呼吸道合胞病毒融合前F蛋白双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立及验证

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作者 李海巍 黄陆霞 +1 位作者 李智华 李倩倩 《中国医药生物技术》 2025年第5期515-521,共7页

目的建立一种基于酶联免疫吸附技术(ELISA)并能简便、快速对呼吸道合胞病毒(RSV)融合前F蛋白(preF)进行定量检测的方法。方法利用HEK293悬浮细胞表达7种针对RSV F蛋白不同表位的单克隆抗体(D25、palivizumab、101F、MED18897、AM22、AM1... 目的建立一种基于酶联免疫吸附技术(ELISA)并能简便、快速对呼吸道合胞病毒(RSV)融合前F蛋白(preF)进行定量检测的方法。方法利用HEK293悬浮细胞表达7种针对RSV F蛋白不同表位的单克隆抗体(D25、palivizumab、101F、MED18897、AM22、AM14、motavizumab)及preF、融合后F蛋白(postF)。根据7种单克隆抗体对preF、post F结合能力的不同,将可同时识别preF、post F抗体作为包被抗体,特异性识别preF抗体作为酶标抗体,选择信噪比最大的组别建立针对preF的双抗体夹心ELISA检测及定量方法。结果本研究建立的以motavizumab作为包被抗体,D25作为酶标抗体的双抗体夹心ELISA方法可特异性识别RSV preF并对其定量,并且该方法具有良好的特异性和灵敏度,其检测灵敏度为7.8 ng/mL、线性范围为7.8 ng/mL~0.5μg/m L,r^(2)为0.9932,同一样本3次重复检测结果的CV值为0.15%~6.86%。结论motavizumab作为包被抗体,D25作为酶标抗体的双抗体夹心ELISA方法特异性好、灵敏度高、稳定性佳,可用于RSV疫苗产品及前期研究样品中preF抗原含量测定,为RSV疫苗的研制及工艺开发奠定基础。 展开更多

关键词 呼吸道合胞病毒 融合前F蛋白 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA 抗原定量

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日本血吸虫病常用诊断方法现场查病效果的评估 被引量：61

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作者 许静 陈年高 +6 位作者 冯婷 王恩木 吴晓华 陈红根 汪天平 周晓农 郑江 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期175-179,共5页

目的评估几种常用血吸虫病诊断方法现场查病的效果。方法2005年11月,选取江西省鄱阳湖沿岸3个血吸虫病流行村的6～65岁居民为调查对象,用改良加藤厚涂片法(Kato-Katz法,3张涂片)和尼龙绢集卵孵化法进行病原学检测的同时,分别用胶体染料... 目的评估几种常用血吸虫病诊断方法现场查病的效果。方法2005年11月,选取江西省鄱阳湖沿岸3个血吸虫病流行村的6～65岁居民为调查对象,用改良加藤厚涂片法(Kato-Katz法,3张涂片)和尼龙绢集卵孵化法进行病原学检测的同时,分别用胶体染料试纸条法(DDIA)、快速酶联免疫吸附试验(F-ELISA)及2种间接红细胞凝集试验(IHA-A和IHA-B)进行血清学检测,以评价该几种检测方法的效果。结果3村共检测居民1864人,平均粪检阳性率为9.7%。改良加藤法在血吸虫病中度、重度流行区的漏检率相对稳定,为20.0%～27.8%;尼龙绢集卵孵化法的漏检率在每克粪便虫卵数(EPG)>100时相对稳定(约25%)。DDIA、F-ELISA、IHA-A和IHA-B的平均阳性率分别为47.8%、50.0%、66.3%和40.1%。以病原学检测结果为金标准,DDIA、F-ELISA、IHA-A和IHA-B的敏感性分别为75.3%、65.8%、85.6%和76.0%;特异性为55.1%、51.7%、35.7%和63.6%。与其他几种免疫血清学诊断方法相比,IHA-B试剂的特异性、Youden指数、阳性似然比及粪检符合率最高。DDIA法与IHA-B法的符合率最高(77.3%),而F-ELISA和IHA-A的符合率最低(61.5%)。结论在血吸虫病中、重度流行区,改良加藤法虫卵检出率和稳定性均优于尼龙绢集卵孵化法;IHA-A的敏感性最高,IHA-B的4个指标最高,具有较高的现场使用价值,但需进一步提高其敏感性。 展开更多

关键词 日本血吸虫病 改良加藤厚涂片法 尼龙绢集卵孵化法 胶体染料试纸条法(DDIA) f-elisa 间接红细胞凝集试验(IHA)

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日本血吸虫快速酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒的应用研究 被引量：4

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作者 张顺科 曾宪芳 +3 位作者 易新元 李忠杰 汪世平 曾庆仁 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2001年第2期79-81,共3页

目的　探讨日本血吸虫快速酶联免疫吸附试验 (F- EL ISA )抗体检测试剂盒检测日本血吸虫病的特异性、敏感性及与其他寄生虫病的交叉反应。方法　采用 F- EL ISA法检测日本血吸虫急性、慢性及晚期病人血清中抗 SEA抗体和健康人、并殖吸... 目的　探讨日本血吸虫快速酶联免疫吸附试验 (F- EL ISA )抗体检测试剂盒检测日本血吸虫病的特异性、敏感性及与其他寄生虫病的交叉反应。方法　采用 F- EL ISA法检测日本血吸虫急性、慢性及晚期病人血清中抗 SEA抗体和健康人、并殖吸虫、肝吸虫、囊虫及旋毛虫病患者血清中的交叉抗体。结果　检测急性、慢性及晚期血吸虫病人的敏感性分别为 10 0 %、95 .19%和 77.78% ,检测正常人的特异性为 98.46 % ,与并殖吸虫、肝吸虫、囊虫及旋毛虫病人的交叉反应率分别为11.6 3%、7.5 5 %、0和 13.33%。结论　 F- EL ISA检测日本血吸虫病具有敏感性高、特异性强、快速简便等优点 。 展开更多

关键词 日本血吸虫 f-elisa 抗体 检测 f-elisa

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胶体金免疫渗滤法检测日本血吸虫病血清抗体的研究 被引量：5

4

作者 许静 严自助 +7 位作者 张瑞鉴 冯婷 王强 钱翠珍 吴晓华 朱丹 郭家钢 周晓农 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期146-147,155,共3页

应用建立的胶体金免疫渗滤法检测日本血吸虫病血清抗体,并以快速酶联免疫吸附试验(F-ELISA)方法检测作平行对照。现场和实验室试验表明,胶体金渗滤法与F-ELISA方法在敏感度和特异度的差异无统计学意义(P>0.05),两法具有较高的一致性... 应用建立的胶体金免疫渗滤法检测日本血吸虫病血清抗体,并以快速酶联免疫吸附试验(F-ELISA)方法检测作平行对照。现场和实验室试验表明,胶体金渗滤法与F-ELISA方法在敏感度和特异度的差异无统计学意义(P>0.05),两法具有较高的一致性。但胶体金免疫渗滤法操作简便快速,无特殊要求,在临床和现场防治工作中具有比较广泛的应用前景。 展开更多

关键词 胶体金免疫渗滤法 快速酶联免疫吸附试验 日本血吸虫病 抗体

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快速ELISA法诊断血吸虫病的应用研究 被引量：4

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作者 华万全 余传信 +1 位作者 殷旭仁 钱春艳 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期158-162,共5页

目的对快速酶联免疫吸附试验(ELISA)的血吸虫病诊断实验条件进行优化,并观察其应用价值。方法同时将抗原、待测血清、HRP-SPA共置进行反应,替代常规ELISA法的分步反应。通过比较不同稀释度HRP-SPA的检测效果,确定其最佳工作浓度。观察... 目的对快速酶联免疫吸附试验(ELISA)的血吸虫病诊断实验条件进行优化,并观察其应用价值。方法同时将抗原、待测血清、HRP-SPA共置进行反应,替代常规ELISA法的分步反应。通过比较不同稀释度HRP-SPA的检测效果,确定其最佳工作浓度。观察待测血清和HRP-SPA不同混合反应时间对检测效果的影响,优化快速ELISA法的检测条件。用快速ELISA法、常规ELISA法和胶体染料试纸条法(DDIA)平行检测慢性血吸虫病人、华支睾吸虫病人及健康人血清,观察快速ELISA法的血吸虫病诊断实用价值。结果 HRP-SPA的最佳工作浓度为1∶2 000,待测血清和HRP-SPA最佳混合反应条件是37℃同步反应60 min。快速ELISA法检测慢性血吸虫病人血清抗体阳性检出率为93.8%,与华支睾吸虫病人血清的交叉反应率为4.0%,检测健康人血清的假阳性率为1.5%,与常规ELISA法和DDIA检测结果相似。结论快速ELISA法具有快速、简便等优点,是一种简便实用的血吸虫病免疫诊断方法。 展开更多

关键词 血吸虫病 免疫诊断 快速ELISA法 金黄色葡萄球菌A蛋白

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湖北光敏核不育水稻幼穗发育中1AA的变化 被引量：35

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作者 徐孟亮 刘文芳 肖翊华 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第4期381-386,共6页

利用IAA酶联免疫检测技术,测定了农垦58S及农垦58幼穗发育中长(LD)、短(SD)日照下IAA含量。结果表明:农垦58S在LD下叶片中F-IAA在花粉母细胞形成期、减数分裂期和花粉内容物充实期大量积累,而同期幼穗及花药中F-IAA严重亏缺,农垦58S SD... 利用IAA酶联免疫检测技术,测定了农垦58S及农垦58幼穗发育中长(LD)、短(SD)日照下IAA含量。结果表明:农垦58S在LD下叶片中F-IAA在花粉母细胞形成期、减数分裂期和花粉内容物充实期大量积累,而同期幼穗及花药中F-IAA严重亏缺,农垦58S SD、农垦58 SD及农垦58 LD均不表现此现象。据此认为这种现象是导致农垦58S LD败育的重要生理原因。C-IAA的测定表明:农垦58S及农垦58长短日下也不表现上述积累与亏缺现象,且农垦58S LD下的C-IAA变化与F-IAA的积累与亏缺无关。 展开更多

关键词 水稻 光敏核不育 幼穗 发育 IAA

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养殖刺参腐皮综合征两种致病菌Dot-ELISA快速检测 被引量：23

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作者 谢建军 王印庚 +1 位作者 张正 荣小军 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期59-64,共6页

以养殖刺参(Apostichopus japonicus)腐皮综合征两种主要致病原灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)为抗原,分别制备兔抗血清,建立了两种病原菌的点酶ELISA(Dot-ELISA)检测方法。根据方正试验,... 以养殖刺参(Apostichopus japonicus)腐皮综合征两种主要致病原灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)为抗原,分别制备兔抗血清,建立了两种病原菌的点酶ELISA(Dot-ELISA)检测方法。根据方正试验,确定检测用一抗、二抗最佳工作稀释度:灿烂弧菌抗血清稀释度320,酶标二抗稀释度3 000;假交替单胞菌抗血清稀释度160,酶标二抗稀释度2 000。阻断试验结果表明两种抗血清特异性均较高。灿烂弧菌抗血清在稀释度为40时与溶藻胶弧菌、河流弧菌、创伤弧菌等弧菌发生微弱交叉反应,提高稀释度到160时,不发生交叉反应。假交替单胞菌抗血清基本不与常见海水致病弧菌发生交叉反应。人工感染试验检测结果表明该方法能从患病海参溃烂组织、未发病海参组织和感染水体检测到相应致病菌,检测灵敏度为9.4×103个/mL。人工感染试验检测结果经直接凝集反应验证。该方法操作简便、灵敏度高,不需复杂仪器设备,适合在基层推广。 展开更多

关键词 刺参(Apostichopus japonicus) 腐皮综合征 灿烂弧菌(Vibrio splendidus) 假交替 单胞菌(Pseudoalteromonas nigrzfaciens) Dot- ELISA 快速检测

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间接ELISA检测犬瘟热血清抗体方法的建立 被引量：5

8

作者 杨敬 乌仁高娃 +1 位作者 范薇 隋丽华 《动物医学进展》 CSCD 2005年第11期61-64,共4页

以重组表达的犬瘟热病毒融合蛋白(fusion protein,F)作为包被抗原,建立了检测犬瘟热病毒血清抗体的间接ELISA方法。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为125ng/孔,血清最佳稀释度为1∶160。经阻断试验、重复性试验等表明该方法特异性强、重... 以重组表达的犬瘟热病毒融合蛋白(fusion protein,F)作为包被抗原,建立了检测犬瘟热病毒血清抗体的间接ELISA方法。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为125ng/孔,血清最佳稀释度为1∶160。经阻断试验、重复性试验等表明该方法特异性强、重复性较好,可用于犬瘟热血清抗体的定量和定性检测。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 F基因 间接ELISA

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四种诊断血吸虫病方法的比较研究 被引量：4

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作者 胡一河 顾宏亮 +3 位作者 张进 朱振球 计小弟 刘伯荧 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 1995年第5期281-284,共4页

本文对血吸虫病监测中的COPT、IHA、PVC-IEST和F-ELISA4种血清免疫诊断方法进行了比较.4种方法的敏感性依次为70.45%、65.91%、54.55%、68.18%,假阳性率均不超过5.00%,4种方法的操作时间和劳动强度以COPT为最长、最大,其余3种方法较为接... 本文对血吸虫病监测中的COPT、IHA、PVC-IEST和F-ELISA4种血清免疫诊断方法进行了比较.4种方法的敏感性依次为70.45%、65.91%、54.55%、68.18%,假阳性率均不超过5.00%,4种方法的操作时间和劳动强度以COPT为最长、最大,其余3种方法较为接近,成本费用以IHA最低.作者认为,在血吸虫病巩固监测地区,可用IHA和F-ELISA法结合门诊肝功能血清检查进行监测,有史者加做COPT,阳性者可作病人处理.疫区暂住人员监测可用PVC-IEST和IHA检测,两种方法均阳性者可作病人处理. 展开更多

关键词 COPT IHA f-elisa PVC-IEST 血吸虫病诊断

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纸纤维固定木瓜蛋白酶的研究及应用 被引量：2

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作者 易喻 李慧娟 +3 位作者 陈建澍 梅建凤 朱克寅 应国清 《浙江工业大学学报》 CAS 2013年第2期147-151,共5页

利用纸纤维为载体,制备高活性的固定化木瓜蛋白酶并应用于抗HCG抗体的水解.利用戊二醛交联法,制备固定化木瓜蛋白酶,并通过一系列优化,得到最佳固定化条件,包括pH﹑给酶量﹑温度﹑戊二醛体积分数,将制备的固定化木瓜蛋白酶应用于抗HCG... 利用纸纤维为载体,制备高活性的固定化木瓜蛋白酶并应用于抗HCG抗体的水解.利用戊二醛交联法,制备固定化木瓜蛋白酶,并通过一系列优化,得到最佳固定化条件,包括pH﹑给酶量﹑温度﹑戊二醛体积分数,将制备的固定化木瓜蛋白酶应用于抗HCG抗体水解并制备F(ab′)2片段.研究表明:反应温度为40℃时,固定化酶在pH 5.0,0.01mol/L的醋酸缓冲液条件下,给酶量为46mg/g载体,戊二醛体积分数为0.01%时,固定化酶的酶活达到最高19 250U/g,相对于优化前1 940U/g提高了近10倍,成功应用于抗HCG抗体水解制备F(ab′)2片段:经SDS-PAGE电泳检测,F(ab′)2片段达到电泳纯.ELISA反应检测表明:片段仍保留较高的活性,效价为1∶12 000. 展开更多

关键词 抗HCG抗体 固定化酶 木瓜蛋白酶 F(ab’)2片段 ELISA 纸纤维

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标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量测定 被引量：1

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作者 吉坤美 刘晓宇 +2 位作者 唐艳 詹政科 刘志刚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期663-667,共5页

目的研制粉尘螨Ⅱ组变应原Der f 2单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),并建立双单抗夹心ELISA检测方法 ,测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量。方法应用基因工程方法获得粉尘螨变应原Der f2重组蛋白并通过亲和层析纯化,... 目的研制粉尘螨Ⅱ组变应原Der f 2单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),并建立双单抗夹心ELISA检测方法 ,测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量。方法应用基因工程方法获得粉尘螨变应原Der f2重组蛋白并通过亲和层析纯化,再免疫小鼠,利用间接ELISA筛选获得McAb杂交瘤细胞株并纯化、鉴定抗体的特异性;用一株单抗包被酶标板,同时用生物素标记另一株单抗,从而建立双单抗体夹心ELISA法;并用此法测定粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量。结果成功地获得了一株单抗3B12与屋尘螨抗原具有交叉反应,另外一株单抗3G7与屋尘螨抗原没有交叉反应,并建立了双单抗夹心ELISA方法测定Der f2的含量,其方法的检测限为0.5ng/mL,并在6.25ng/mL-300ng/mL范围内线性良好;标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量为100ng/10000BAU。结论成功制备了高效价抗Der f 2单抗,并建立了双抗体夹心ELISA检测方法。该方法具有很高的灵敏度,可以测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量,为临床应用奠定基础。 展开更多

关键词 尘螨过敏原 Der F 2 单克隆抗体 夹心ELISA

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鹅源新城疫病毒F基因的原核表达及间接ELISA诊断方法的建立 被引量：1

12

作者 刘新鑫 孟轲音 +1 位作者 尹仁福 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1383-1386,共4页

参照GenBank公布的鹅源新城疫病毒NA-1株F基因(DQ659677)的核苷酸序列设计1对引物,通过PCR扩增F基因全长,将其克隆到pET-22b(+)载体中,构建了原核表达载体pET-22b(+)-F,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化了重组蛋白,Western-blot证明该... 参照GenBank公布的鹅源新城疫病毒NA-1株F基因(DQ659677)的核苷酸序列设计1对引物,通过PCR扩增F基因全长,将其克隆到pET-22b(+)载体中,构建了原核表达载体pET-22b(+)-F,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化了重组蛋白,Western-blot证明该重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白为包被抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为0.21μg/孔,建立了检测鹅源新城疫病毒抗体的间接ELISA诊断方法。 展开更多

关键词 鹅源新城疫病毒 F基因 原核表达 间接ELISA

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血浆凝血因子ⅩⅢ抗原及活性的测定 被引量：3

13

作者 段宝华 王鸿利 +3 位作者 王学锋 胡翊群 谢爽 王振义 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期437-439,共3页

目的　建立血浆F抗原及活性定量测定的方法。方法　对 4 6例正常人及两个遗传性F缺陷症家系部分成员采用双抗体夹心法检测F抗原 ,生物素化戊胺测定F活性 ,以F标准品建立标准曲线。结果　 3例患者FA :Ag均为 0 % ,FB :Ag... 目的　建立血浆F抗原及活性定量测定的方法。方法　对 4 6例正常人及两个遗传性F缺陷症家系部分成员采用双抗体夹心法检测F抗原 ,生物素化戊胺测定F活性 ,以F标准品建立标准曲线。结果　 3例患者FA :Ag均为 0 % ,FB :Ag分别为正常人的 78.4 6 %、6 6 .4 3%、5 7.2 9%。 4 6例正常人血浆F活性F∶C平均值为 86 .34%± 17.98% ,范围在5 6 .5 %～ 16 5 .17%之间 ,3例患者为 0 % ,家系中杂合子范围为 2 9.6 0 %～ 10 4 .86 %。结论　双抗体夹心法和生物素标记法均为简捷、灵敏而且特异的F测定方法。 展开更多

关键词 凝血因子Ⅷ 抗原活性 遗传性FⅧ缺陷症 双抗体夹心法 生物素标记法

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应用酶联免疫吸附分析法评价大麦品种对黄花叶病毒的抗性

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作者 阮义理 邹皖和 王卉 《浙江农业学报》 CSCD 1995年第3期187-189,共3页

选用国内外大麦种质资源384份，分别种植于上海、江苏和浙江三省市的3个病圃中。用F（ab’）2－ELISA检测带毒情况，并进行田间发病率调查。结果有364份大麦品种经血清学检测与田间发病相符，发病轻重与植株内病毒含量基本一致。另有20... 选用国内外大麦种质资源384份，分别种植于上海、江苏和浙江三省市的3个病圃中。用F（ab’）2－ELISA检测带毒情况，并进行田间发病率调查。结果有364份大麦品种经血清学检测与田间发病相符，发病轻重与植株内病毒含量基本一致。另有20份大麦品种经检测为阳性，但田间未查到明显病株，为隐症带毒。 展开更多

关键词 ELISA 大麦 黄花叶病毒 品种 评价 抗病性

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重组抗人血小板GPⅡb/Ⅲa嵌合单抗F(ab′)_2在Beagle犬体内药动学 被引量：1

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作者 李佐刚 闻镍 +6 位作者 季顺东 汤瑶 孙旭 于敏 王秀文 王军志 李波 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第20期1570-1573,共4页

目的研究了重组抗人血小板GPIIb/Ⅲa嵌合单抗F(ab′)2经静脉单次给药后在Beagle犬中的药动学。方法按不同时间点采血,分离血浆,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定犬血浆中嵌合单抗F(ab′)2的浓度,根据非房室统计矩模型进行... 目的研究了重组抗人血小板GPIIb/Ⅲa嵌合单抗F(ab′)2经静脉单次给药后在Beagle犬中的药动学。方法按不同时间点采血,分离血浆,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定犬血浆中嵌合单抗F(ab′)2的浓度,根据非房室统计矩模型进行曲线拟合并计算药动学参数。结果Beagle犬分别静脉单次注射高、中、低(1.2,0.8,0.4mg.kg-1)后,t1/2分别为(7.35±0.65),(8.28±0.68)和(7.03±3.26)h,CLs与Vss随着剂量的减小发生增加的变化,血药浓度-时间曲线下面积AUC0-inf分别为(2453.70±371.59),(1097.64±142.11)和(362.63±169.12)μg.h.L-1,剂量之比为3:2:1,对应的AUC0-inf比值为6.8:3:1,剂量与AUC成正相关性,相关系数R2=0.9714,但是AUC0-inf的增加量大于剂量的增加量。结论在本实验的剂量范围内,剂量与AUC0-inf成正相关性,AUC0-inf的增加量大于剂量的增加量,预示在以上剂量范围内嵌合单抗F(ab′)2在Beagle犬血浆中的浓度变化可能呈非线性药动学规律;动物性别对药动学参数无显著性影响。 展开更多

关键词 ELISA 血小板减少症 人源化重组anti—GPⅡb/Ⅲa 单克隆抗体 药动学

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肝特异性F抗原ELISA检测法的建立及其临床应用研究

16

作者 黄兴华 孙燕 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 1999年第4期236-238,共3页

应用两株抗人肝特异性Ｆ抗原的单克隆抗体建立测定血清Ｆ抗原的夹心ＥＬＩＳＡ法。结果显示本法标准曲线工作范围（５ － ２００）μｇ／ｍｌ，平均回收率９５ ．６ ％ 。正常对照、良性肝病、急性肝炎、肝硬化、肝癌患者Ｆ抗原含量（... 应用两株抗人肝特异性Ｆ抗原的单克隆抗体建立测定血清Ｆ抗原的夹心ＥＬＩＳＡ法。结果显示本法标准曲线工作范围（５ － ２００）μｇ／ｍｌ，平均回收率９５ ．６ ％ 。正常对照、良性肝病、急性肝炎、肝硬化、肝癌患者Ｆ抗原含量（μｇ／ｍｌ） 分别为０ ．２０ ±０．０７ 、０ ．４５ ±０ ．１４ 、３５ ．５０ ±８ ．４０ 、２２ ．１６±７ ．１２ 、４１．５０ ±１４ ．１７ ，其中急性肝炎及肝癌血清Ｆ抗原水平显著升高。该法可为肝损伤，尤其是肝癌提供早期辅助诊断。 展开更多

关键词 肝特异性F抗原 ELISA 肝损伤 肝癌

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Der f 1血清特异性IgE ELISA检测方法的建立

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作者 王运刚 周鹰 +2 位作者 马桂芳 杨李 崔玉宝 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第6期436-439,共4页

目的利用粉尘螨变应原第1组分重组蛋白rDer f 1建立特异性IgE ELISA检测方法,并对哮喘患者血清进行检测。方法以rDer f 1为包被抗原,分别建立间接ELISA法和亲和素-生物素复合ELISA(ABC-ELISA)法,检测Der f 1特异性IgE阳性标准血清和39... 目的利用粉尘螨变应原第1组分重组蛋白rDer f 1建立特异性IgE ELISA检测方法,并对哮喘患者血清进行检测。方法以rDer f 1为包被抗原,分别建立间接ELISA法和亲和素-生物素复合ELISA(ABC-ELISA)法,检测Der f 1特异性IgE阳性标准血清和39例哮喘患者血清中的Der f 1特异性IgE,并分析检测结果。结果间接ELISA法和ABC-ELISA法检测Der f 1特异性IgE的最适抗原包被浓度和血清稀释倍数均为15μg/ml和1︰2,间接ELISA法辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE抗体适宜稀释倍数为1︰1 000,ABC-ELISA法生物素标记抗人IgE抗体和HRP标记亲和素的稀释倍数分别为1︰1 000和1︰2 000。用间接ELISA和ABC-ELISA检测IgE的灵敏度分别为0.68U/ml和0.73U/ml,检测患者血清中Der f 1特异性IgE的阳性率分别为92.3%和97.4%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于重组变应原rDer f 1的ELISA法检测粉尘螨特异性IgE具有较高的敏感度,可用于螨过敏性疾病的实验诊断。 展开更多

关键词 酶联免疫吸附试验 重组变应原 粉尘螨变应原第1组分 变态反应性疾病

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鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒的研制 被引量：5

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作者 常娅莉 席仲兴 +10 位作者 吴智远 徐秉臣 彭林锋 胡丽娜 热娜 雷刚 韩少波 张正雷 卜培英 袁浩嘉 王秉翔 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第11期1632-1636,共5页

目的研制鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒，并进行验证。方法用鼠疫菌F1抗原免疫家兔制备抗血清，经50％饱和硫酸铵盐析2次后，再经Sephacryl S-300凝胶柱层析纯化，作为包被抗体；制备鼠疫菌F1抗原单克隆抗体腹水，并进行纯化，... 目的研制鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒，并进行验证。方法用鼠疫菌F1抗原免疫家兔制备抗血清，经50％饱和硫酸铵盐析2次后，再经Sephacryl S-300凝胶柱层析纯化，作为包被抗体；制备鼠疫菌F1抗原单克隆抗体腹水，并进行纯化，用HRP标记单抗，作为酶标抗体；建立鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA检测方法，连续制备3批诊断试剂盒，并建立内部质控品。对试剂盒进行板内板间精密性、灵敏度、线性范围、特异性、重复性、准确性和稳定性验证。结果制备的试剂盒检测精密性参比品的板内变异系数为5．2％，板间变异系数为8．23％；试剂盒的线性范围为3．91～62．5ng／ml，最低检测限为3．0ng／ml；试剂盒检测鼠疫菌菌液的结果为阳性，而与近缘假结核耶尔森菌无交叉反应；试剂盒检测高、中、低3种浓度Fl抗原含量的变异系数为4．54％～8．4％，回收率在104％-108％之间；试剂盒稳定性良好，有效期至少为1年。结论成功制备了鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒，为鼠疫的临床诊断及流行病学监测提供了一种快速检测手段，也为新型鼠疫组分疫苗F1抗原含量的检测提供了方法。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森菌 F1抗原 单克隆抗体 酶联免疫吸附测定

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抗孕酮Fab’的制备和鉴定

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作者 沈明泉 蒋静 +1 位作者 陈鲁勇 龚振明 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2003年第1期46-50,共5页

利用酶联免疫测定法(ELISA)测定乳中孕酮含量来进行妊娠诊断的的方法有很多,采用二级竞争酶联免疫法可提高反应的灵敏度,但操作可进一步简化。通过制备抗孕酮Fab'可简化该操作。实验采用硫酸铵沉淀法对兔抗孕酮血清进行粗提,再用DEA... 利用酶联免疫测定法(ELISA)测定乳中孕酮含量来进行妊娠诊断的的方法有很多,采用二级竞争酶联免疫法可提高反应的灵敏度,但操作可进一步简化。通过制备抗孕酮Fab'可简化该操作。实验采用硫酸铵沉淀法对兔抗孕酮血清进行粗提,再用DEAESepharoseFastFlow对IgG作进一步纯化,回收率为93.24%。用胃蛋白酶将IgG消化成F(ab')2,回收率为73.75%。F(ab')2用10mmol/L巯基乙醇在pH6.0,37℃条件下反应2h而被还原成Fab',回收率为67.84%。最后对IgG、F(ab')2、Fab'进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳其分子量分别接近于150000、92000、46000。 展开更多

关键词 早期妊娠诊断 ELISA F(ab')2 动物 抗孕酮Fab’

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基于牛呼吸道合胞体病毒融合前F蛋白的间接ELISA方法的建立与应用 被引量：7

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作者 王磊 常继涛 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1126-1130,1158,共6页

为确定牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)在我国的流行情况,本研究以BRSV融合前F蛋白作为包被抗原,经各项条件优化后建立了检测BRSV抗体的间接ELISA方法:确定抗原最佳包被浓度为2 mg/L、待检血清的最佳稀释度为1∶100、最佳封闭液为3%明胶、羊抗... 为确定牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)在我国的流行情况,本研究以BRSV融合前F蛋白作为包被抗原,经各项条件优化后建立了检测BRSV抗体的间接ELISA方法:确定抗原最佳包被浓度为2 mg/L、待检血清的最佳稀释度为1∶100、最佳封闭液为3%明胶、羊抗牛Ig G-HRP的稀释度为1:8000,抗体阴阳性临界值为0.204。特异性试验结果显示,该ELISA方法与阿卡斑病毒(AKAV)、牛轮状病毒(BRV)、蓝舌病病毒(BTV)、口蹄疫病毒(FMDV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)以及牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的阳性血清无交叉反应。敏感性试验结果显示,当BRSV阳性血清稀释倍数达1∶6400时仍为阳性结果,表明该方法具有较高的敏感性。重复性试验结果显示,ELISA组内、组间最大变异系数分别为6.80%和8.80%,表明该方法的重复性良好。对195份临床牛血清样品检测结果显示,BRSV抗体阳性率为61.0%;对其中的143份血清同时进行病毒中和试验检测,结果显示二者符合率为89.5%。上述结果表明本研究建立的间接ELISA方法可以用于牛群中BRSV抗体的检测,为BRSV的血清流行病学调查提供可靠的技术手段。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 融合前的F蛋白 间接ELISA 抗体检测

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