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FD耐热逆转录酶的部分酶学性质研究 被引量：4
1
作者 郑佐华 周宗祥 +3 位作者 朱蔚 殷长传 季朝能 毛裕民 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第2期170-174,共5页
ＦＤ耐热逆转录酶（ＦＤ－ＴＲＴ）来自一株栖热杆菌菌株．通过ＲＴ－ＰＣＲ方法，论文对ＦＤ－ＴＲＴ的部分酶学性质进行了研究．ＦＤ耐热逆转录酶能耐受９５℃的高温，最适反应温度在６５～７５℃左右，这时ＲＮＡ的高级结构能解开，... ＦＤ耐热逆转录酶（ＦＤ－ＴＲＴ）来自一株栖热杆菌菌株．通过ＲＴ－ＰＣＲ方法，论文对ＦＤ－ＴＲＴ的部分酶学性质进行了研究．ＦＤ耐热逆转录酶能耐受９５℃的高温，最适反应温度在６５～７５℃左右，这时ＲＮＡ的高级结构能解开，可以提高逆转录反应的效率；同时引物和ＲＮＡ模板识别的专一性强，可大大提高逆转录的特异性．实验表明ＦＤ－ＴＲＴ逆转录反应的最适条件为：２５ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．８，１５ｍｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４，１００μｇ／ｍｌ明胶，５００μｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｓ，２５ｐｍｏｌ逆转录引物，１ｍｍｏｌ／ＬＭｎＣｌ２，２ＵＦＤ耐热逆转录酶，反应在６５～７０℃下进行．在上述条件下，用ＲＴ－ＰＣＲ可检出少于５ｐｇ外周血总ＲＮＡ中特异的α珠蛋白ｍＲＮＡ． 展开更多
关键词 逆转录酶 耐热 逆转录 PCR
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UNcle高通量蛋白稳定系统分析3种反转录酶 被引量：1
2
作者 武瑶 安琳 《分析仪器》 CAS 2022年第2期64-72,共9页
目的:反转录酶的热稳定性是重要的质控参数,利用UNcle高通量蛋白稳定分析仪多种检测功能对反转录酶热稳定性进行表征。方法:比较qRT-PCR方法及UNcle系统对3种反转录酶的热稳定检测,并利用UNcle荧光光谱分析核苷类反转录酶抑制剂去羟肌... 目的:反转录酶的热稳定性是重要的质控参数,利用UNcle高通量蛋白稳定分析仪多种检测功能对反转录酶热稳定性进行表征。方法:比较qRT-PCR方法及UNcle系统对3种反转录酶的热稳定检测,并利用UNcle荧光光谱分析核苷类反转录酶抑制剂去羟肌苷对反转录酶的影响。结果:利用高通量蛋白稳定性分析系统UNcle进行反转录酶熔解温度Tm、聚集起始温度Tagg及蛋白均一度分析。和qRT-PCR检测结果相比,3种反转录酶的热稳定性顺序一致,但各自检测的Tm数值差距较大。比较这两种方法的前处理,UNcle不需要外源添加染料,即没有引入外来变量直接检测,可以更加准确反映反转录酶本身的Tm值。结论:提供了一种新的快速准确表征反转录酶热稳定性的方法,为反转录酶的研发质控提供重要检测依据,并为UNcle在其他蛋白的热稳定分析提供借鉴参考意义。 展开更多
关键词 反转录酶 蛋白热稳定性 核苷类逆转录酶抑制剂 去羟肌苷
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FD耐热逆转录酶介导的逆转录 nestedPCR检测丙型肝炎病毒
3
作者 郑佐华 张丽萍 +3 位作者 赵炜 张炜 陈燃 毛裕民 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期445-447,共3页
目的　为检测丙型肝炎病毒，建立 Ｆ Ｄ 耐热逆转录酶介导的逆转录ｎｅｓｔｅｄ Ｐ Ｃ Ｒ 系统。方法　用该系统对１０８ 例可疑患者的血液进行检测，并与 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法的结果进行比较。结果　实验表明， Ｆ Ｄ 耐热逆转录酶介... 目的　为检测丙型肝炎病毒，建立 Ｆ Ｄ 耐热逆转录酶介导的逆转录ｎｅｓｔｅｄ Ｐ Ｃ Ｒ 系统。方法　用该系统对１０８ 例可疑患者的血液进行检测，并与 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法的结果进行比较。结果　实验表明， Ｆ Ｄ 耐热逆转录酶介导的逆转录ｎｅｓｔｅｄ Ｐ Ｃ Ｒ 比 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检出了更高的阳性率。结论　该系统是一种灵敏、有效、特异的 Ｈ Ｃ Ｖ 检测方法。 展开更多
关键词 fd 耐热逆转录酶 nestedPCR 丙型肝炎病毒
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FD-TRT耐热逆转录酶的特性分析 被引量：3
4
作者 殷长传 颜学恒 +2 位作者 郑佐华 黄啸宇 毛裕民 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期225-228,共4页
从嗜热细菌ＦＤ３００９中克隆并分离纯化得到的耐热逆转录酶（ＦＤ－ＴＲＴ），逆转录反应在６５℃高温下进行，可克服常温逆转录酶的许多缺点，以酵母核糖体ｒＲＮＡ为模板，以与２５５和１８Ｓ ｒＲＮＡ匹配的寡聚脱氧核苷酸为引物... 从嗜热细菌ＦＤ３００９中克隆并分离纯化得到的耐热逆转录酶（ＦＤ－ＴＲＴ），逆转录反应在６５℃高温下进行，可克服常温逆转录酶的许多缺点，以酵母核糖体ｒＲＮＡ为模板，以与２５５和１８Ｓ ｒＲＮＡ匹配的寡聚脱氧核苷酸为引物，探明了ＦＤ－ＴＲＴ的最适反应条件： ２５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ ８．５，２５℃），２５ ｍｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４，２ ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｎＣｌ２，１００ μｇ／ｍｌ明胶．５ ｕｎｉｔ ＲＮａｓｉｎ，２５０ ｍｍｏｌ／Ｌ ４种 ｄＮＴＰ， １μＣｉ３ Ｈ－ｄＣＴＰ， １２ｕｇ ＲＮＡ，２５ ｐｍｏｌ引物，并在此条件下测得 ＦＤ－ＴＲＴ和 Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶逆转录活力与聚合酶活力的相对比值分别为０．０５６，０．００４５． 展开更多
关键词 耐热逆转录酶 fd-TRT DNA 逆转录反应
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