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GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白的表达和纯化鉴定 被引量:1
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作者 王佳慧 李凤琴 +2 位作者 李楠 韩春卉 江涛 《中国食品卫生杂志》 2017年第1期9-13,共5页
目的通过杆状病毒表达系统,获取高纯度GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白,为制备抗GⅡ.3型诺如病毒单克隆和多克隆抗体提供免疫原。方法将GⅡ.3型诺如病毒衣壳蛋白基因片段修饰后插入p HTA表达载体中,经测序鉴定,将鉴定正确的重组质粒转化到M... 目的通过杆状病毒表达系统,获取高纯度GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白,为制备抗GⅡ.3型诺如病毒单克隆和多克隆抗体提供免疫原。方法将GⅡ.3型诺如病毒衣壳蛋白基因片段修饰后插入p HTA表达载体中,经测序鉴定,将鉴定正确的重组质粒转化到MAX Efficiency~DH10Bac^(TM)感受态细胞中,获取表达杆粒并转染SF9细胞,表达GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白。重组蛋白用Ni-NTA His蛋白亲和柱纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法鉴定。结果 SDS-PAGE和Western blot结果表达了分子量约为60 k Da的重组蛋白,动物试验表明重组蛋白具有较好的免疫原性,为制备抗GⅡ.3型诺如病毒单克隆抗体和多克隆抗体、建立相应的免疫学检测方法奠定了基础。结论构建了GⅡ.3型诺如病毒衣壳蛋白表达载体,并获得GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白。 展开更多
关键词 重组蛋白 GⅡ.3型诺如病毒 杆状病毒表达系统 表达 纯化 鉴定 食品污染物 食品安全
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GII.3型诺如病毒GZ31597株变异情况及与受体组织血型抗原结合模式分析 被引量:5
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作者 王婧 张会芳 +7 位作者 靳淼 谢华萍 孔翔羽 冯微宏 李宇宁 胡贵方 何雅青 段招军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期37-44,共8页
诺如病毒(Noroviruses,NoVs)是引起非菌型胃肠炎暴发流行的主要病原体之一。为了解我国GII.3型NoVs毒株的变异以及受体结合模式,本研究对来自2015年一起中国广州NoVs胃肠炎暴发的GII.3型毒株GZ31597株进行聚合酶区和完整VP1区基因扩增... 诺如病毒(Noroviruses,NoVs)是引起非菌型胃肠炎暴发流行的主要病原体之一。为了解我国GII.3型NoVs毒株的变异以及受体结合模式,本研究对来自2015年一起中国广州NoVs胃肠炎暴发的GII.3型毒株GZ31597株进行聚合酶区和完整VP1区基因扩增、序列测定和序列分析,并表达VP1突出区蛋白(P蛋白),通过P蛋白与不同血型唾液样本的酶免疫分析法(EIA)测定实验确定其组织血型抗原(Histo-blood group antigens,HBGAs)结合模式。GZ31597株聚合酶和VP1基因系统进化分析表明,GZ31597株为GII.P12/GII.3-SubD基因型(聚合酶/衣壳区),该毒株较先前的GII.3毒株相比,在既是抗原表位又是HBGAs受体结合位点的氨基酸385残基发生了氨基酸转换。根据Western Blotting结果,证实P蛋白成功表达。唾液结合分析结果显示,该毒株P蛋白与A、B、AB、O型分泌型以及O型非分泌型唾液均可以结合,但结合值相对低。本研究表明该GII.P12/GII.3-SubD亚型的GII.3毒株在长期的流行过程中,通过氨基酸的转换,改变抗原性和受体结合活性,使GII.3型毒株在人群中继续流行。通过探索GII.3型NoVs在人群中长期广泛流行的原因,为GII.3型诺如病毒性胃肠炎的预防和控制提供重要依据。 展开更多
关键词 诺如病毒(NoVs) GII.3基因型 进化 组织血型抗原(HBGAs) P蛋白
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我国诺如病毒易重组基因型GII.P12/GII.3毒株RNA聚合酶的表达与功能表征 被引量:1
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作者 蔡淑珍 高珺珊 +5 位作者 薛亮 程彤 王林平 梁燕惠 张菊梅 吴清平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期964-974,共11页
【背景】诺如病毒是引起人类急性胃肠炎的主要食源性病原体。目前尚无获批的诺如病毒疫苗和药物,诺如病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)是当前抗诺如病毒药物开发的主要靶点。【目的】表达我国诺如病毒易重组基因型GII.P12/GII.3毒株的RdRp... 【背景】诺如病毒是引起人类急性胃肠炎的主要食源性病原体。目前尚无获批的诺如病毒疫苗和药物,诺如病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)是当前抗诺如病毒药物开发的主要靶点。【目的】表达我国诺如病毒易重组基因型GII.P12/GII.3毒株的RdRp并系统地表征其复制特征。【方法】基于大肠杆菌系统表达并纯化得到高纯度可溶性的GII.P12/GII.3诺如病毒RdRp蛋白,通过体外RNA合成实验确定温度、模板、底物和盐浓度对RdRp功能的影响。【结果】GII.P12/GII.3诺如病毒的RdRp在30℃、1mmol/L氯化锰条件下酶活性最佳。酶动力学实验表明底物GTP和模板polyC的Km值分别为79.0μmol/L和10.6μg/mL。体外抑制试验表明,RdRp在微摩尔范围内可被利巴韦林、法维拉韦和NF023有效抑制,半数最大抑制浓度分别为23、59和11μmol/L。【结论】首次表征了诺如病毒易重组基因型GII.P12/GII.3毒株RdRp的酶学特性。基于荧光的酶活性测试表明,RdRp在体外具有催化活性,这为诺如病毒RdRp抑制剂的筛选及诺如病毒感染的治疗提供了良好的技术和理论支持。 展开更多
关键词 诺如病毒 RNA依赖性RNA聚合酶 GII.P12/GII.3 抑制剂
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长沙地区诺如病毒基因型分析
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作者 漆辉洲 钟慧 《社区医学杂志》 2014年第12期12-13,共2页
目的确定长沙地区引起急性胃肠炎诺如病毒的类型。方法从128例腹泻患者粪便中,提取RNA。将RNA进行逆转录、扩增、测序,并通过构建基因进化树进行分析导致长沙地区患者感染的诺如病毒的主要种类。结果63个样品中含有诺如病毒,分别为GII-3... 目的确定长沙地区引起急性胃肠炎诺如病毒的类型。方法从128例腹泻患者粪便中,提取RNA。将RNA进行逆转录、扩增、测序,并通过构建基因进化树进行分析导致长沙地区患者感染的诺如病毒的主要种类。结果63个样品中含有诺如病毒,分别为GII-3、GII-4、GII-12三种类型,其中GII-4为主要病原体。结论在长沙地区,诺如病毒GII-4是引起病毒性胃肠炎的的主要致病株。GII-4基因进化快速,已成为全球范围内导致急性胃肠炎的最常见病毒株。 展开更多
关键词 诺如病毒 急性胃肠炎 腹泻 RNA gii-3 gii-4 gii-12
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人源诺如病毒GII.3[P12]型病毒样颗粒的免疫原性及受体结合能力
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作者 王林平 高珺珊 +5 位作者 薛亮 王大鹏 梁燕惠 洪晓静 张菊梅 吴清平 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2022年第5期514-520,共7页
目的制备GII.3[P12]型人源诺如病毒(human norovirus,HuNoV)广州株GZ2013-L20的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)和多克隆抗体,系统表征其免疫原性特征和受体结合能力,为HuNoV防控提供数据支撑。方法以GZ2013-L20毒株基因组为模板,... 目的制备GII.3[P12]型人源诺如病毒(human norovirus,HuNoV)广州株GZ2013-L20的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)和多克隆抗体,系统表征其免疫原性特征和受体结合能力,为HuNoV防控提供数据支撑。方法以GZ2013-L20毒株基因组为模板,扩增ORF2并构建重组转座载体,转化至大肠埃希菌DH10Bac获得重组杆状病毒质粒Bacmid-L20-ORF2,在昆虫细胞sf9中表达目的VLP,采用透射电镜、SDS-PAGE、Western blot(WB)和受体结合实验等方法对纯化后VLP进行鉴定。此外,将VLP免疫小鼠获得多克隆抗体,通过间接ELISA和受体结合阻断试验进行评价。结果构建了重组杆状病毒Bacmid-L20-ORF2,并成功获得目的毒株VLP;透射电镜显示颗粒直径约为30 nm;SDS-PAGE和WB结果显示蛋白相对分子质量(Mr.×10^(3))约58;受体结合实验表明,目的VLP与分泌型唾液受体(A型、B型、AB型和O型)、O型非分泌型唾液受体以及猪胃黏蛋白均能有效结合;VLP多克隆抗体效价达到2×10^(5),且与20种(20/28)基因型HuNoV的衣壳蛋白具有交叉免疫反应;受体结合阻断实验显示,多克隆抗体仅对同型VLP具有中和阻断效果,而对GII.2、GII.4、GII.8和GII.17等基因型VLP没有中和作用。结论GII.3[P12]型HuNoV广州株VLP与分泌型和非分泌型唾液受体均呈现较强的结合能力,其多克隆抗体具有免疫结合广谱性,但中和阻断效果仅对同型病毒有效,其结果为疫苗研发的理性设计提供基础数据。 展开更多
关键词 人源诺如病毒 GII.3[P12] 病毒样颗粒 多克隆抗体 受体结合功能 免疫原性
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GIL血型抗原的研究进展 被引量:15
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作者 倪强 李树中 +1 位作者 雒晶 李凌波 《临床血液学杂志(输血与检验)》 CAS 2017年第5期812-814,共3页
GIL血型抗原在2002年由国际输血协会(ISBT)确认为独立的系统抗原,编号为029,命名为GIL。该系统只有1个抗原,抗原命名为GIL1,编号为029001。至今只有很少的篇幅报道该抗原,是目前我们已知的36个红细胞血型抗原系统、308个系统抗原中认... GIL血型抗原在2002年由国际输血协会(ISBT)确认为独立的系统抗原,编号为029,命名为GIL。该系统只有1个抗原,抗原命名为GIL1,编号为029001。至今只有很少的篇幅报道该抗原,是目前我们已知的36个红细胞血型抗原系统、308个系统抗原中认知较少的一个系统抗原。但该抗原却是一个可以引起输血性溶血反应和新生儿溶血病有临床意义的抗原。本文就该抗原的最新研究进展,综述如下。 展开更多
关键词 GIL抗原 水通道蛋白3(AQP3) 膜转运蛋白 甘油运输通道 溶血反应 HDN
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