HAdV;两株HAdV与HAdV-D参照基因组序列之间的同源性为92.8%,属于D型HAdV;还有两株HAdV的多序列比对结果与系统进化分析预测结果不一致,无法推断其分型。剩余5株未能预测的HAdV通过与7条HAdV参照序列进行多序列比对分析,发现与B型HAdV基因组序列的同源性达到了97.9%,推测这5株HAdV基因组可能属于B型HAdV。结论从基因角度来对11株未知的HAdV基因组进行分型,预测有7株可能属于B型HAdV,有两株可能属于D型HAdV,还有两株无法判断其分型。其中7株B型HAdV可能适合作为溶瘤腺病毒进行骨肉瘤的治疗。 展开更多
关键词 人腺病毒 系统进化分析 溶瘤腺病毒 分型 癌症
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新型CpG-ODN佐剂增强灭活HAdV-55抗原在BALB/c小鼠体内的免疫应答
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作者 冯意 江洁 +10 位作者 刘莹 马若群 蔡建林 曹蕾 李海 任虎 朱贞 崔爱利 张燕 许文波 毛乃颖 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2022年第4期409-416,共8页
目的评价人工合成CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)作为佐剂对灭活人腺病毒55型(human adenovirus type 55,HAdV-55)抗原诱导BALB/c小鼠免疫应答的影响。方法HAdV-55 QS原型株经噬斑纯化构建疫苗候选株种子库,将疫... 目的评价人工合成CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)作为佐剂对灭活人腺病毒55型(human adenovirus type 55,HAdV-55)抗原诱导BALB/c小鼠免疫应答的影响。方法HAdV-55 QS原型株经噬斑纯化构建疫苗候选株种子库,将疫苗候选株扩增产物经0.05%β-丙内酯灭活,纯化后制备成全病毒颗粒抗原。纯化HAdV-55抗原按低剂量组(0.2 mg/ml)和高剂量组(1 mg/ml)分别与CpG-ODN和氢氧化铝佐剂等体积混合,乳化后接种BALB/c小鼠,同时设PBS对照组,间隔21 d加强免疫1次。分别在初次免疫后21 d和35 d采集小鼠静脉血并分离血清,采集末次血清时分离小鼠脾脏淋巴细胞。通过酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和微量中和试验检测免疫后小鼠血清中HAdV-55特异性IgG抗体和中和抗体水平,酶联免疫斑点法(enzyme linked immunospot assay,ELISpot)检测小鼠分泌IL-4和IFN-γ细胞因子淋巴细胞水平。结果无论有无佐剂,随着免疫次数和接种剂量的增加,灭活HAdV-55抗原诱导BALB/c小鼠产生的病毒特异性IgG抗体显著升高;而中和抗体只有在加强免疫后才能达到可检测水平,中和抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)在1:11~1:23之间;使用不同佐剂对小鼠免疫应答有显著影响,低剂量抗原联合CpG-ODN和氢氧化铝混合佐剂可诱导小鼠产生较高的体液免疫和细胞免疫应答,其特异性IgG抗体和中和抗体水平分别是单独使用氢氧化铝佐剂组小鼠的2.2和1.8倍,分泌IFN-γ淋巴细胞数是其2.3倍。结论新型CpG-ODN佐剂免疫能显著提高灭活HAdV-55全病毒抗原在BALB/c小鼠体内的免疫原性,同时使细胞免疫应答向偏向Th1型。 展开更多
关键词 人腺病毒55型 免疫原性 CPG寡聚脱氧核苷酸
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儿童呼吸系统腺病毒感染流行特征及季节因素分析
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作者 郭延卫 徐少艳 黄元元 《黑龙江医药科学》 2025年第6期111-114,共4页
目的:分析儿童呼吸系统腺病毒感染流行特征及季节因素。方法:回顾性分析2019年3月至2023年9月于洛阳石化医院就诊的1012例急性呼吸道感染患儿的临床资料,采用荧光定量PCR(RT-PCR)法对患儿的咽拭子标本进行腺病毒核酸检测,分析腺病毒的... 目的:分析儿童呼吸系统腺病毒感染流行特征及季节因素。方法:回顾性分析2019年3月至2023年9月于洛阳石化医院就诊的1012例急性呼吸道感染患儿的临床资料,采用荧光定量PCR(RT-PCR)法对患儿的咽拭子标本进行腺病毒核酸检测,分析腺病毒的流行情况。结果:在1012例急性呼吸道感染的患儿中,HAdV的阳性检出率为14.43%(146/1012),不同性别的患儿HAdV阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05),不同年龄段的患儿的HAdV阳性检出率差异有统计学意义(P<0.05),以学龄前儿童的HAdV阳性检出率最高18.57%。不同季节的HAdV阳性检出率差异有统计学意义,以夏季的HAdV阳性检出率最高20.92%(P<0.05)。146例HAdV阳性感染患儿中,单一感染占89.04%(130/146),混合感染占10.27%(15/146)。混合感染以HAdV合并呼吸道合胞病毒感染占比最多(10例,66.66%),其次为HAdV合并甲型流感病毒感染(3例,20.00%)。146例阳性标本检测出C组、B组、E组共7个基因型别,以B组的HAdV检出率最高72.60%,主要为HAdV3型(55例,51.89%)和HAdV7型(22例,20.75%)。结论:HAdV是引起患儿急性呼吸道感染的常见病原体,夏季为HAdV感染的高发季节,好发于学龄前儿童,这提示应加强儿童呼吸道腺病毒感染的防治工作。 展开更多
关键词 急性呼吸道感染 hadv 流行特征 季节 患儿
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Comparative analysis between genotypes of adenovirus isolates from hospitalized children with acute respiratory tract infections and clinical manifestations in Wuhan,China,from June 2022 to September 2023
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作者 Chunchen Wu Yanfang Zhang +9 位作者 Ao Liang Xiaoxue Wu Yaqi Zhu Zhaoxuan Huang Jun Wang Yali Deng Lixian Pan Anbang Wang Fei Deng Jianbo Xia 《Virologica Sinica》 2025年第1期50-60,共11页
Acute respiratory tract infections(ARTIs)are among the leading causes of morbidity and mortality in children worldwide.Human adenovirus(HAdV)infections are estimated to account for at least 5%of pediatric ARTIs.The ci... Acute respiratory tract infections(ARTIs)are among the leading causes of morbidity and mortality in children worldwide.Human adenovirus(HAdV)infections are estimated to account for at least 5%of pediatric ARTIs.The circulated genotypes of HAdV and the correlation between genotype and clinical manifestations in Wuhan,China,before and after the complete relaxation of nonpharmaceutical interventions against severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,remain unknown.Here,101 HAdV strains were isolated from throat swab samples collected from hospitalized children with ARTIs who tested positive for HAdV nucleic acid.Of these,sixty-six strains from 2022 to twenty-three strains from 2023 were successfully genotyped and subjected to phylogenetic analysis based on the hexon,penton base,and fiber genes.Six genotypes,B3,C1,C2,C5,C104,and C108 were identified.HAdV-B3(84.85%)was the most prevalent type in 2022,while HAdV-C(86.96%),including C1,C2,C108,and C104,was the most prevalent in 2023.These strains were phylogenetically related to strains from Japan,China,and the United States in recent years.When comparing clinical characteristics,pediatric patients infected with B3,C1,C2,C5,C104,or C108 exhibited similar clinical manifestations,primarily fever and cough,but varying interleukin(IL)-10 levels.In conclusion,from June 2022 to September 2023,the circulated genotypes of HAdV in Wuhan included B3,C1,C2,C108,C5,and C104.The endemic pattern of HAdV in Wuhan,China,shifted from species B as the dominant type in 2022 to species C in 2023. 展开更多
关键词 Acute respiratory tract infection (ARTIs) Human adenovirus(hadv) Viral isolates GENOTYPES Clinical characteristics PNEUMONIA
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浙江省2019年儿童腺病毒肺炎流行病学特征分析 被引量:8
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作者 叶青 许承鲜 +2 位作者 张莹莹 韩秀翠 毛建华 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期90-97,共8页
为了解浙江地区腺病毒肺炎的流行病学和病原学特征,本研究统计分析了2019年1月至2019年12月浙江大学医学院附属儿童医院腺病毒肺炎患儿的基本临床资料;并前瞻性的通过聚合酶链式反应(PCR)随机对部分的腺病毒阳性的肺炎患儿咽拭子进行基... 为了解浙江地区腺病毒肺炎的流行病学和病原学特征,本研究统计分析了2019年1月至2019年12月浙江大学医学院附属儿童医院腺病毒肺炎患儿的基本临床资料;并前瞻性的通过聚合酶链式反应(PCR)随机对部分的腺病毒阳性的肺炎患儿咽拭子进行基因扩增、测序和分型鉴定;进而构建系统发育树分析其核苷酸序列进化情况。本研究共检测咽拭子标本19650份,其中腺病毒阳性标本有4032份,腺病毒检出率为20.5%;春季和夏季腺病毒肺炎的患病率相对较高,患儿年龄主要在1~7岁。本研究所检测的99株腺病毒阳性标本经与GenBank数据库比对均为HAdV-3,通过Hexon基因全长系统进化分析得出,所检出的HAdV-3腺病毒均为Clade2进化分支。2019年浙江地区存在儿童HAdV-3肺炎的暴发流行,该病毒株未发生大的变异,均为Clade2进化分支。1~7岁的儿童为主要的易感人群。 展开更多
关键词 腺病毒(hadv) 腺病毒肺炎 流行特征 病原学特征
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2013~2014年我国4省急性呼吸道感染人腺病毒4型的基因特征分析 被引量:10
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作者 李红 毛乃颖 +9 位作者 余鹏博 尹洁 姜洪波 张波 孟婷玉 孙利伟 崔爱利 许文波 朱贞 张荣波 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期850-859,共10页
为了从分子水平上初步探讨我国流行HAdV-4的基因特征以及分子进化规律,为HAdV-4在我国的疫情监测与防控以及疫苗研发提供科学数据,本研究通过对2013~2014年间在陕西、云南、吉林和山东4省发热呼吸道症候群监测病例鼻咽拭子标本中分离... 为了从分子水平上初步探讨我国流行HAdV-4的基因特征以及分子进化规律,为HAdV-4在我国的疫情监测与防控以及疫苗研发提供科学数据,本研究通过对2013~2014年间在陕西、云南、吉林和山东4省发热呼吸道症候群监测病例鼻咽拭子标本中分离得到的HAdV-4毒株,分别进行Penton base,Hexon和Fiber三个靶基因的序列测定,同时下载GenBank数据库中所有我国及全球流行HAdV-4病毒株的上述三基因序列进行比对,构建基因亲缘性关系树,并使用生物信息学分析软件进行基因特征和分子进化分析。结果显示:全球HAdV-4病毒株可划分两个进化分支(HAdV-4p和HAdV-4a),我国自2008年至今流行的HAdV-4病毒株属于HAdV-4a进化分支,与全球优势流行株一致;HAdV-4p和HAdV-4a进化分支病毒株的三个基因序列在时间和空间上均具保守性和稳定性,核苷酸和氨基酸突变主要与不同进化分支密切相关;HAdV-4基于三个基因的估算进化速率分别为3.73×10-5碱基替代/位点/年,1.86×10-5碱基替代/位点/年和4.09×10-5碱基替代/位点/年;基于Fiber基因估算的最近共同祖先(The most recent common ancestor,tMRCA)结果显示,HAdV-4起源于1771年,其中HAdV-4p和HAdV-4a可分别追溯至1933年和1962年。为了进一步积累并完善上述HAdV病毒学监测数据,我国急需建立长期有效的HAdV监测体系。 展开更多
关键词 人腺病毒4型(hadv-4) 急性呼吸道感染 基因特征 分子进化
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利用Gibson DNA组装技术构建人5型腺病毒感染性克隆 被引量:5
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作者 邹小辉 夏百成 +3 位作者 郭小娟 王敏 鲁茁壮 洪涛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期349-355,共7页
为了构建人5型腺病毒(HAdV-5)的感染性克隆,我们使用了Gibson DNA组装技术。设计1对引物用于扩增质粒骨架(包含卡那霉素抗性基因和质粒的复制起点,KAN-ORI),在引物的5’端添加HAdV-5基因组末端序列(约30NT)和Pac I位点,以携带卡... 为了构建人5型腺病毒(HAdV-5)的感染性克隆,我们使用了Gibson DNA组装技术。设计1对引物用于扩增质粒骨架(包含卡那霉素抗性基因和质粒的复制起点,KAN-ORI),在引物的5’端添加HAdV-5基因组末端序列(约30NT)和Pac I位点,以携带卡那霉素抗性基因的pShuttle-CMV质粒为模板,PCR扩增得到KAN-ORI片段,该片段的两端均含有约30bp的HAdV-5基因组序列。将KAN-ORI片段与利用野毒扩增纯化的HAdV-5基因组混合,进行Gibson DNA组装反应;反应产物直接转化E.coli感受态细胞,涂布含卡那霉素的LB琼脂平板。挑取菌落,提取质粒,命名为pKAd5。限制性酶切鉴定的结果显示,所鉴定的质粒均含有完整的HAdV-5基因组。使用Pac I酶切线性化pKAd5,利用脂质体转染293细胞,转染4d后单层细胞出现病毒噬斑。拯救的病毒能够在HEp-2细胞扩增;电子显微镜观察呈现典型的腺病毒形态;提取病毒DNA,酶切鉴定的结果与预期的HAdV-5基因组相同,证实HAdV-5得到成功拯救。上述研究结果说明使用Gibson DNA组装技术构建HAdV-5感染性克隆简便易行,为其他DNA病毒基因组的克隆提供了新思路。 展开更多
关键词 人5型腺病毒(hadv-5) GIBSON DNA组装 感染性克隆 病毒拯救 透射电子显微镜
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腺病毒7d基因型与7b基因型全基因组比较分析 被引量:3
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作者 任洛 付扬喜 +7 位作者 郑首燕 王鹂鹂 倪科 王莉佳 臧娜 谢晓虹 邓昱 刘恩梅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期142-148,共7页
为了解重庆地区流行的7型腺病毒(Human adenovirus 7,HAdV-7)基因型型别,从全基因组水平探讨HAdV-7b和HAdV-7d可能的致病性差异,收集儿童急性下呼吸道感染患儿的呼吸道分泌物标本分离培养,提取DNA后进行HAdV-7基因型别鉴定、限制性酶切... 为了解重庆地区流行的7型腺病毒(Human adenovirus 7,HAdV-7)基因型型别,从全基因组水平探讨HAdV-7b和HAdV-7d可能的致病性差异,收集儿童急性下呼吸道感染患儿的呼吸道分泌物标本分离培养,提取DNA后进行HAdV-7基因型别鉴定、限制性酶切分析和全基因组测序,再利用MEGA6比较分析。本研究在2009年6月~2013年1月间共收集4334份急性下呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物标本,随机选取2411份进行病毒分离培养,共有164份(164/2411,6.8%)鼻咽抽吸物HAdV阳性,其中HAdV-7 87例。限制性酶切分析显示,随机挑选的3株HAdV-7分离株均为HAdV-7d。CQ1198株行全基因组测序并与其他HAdV-7全基因组构建进化树,结果发现16株中国地区的HAdV-7为HAdV-7d基因型,且上述16株HAdV-7与7d2的同源性为99.9%,与7b的同源性为98.2%。相较于ak40株(HAdV-7b),CQ1198共有49处核苷酸替换,其中20处可导致非同义替换;4处核苷酸插入,其中24bp和18bp 2个片段插入分别位于病毒相关RNAⅡ(Virus-associated RNAⅡ,VA RNAⅡ)和L3的pⅥ区域。HAdV-7可有多个基因型致病,且一直处于进化过程中,其主要流行基因型由HAdV-7b变为HAdV-7d。应加强对HAdV分子流行病学监测,明确其进化规律,为HAdV疫苗研发提供分子流行病学依据。 展开更多
关键词 腺病毒 hadv-7基因型 全基因组 进化树
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纤维顶球改造增强了人5型腺病毒载体对造血细胞的感染 被引量:2
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作者 郭小娟 梅玲玲 +3 位作者 付鸿臣 邹小辉 鲁茁壮 洪涛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1079-1088,共10页
基于人5型腺病毒(Human adenovirus type 5,HAdV⁃5)的腺病毒载体对造血细胞的基因转导效率低,将病毒fiber基因替换为HAdV⁃11p的同源基因F11p后,载体对造血细胞的感染效率增强。本研究拟在F11p纤维顶球(knob)结构域添加RGD4C多肽或HIV包... 基于人5型腺病毒(Human adenovirus type 5,HAdV⁃5)的腺病毒载体对造血细胞的基因转导效率低,将病毒fiber基因替换为HAdV⁃11p的同源基因F11p后,载体对造血细胞的感染效率增强。本研究拟在F11p纤维顶球(knob)结构域添加RGD4C多肽或HIV包膜糖蛋白(gp120)的V3结构域,观察重组HAdV⁃5对造血细胞感染效率的变化。在前期构建的pKAd5f11p153R⁃EPG腺病毒质粒基础上,结合限制性酶切和DNA组装技术,在F11p 153 aa后(knob AB loop,153位)、228位(FG loop)以及300位(IJ loop)插入RGD4C肽或者gp120的V3肽,构建了共6种重组腺病毒载体(F153RGD⁃EG、F228RGD⁃EG、F300RGD⁃EG、F153CV⁃EG、F228CV⁃EG和F300CV⁃EG),以fiber未改造的HAdV5⁃EG和改造为F11p的F11p⁃EG病毒作对照,观察了其对4种造血细胞系U937、K562、Jurkat和HL60以及人原代T细胞的感染效率。结果显示,对于U937细胞,当感染复数(MOI,vp/cell)为100时,HAdV5⁃EG感染效率最低,为2%;其次为F228CV⁃EG,感染率为45%;F300RGD⁃EG、F153CV⁃EG和F300CV⁃EG感染率为85%~90%;F153RGD⁃EG、F228RGD⁃EG高于阳性对照病毒F11p⁃EG,三者分别为99%、99%、95%。各病毒对于Jurkat细胞的感染率均较高,但HAdV5⁃EG明显低于F11p⁃EG、F153RGD⁃EG和F228RGD⁃EG,当MOI为100时分别为75%、93%、93%和96%。感染K562细胞的情况与U937细胞类似。各病毒对于HL60细胞感染效率最低,MOI为500时,F300RGD⁃EG和F300CV⁃EG的转导效率为28%和33%,是F11p⁃EG的10倍。对于人原代T细胞,F153RGD⁃EG和F228RGD⁃EG优于F11p⁃EG,当MOI为1000时,感染率分别为87%、90%和84%。研究结果表明,F11p knob插入RGD4C比单独F11p替换的HAdV⁃5对造血细胞的感染效率高,同时,本研究还发现HAdV⁃11p fiber knob的AB、FG或IJ loop可插入外源多肽,为腺病毒嗜向性改造增加了新靶点。 展开更多
关键词 人5型腺病毒(hadv⁃5) 纤维顶球 造血细胞
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云南省两医疗机构腹泻儿童腺病毒感染分子生物学特征 被引量:1
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作者 曹亿会 乔恩发 +3 位作者 寸建萍 周晓芳 姜黎黎 向以斌 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1133-1137,共5页
人腺病毒(Human adenovrius,HAdV)是引起腹泻的重要病原体之一,本研究于2015~2018年在云南省昆明市儿童医院、玉溪市妇幼保健院两家哨点医院采集5岁以下腹泻儿童粪便样本1017份,采用实时荧光定量核酸检测HAdV。结果显示,HAdV阳性样本共4... 人腺病毒(Human adenovrius,HAdV)是引起腹泻的重要病原体之一,本研究于2015~2018年在云南省昆明市儿童医院、玉溪市妇幼保健院两家哨点医院采集5岁以下腹泻儿童粪便样本1017份,采用实时荧光定量核酸检测HAdV。结果显示,HAdV阳性样本共40份,阳性感染率为3.93%。其中男性患儿21人,女性患儿19人,男女性别比为1.1∶1。2岁以下幼儿感染HAdV有33例(82.5%)。6、7月阳性检出率较高,阳性检出数占全年阳性数的40.0%。2015~2018年,每年腹泻HAdV检出率逐步增加。阳性样本六邻体Hexon和纤维突蛋白Fiber基因序列分析发现,7号毒株可能存在基因重组。肠道HAdV感染在昆明、玉溪两地儿童腹泻中占有重要地位,应加强该地区的HAdV监测与防控。 展开更多
关键词 人腺病毒(hadv) 腹泻 儿童 六邻体 纤维突蛋白基因
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2010⁃2019年北京地区腹泻患儿中人腺病毒41型Fiber基因分子特征和进化分析 被引量:3
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作者 刘立颖 钱渊 +2 位作者 贾立平 董慧谨 朱汝南 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1102-1111,共10页
人腺病毒41型(Human adenovirus 41,HAdV-41)是引起儿童腹泻的重要病原之一。为了解北京地区腹泻儿童中HAdV-41 Fiber基因的分子变异和遗传进化特征,选取2010-2019年首都儿科研究所附属儿童医院门诊腹泻患儿HAdV-41阳性的粪便标本,扩增F... 人腺病毒41型(Human adenovirus 41,HAdV-41)是引起儿童腹泻的重要病原之一。为了解北京地区腹泻儿童中HAdV-41 Fiber基因的分子变异和遗传进化特征,选取2010-2019年首都儿科研究所附属儿童医院门诊腹泻患儿HAdV-41阳性的粪便标本,扩增Fiber全基因,使用多种生物信息学软件进行系统发生、遗传进化、种群演变和选择压力等分析。结果显示HAdV-41本地毒株存在1644碱基(547氨基酸)和1689碱基(562氨基酸)两种长度的Fiber基因,截短的15个氨基酸位于Fiber蛋白纤维轴区。Mann-Whitney U秩和检验提示检测到感染短Fiber基因的HAdV-41的患儿年龄更小(P=0.036)。同源性分析结果显示Fiber基因的核苷酸和氨基酸序列同源性均大于97%,主要分为四个进化分支(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ),其中Ⅰ和Ⅲ是主要的流行分支,分支Ⅰ主要在国内流行,而分支Ⅲ全球均有流行。HAdV-41共祖起源可追溯到1856年,平均进化速率每年为6.81×10^(-5)碱基替换/位点,10年间理论有效种群一直比较平稳呈缓慢下降趋势。压力选择分析表明,一个正向和三个负向选择位点均位于Fiber蛋白的纤维轴区。上述结果表明2010-2019年间不同进化分支的HAdV-41在北京地区流行,进化速率稳定。Fiber蛋白轴区存在两种不同类型的氨基酸缺失。 展开更多
关键词 人腺病毒41型(hadv-41) 纤维蛋白 腹泻 分子进化
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Analysis of severe human adenovirus infection outbreak in Guangdong Province,southern China in 2019 被引量:10
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作者 Wenkuan Liu Shuyan Qiu +9 位作者 Li Zhang Hongkai Wu Xingui Tian Xiao Li Duo Xu Jing Dai Shujun Gu Qian Liu Dehui Chen Rong Zhou 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2022年第3期331-340,共10页
During 2018–2019,a severe human adenovirus(HAdV)infection outbreak occurred in southern China.Here,we screened 18 respiratory pathogens in 1704 children(≤14 years old)hospitalized with acute respiratory illness in G... During 2018–2019,a severe human adenovirus(HAdV)infection outbreak occurred in southern China.Here,we screened 18 respiratory pathogens in 1704 children(≤14 years old)hospitalized with acute respiratory illness in Guangzhou,China,in 2019.In total,151 patients had positive HAdV test results;34.4%(52/151)of them exhibited severe illness.HAdV infection occurred throughout the year,with a peak in summer.The median patient age was 3.0(interquartile range:1.1–5.0)years.Patients with severe HAdV infection exhibited increases in12 clinical indexes(P≤0.019)and decreases in four indexes(P≤0.007),compared with patients exhibiting nonsevere infection.No significant differences were found in age or sex distribution according to HAdV infection severity(P>0.05);however,the distributions of comorbid disease and HAdV co-infection differed according to HAdV infection severity(P<0.05).The main epidemic types were HAdV-3(47.0%,71/151)and HAdV-7(46.4%,70/151).However,the severe illness rate was significantly higher in patients with HAdV-7(51.4%)than in patients with HAdV-3(19.7%)and other types of HAdV(20%)(P<0.001).Sequencing analysis of genomes/capsid genes of 13 HAdV-7 isolates revealed high similarity to previous Chinese isolates.A representative HAdV-7isolate exhibited a similar proliferation curve to the curve described for the epidemic HAdV-3 strain Guangzhou01(accession no.DQ099432)(P>0.05);the HAdV-7 isolate exhibited stronger virulence and infectivity,compared with HAdV-3(P<0.001).Overall,comorbid disease,HAdV co-infection,and high virulence and infectivity of HAdV-7 were critical risk factors for severe HAdV infection;these data can facilitate treatment,control,and prevention of HAdV infection. 展开更多
关键词 Human adenovirus(hadv) Human adenovirus type 7(hadv-7) Severe illness EPIDEMIOLOGY Acute respiratory illness Virulence and infectivity Risk factor
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Seroprevalence of neutralizing antibodies against adenovirus type 26 and 35 in healthy populations from Guangdong and Shandong provinces,China 被引量:2
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作者 Haisu Yi Qian Wang +13 位作者 Jiankai Deng Hengchun Li Yingkun Zhang Zhilong Chen Tianxin Ji Wenming Liu Xuehua Zheng Qinghua Ma Xinxin Sun Yudi Zhang Xuegao Yu Mengzhang He Ling Chen Ying Feng 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2022年第5期716-723,共8页
Human adenoviruses type 26(HAdV26)and type 35(HAdV35)have increasingly become the choice of adenovirus vectors for vaccine application.However,the population pre-existing immunity to these two adenoviruses in China,wh... Human adenoviruses type 26(HAdV26)and type 35(HAdV35)have increasingly become the choice of adenovirus vectors for vaccine application.However,the population pre-existing immunity to these two adenoviruses in China,which may reduce vaccine efficacy,remains largely unknown.Here,we established micro-neutralizing(MN)assays to investigate the seroprevalence of neutralizing antibodies(nAbs)against HAdV26 and HAdV35 in the general population of Guangdong and Shandong provinces,China.A total of 1184 serum samples were collected,47.0%and 15.8%of which showed HAdV26 and HAdV35 nAb activity,respectively.HAdV26-seropositive individuals tended to have more moderate nAbs titers(201-1000),while HAdV35-seropositive individuals appeared to have more low nAbs titers(72-200).The seropositive rates of HAdV26 and HAdV35 in individuals younger than 20 years old were very low.The seropositive rates of HAdV26 increased with age before 70 years old and decreased thereafter,while HAdV35 seropositive rates did not show similar characteristics.Notably,the seropositive rates and nAb levels of both HAdV26 and HAdV35 were higher in Guangdong Province than in Shandong Province,but did not exert significant differences between males and females.The seroprevalence between HAdV26 and HAdV35 showed little correlation,and no significant cross-neutralizing activity was detected.These results clarified the characteristics of the herd immunity against HAdV26 and HAdV35,and provided information for the rational development and application of HAdV26 and HAdV35 as vaccine vectors in China. 展开更多
关键词 Human adenovirus type 26(hadv 26) Human adenovirus type 35(hadv 35) Neutralizing antibody(nAb) SEROPREVALENCE Guangdong and shandong provinces
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致急性呼吸道感染人腺病毒的体外感染特性初步比较 被引量:14
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作者 陈诗颖 樊晔 +2 位作者 张玲 田新贵 周荣 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期741-747,共7页
致急性呼吸道感染人腺病毒(Human adenoviruses,HAdV)的型别特异性体外感染可能与细胞因子诱导的差异有关,并推测型别特异性体外感染可能与肺细胞中型别特异性细胞因子的诱导有关。为了比较致急性呼吸道感染人腺病毒3型、5型、7型和55... 致急性呼吸道感染人腺病毒(Human adenoviruses,HAdV)的型别特异性体外感染可能与细胞因子诱导的差异有关,并推测型别特异性体外感染可能与肺细胞中型别特异性细胞因子的诱导有关。为了比较致急性呼吸道感染人腺病毒3型、5型、7型和55型的体外感染特性,临床分离多株人腺病毒3型、7型和55型接种人肺腺癌细胞(A549细胞)或人胚肺成纤维细胞(MRC-5细胞),比较其感染滴度;将人腺病毒3型、5型、7型和55型毒株接种MRC-5细胞和A549细胞进行空斑试验,比较其空斑形成以及大小、形态;接种感染MRC-5细胞,分别于感染后10h和26h收集细胞培养上清,用人炎症细胞因子抗体芯片同步检测10个主要炎症相关细胞因子包括IL-1α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、MCP-1、IFN-γ以及TNF-α的表达水平并进行分析。结果显示,与MRC-5细胞相比,A549细胞对这几种人腺病毒更加敏感;人腺病毒55型毒株与其它型别相比产毒量较高。人腺病毒在MRC-5细胞上难以形成空斑,而用A549细胞进行的空斑试验显示人腺病毒5型和55型毒株有较高的空斑形成单位,并且形成的空斑为规则的圆形且边缘清晰,空斑直径较大;而人腺病毒7型和3型毒株感染滴度较低,人腺病毒7型形成的空斑大小不均匀,形状不规则,人腺病毒3型形成的空斑直径很小,呈点状。炎症细胞因子检测结果显示,与正常对照组相比,野生型人腺病毒55型表达差异的炎症细胞因子是IL-1α、IL-1β和TNF-α;改造的人腺病毒3型感染MRC-5细胞后,两个时间点的各炎症细胞因子基本低表达。与正常对照组相比,人腺病毒感染MRC-5细胞后表达有差异的炎症细胞因子主要为IL-6和IL-8。 展开更多
关键词 人腺病毒(hadv) 病毒培养 人胚肺成纤维细胞(MRC-5细胞) 抗体芯片 炎症细胞因子
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2018年北京市西城区呼吸道腺病毒感染疫情流行病学和病原学特征分析 被引量:11
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作者 牛丹丹 毛乃颖 +7 位作者 乔富宇 秦京宁 白书媛 李红 许文波 王英 朱贞 初艳慧 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期270-280,共11页
2018年5~9月,北京市西城区五所小学先后共报告了5起呼吸道感染集中发热疫情。为了解报告的5起疫情的流行病学和病原学特征,开展了现场调查,并采集病例咽拭子标本,使用荧光定量PCR方法检测17种常见呼吸道病毒进行病原学筛查,对鉴定为人... 2018年5~9月,北京市西城区五所小学先后共报告了5起呼吸道感染集中发热疫情。为了解报告的5起疫情的流行病学和病原学特征,开展了现场调查,并采集病例咽拭子标本,使用荧光定量PCR方法检测17种常见呼吸道病毒进行病原学筛查,对鉴定为人腺病毒(Human adenovirus,HAdV)阳性的标本进行病毒分离,并分别扩增六邻体蛋白基因Loop2区域以及三个衣壳蛋白(五邻体基座蛋白、六邻体蛋白和纤维蛋白)基因全长,进行HAdV型别的初筛和确认,同时与GenBank数据库中国内外HAdV-3流行株序列进行比对分析。结果显示,5起集中发热疫情的致病原均为HAdV-3。进一步研究发现,全球流行HAdV-3可划分为Clade1和Clade2两个进化分支,2004年至今我国流行的HAdV-3病毒株均属于Clade2进化分支,也是近年全球优势流行株。两个进化分支HAdV-3病毒株在三个基因序列上均高度保守。本研究为我国呼吸道HAdV防控,以及HAdV-3型疫苗研发提供了基础科学数据。 展开更多
关键词 人腺病毒3型(hadv-3) 呼吸道感染疫情 流行病学特征 病原学鉴定
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