缺失F1L对重组复制缺陷痘苗病毒天坛株在小鼠中免疫原性与免疫保护效果的影响 被引量：1

1

作者 刘士元 任皎 +7 位作者 赵莉 吴依依 刘冠雅 韩一泽 黄保英 王文玲 田厚文 谭文杰 《病毒学报》 北大核心 2025年第2期334-343,共10页

痘苗病毒(Vaccinia virus,VACV)广泛用于疫苗与重组病毒载体。国内拥有自主知识产权的复制缺陷型痘苗病毒天坛株(Non-replicating Tiantan strain Vaccinia virus,NTV)作为新型猴痘疫苗近期已获得临床试验批准。前期研究中,本课题组通... 痘苗病毒(Vaccinia virus,VACV)广泛用于疫苗与重组病毒载体。国内拥有自主知识产权的复制缺陷型痘苗病毒天坛株(Non-replicating Tiantan strain Vaccinia virus,NTV)作为新型猴痘疫苗近期已获得临床试验批准。前期研究中,本课题组通过回插基因C7L获得了重组病毒NTV-C7L(J),然而该重组病毒的免疫原性未得到明显改善,迫切需要进一步改进。本研究利用同源重组技术对NTV-C7L(J)进行了二次基因改造,构建了缺失F1L基因的重组病毒NTV-ΔF1L-C7L(J)。BALB/c小鼠免疫结果表明,105 PFU免疫剂量二次肌肉注射,NTV-ΔF1L-C7L(J)可诱导出较强体液免疫反应和CD8^(+)T细胞反应,其水平明显高于NTV与NTV-C7L(J)免疫组。与2×10^(5) PFU剂量复制型痘苗病毒天坛株(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)组尾部划痕单剂免疫组相比,NTV-ΔF1L-C7L(J)抗体应答低但细胞免疫反应强。初次免疫后第42d采用致死剂量(107 PFU)VACV WR株进行小鼠滴鼻攻毒,NTV-ΔF1L-C7L(J)加强免疫组与VTT单剂免疫组均可提供完全保护,且攻毒后前者小鼠体重保护明显优于后者;但NTV与NTV-C7L(J)免疫组仅呈现部分保护(分别为60%和90%)。研究结果表明∶F1L基因的缺失明显提高了NTV及NTV-C7L(J)的免疫原性与免疫保护效果,且安全性优于VTT。本研究为开发新型痘苗病毒载体及更加安全高效阻断猴痘的疫苗提供了新思路和实验依据。 展开更多

关键词 痘苗病毒 天坛株 复制缺陷 f1l 免疫原性 保护

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2021—2023年安徽省肉羊主产区羊口疮病毒感染情况调查及流行毒株B2L和F1L基因的遗传演化分析

2

作者 张留君 陈佳乐 +7 位作者 冯星 陈威振 邓亚飞 王波 左国林 贺绍君 辛洪雷 刘德义 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第7期697-703,共7页

目的为明确安徽省肉羊主产区羊口疮病毒(ORFV)感染情况及流行毒株的遗传演变特征。方法使用荧光定量PCR(qPCR)对2021—2023年从安徽省主要肉羊养殖地市采集的303份临床样本进行ORFV检测;采用常规PCR扩增阳性样本中ORFV的全长B2L和F1L基... 目的为明确安徽省肉羊主产区羊口疮病毒(ORFV)感染情况及流行毒株的遗传演变特征。方法使用荧光定量PCR(qPCR)对2021—2023年从安徽省主要肉羊养殖地市采集的303份临床样本进行ORFV检测;采用常规PCR扩增阳性样本中ORFV的全长B2L和F1L基因,并通过测序后进行遗传演化分析。结果qPCR检测显示,本次临床样本ORFV总阳性率为48.8%(148/303)。序列多重比对分析显示,本次56株样本毒株B2L基因间DNA和氨基酸序列相似性分别为96.7%~100.0%和97.4%~100.0%。同时,本次56株样本毒株F1L基因间DNA和氨基酸序列相似性分别为95.1%~100.0%和95.0%~100.0%。根据B2L基因DNA序列构建的遗传进化树结果显示,山羊源样本毒株FY-TYA与甘肃人源参考毒株Gansu位于同一小分支,而山羊源样本毒株FY-XQC与国内疫苗参考毒株China Vaccine和国内山羊源参考毒株OV-HLJ-04位于同一小分支。同时,根据F1L基因DNA序列构建的遗传进化树显示,山羊源样本毒株FY-XQA和FY-XQC均与新疆绵羊源参考毒株Xinjiang位于同一小分支。结论安徽省主要肉羊养殖地区ORFV感染较为普遍,且当前流行毒株B2L和F1L基因DNA及氨基酸序列均存在不同程度的遗传变异,其中F1L基因变异程度较大。此外,部分山羊源样本毒株与人源、疫苗及绵羊源参考毒株亲缘关系较近。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 B2L基因 f1l基因 遗传演化分析

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羊口疮病毒的F1L和B2L基因研究现状

3

作者 杨毅 阿安拉木 朵红 《动物医学进展》 北大核心 2025年第10期115-118,共4页

羊传染性脓疱(CE)是由羊传染性脓疱病毒(CEV)或学名羊口疮病毒(ORFV)引起的一种急性接触性人兽共患病。其基因组长约140 kb,编码130多个基因,其中,F1L和B2L基因保守程度高,蛋白免疫原性较好。论文介绍了F1L和B2L基因的研究现状,以期为O... 羊传染性脓疱(CE)是由羊传染性脓疱病毒(CEV)或学名羊口疮病毒(ORFV)引起的一种急性接触性人兽共患病。其基因组长约140 kb,编码130多个基因,其中,F1L和B2L基因保守程度高,蛋白免疫原性较好。论文介绍了F1L和B2L基因的研究现状,以期为ORFV的检测和新型疫苗的研制提供新的思路。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 f1l基因 B2L基因

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羊口疮病毒F1L基因真核表达载体的构建及鉴定

4

作者 蒋尊 安红艳 +3 位作者 孙创奇 葛佳仪 梁倩 鲜思美 《贵州畜牧兽医》 2024年第1期57-59,共3页

为构建羊口疮病毒F1L基因的真核表达载体,以ORFV-DZ分离株基因组作为模板,PCR特异性扩增F1L基因,扩增产物与pEGFP-N1质粒连接构建重组质粒pEGFP-F1L,经测序和酶切验证的阳性重组子转染HEK-293t细胞进行表达,通过荧光显微镜观察和Western... 为构建羊口疮病毒F1L基因的真核表达载体,以ORFV-DZ分离株基因组作为模板,PCR特异性扩增F1L基因,扩增产物与pEGFP-N1质粒连接构建重组质粒pEGFP-F1L,经测序和酶切验证的阳性重组子转染HEK-293t细胞进行表达,通过荧光显微镜观察和Western blotting对融合蛋白的表达进行鉴定。结果:PCR产物长度为1 029 bp,与F1L基因片段长度相符;阳性重组质粒pEGFP-F1L转染HEK-293t细胞可观察到明显绿色荧光,表达的融合蛋白大小约65 ku,与预期相符。结论:试验成功构建了pEGFP-F1L真核表达载体。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 f1l基因 真核表达载体

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羊口疮病毒榆林株B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统的表达 被引量：4

5

作者 冯平 李云章 +2 位作者 孙丰廷 屈雷 闫海龙 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第6期1-8,共8页

【目的】克隆分析羊口疮病毒(ORFV)榆林株(ORFV-Yulin)的F1L基因序列,通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因,测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因(r ... 【目的】克隆分析羊口疮病毒(ORFV)榆林株(ORFV-Yulin)的F1L基因序列,通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因,测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因(r B2L)和F1L融合基因(c F1L),利用碱基linker连接,通过重叠PCR方法扩增获得ORFV r B2L-linker-c F1L重组基因(r B2Lc F1L),将其与昆虫杆状病毒表达载体pBac5连接构建表达载体pBac-rB2LcF1L。将pBac-rB2LcF1L包装出杆状病毒,侵染sf9细胞,通过SDS-PAGE、Western-blotting以及质谱鉴定等方法验证目的基因r B2Lc F1L的表达。【结果】克隆获得了1 029bp的F1L全长基因,该基因高度保守,与FJ-MH2015株的序列相似性最高,核苷酸和氨基酸的相似性分别为99.0%和99.4%。系统进化分析表明,ORFV-Yulin株与XP(KU199840.1)、FJ-MH2015(KM675409.1)以及Shanxi(HQ221964.1)株同处于一个分支。PCR扩增获得了855bp的c F1L基因、1 180bp的r B2L基因及1 983bp的r B2Lc F1L基因,成功构建了pBacrB2LcF1L载体,并包装出相应的杆状病毒。B2L和F1L串联基因通过昆虫杆状病毒表达系统获得成功表达,表达产物的分子质量为80ku,且有部分重组蛋白能分泌到细胞培养基中。【结论】ORFV-Yulin株的B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统表达成功。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 f1l基因 f1l+B2L串联表达 昆虫杆状病毒 基因表达

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表达ORFV F1L基因的重组山羊痘病毒的构建及初步鉴定 被引量：3

6

作者 张倩 王震 +4 位作者 倪伟 付强 李瑞芳 张辉 陈创夫 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期68-72,共5页

目的:研制安全有效的预防羊口疮的重组山羊痘病毒活载体疫苗。方法:采用PCR技术扩增ORFV的F1L基因,将其与载体pUC-TK12连接,同时酶切插入LacZ报告基因和Pb56双向启动子,构建重组转移载体pUC-TK12-LacZ-F1L,将其转染至已感染山羊痘病毒... 目的:研制安全有效的预防羊口疮的重组山羊痘病毒活载体疫苗。方法:采用PCR技术扩增ORFV的F1L基因,将其与载体pUC-TK12连接,同时酶切插入LacZ报告基因和Pb56双向启动子,构建重组转移载体pUC-TK12-LacZ-F1L,将其转染至已感染山羊痘病毒疫苗株的BHK-21细胞,进行同源重组。通过蓝白斑筛选,收获重组病毒并进行PCR初步鉴定。结果:获得了全长为1 023bp的F1L基因,测序结果与GenBank公布的标准序列同源性为99.9%。构建了重组转移载体pTL-F1L,转染BHK-21细胞后,获得了重组山羊痘病毒蓝色蚀斑。结论:该研究成功获得了含有羊传染性脓疱病毒F1L基因的重组山羊痘病毒疫苗候选株rGPV-F1L,为羊传染性脓疱病基因工程活载体疫苗的研制奠定基础。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒(ORFV) f1l基因 山羊痘病毒 rGPV—f1l

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羊口疮病毒F1L蛋白二级结构分析与表位预测 被引量：21

7

作者 王光祥 尚佑军 +3 位作者 吕占禄 张克山 田宏 刘湘涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1185-1190,共6页

目的利用软件预测羊口疮病毒(ORFV)F1L蛋白的二级结构和细胞表位。方法利用SOPMA服务器预测ORFV F1L蛋白的二级结构,以DNAStar软件单参数(二级结构、亲水性、可及性、柔韧性及抗原性)预测结果为基础,通过二级结构预测初步筛选,并以ABCp... 目的利用软件预测羊口疮病毒(ORFV)F1L蛋白的二级结构和细胞表位。方法利用SOPMA服务器预测ORFV F1L蛋白的二级结构,以DNAStar软件单参数(二级结构、亲水性、可及性、柔韧性及抗原性)预测结果为基础,通过二级结构预测初步筛选,并以ABCpred方案作为最终验证,预测羊口疮病毒(ORFV)F1L蛋白的B细胞表位;运用神经网络+量化矩阵法(ANNs+QM法)预测ORFV F1L蛋白的CTL细胞表位;使用MHC-II类分子结合肽在线程序预测ORFV F1L蛋白的Th细胞表位。结果 ORFV F1L蛋白含有α-螺旋34.71%、β-片层18.82%、β-转角5.88%、无规则卷曲40.59%;没有信号肽,可能存在7个B细胞表位,2个CTL表位,3个Th细胞表位。结论该研究结果将为建立ORFV诊断方法、制备单克隆抗体及合成肽疫苗提供理论依据。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 f1l基因 二级结构 细胞表位 预测

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羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒构建及其在MDBK细胞中的表达 被引量：17

8

作者 刘嫒 冯将 +3 位作者 鲜思美 刘宗胜 李鹏飞 罗代兵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1124-1128,共5页

目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和... 目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和测序鉴定,将鉴定正确的真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L转染至MDBK细胞,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)检测目的基因表达。结果双酶切鉴定和序列测定表明真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L构建成功,RT-PCR和IFA同时验证目的基因在MDBK细胞浆中能瞬时表达。结论本试验构建成功的真核表达质粒为下一步羊口疮病毒核酸疫苗研究奠定基础。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 f1l基因 B2L基因 真核表达

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羊IL-2和OrfV-F1L基因疫苗联合免疫小鼠的免疫应答研究 被引量：10

9

作者 李婷 包细明 +7 位作者 鲜思美 张益 饶体宇 吴伯梅 张友 刘嫒 李鹏飞 闵德省 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期924-931,共8页

为评价pVAX1-IL-2和pVAX1-F1L联合免疫小鼠诱导的体液和细胞免疫应答,分别将pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2、pVAX1-F1L、pVAX1空载体、PBS对照组通过后腿肌肉注射的方式免疫KM系小鼠,采用ELISA方法检测免疫小鼠血清中OrfV特异性抗体以及Th1型(I... 为评价pVAX1-IL-2和pVAX1-F1L联合免疫小鼠诱导的体液和细胞免疫应答,分别将pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2、pVAX1-F1L、pVAX1空载体、PBS对照组通过后腿肌肉注射的方式免疫KM系小鼠,采用ELISA方法检测免疫小鼠血清中OrfV特异性抗体以及Th1型(IL-2、IFN-γ和TNF-α)、Th2型(IL-4、IL-6和IL-10)细胞因子;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应。结果显示,pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体效价及IL-2、IFN-γ和TNF-α细胞因子水平均显著高于pVAX1-F1L组,与pVAX1组、PBS组相比差异极显著(P<0.01);pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清IL-4、IL-6和IL-10细胞因子水平均显著高于pVAX1组和PBS组,与pVAX1-F1L组相比差异不显著(P>0.05);且pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2免疫组的脾淋巴细胞增殖水平高于pVAX1-F1L组、pVAX1组和PBS组(P<0.01)。结果表明,pVAX1-IL-2和pVAX1-F1L联合免疫小鼠,能诱导小鼠产生OrfV特异性体液免疫和细胞免疫,pVAX1-IL-2诱导的免疫反应以细胞免疫应答为主,且能促进Th1型细胞因子的分泌。 展开更多

关键词 IL-2 OrfV f1l基因 核酸疫苗 免疫应答

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羊口疮病毒的分离鉴定及F1L基因的遗传变异分析 被引量：12

10

作者 曾显成 陈珍珍 +6 位作者 林心宇 程洁 张晨凯 刘平 池雪林 罗树红 修金生 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期860-866,共7页

采用羊胚胎鼻甲(OFTu)细胞对湖北某山羊养殖场疑似羊口疮(Orf)的病羊唇部痂皮组织进行病毒分离,通过病理组织学、电镜形态观察及PCR试验等方法对分离的病毒进行鉴定,证实分离毒株为羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),命名为HuB13。分析HuB13 ... 采用羊胚胎鼻甲(OFTu)细胞对湖北某山羊养殖场疑似羊口疮(Orf)的病羊唇部痂皮组织进行病毒分离,通过病理组织学、电镜形态观察及PCR试验等方法对分离的病毒进行鉴定,证实分离毒株为羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),命名为HuB13。分析HuB13 F1L基因序列,结果F1L基因全长为1 017 bp,编码339个氨基酸,G+C含量为64.70%。遗传进化树显示,HuB13与8株山羊和6株绵羊来源的ORFV同源性分别为97.50%～99.41%和97.15%～97.35%,与牛痘病毒(PCPV)和牛丘疹性皮炎病毒(BPSV)同源性分别为88.0%～88.69%和75.15%。Bioedit软件分析发现宿主为山羊和绵羊的ORFV存在1个高变异区(148～171 bp)和6个特异性位点G186C、T187G、A541G、A765G、G856A和G982A。研究结果为开发宿主特异的Orf疫苗及致病机理研究提供参考依据。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 分离鉴定 电镜观察 f1l基因 遗传变异

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羊口疮病毒F1L基因的克隆及其B细胞表位预测 被引量：6

11

作者 吉艳红 尚佑军 +3 位作者 王光祥 尹双辉 刘艳红 刘湘涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1101-1105,共5页

为了研究羊口疮病毒(ORFV)F1L基因,以该病毒基因组DNA为模板,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增得到1011bp的F1L基因,将其插入pMD18-TEasy克隆载体,构建了F1L基因克隆重组质粒;再将该基因片段插入pGEX-6P-1表达载体,通过PCR、限制性内切酶双... 为了研究羊口疮病毒(ORFV)F1L基因,以该病毒基因组DNA为模板,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增得到1011bp的F1L基因,将其插入pMD18-TEasy克隆载体,构建了F1L基因克隆重组质粒;再将该基因片段插入pGEX-6P-1表达载体,通过PCR、限制性内切酶双酶切和测序鉴定,得到F1L基因插入方向和读码框结构均正确的阳性质粒,表明,成功构建了羊口疮病毒F1L基因的重组表达载体。通过对F1L基因序列进行生物信息学分析,预测发现F1L蛋白亲水、无信号肽,B细胞表位主要位于第4～8位、第16～22位、第32～53位、第59～73位、第82～99位和第123～133位氨基酸。这将为建立ORFV诊断方法、制备单克隆抗体及合成肽疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 f1l基因 克隆 亲水性 信号肽 B细胞表位

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羊口疮病毒农安分离株的分离鉴定及Orf059(F1L)基因的序列分析 被引量：8

12

作者 苏高莉 赵魁 +7 位作者 孙秀萍 何叶 周平 潘伟 包英夫 李吉达 宋德光 高丰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期4-8,共5页

利用初生胎羊鼻甲骨(Primary ovine fetal turbinate,OFTu)细胞从送检的疑似"口疮"症状的病羊唇部痂皮中分离获得1株病毒,用PCR检测、电镜负染观察及理化性质测定等方法对该分离株病毒进行鉴定,证实该分离株为羊传染性脓疱病... 利用初生胎羊鼻甲骨(Primary ovine fetal turbinate,OFTu)细胞从送检的疑似"口疮"症状的病羊唇部痂皮中分离获得1株病毒,用PCR检测、电镜负染观察及理化性质测定等方法对该分离株病毒进行鉴定,证实该分离株为羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV),命名为(Orf virus Jilin-Nongan,ORFV JL-NA株)。对ORFV JL-NA分离株Orf059(F1L)基因进行克隆、测序并对测序结果进行序列分析。结果显示,获得的ORFV JL-NA分离株Orf059(F1L)基因序列长为994bp,编码329个氨基酸,与ORFV-D1701株、ORFV-Jilin株、ORFV-NZ2株、ORFV-20株、ORFV-7株、ORFV-C2株、ORFV-IA82株、ORFV-SA00株、ORFV-mi90株、ORFV-torino株、ORFV-Shanxi株核苷酸序列同源性分别为96.4%、97.3%、99.1%、98.7%、99.0%、97.5%、98.4%、97.2%、97.4%、96.9%和96.8%。遗传进化树结果显示,ORFV JL-NA分离株与意大利ORFV-7毒株的亲缘关系较近,表明不同地区分离株的Orf059(F1L)基因差异不大。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 分离鉴定 Orf059(f1l)基因 序列分析

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羊口疮病毒重庆株F1L基因克隆与生物信息学分析 被引量：7

13

作者 李鹏飞 冯将 +4 位作者 刘嫒 包细明 张益 李婷 鲜思美 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1281-1288,共8页

旨在分析OrfV-CQ株F1L基因的分子特点,预测其编码蛋白的生物学功能。对OrfV-CQ株F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,利用生物信息学相关软件进行序列分析并对其编码蛋白的二级结构、B细胞表位、T细胞表位、保守结构域、跨膜结构域和... 旨在分析OrfV-CQ株F1L基因的分子特点,预测其编码蛋白的生物学功能。对OrfV-CQ株F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,利用生物信息学相关软件进行序列分析并对其编码蛋白的二级结构、B细胞表位、T细胞表位、保守结构域、跨膜结构域和信号肽进行预测。结果表明,OrfV-CQ株F1L基因长1 023bp,编码340个氨基酸,与Shanxi株F1L基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.4%和95.0%。OrfV-CQ株F1L基因编码蛋白的α-螺旋、β-片层、β-转角、无规则卷曲分别为11.21%、10.3%、2.73%、75.76%;可能存在5个B细胞优势抗原表位,3个CTL表位,4个Th细胞表位,无跨膜结构域和信号肽。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 f1l基因 克隆 生物信息学分析

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1株长春地区羊传染性脓疱病毒的分离鉴定及F1L基因的克隆与序列分析 被引量：4

14

作者 赵魁 高丰 +6 位作者 贺文琦 刘云志 邵洪泽 程荣华 张希牧 赵亚昕 宋德光 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期931-935,共5页

利用MDBK细胞从长春郊区一养羊户送检的出现典型"口疮"症状的病羊唇部痂皮中分离获得1株病毒,通过电镜观察、理化学测定、PCR检测、动物回归试验、间接免疫荧光(IFA)及病理组织学观察等方法对该株病毒进行了系统鉴定,证实该... 利用MDBK细胞从长春郊区一养羊户送检的出现典型"口疮"症状的病羊唇部痂皮中分离获得1株病毒,通过电镜观察、理化学测定、PCR检测、动物回归试验、间接免疫荧光(IFA)及病理组织学观察等方法对该株病毒进行了系统鉴定,证实该分离株为羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV),命名为ORFV-cc。参照GenBank中ORFVF1L基因的核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,成功地对ORFV-cc株F1L基因进行克隆、测序,并推导出其氨基酸序列。序列分析表明,获得的ORFV-cc分离株F1L基因片段长987bp,编码328个氨基酸,与ORFV-NZ2,ORFV-7,ORFV-20,ORFV-C2,ORFV-mi-90,ORFV-Torino株核苷酸序列同源性分别为97.5%,98.3%,97.9%,98.5%,98.4%,97.5%;氨基酸序列同源性分别为97.2%,97.2%,97.5%,98.8%,98.8%,97.9%。系统发育进化树结果表明,ORFV-cc分离株与参考毒株ORFV-C2和ORFV-mi-90的亲缘关系较近,表明不同地区分离毒株的F1L基因差异不大。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 分离鉴定 f1l基因 序列分析

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重庆地区羊口疮病毒的分离鉴定及F1L基因的原核表达 被引量：7

15

作者 杨钰 冯杰 +5 位作者 刘嫒 张素辉 许国洋 冯将 刘宗胜 鲜思美 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期1396-1401,共6页

本试验旨在对重庆地区羊口疮病毒(ORFV)进行分离培养及鉴定,并研究其F1L基因序列在大肠杆菌中的表达情况。利用MDBK细胞对疑似ORFV感染的羔羊痂皮中的病毒进行分离培养;对F1L基因序列进行PCR扩增,引入限制性内切酶NotⅠ和EcoRⅠ,构建重... 本试验旨在对重庆地区羊口疮病毒(ORFV)进行分离培养及鉴定,并研究其F1L基因序列在大肠杆菌中的表达情况。利用MDBK细胞对疑似ORFV感染的羔羊痂皮中的病毒进行分离培养;对F1L基因序列进行PCR扩增,引入限制性内切酶NotⅠ和EcoRⅠ,构建重组质粒pET-32a-F1L,转化至大肠杆菌BL21菌株后,对阳性菌株进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。结果表明,所获得的毒株为ORFV,其F1L基因在大肠杆菌中的表达产物大小约为57.4ku,主要以包涵体形式存在,5h为最佳诱导表达时间,并具有良好的反应原性。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 分离鉴定 f1l基因 原核表达

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羊传染性脓疱病毒新疆流行株F1L基因克隆及表达 被引量：5

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作者 李瑞芳 乔军 +1 位作者 张辉 陈创夫 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期13-16,共4页

目的:为了探讨F1L重组蛋白作为羊传染性脓疱病毒亚单位疫苗的可行性。方法:以分离出羊传染性脓疱病毒ORFV-shz分离株为模板,扩增F1L基因片段,并将其克隆至pMD18-T载体中进行测序。构建原核表达载体pET-32a-F1L,转化至大肠埃希菌BL21,用S... 目的:为了探讨F1L重组蛋白作为羊传染性脓疱病毒亚单位疫苗的可行性。方法:以分离出羊传染性脓疱病毒ORFV-shz分离株为模板,扩增F1L基因片段,并将其克隆至pMD18-T载体中进行测序。构建原核表达载体pET-32a-F1L,转化至大肠埃希菌BL21,用SDS-PAGE及Western blot检测目的蛋白的表达情况及其反应原性。结果:PCR扩增出F1L基因全长1023bp,共编码340个氨基酸;推导的氨基酸序列中第1～70位氨基酸构成信号肽序列,第285～313位氨基酸为跨膜区。SDS-PAGE分析表明获得了约57.4kDa的融合蛋白,在Western-blotting检测中,融合蛋白可与羊传染性脓疱病毒阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。结论:成功构建F1L基因的原核表达载体,为研究新疆地区羊传染性脓疱的防治及疫苗开发提供了科学依据。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 f1l基因 序列分析 原核表达 反应原性

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羊口疮病毒B2L、F1L基因融合真核表达质粒诱导小鼠的免疫应答及IL-2对其作用影响的研究 被引量：3

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作者 鲜思美 张友 +7 位作者 李婷 杨倩 饶体宇 吴伯梅 包涛涛 闵德省 包细明 张益 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期168-174,共7页

为评价羊口疮病毒(OrfV)B2L、F1L基因融合真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L免疫小鼠诱导的体液和细胞免疫应答及IL-2对其免疫作用的影响。本研究将构建的pVAX1-B2L-F1L真核质粒转染MDBK细胞后,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)检测B2L-F1L... 为评价羊口疮病毒(OrfV)B2L、F1L基因融合真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L免疫小鼠诱导的体液和细胞免疫应答及IL-2对其免疫作用的影响。本研究将构建的pVAX1-B2L-F1L真核质粒转染MDBK细胞后,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)检测B2L-F1L融合基因在MDBK细胞中的表达;将pVAX1-B2L-F1L、pVAX1-B2L-F1L+pVAX1-IL-2、pVAX1空载体、生理盐水对照组KM系小鼠通过后腿肌肉注射的方式免疫,采用ELISA方法检测免疫小鼠血清中OrfV特异性抗体以及Th1型(IL-2、IFN-γ)、Th2型(IL-4、IL-6)细胞因子;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应。结果显示,pVAX1-B2L-F1L重组质粒能够在MDBK细胞中表达;pVAX1-B2L-F1L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体及IL-2和IFN-γ水平均显著高于pVAX1-B2L-F1L组;该联合免疫组小鼠血清IL-4、IL-6细胞因子水平与pVAX1-B2L-F1L组相比差异不显著(p>0.05);该联合免疫组小鼠的脾淋巴细胞增殖水平高于pVAX1-B2L-F1L组(p<0.05)。由此表明,pVAX1-B2L-F1L能够诱导小鼠产生OrfV特异性体液免疫和细胞免疫应答,联合pVAX1-IL-2诱导的免疫反应以细胞免疫应答为主,且能够促进Th1型细胞因子的分泌。本研究为OrfV基因工程疫苗的研制提供了参考依据。 展开更多

关键词 OrfV B2L基因 f1l基因 IL-2 融合表达 免疫应答

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羊口疮病毒疫苗株和野毒株F1L基因的比较分析 被引量：3

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作者 王文莉 魏楠楠 +5 位作者 徐守兴 卢炳洲 张大俊 张克山 郑海学 刘湘涛 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期83-87,共5页

羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起的人兽共患传染病,ORFV F1L基因编码肝素结合蛋白。为比较分析ORFV疫苗株和野毒株编码的F1L基因的特征,本试验对疫苗株和野毒株的F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,并应用生物信息学... 羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起的人兽共患传染病,ORFV F1L基因编码肝素结合蛋白。为比较分析ORFV疫苗株和野毒株编码的F1L基因的特征,本试验对疫苗株和野毒株的F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,并应用生物信息学相关软件及方法,对两者的F1L基因在核酸水平和氨基酸水平的变异情况及其二、三级蛋白结构变化情况进行了比较分析。结果显示,此次测定的ORFV疫苗株与野毒株F1L基因核苷酸序列相似性为95.9%,氨基酸序列相似性为94.5%。本研究结果为揭示ORFV异源宿主致弱的机制积累了资料。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 疫苗株 野毒株 f1l基因

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羊口疮病毒新疆野毒株SHZ1 B2L和F1L基因的克隆及遗传进化分析 被引量：4

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作者 杨海波 贺志昊 +5 位作者 刘昱成 彭叶龙 王国超 孟庆玲 乔军 陈创夫 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第3期323-327,共5页

为了研究羊口疮病毒(ORFv)新疆野毒株的遗传进化情况,参照GenBank公布的ORFv B2L和F1L基因序列,设计特异性引物,对ORFv SHZ1新疆野毒株B2L和F1L基因进行PCR扩增,克隆、测序后进行遗传进化分析。结果表明:新疆野毒株SHZ1与GenBank公布的... 为了研究羊口疮病毒(ORFv)新疆野毒株的遗传进化情况,参照GenBank公布的ORFv B2L和F1L基因序列,设计特异性引物,对ORFv SHZ1新疆野毒株B2L和F1L基因进行PCR扩增,克隆、测序后进行遗传进化分析。结果表明:新疆野毒株SHZ1与GenBank公布的不同地域的17个流行株相比,B2L基因核苷酸同源性为97.28%～98.86%,推导氨基酸同源性为88.65%～90.50%;F1L基因核苷酸同源性为94.56%～97.07%,推导氨基酸同源性为93.82%～95.88%。基于B2L基因的遗传进化树分析发现,SHZ1株B2L基因与我国现用疫苗株B2L基因亲缘关系较近;而基于F1L基因的遗传进化树显示,SHZ1株与意大利分离株的亲缘关系最近。本研究提示ORFv SHZ1株可能是国外流行株与疫苗株重组后产生的一个变异株。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 新疆野毒株SHZ1 B2L基因 f1l基因 遗传进化分析

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羊传染性脓疱病毒内蒙分离株F1L基因的克隆与序列分析 被引量：7

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作者 王辉 赵晓军 +1 位作者 易建刚 申之义 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第6期26-27,共2页

本试验通过对羊传染性脓疱病毒内蒙分离株(OV/nm-05)进行总DNA提取,参考GeneBank中OrfVirus(Strain NZ2)株F1L基因序列设计一对引物,应用PCR技术特异性地扩增出该毒株的F1L基因的片段,并将其克隆到pGEM-Teasy载体后进行测序,得到该病毒... 本试验通过对羊传染性脓疱病毒内蒙分离株(OV/nm-05)进行总DNA提取,参考GeneBank中OrfVirus(Strain NZ2)株F1L基因序列设计一对引物,应用PCR技术特异性地扩增出该毒株的F1L基因的片段,并将其克隆到pGEM-Teasy载体后进行测序,得到该病毒F1L基因序列。应用计算机软件将测定序列与参考毒株OV/7、Strain NZ2、OV/C2、OV/mi-90、OV/Torino、OV/2的F1L基因序列进行比较。结果表明羊传染性脓疱病毒内蒙分离株与Strain NZ2同原性最高,达99.1%,与OV/Torino最低,但也为96.3%。说明羊传染性脓疱病毒内蒙分离株F1L基因与其他参考毒株之间差异不大。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 f1l基因 PCR 序列分析

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