转GAFP基因棉花生态适合度及其对棉田昆虫群落的影响 被引量：7

1

作者 雒珺瑜 张帅 +6 位作者 朱香镇 吕丽敏 王春义 李春花 张利娟 王丽 崔金杰 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期3675-3681,共7页

新型转基因棉花生态适合度及其对棉田昆虫群落的影响是转基因棉花环境安全评价的重点内容.本文选用新型转GAFP(Gastrodia anti-fungal protein)基因棉花及其非转基因亲本棉花为试验材料,于2013和2014年在河南安阳研究了田间棉花生态适... 新型转基因棉花生态适合度及其对棉田昆虫群落的影响是转基因棉花环境安全评价的重点内容.本文选用新型转GAFP(Gastrodia anti-fungal protein)基因棉花及其非转基因亲本棉花为试验材料,于2013和2014年在河南安阳研究了田间棉花生态适合度及其对昆虫群落的影响.结果表明:转基因棉蕾期、花铃期和铃期叶片干物质量与其亲本无显著差异;苗期比叶面积显著低于亲本,蕾期、花铃期和铃期叶面积显著大于亲本;苗期株高显著低于亲本,蕾期、花铃期和铃期株高与亲本无显著差异;棉花生长的4个关键时期(苗期、蕾期、花铃期和铃期),转基因棉单株果枝数、蕾数和脱落数均与亲本无显著差异,而铃期单株大铃数显著低于亲本.棉铃虫发生的3个高峰期,转基因棉对棉铃虫和甜菜夜蛾无明显控制作用,且对棉田昆虫群落、害虫亚群落和天敌亚群落的昆虫个体总数、昆虫群落结构与组成、均匀性指数、多样性指数和优势集中性指数均无显著影响.表明外源基因GAFP导入后,新型转基因棉花营养生长增强,产量构成性状整体无显著变化,未引起棉田昆虫群落变化.研究初步明确了新型转基因棉花生存竞争势态和棉田昆虫群落发生规律与动态,可为新型转基因棉花环境安全评价提供理论依据,同时为转基因棉花环境安全评价积累科学数据. 展开更多

关键词 转gafp基因棉花 生态适合度 棉铃虫 甜菜夜蛾 昆虫群落结构与组成 生物多样性

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天麻抗真菌蛋白GAFP基因转化油葵的研究 被引量：2

2

作者 胡文冉 黄乐平 +2 位作者 孟庆玉 危晓薇 黄全生 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2007年第B11期67-70,共4页

以培养6h的油葵自交系6136的子叶为外植体，利用农杆菌介导法将GAFP基因导入该自交系。通过对其遗传转化主要因素的研究，发现将外植体在OD600=0．7的农杆菌中浸泡10—15min后，在含有AS100／μmol／L、pH5．4的预培养培养基上22±... 以培养6h的油葵自交系6136的子叶为外植体，利用农杆菌介导法将GAFP基因导入该自交系。通过对其遗传转化主要因素的研究，发现将外植体在OD600=0．7的农杆菌中浸泡10—15min后，在含有AS100／μmol／L、pH5．4的预培养培养基上22±1℃暗培养2d，遗传转化率高。研究建立了油葵遗传转化体系，获得了4株经PCR检测为阳性的转基因植株。研究为通过植物抗病基因工程方法防治油葵菌核病提供了1条新的途径。 展开更多

关键词 油葵 农杆菌介导法 遗传转化 gafp

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转GAFP-NPI基因香石竹 被引量：6

3

作者 何秋伶 陈英 +2 位作者 戴咏梅 杨春霞 黄敏仁 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第3期314-318,共5页

将双价抗病基因转入同一植物,是增强植物抗病性、拓宽抗病谱的有效措施。在建立香石竹叶片离体培养再生体系的基础上,将兔防御素基因(NP-I)和天麻毒蛋白基因(gastrodia antifungal protein,GAFP)构建在同一个植物表达载体pBin35SGAFP-NP... 将双价抗病基因转入同一植物,是增强植物抗病性、拓宽抗病谱的有效措施。在建立香石竹叶片离体培养再生体系的基础上,将兔防御素基因(NP-I)和天麻毒蛋白基因(gastrodia antifungal protein,GAFP)构建在同一个植物表达载体pBin35SGAFP-NPI上,通过农杆菌介导法,利用香石竹叶片作外植体,将GAFP-NPI双价抗病基因导入香石竹品种Asso、Tuareg、ciao Bianco,经卡那霉素筛选共获得300余株转基因植株,并进行多重PCR检测,证明GAFP-NPI双价抗病基因已整合进香石竹的基因组中。琼脂糖孔隙扩散实验证明转基因香石竹对绿色木霉具有抑菌活性,说明了GAFP和NPI双价抗病基因在转基因植株中得到了表达。 展开更多

关键词 转基因香石竹 抗病 gafp-NPI基因 离体抑菌活性

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天麻抗真菌蛋白(GAFP)的N端序列测定及cDNA基因克隆 被引量：9

4

作者 王义琴 李文彬 +4 位作者 LamHonming 张秀海 陈潜 郭顺星 孙勇如 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第1期10-14,共5页

从新鲜天麻次生块茎中将天麻抗真菌蛋白(GAFP)提纯,然后测得其N端的30个氨基酸,根据氨基酸序列设计了一段30bp的核酸探针,从cDNA文库中筛选到了编码该蛋白的基因,为这一新型蛋白在抗真菌基因工程中的应用奠定了基础。

关键词 天麻 CDNA文库 N端序列 抗真菌蛋白基因

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天麻抗真菌蛋白基因(gafp)转化彩色棉的研究 被引量：18

5

作者 王义琴 陈大军 +8 位作者 危晓薇 吴明刚 王冬梅 姚正培 黄全生 刘丰疆 美丽古利 李仁敬 孙勇如 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2003年第6期703-712,共10页

天麻抗真菌蛋白 (gastrodiaantifungalprotein简称GAFP)是从我国传统中药天麻 (GastrodiaelataBl.)中分离到的一种具有广谱抗真菌活性的蛋白质 ,它对许多植物真菌病包括棉花枯萎病、黄萎病等的致病菌离体具有很强的抑制作用 ,因此 ,在... 天麻抗真菌蛋白 (gastrodiaantifungalprotein简称GAFP)是从我国传统中药天麻 (GastrodiaelataBl.)中分离到的一种具有广谱抗真菌活性的蛋白质 ,它对许多植物真菌病包括棉花枯萎病、黄萎病等的致病菌离体具有很强的抑制作用 ,因此 ,在植物抗真菌病基因工程上有很重要的应用价值。本研究通过花粉管通道法 ,将GAFP的基因gafp转入 3个新疆彩色棉品种中 ,通过田间抗病筛选和分子检测 ,得到了高抗黄萎病的转基因植株 ,两株Southern杂交阳性植株LB_5_8和ZB_1_49对黄萎病表现整株免疫。RT_PCR的结果显示 ,LB_5_8和ZB_1_49中均有gafp的正确转录 ;离体的抑菌实验也表明 ,它们的蛋白粗提物对棉花黄萎病致病菌离体有明显的抑制 ,表明了gafp在转基因植株中的正确表达 ,翻译的产物具有活性。经过进一步选育和扩繁 ,发现转基因彩色棉后代具有稳定的、较强的抗黄萎病能力 ,本研究为通过植物抗病基因工程的方法防治棉花黄萎病提供了一条新的途径。 展开更多

关键词 天麻抗真菌蛋白基因 转化 彩色棉 花粉管通道法 棉花黄萎病

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天麻抗真菌蛋白GAFP-Ⅰ的一级结构和cDNA克隆 被引量：11

6

作者 胡忠 黄清藻 +1 位作者 刘小烛 杨俊波 《云南植物研究》 CSCD 1999年第2期131-138,共8页

天麻抗真菌蛋白ＧＡＦＰ－Ⅰ是从天麻（ＧａｓｔｒｏｄｉａｅｌａｔａＢｌ）顶生球茎分离的１４ｋＤ蛋白，它能强烈抑制腐生真菌菌丝的生长，在天麻限制和防止密环菌（Ａｒｍｉｌａｒｉａｍｅｌｅａ）侵染球茎的防卫机制中起重要作用... 天麻抗真菌蛋白ＧＡＦＰ－Ⅰ是从天麻（ＧａｓｔｒｏｄｉａｅｌａｔａＢｌ）顶生球茎分离的１４ｋＤ蛋白，它能强烈抑制腐生真菌菌丝的生长，在天麻限制和防止密环菌（Ａｒｍｉｌａｒｉａｍｅｌｅａ）侵染球茎的防卫机制中起重要作用。本文报告ＧＡＦＰ－Ⅰ的一级结构和ｃＤＮＡ克隆的核苷酸序列。首先测得Ｎ－末端７个氨基酸序列为ＳＤＲＬＮＳＧ－用以合成一个简并引物，由天麻营养球茎提取ＲＮＡ，通过３′－ＲＡＣＥ技术扩增到一个６００ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，直接克隆到ｐＧＥ－Ｔ载体中测定核苷酸序列。根据ｃＤＮＡ核苷酸序列和用羧肽酶Ａ测得ＧＡＦＰ－Ⅰ的Ｃ－末端为－ＡＳＧ，确认该ｃＤＮＡ含有４２９ｂｐ编码区，它编码一条１２９个氨基酸的ＧＡＦＰ－Ｉ和１４个氨基酸的Ｃ－末端扩展肽。同时，分离和纯化ＧＡＦＰ－Ⅰ经过羟胺裂解和α－糜乳胰蛋白酶消化产生的肽段，经自动Ｅｄｍａｎ降解程序测出它们的氨基酸序列。结果表明，由此测出的ＧＡＦＰ－Ⅰ氨基酸序列和由ｃＤＮＡ核苷酸序列推导出的序列９８４％一致。ＧＡＦＰ－Ⅰ由１２９个氨基酸组成，富含Ａｓｎ（１９）、Ｇｌｙ（１４），２９和５２位间有一对双硫键，计算分子量为１３９５８Ｄａ。ＧＡＦＰ－Ⅰ与雪花莲（Ｇａｌａｎ? 展开更多

关键词 天麻 抗真菌蛋白 蛋白质一级结构 CDNA 克隆

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新疆陆地棉转天麻毒蛋白基因GAFP特性研究 被引量：1

7

作者 沈海涛 王爱英 +1 位作者 李玉霞 祝建波 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期1-8,共8页

本研究利用花粉管通道技术将在天麻中克隆的天麻毒蛋白基因(GAFP)转化棉花,经PCR和RTPCR鉴定,证实得到了5个转基因株系672GAFP-1,672GAFP-2,672GAFP-3,672GAFP-4,672GAFP-5。通过两年在无病田和病圃中连续种植分析转基因植株抗病性、农... 本研究利用花粉管通道技术将在天麻中克隆的天麻毒蛋白基因(GAFP)转化棉花,经PCR和RTPCR鉴定,证实得到了5个转基因株系672GAFP-1,672GAFP-2,672GAFP-3,672GAFP-4,672GAFP-5。通过两年在无病田和病圃中连续种植分析转基因植株抗病性、农艺性状和经济性状的研究,结果表明:外源基因GAFP的导入对棉花农艺性状和经济性状无显著影响;转基因株系672GAFP-1,672GAFP-2,672GAFP-5在病圃中的抗病指数、株高、产量和纤维品质与受体材料672差异显著(P<0.05),产量较对照提高近30%;转基因植株农艺性状和经济性状的各项指标均优于对照,具较强耐枯、黄萎病能力,且能稳定遗传。 展开更多

关键词 天麻抗真菌蛋白 转基因抗病陆地棉 棉花枯萎病 黄萎病

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GAFP基因导入对彩色棉抗病性和农艺及经济性状的影响 被引量：3

8

作者 刘丰疆 刘海峰 +4 位作者 黄芳 李慕春 曹燕燕 罗成 李金枫 《中国农学通报》 CSCD 2006年第11期57-59,共3页

通过对转GAFP基因品系ZB-1-31、ZB-1-49、LB-7-8与原受体品种新彩棉1号、绿9903进行了抗枯、黄萎病性的对比和农艺、经济性状方面的对比研究,结果表明,3个转GAFP基因品系对枯、黄萎病的抗性显著高于受体品种,生育期有所提前,产量均明显... 通过对转GAFP基因品系ZB-1-31、ZB-1-49、LB-7-8与原受体品种新彩棉1号、绿9903进行了抗枯、黄萎病性的对比和农艺、经济性状方面的对比研究,结果表明,3个转GAFP基因品系对枯、黄萎病的抗性显著高于受体品种,生育期有所提前,产量均明显高于受体品种,纤维品质也有不同程度的提高。 展开更多

关键词 gafp基因 彩色棉 抗病性 经济性状

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天麻抗真菌蛋白基因(GAFP)转化彩色棉新品系抗黄、枯萎病性鉴定 被引量：8

9

作者 刘丰疆 马德成 +5 位作者 李仁敬 李卫平 陈大军 姚正培 宋武 李玮 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2004年第4期244-247,共4页

将天麻抗真菌蛋白基因(GastrodiaAntifargalProtein,GAFP)利用花粉管通道法导入彩色棉品种新彩棉1号和新彩棉3号,转化后代经卡那霉素初筛、分子检测、农艺性状选择,培育出16个转基因新品系,对其在人工病圃进行田间黄、枯萎病的抗性鉴定... 将天麻抗真菌蛋白基因(GastrodiaAntifargalProtein,GAFP)利用花粉管通道法导入彩色棉品种新彩棉1号和新彩棉3号,转化后代经卡那霉素初筛、分子检测、农艺性状选择,培育出16个转基因新品系,对其在人工病圃进行田间黄、枯萎病的抗性鉴定,结果表明:参试的转基因品系中LB5007、ZB5020等5个品系既抗黄萎病又抗枯萎病,为兼抗类型;其余11个品系均为抗黄萎病耐枯萎病类型。 展开更多

关键词 天麻抗真菌蛋白基因 彩色棉 黄萎病 枯萎病 抗性鉴定 转基因

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花榈木提取物对慢性不可预知应激小鼠认知损害的影响 被引量：8

10

作者 刘冬 刘顶鼎 +5 位作者 马丽 云雪林 向怡 聂平 曾贵荣 郭建生 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2020年第8期768-779,共12页

认知缺陷是抑郁症的核心症状之一,已成为抑郁症治疗面临的的一大挑战.花榈木为我国南方广泛分布的一种绿色乔木,具有抗抑郁作用.然而,花榈木对认知损害的作用尚未见报道.本研究旨在探讨花榈木提取物对慢性应激引起的认知障碍的影响,通... 认知缺陷是抑郁症的核心症状之一,已成为抑郁症治疗面临的的一大挑战.花榈木为我国南方广泛分布的一种绿色乔木,具有抗抑郁作用.然而,花榈木对认知损害的作用尚未见报道.本研究旨在探讨花榈木提取物对慢性应激引起的认知障碍的影响,通过建立小鼠慢性不可预测轻度应激(CUMS)模型,评价花榈木改善认知功能的作用.认知行为采用新物识别和Morris水迷宫测试,免疫组织化学分析海马组织中GFAP和Aβ蛋白的水平,Western Blotting分析海马组织NLRP3、TNF-α和IL-1β蛋白表达.结果显示,花榈木提取物能明显增加小鼠的物体识别辨别指数,明显减少定位航行小鼠平台潜伏期,增加平台穿越次数.花榈木提取物能显著提高海马组织中5-HT、DA、NE的水平;同时提高应激小鼠海马CA1区GFAP水平,降低Aβ沉积,减少海马区NLRP3、TNF-α和IL-1β的表达.以上数据表明,花榈木提取物能明显改善CUMS小鼠学习记忆障碍,其作用机制与上调GAFP、减少Aβ沉积、缓解炎性有关. 展开更多

关键词 花榈木提取物 慢性不预知应激 NLRP3 gafp AΒ

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树舌发酵浸膏粗多糖对SW1116细胞的生长抑制作用 被引量：2

11

作者 刘小腊 余涛 +2 位作者 宋慧 苏玲 王雪 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期617-619,623,共4页

采用热水浸提树舌发酵浸膏中的水溶性多糖,苯酚—硫酸法测定多糖的含量,MTT法测定GAFP对SW1116细胞的生长抑制率,荧光染色观察细胞的核形变化,流式细胞仪检测细胞周期等方法,研究了树舌发酵浸膏粗多糖(GAFP)体外对人结肠腺癌细胞SW1116... 采用热水浸提树舌发酵浸膏中的水溶性多糖,苯酚—硫酸法测定多糖的含量,MTT法测定GAFP对SW1116细胞的生长抑制率,荧光染色观察细胞的核形变化,流式细胞仪检测细胞周期等方法,研究了树舌发酵浸膏粗多糖(GAFP)体外对人结肠腺癌细胞SW1116的生长抑制作用。结果表明:与正常Vero细胞相比较,GAFP对SW1116细胞的生长抑制具有时间和剂量依赖性;荧光显微镜下观察到经GAFP处理的细胞呈现出凋亡早、晚期的染色质变化;流式细胞仪检测结果显示GAFP能将SW1116细胞阻滞于细胞周期的G2/M期。结论:GAFP通过影响DNA的合成和阻滞细胞周期达到体外抑制SW1116细胞生长的作用。 展开更多

关键词 gafp 苯酚-硫酸法 体外抑瘤 MTT法 细胞周期

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杂交鹅掌楸转双价抗病基因影响因子研究 被引量：3

12

作者 陈志 陈金慧 +2 位作者 李婷婷 吴淳 施季森 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第4期588-592,共5页

本研究利用在固体培养基上长期保存的杂交鹅掌楸胚性愈伤为外植体,对杂交鹅掌楸进行了遗传转化的研究。对于影响转化效果的众多影响因素,本研究主要讨论了乙酰丁香酮、菌液浓度、侵染时间对杂交鹅掌楸转化结果的影响。试验结果表明,在... 本研究利用在固体培养基上长期保存的杂交鹅掌楸胚性愈伤为外植体,对杂交鹅掌楸进行了遗传转化的研究。对于影响转化效果的众多影响因素,本研究主要讨论了乙酰丁香酮、菌液浓度、侵染时间对杂交鹅掌楸转化结果的影响。试验结果表明,在预培养阶段,乙酰丁香酮的使用有利于转化效率的提高,最佳条件时浓度100mg/L,预培养4d。而在共培养阶段,乙酰丁香酮的使用和延长共培养时间并不能显著提高杂交鹅掌楸的遗传转化效率。同时,在侵染时,不同菌液浓度和不同侵染时间对转化结果的影响也无显著的差异。通过PCR检测经过筛选培养获得的阳性植株,初步验证了外源基因已经整合到杂交鹅掌楸基因组中。 展开更多

关键词 杂交鹅掌揪(Liriodendron hybrids) 遗传转化 gafp NP1

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基于HIF-VEGF-Notch通路探讨通脉活血汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠的保护作用 被引量：7

13

作者 李慧 李丹丹 +3 位作者 吴珠 朱丽朋 李和教 王源江 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2021年第17期3740-3745,共6页

目的探讨通脉活血汤通过影响大鼠低氧诱导因子(HIF)-血管内皮生长因子(VEGF)-Notch通路对局灶性脑缺血再灌注损伤(FCIRI)的保护作用。方法将54只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、抑制剂组[HIF-1α抑制剂YC-1,2.5 mg/(kg·d)]... 目的探讨通脉活血汤通过影响大鼠低氧诱导因子(HIF)-血管内皮生长因子(VEGF)-Notch通路对局灶性脑缺血再灌注损伤(FCIRI)的保护作用。方法将54只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、抑制剂组[HIF-1α抑制剂YC-1,2.5 mg/(kg·d)]和通脉活血汤低、中、高剂量组[20、40、80 mg/(kg·d)]。线栓法构建大鼠脑中动脉阻塞(MACO)模型,模拟局灶性脑缺血再灌注。建模后假手术组和模型组腹膜注射2.5 ml/d 5%葡萄糖注射液,抑制剂组和通脉活血汤组分别注射对应剂量YC-1和通脉活血汤。对大鼠神经功能进行评分、检测大鼠脑脊液中VEGF水平、检测冰冻切片中胚胎干细胞关键蛋白(Sox2)和胶质酸性蛋白(GAFP)细胞数、RT-PCR检测HIF-1、VEGF、Notch1 mRNA水平、Western印迹检测HIF-1α、Notch1蛋白水平。结果与假手术组相比,模型组脑组织中Sox2、GFAP染色细胞数显著降低(P<0.05);神经功能评分、脑组织中Notch1、VEGF和HIF-1 mRNA水平、脑脊液中VEGF水平、脑组织中HIF-1α和Notch1蛋白水平显著升高(P<0.05)。与模型组相比,抑制剂组和通脉活血汤低、中、高剂量组脑组织中Sox2、GFAP染色细胞数显著升高(P<0.05),且通脉活血汤各剂量组升高水平呈剂量依赖性(P<0.05);神经功能评分、脑组织中Notch1、VEGF和HIF-1 mRNA、脑脊液中VEGF水平、脑组织中HIF-1α和Notch1蛋白水平显著降低(P<0.05),且通脉活血汤各剂量组降低水平呈剂量依赖性(P<0.05)。与抑制剂组相比,通脉活血汤高剂量组神经功能评分、Sox2、GFAP染色细胞数、脑组织中Notch1、VEGF和HIF-1 mRNA、脑脊液中VEGF水平、脑组织中HIF-1α和Notch1蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论在局灶性脑缺血模型大鼠的治疗过程中,通脉活血汤可能通过影响HIF-VEGF-Notch通路来促进神经干细胞增殖分化,从而起到神经保护的作用。 展开更多

关键词 通脉活血汤 脑缺血再灌注损伤 HIF-VEGF-Notch Sox2/gafp

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视神经星状胶质细胞的培养 被引量：1

14

作者 顾蓓 刘玉琴 +4 位作者 张永鹏 张宏 王春景 苏小玲 董继红 《中国当代医药》 2009年第10期33-35,共3页

目的:探索建立视神经星状胶质细胞培养的最佳方法,观察该细胞体外水解酶表达情况。方法:分别取不同年龄WISTAR大鼠(出生4 d、7 d、成年)的视神经,利用胰蛋白酶加EDTA、胶原酶、木瓜酶、胰蛋白酶加胶原酶等不同方法消化,分别接种在0.2%... 目的:探索建立视神经星状胶质细胞培养的最佳方法,观察该细胞体外水解酶表达情况。方法:分别取不同年龄WISTAR大鼠(出生4 d、7 d、成年)的视神经,利用胰蛋白酶加EDTA、胶原酶、木瓜酶、胰蛋白酶加胶原酶等不同方法消化,分别接种在0.2%明胶、鼠尾胶、多聚赖氨酸包被的培养瓶中,进行原代培养,观察细胞生长状况。利用免疫组化鉴定分离培养的细胞。连续传代观察其衰老情况。利用水解空斑法观察其水解酶表达。结果:几种方法均可见细胞生长,年龄4、7 d大鼠视神经要比成年大鼠视神经胶质细胞培养成功率高,利用胰蛋白酶与胶原酶混合消化要比其他消化方法细胞损失小,速度快,细胞成活率高。培养细胞呈典型星状胶质细胞形态,GAFP呈阳性。常规3 d传代一次,可传代40次。胶质细胞在蛋白膜上可形成明显的水解空斑。结论:利用胰蛋白酶与胶原酶混合消化法,从新生鼠取材,可成功培养视神经星状胶质细胞,体外可传代40代。该细胞在体外可分泌蛋白水解酶。 展开更多

关键词 星状胶质细胞 gafp 大鼠

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盐酸川芎嗪抗大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究 被引量：3

15

作者 丁兴 《甘肃中医》 2008年第9期58-59,共2页

目的:探讨盐酸川芎嗪抗大鼠脑缺血再灌注损伤的机制。方法:采用Longa法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察盐酸川芎嗪对大鼠血清NOS、i NOS的含量,及脑组织GFAP表达的影响。结果:川芎嗪高剂量组和尼莫地平组大鼠血清中NOS和i NOS... 目的:探讨盐酸川芎嗪抗大鼠脑缺血再灌注损伤的机制。方法:采用Longa法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察盐酸川芎嗪对大鼠血清NOS、i NOS的含量,及脑组织GFAP表达的影响。结果:川芎嗪高剂量组和尼莫地平组大鼠血清中NOS和i NOS显著下降(P<0.05),脑组织GFAP表达显著下降(P<0.01)。结论:盐酸川芎嗪有明显抗脑缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与降低NOS尤其是i NOS的含量,抑制AST的过度表达有关。 展开更多

关键词 盐酸川芎嗪 脑缺血再灌注 一氧化氮合酶 gafp

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双价抗病基因植物表达载体构建及在烟草中表达的初步研究 被引量：4

16

作者 陈英 戴咏梅 +2 位作者 黄敏仁 诸葛强 王明庥 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期81-85,共5页

多基因转化是基因工程研究热点之一。本研究应用DNA重组技术,将两个抗病机制不同,抗菌谱较广的抗病基因(天麻抗真菌蛋白GAFP和兔防御素NP1基因)构建在一个植物表达载体pBin35SGAFP-NP1上,两者具有各自的CaMV35S启动子和Nos终止子。通过... 多基因转化是基因工程研究热点之一。本研究应用DNA重组技术,将两个抗病机制不同,抗菌谱较广的抗病基因(天麻抗真菌蛋白GAFP和兔防御素NP1基因)构建在一个植物表达载体pBin35SGAFP-NP1上,两者具有各自的CaMV35S启动子和Nos终止子。通过根癌农杆菌介导,采用叶盘法转化烟草,PCR和PCR-Southern分析证明已将NP1和GAFP基因整合到烟草基因组中。离体抑菌实验表明转基因植株对真菌和细菌表现出一定的抗性。以上结果表明通过该表达载体进行遗传转化可获得含双价抗病基因植物,并能有效表达,提高转基因植物抗病能力。 展开更多

关键词 防御素基因NP1 天麻抗真菌蛋白基因翻肿 双价抗病基因植物表达载体 转基因烟草 抗病性

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天麻中抗真菌蛋白质的诱导和积累 被引量：17

17

作者 胡忠 黄清藻 《云南植物研究》 CSCD 1994年第2期169-177,共9页

前曾报告从天麻（ＧａｓｔｒｏｄｉａｅｌａｔａＢｌ，）中分离出一种对木霉菌丝生长有强抑制作用的蛋白质，命名为天麻抗真菌蛋白，简称ＧＡＦＰ，也称为Ｇａｓｔｒｏｄｉａｎｉｎ。对不同天麻材料来源的ＧＡＦＰ分析表明：ＧＡＦＰ的... 前曾报告从天麻（ＧａｓｔｒｏｄｉａｅｌａｔａＢｌ，）中分离出一种对木霉菌丝生长有强抑制作用的蛋白质，命名为天麻抗真菌蛋白，简称ＧＡＦＰ，也称为Ｇａｓｔｒｏｄｉａｎｉｎ。对不同天麻材料来源的ＧＡＦＰ分析表明：ＧＡＦＰ的相对分子量为１４ｋＤ，等电点可能不同，变动范围８．１—９．３。体外抑菌试验证明ＧＡＦＰ对腐生性真菌如木霉和密环菌等有强抑制活性，半抑制浓度ＩＣ０．５为０．０８ｍｇ／ｍＬ；对寄生性真菌如棉花枯萎病和稻瘟病作用很弱。对球茎生长期中７个阶段ＧＡＦＰ的含量测定和ＧＡＦＰ免疫荧光组织定位观察证明：１．ＧＡＦＰ是营养茎被密环菌侵染诱导而后大量合成的，合成部位可能是大型细胞。２．ＧＡＦＰ由营养茎输送到顶生球茎，积累于皮层细胞中，是皮层细胞的主要蛋白成分。３．营养基衰败后，顶生球茎ＧＡＦＰ的总量下降不多，直至抽苔时转移到花茎中。结果说明ＧＡＦＰ是天麻的一种重要功能蛋白质，是使顶生球茎处于拒菌状态的主要物质。 展开更多

关键词 天麻 抗真菌蛋白 密环菌 诱导

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天麻抗真菌蛋白cDNA克隆及植物表达载体的构建 被引量：1

18

作者 李长福 张守鸿 +1 位作者 葛正龙 范芳 《贵州农业科学》 CAS 2008年第3期10-11,共2页

采用RT-PCR技术扩增出天麻抗真菌蛋白(Gastrodia antifungal protein,GAFP)的cDNA序列,通过pGM-T载体转入大肠杆菌JM109克隆,在培养基上筛选重组质粒酶切鉴定,阳性克隆经限制性内切酶Xba1和Sac1酶切与同样酶切的植物表达载体pBI121连接... 采用RT-PCR技术扩增出天麻抗真菌蛋白(Gastrodia antifungal protein,GAFP)的cDNA序列,通过pGM-T载体转入大肠杆菌JM109克隆,在培养基上筛选重组质粒酶切鉴定,阳性克隆经限制性内切酶Xba1和Sac1酶切与同样酶切的植物表达载体pBI121连接,构建天麻抗真菌蛋白(GAFP)的植物表达载体pBI121-GAFP。结果,天麻抗真菌蛋白(GAFP)的植物表达载体构建成功。 展开更多

关键词 天麻抗真菌蛋白 CDNA克隆 植物表达载体

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两种抗病基因双T-DNA区双元载体的构建 被引量：1

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作者 吴磊 史秀岚 +2 位作者 田巍 刘巧泉 王幼平 《分子植物育种》 CAS CSCD 2010年第5期976-980,共5页

选择标记基因的删除是植物转基因工程中重要的步骤之一,双T-DNA区双元载体转化法以其共整合频率高、删除标记基因效率高的优点在植物遗传转化中应用非常广泛。本文通过构建天麻抗真菌蛋白基因、脂质转移蛋白基因双T-DNA区双元载体,为培... 选择标记基因的删除是植物转基因工程中重要的步骤之一,双T-DNA区双元载体转化法以其共整合频率高、删除标记基因效率高的优点在植物遗传转化中应用非常广泛。本文通过构建天麻抗真菌蛋白基因、脂质转移蛋白基因双T-DNA区双元载体,为培育不含选择标记基因的抗病新材料奠定基础。通过PCR的方法克隆GAFP基因,产物纯化测序确定序列准确后与pSB130-35S载体进行BamHⅠ、SacⅠ双酶切;pCAMBIA2300-LTP、pSB130-35S经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切,酶切产物纯化后连接,连接产物转化大肠杆菌。采用基因特异性引物进行菌液PCR鉴定阳性克隆,重组质粒pSB130-GAFP、pSB130-LTP双酶切产物大小分别为540bp、1200bp,与预期产物大小一致,pSB130-GAFP、pSB130-LTP双T-DNA区双元载体构建成功。载体pSB130-GAFP、pSB130-LTP转化根癌农杆菌后可以直接用于植物的遗传转化。 展开更多

关键词 双元载体 双T-DNA区 天麻抗真菌蛋白基因 脂质转移蛋白基因

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转天麻抗真菌蛋白基因彩色棉新品系抗枯黄萎病研究 被引量：9

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作者 陈大军 简桂良 +3 位作者 李仁敬 张振南 刘丰疆 姚正陪 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第5期673-676,共4页

将天麻抗真菌蛋白基因 (GastrodiaAntifargalProtein ,GAFP)用花粉管通道法转化天然彩色棉主栽品种和高代系 ,转化后代经卡那霉素初筛、分子检测、综合农艺性状选择 ,获得整合了GAFP的彩色棉花新品系。对其进行了室内抗枯萎病性鉴定和... 将天麻抗真菌蛋白基因 (GastrodiaAntifargalProtein ,GAFP)用花粉管通道法转化天然彩色棉主栽品种和高代系 ,转化后代经卡那霉素初筛、分子检测、综合农艺性状选择 ,获得整合了GAFP的彩色棉花新品系。对其进行了室内抗枯萎病性鉴定和田间人工病圃抗黄萎病性鉴定。结果表明 :彩B5 - 8相对病指 4 93,为高抗枯萎病类型 ,彩B5 - 3相对病指 7 75、彩B5 - 9相对病指 8 0 9,为抗枯萎病类型 ;彩B5 - 7枯萎病、黄萎病相对病指分别为 9 95和 19 13,既抗枯萎病又抗黄萎病 ,是一个兼抗类型 ,彩B5 - 2相对病指 19 6 9为抗黄萎病类型。 展开更多

关键词 天然彩色棉 天麻抗真菌蛋白基因 转基因 枯萎病 黄萎病 抗性鉴定

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