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东乡野生稻OrCaM/OrCML基因家族鉴定与冷胁迫下表达模式分析
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作者 霍晨敏 许天运 +1 位作者 王娇 周硕 《河北大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第3期266-277,共12页
东乡野生稻的耐冷性优于栽培稻,具有丰富的抗冷基因资源.本研究对东乡野生稻OrCaM/OrCML基因家族成员进行全基因组水平鉴定和理化性质分析,并探究家族成员冷胁迫后表达模式.结果显示,东乡野生稻中有40个OrCaM/OrCML家族成员,在系统进化... 东乡野生稻的耐冷性优于栽培稻,具有丰富的抗冷基因资源.本研究对东乡野生稻OrCaM/OrCML基因家族成员进行全基因组水平鉴定和理化性质分析,并探究家族成员冷胁迫后表达模式.结果显示,东乡野生稻中有40个OrCaM/OrCML家族成员,在系统进化树中分布于亚组Ⅰ~Ⅶ.各组成员除EF手单元,无其他已知功能的结构域.OrCaM/OrCML基因的启动子顺式元件种类和数量不同,笔者研究了14个具有CRT/DRE或CM2顺式元件的OrCaM/OrCML基因对冷胁迫的反应.结果表明,OrCML1、OrCML6和OrCML18属于冷胁迫后激活最快的3个基因.本结果对于研究OrCaM/OrCML基因家族响应冷胁迫的分子机制提供了参考. 展开更多
关键词 东乡野生稻 钙调蛋白/类钙调蛋白 保守基序 EF手单元 启动子分析
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梭梭EF-hand CaBP基因克隆及序列分析 被引量:3
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作者 周晓燕 甘晓燕 +3 位作者 石磊 陈虞超 李苗 宋玉霞 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期47-52,57,共7页
采用RT-PCR、RACE等方法从超旱生、耐盐植物梭梭(Haloxylon ammodendron)中扩增出EF-handCaBP(EF-hand calcium-binding protein)基因的cDNA序列(GenBank登录号为JQ023165),其开放阅读框为732bp,推测的氨基酸序列全长为243个氨基酸残基... 采用RT-PCR、RACE等方法从超旱生、耐盐植物梭梭(Haloxylon ammodendron)中扩增出EF-handCaBP(EF-hand calcium-binding protein)基因的cDNA序列(GenBank登录号为JQ023165),其开放阅读框为732bp,推测的氨基酸序列全长为243个氨基酸残基。运用SMART、GOR4、TMPred等生物信息学软件对梭梭EF-hand CaBP功能域、跨膜结构进行分析显示,梭梭EF-hand CaBP含有26个氨基酸的信号肽序列及4个保守的钙结合位点(EF-hand),并且存在2种跨膜模型,推测梭梭EF-hand CaBP基因可能定位于液泡膜或叶绿体膜上。 展开更多
关键词 梭梭 钙结合蛋白 ef-hand手型 序列分析
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EF-hand对钙调磷酸酶B同源蛋白2的生物学功能影响 被引量:1
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作者 张洪菊 李庆华 +3 位作者 王立洪 蔺亚妮 常国强 庞天翔 《中国医药导报》 CAS 2012年第35期28-31,共4页
目的探讨EF-hand结构对钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)的生物学功能的影响。方法通过PCR扩增CHP2 cDNA片段,构建带GFP标签的野生型及EF-hand突变型CHP2表达质粒;与钠氢离子交换蛋白1(NHE1)共转染PS120细胞;采用激光共聚焦显微镜、膜滤过法... 目的探讨EF-hand结构对钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)的生物学功能的影响。方法通过PCR扩增CHP2 cDNA片段,构建带GFP标签的野生型及EF-hand突变型CHP2表达质粒;与钠氢离子交换蛋白1(NHE1)共转染PS120细胞;采用激光共聚焦显微镜、膜滤过法、免疫共沉淀等手段,明确CHP2结合Ca2+的数量、部位,以及对CHP2与NHE1结合的影响;在血清饥饿条件下,观察表达EF-hand突变的CHP2(NHE1/CHP2-EF3m/4m)对细胞生存的影响。结果分别突变EF-hand结构EF3或EF4,CHP2结合Ca2+减少;同时突变EF3和EF4,CHP2不能结合Ca2+;免疫共沉淀实验结果显示乙二胺四乙酸(EDTA)剥夺CHP2携带的Ca2+之后,CHP2与NHE1结合的数量明显减少;不携带Ca2+的CHP2在细胞内与NHE1结合的数量也明显减少;在血清饥饿条件下,表达不携带Ca2+的CHP2的细胞存活数量减少。结论 CHP2能结合2个Ca2+,结合部位在EF3和EF4;携带Ca2+能增强CHP2与NHE1的结合能力;在血清饥饿条件下,携带Ca2+的CHP2能提升细胞抵抗死亡的能力。 展开更多
关键词 钙调磷酸酶B同源蛋白2 钠氢交换蛋白1 ef-hand CA2+
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三阴性乳腺癌组织中LETM1、HIF-1α的表达及其对临床预后的影响
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作者 李庆辉 牛冰 +2 位作者 李海平 冯燕枝 叶贝贝 《齐齐哈尔医学院学报》 2025年第4期327-331,共5页
目的 探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织中亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其对临床预后的影响。方法 回顾性分析2018年5月—2021年5月本院收治的177例行改良根治术治疗的TNBC患者病历资料和随... 目的 探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织中亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其对临床预后的影响。方法 回顾性分析2018年5月—2021年5月本院收治的177例行改良根治术治疗的TNBC患者病历资料和随访资料,根据术后3年复发情况将其分为复发组(n=53)和未复发组(n=124)。检测TNBC患者手术切除标本的癌组织和癌旁组织中LETM1、HIF-1α表达水平并比较差异。比较不同预后TNBC患者基线资料及癌组织中LETM1、HIF-1α表达;采用Logistic回归分析TNBC患者临床预后的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,检验癌组织中LETM1、HIF-1α对TNBC患者临床预后的预测价值;绘制决策曲线评估癌组织中LETM1、HIF-1α预测TNBC患者临床预后的临床获益情况。结果 癌组织中LETM1、HIF-1α表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05)。复发组和未复发组肿瘤最大径、淋巴结转移、Ki-67、LETM1、HIF-1α比较,差异有统计学意义(P<0.05)。经Logistic回归分析,肿瘤最大径>5 cm、Ki-67阳性、LETM1、HIF-1α是TNBC患者复发的危险因素(OR>1,P<0.05)。绘制ROC曲线显示,癌组织中LETM1、HIF-1α单独及联合对TNBC患者复发均有一定预测价值,且联合预测价值最高(P<0.05)。绘制决策曲线显示,在阈值0.12~0.95范围内,癌组织中LETM1、HIF-1α联合预测TNBC患者复发的净收益率优于单一指标,最大净收益率为0.299;且在高风险阈值0~1范围内,联合预测的净收益率>0,有临床意义。结论 LETM1、HIF-1α在TNBC组织中呈高表达,二者均为TNBC患者复发的影响因素,且可作为患者复发的预测指标,联合两项指标可提高预测效能。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 亮氨酸拉链ef-hand结构域跨膜蛋白1 缺氧诱导因子-1Α 预后
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微小隐孢子虫含EF-hand结构域蛋白家族的生物信息学研究 被引量:1
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作者 郭志云 杨光 +5 位作者 荆春霞 付芹芹 孙小会 王穗湘 李月琴 周天鸿 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期653-658,663,共7页
目的对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,Cp)含EF-hand结构域家族蛋白进行生物信息学研究,探讨该家族蛋白的EF-hand结构域与Ca2+信号的关系以预测该家族蛋白的功能,为隐孢子虫病的诊断和治疗提供新的方向。方法首先通过数据收集,获... 目的对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,Cp)含EF-hand结构域家族蛋白进行生物信息学研究,探讨该家族蛋白的EF-hand结构域与Ca2+信号的关系以预测该家族蛋白的功能,为隐孢子虫病的诊断和治疗提供新的方向。方法首先通过数据收集,获得EF-hand结构域家族蛋白的序列信息,接着对每个蛋白进行CDD结构域搜索和NCBI BLAST的比对分析,确证为EF-hand结构域家族蛋白,最后进行结构域分析和功能预测。结果搜索到了C.parvumIowa II中18个含有EF-hand结构域的蛋白,它们之间的氨基酸长度,分子量大小以及等电点等都有很大的区别,通过结构域分析把EF-hand家族分成了含一个EF-hand结构域、二个EF-hand结构域、同时含EF-hand和STKc-AGC两种结构域和同时含EF-hand和PKC两种结构域四大类。结论 EF-hand结构域蛋白家族与重要的钙离子信号作用有着密切的关系,而C.parvum对宿主细胞的侵袭能力与胞内的Ca2+水平密切相关,所以EF-hand蛋白家族很有可能成为隐孢子虫病治疗的一个新的突破点。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 EF—hand结构域 CA2+ 生物信息学分析 功能预测
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EF-Hand蛋白研究进展 被引量:9
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作者 吁亭 赵宇威 余绍宁 《生物物理学》 2013年第1期1-10,共10页
EF-hand蛋白作为钙离子结合蛋白家族中的特殊成员和钙离子一起参与了从细胞增殖到细胞凋亡各方面的功能调节,EF-hand蛋白调节信号的异常也被认为是人类多种疾病的诱因。按照功能分类,EF-hand蛋白可以分为具有调控功能的Ca2+信号蛋白和... EF-hand蛋白作为钙离子结合蛋白家族中的特殊成员和钙离子一起参与了从细胞增殖到细胞凋亡各方面的功能调节,EF-hand蛋白调节信号的异常也被认为是人类多种疾病的诱因。按照功能分类,EF-hand蛋白可以分为具有调控功能的Ca2+信号蛋白和只参与Ca2+转运、缓冲的Ca2+缓冲蛋白两大类。EF-hand蛋白功能的多样性与EF-hand结构的构象、组织形式、对钙离子的响应程度等密切相关。本文就EF-hand蛋白结构与功能的差异以及与疾病的关系进行简要综述。 展开更多
关键词 ef-hand蛋白 ef-hand结构域 钙离子
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三角帆蚌EF-hand基因的表达研究
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作者 祁晓翔 李文娟 +3 位作者 施志仪 尚朝 周子睿 尚攀 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第12期2078-2085,共8页
淡水贝类包含EF-hand结构域的蛋白质对Ca^(2+)代谢具有重要的调控作用,加强EF-hand蛋白的研究对培育大型优质珍珠具有十分重要的意义。通过三角帆蚌转录组筛选到7个EF-hand基因,并进行生物信息学分析;通过数字基因表达谱(DGE)分析了这7... 淡水贝类包含EF-hand结构域的蛋白质对Ca^(2+)代谢具有重要的调控作用,加强EF-hand蛋白的研究对培育大型优质珍珠具有十分重要的意义。通过三角帆蚌转录组筛选到7个EF-hand基因,并进行生物信息学分析;通过数字基因表达谱(DGE)分析了这7个基因在不同育珠时间两个育珠组织(外套膜和内脏团)中的表达趋势;通过Real-time Q-PCR技术对EF-hand基因进行了表达研究。结果表明,三角帆蚌7个EFhand基因都具有经典保守的EF-hand模块。进化树分析表明,EFCB1和EFCB6进化关系最近,EFCB7和N-EFCB1进化关系较近,EFCBD2和RASEFCB进化关系较近。DGE表达趋势分析表明三角帆蚌EF-hand基因在外套膜和内脏团组织不同育珠时期表达变化趋势差异较大,说明这7个基因在珍珠形成过程中的功能可能各不相同。荧光定量PCR结果表明,EF-hand基因在插核后不同时期的外套膜和内脏团育珠部位组织中表达与DGE表达趋势分析基本一致。EFCB1在外套膜插核后20 d表达水平最高(P<0.05),EFCB6和EFCB7在内脏团插核后20 d表达水平最高(P<0.05),表明这3个基因在珍珠质最初分泌形成过程中可能起着重要的作用,为进一步探索该类蛋白调控钙代谢及在珍珠形成过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 三角帆蚌 ef-hand基因 外套膜 内脏团 有核珍珠
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SikCDPK1基因EF-hand的定点突变、原核表达及蛋白纯化
8
作者 郭家秀 朱新霞 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第2期503-509,共7页
钙依赖性蛋白激酶(calcium dependent protein kinase,CDPK)通过与Ca^(2+)相互作用,在植物响应各种逆境胁迫的过程中发挥重要作用,其C端调控区的EF-hand基序是使CDPK的激活依赖于Ca^(2+)的关键结构。为进一步研究具有极强耐寒性的天山... 钙依赖性蛋白激酶(calcium dependent protein kinase,CDPK)通过与Ca^(2+)相互作用,在植物响应各种逆境胁迫的过程中发挥重要作用,其C端调控区的EF-hand基序是使CDPK的激活依赖于Ca^(2+)的关键结构。为进一步研究具有极强耐寒性的天山雪莲对逆境的响应机制,本研究采用PCR定点突变技术,将SikCDPK1基因EF-hand基序的第435、第471、第507和第540位氨基酸分别由E(谷氨酸)突变为Q(谷氨酰胺),构建定点突变原核表达载体,转化表达菌株E.coli BL21(DE3),使用IPTG诱导蛋白表达,利用亲和层析系统对重组蛋白进行纯化。结果显示,重组菌株能够成功表达出目的重组蛋白,重组蛋白可溶性表达量较高的诱导培养条件是18℃1 mmol/L IPTG诱导16 h,最后成功纯化出符合预期大小的可溶性蛋白,为进一步探究SikCDPK1中不同EF-hand基序的生物学功能提供了实验依据。 展开更多
关键词 SikCDPK1 ef-hand 定点突变 原核表达 蛋白纯化
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LETM1对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的作用及其机制 被引量:2
9
作者 石雨鹭 康权 +1 位作者 岳小涵 罗庆 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1163-1173,共11页
目的 探讨亮氨酸拉链-EF-hand跨膜蛋白1(LETM1)对人骨肉瘤MG63及143B细胞增殖、迁移、凋亡、成骨分化及体内成瘤的作用及其机制。方法 将骨肉瘤MG63及143B细胞分为空白对照组(未加入腺病毒感染)、阴性对照组(sh-NC组,用RNAi阴性对照病... 目的 探讨亮氨酸拉链-EF-hand跨膜蛋白1(LETM1)对人骨肉瘤MG63及143B细胞增殖、迁移、凋亡、成骨分化及体内成瘤的作用及其机制。方法 将骨肉瘤MG63及143B细胞分为空白对照组(未加入腺病毒感染)、阴性对照组(sh-NC组,用RNAi阴性对照病毒感染)及LETM1敲低组(sh-LETM1组,用sh-LETM1腺病毒感染)。采用Western blotting检测各组LETM1蛋白在健康人成骨细胞hFOB1.19及骨肉瘤细胞中的表达水平,以验证腺病毒敲低效果;细胞克隆形成实验及CCK-8法检测细胞增殖情况;划痕愈合实验及Transwell实验检测细胞迁移情况;DAPI染色法及Annexin V-APC/7-AAD流式细胞术双染法检测细胞凋亡情况;碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红S染色检测细胞的早期及晚期成骨分化情况。将10只裸鼠分为sh-NC组(n=5,以RNAi阴性对照病毒感染的143B细胞注入裸鼠皮下)与sh-LETM1组(n=5,以sh-LETM1腺病毒感染的143B细胞注入裸鼠皮下),并采用裸鼠皮下成瘤实验检测各组细胞的体内成瘤能力。结果 Western blotting检测结果显示,LETM1蛋白在骨肉瘤MG63及143B细胞中的表达明显高于健康人成骨细胞hFOB1.19(P<0.05),sh-LETM1腺病毒感染MG63及143B细胞后明显降低了LETM1蛋白的表达。细胞克隆形成实验及CCK-8法检测结果显示,在MG63及143B骨肉瘤细胞中,sh-LETM1组较sh-NC组及空白对照组的克隆形成能力及增殖能力明显降低(P<0.01)。Wound-healing实验及Transwell实验结果显示,在MG63及143B骨肉瘤细胞中,sh-LETM1组较sh-NC组及空白对照组的细胞迁移率明显降低(P<0.01)。DAPI染色及流式细胞术结果显示,在MG63及143B骨肉瘤细胞中,sh-LETM1组较sh-NC组的细胞凋亡率明显增高(P<0.01)。ALP染色及茜素红S染色实验结果显示,在MG63及143B骨肉瘤细胞中,sh-LETM1组较sh-NC组及空白对照组染色区域及钙盐结节增多。裸鼠皮下成瘤实验结果显示,143B sh-LETM1组较143B sh-NC组细胞的皮下成瘤能力降低。结论 LETM1可促进MG63和143B骨肉瘤细胞的增殖、迁移及体内成瘤,其机制可能与抑制细胞凋亡及成骨分化有关。 展开更多
关键词 骨肉瘤细胞 亮氨酸拉链-ef-hand跨膜蛋白1 细胞增殖 细胞迁移 凋亡 细胞分化
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Calmodulin-like 5 promotes PEDV replication by regulating late-endosome synthesis and innate immune response 被引量:2
10
作者 Wen-Jun Tian Xiu-Zhong Zhang +3 位作者 Jing Wang Jian-Feng Liu Fu-Huang Li Xiao-Jia Wang 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2024年第3期501-512,共12页
The infection caused by porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)is associated with high mortality in piglets worldwide.Host factors involved in the efficient replication of PEDV,however,remain largely unknown.Our recent ... The infection caused by porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)is associated with high mortality in piglets worldwide.Host factors involved in the efficient replication of PEDV,however,remain largely unknown.Our recent proteomic study in the virus-host interaction network revealed a significant increase in the accumulation of CALML5(EF-hand protein calmodulin-like 5)following PEDV infection.A further study unveiled a biphasic increase of CALML5 in 2 and 12 h after viral infection.Similar trends were observed in the intestines of piglets in the early and late stages of the PEDV challenge.Moreover,CALML5 depletion reduced PEDV mRNA and protein levels,leading to a one-order-of-magnitude decrease in virus titer.At the early stage of PEDV infection,CALML5 affected the endosomal trafficking pathway by regulating the expression of endosomal sorting complex related cellular proteins.CALML5 depletion also suppressed IFN-βand IL-6 production in the PEDV-infected cells,thereby indicating its involvement in negatively regulating the innate immune response.Our study reveals the biological function of CALML5 in the virology field and offers new insights into the PEDV-host cell interaction. 展开更多
关键词 Porcine epidemic diarrhea virus(PEDV) ef-hand protein calmodulin-like 5(CALML5) Late endosomes Innate immune response
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胃癌组织中EPAS1、LETM1蛋白的表达与临床病理特征的关系
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作者 徐慧 杨晓庆 +1 位作者 张俊 王亚飞 《实用癌症杂志》 2024年第10期1592-1596,共5页
目的探讨胃癌患者癌组织中含有内皮PAS结构域的蛋白1(EPAS1)、亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)的表达与临床病理特征的关系。方法回顾性分析89例胃癌患者的临床资料,比较胃癌组织与癌旁正常组织中EPAS1与LETM1的表达情况,分析... 目的探讨胃癌患者癌组织中含有内皮PAS结构域的蛋白1(EPAS1)、亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)的表达与临床病理特征的关系。方法回顾性分析89例胃癌患者的临床资料,比较胃癌组织与癌旁正常组织中EPAS1与LETM1的表达情况,分析其与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组织内EPAS1、LETM1免疫组化表达评分均高于癌旁正常组织(P<0.05)。不同年龄、性别、基础疾病类型、肿瘤位置、静脉浸润、淋巴结转移情况、肿瘤直径患者之间EPAS1表达情况比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同TNM分期、分化程度、浸润深度、组织学类型、Lauren's分型患者之间EPAS1表达情况比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄、性别、基础疾病类型、肿瘤位置、静脉浸润、淋巴结转移情况、肿瘤直径、分化程度、组织类型患者之间LETM1表达情况比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同TNM分期、浸润深度、Lauren's分型患者之间LETM1表达情况比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌患者癌组织中EPAS1、LETM1免疫组化表达评分均高于正常组织,且与多项临床病理特征有关。 展开更多
关键词 胃癌 内皮PAS结构域的蛋白1 亮氨酸拉链ef-hand结构域跨膜蛋白1 临床病理特征
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大豆CML家族基因的生物信息学分析 被引量:13
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作者 陈超 端木慧子 +3 位作者 朱丹 刘艾林 肖佳雷 朱延明 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期957-963,共7页
CMLs蛋白是一类具有Ca2+结合的EF-hand保守结构域蛋白,广泛参与钙依赖的信号传导途径,在植物生长发育及生物胁迫与非生物胁迫响应中起着重要的作用。通过NCBI和植物基因组注释数据库等筛选并获得了68个大豆GmCML蛋白;分析了所有蛋白的... CMLs蛋白是一类具有Ca2+结合的EF-hand保守结构域蛋白,广泛参与钙依赖的信号传导途径,在植物生长发育及生物胁迫与非生物胁迫响应中起着重要的作用。通过NCBI和植物基因组注释数据库等筛选并获得了68个大豆GmCML蛋白;分析了所有蛋白的基本特性;通过与拟南芥CMLs基因的进化树分析表明,GmCML家族基因属于8个亚类;对GmCML家族基因进行了染色体定位与重复基因进化关系分析,发现其具有较高的进化速率;序列比对发现GmCML类蛋白含有2~4个保守的EF-hand结构域;利用芯片数据对野生大豆在碱胁迫下的叶和根中的CMLs基因表达模式进行了分析,得到26个GsCML基因在碱胁迫下有显著的差异表达,且在根和叶中的差异表达模式不同,表明这些基因参与植物碱胁迫应答,且具组织表达特异性。 展开更多
关键词 大豆 CMLs ef-hand 生物信息学 进化分析
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小麦类钙调素TaCML79基因的克隆和表达分析 被引量:7
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作者 周硕 刘永伟 +6 位作者 董福双 杨帆 赵和 柴建芳 吕孟雨 孙果忠 王海波 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1-6,共6页
为了研究小麦类钙调素基因的功能和在植物逆境响应中的分子机制,以电子克隆结合RT-PCR的方法,在小麦中克隆到一个类钙调素基因TaCML79。该基因的开放阅读框长度为588bp,编码的蛋白长度为195个氨基酸,推测的分子量为20.45kDa,等电点为4.6... 为了研究小麦类钙调素基因的功能和在植物逆境响应中的分子机制,以电子克隆结合RT-PCR的方法,在小麦中克隆到一个类钙调素基因TaCML79。该基因的开放阅读框长度为588bp,编码的蛋白长度为195个氨基酸,推测的分子量为20.45kDa,等电点为4.6,属于酸性蛋白,具有2个典型的和一个不完整的EF-hand结构域。多序列比对和系统进化树分析表明,TaCML79与野生稻的ObCML35和水稻的OsCML10亲缘关系较近,相似性分别为84.6%和86.8%。该基因的表达在根和地上部分受到热激、NaCl、渗透和冷胁迫的诱导或抑制,初步推断该基因可能与植物抗逆有密切的关系。 展开更多
关键词 小麦 类钙调素 ef-hand结构域 基因克隆 基因表达
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LETM1在肝癌中的表达及其对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响 被引量:7
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作者 周宝勇 蒋宁 +2 位作者 廖锐 郑军 杜成友 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第17期1942-1947,共6页
目的探讨亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(leucine bnzipper/EF-hand-containing transmembrane protein1,LETM1)在肝癌组织中的表达水平及通过RNAi技术靶向LETM1基因对肝癌细胞株SMMC-7721的增殖及凋亡的影响。方法采用免疫组织化学... 目的探讨亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(leucine bnzipper/EF-hand-containing transmembrane protein1,LETM1)在肝癌组织中的表达水平及通过RNAi技术靶向LETM1基因对肝癌细胞株SMMC-7721的增殖及凋亡的影响。方法采用免疫组织化学方法、Western blot检测重庆医科大学附属第一医院肝胆外科2012年9月至2013年4月共60例肝癌组织及其癌旁肝组织中LETM1蛋白表达情况。Western blot检测人肝癌细胞株SMMC-7721和Hep G2及人正常肝细胞株LO2中的LETM1蛋白表达情况。将LETM1 siRNA经Lipofectamine 2000TM脂质体转染SMMC-7721(实验组为si-LETM1、对照组为si-NC),实时荧光定量PCR及Western blot分别检测LETM1转染后肝癌SMMC-7721细胞株中LETM1 mRNA及蛋白的表达。CKK-8及流式细胞术检测LETM1低表达对肝癌细胞增殖及细胞凋亡的影响。结果 1免疫组织化学结果显示,LETM1蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为73.33%(44/60),明显高于癌旁组织中的表达率28.33%(17/60,P<0.01);Western blot检测结果显示,LETM1蛋白在肝癌组织中的表达相对量(2.335±0.221)较癌旁组织(1.386±0.081)明显增高(P<0.01)。2LETM1蛋白表达与肝癌肿瘤直径及门静脉侵犯有关(P<0.05),而与肝癌患者性别、年龄、甲胎蛋白、HBs Ag、Edmondson分级及TNM分期无关(P>0.05)。3LETM1蛋白在SMMC-7721及Hep G2中的表达相对量[(分别为(1.447±0.149)、(1.190±0.113)]均明显高于LO2[(0.918±0.027),P<0.05]。4si-LETM1组与si-NC组和空白组比较,si-LETM1组细胞的增殖受到抑制(P<0.01),尤以72 h及96 h最为显著;si-LETM1早期细胞凋亡数(14.6±2.3)%与si-NC早期细胞的凋亡数(6.3±0.7)%比较,差异有统计学意义(P=0.04)。结论 LETM1蛋白在肝癌组织的表达显著高于癌旁组织;基因沉默LETM1后的肝癌细胞其增殖能力明显减弱,凋亡能力明显增强。 展开更多
关键词 肝细胞癌 RNA干扰 LETM1 细胞增殖 凋亡
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LETM1蛋白在结肠癌组织中的表达及临床意义 被引量:8
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作者 高爱花 金永民 +7 位作者 孙红花 金文彪 崔海 崔现 崔玉珍 沈雄虎 张松男 朴龙镇 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2014年第5期718-723,共6页
目的:观察亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(leucine zipper/EF-hand-containing transmembrane protein 1,LETM1)在结肠癌中的表达情况,探讨LETM1蛋白是否能够成为判断结肠癌患者预后的新的生物学指标.方法:利用免疫组织化学法检测73... 目的:观察亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(leucine zipper/EF-hand-containing transmembrane protein 1,LETM1)在结肠癌中的表达情况,探讨LETM1蛋白是否能够成为判断结肠癌患者预后的新的生物学指标.方法:利用免疫组织化学法检测73例结肠癌患者组织中LETM1蛋白的表达水平和蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)/Akt的丝氨酸473(Ser473)、苏氨酸308(Thr308)两个磷酸化位点及葡萄糖合成激酶3β(glycogen synthase k i n a s e 3β,G S K3β)的磷酸化水平,并根据LETM1蛋白表达水平进行高表达和低表达分组;采用Kaplan-Meier法分析各组无疾病生存期;采用χ2检验进行组间单因素分析.结果:在结肠癌患者中LETM1蛋白高表达率为54.8%,LETM1蛋白在结肠癌浸润深度、分化及淋巴结转移中低表达和高表达率分别为27.3%/72.7%、38.3%/61.7%和22.7%/77.3%,其差异均有统计学意义(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤大小未见统计学意义(P>0.05).LETM1蛋白在结肠癌组织中可以激活磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI-3K)/A k t信号传导通路.L ETM1高表达患者无疾病生存期显著低于LETM1低表达患者(P<0.05).结论:LETM1蛋白在结肠癌中高表达,可能参与结肠癌的发生、发展与复发.LETM1蛋白可以作为预测结肠癌患者预后的新的生物学指标. 展开更多
关键词 亮氨酸拉链EF—hand结构域跨膜蛋白1 结肠癌 蛋白激酶B
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大珠母贝外套膜基因PMMG1的克隆、表达及其特征分析 被引量:2
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作者 王玉梅 夏建红 +1 位作者 黄桂菊 喻达辉 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期121-128,共8页
EF-hand结构域在真核生物细胞内钙离子吸收和运输中发挥重要作用,在贝类中可能参与贝壳和珍珠质的形成。根据已报道的贝类中具有EF-hand结构域的碱基序列设计简并引物,从大珠母贝外套膜cDNA文库中筛选得到PMMG1基因(大珠母贝外套膜基因1... EF-hand结构域在真核生物细胞内钙离子吸收和运输中发挥重要作用,在贝类中可能参与贝壳和珍珠质的形成。根据已报道的贝类中具有EF-hand结构域的碱基序列设计简并引物,从大珠母贝外套膜cDNA文库中筛选得到PMMG1基因(大珠母贝外套膜基因1)。PMMG1基因全长618 bp,开放读码框编码140个氨基酸,N-端的22个氨基酸肽段为信号肽。PMMG1氨基酸序列与合浦珠母贝PFMG1的一致性为56%,预测有两个EF-hand结构域。选取编码PMMG1成熟蛋白的cDNA序列插入pET-32a质粒构建表达载体,通过IPTG诱导,Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,成功获得预期大小的融合蛋白。凝胶电泳迁移率的变化证明PMMG1蛋白具有结合Ca2+/Mg2+的活性,组织特异性表达表明PMMG1基因在外套膜的表达量远高于其他组织。大珠母贝外套膜基因PMMG1的克隆与表达研究为进一步研究该蛋白在珍珠质矿化中的作用、探讨珍珠质形成的分子生物学机制奠定了一定基础。 展开更多
关键词 大珠母贝 PMMG1 ef-hand结构域 融合蛋白 珍珠质
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EF手图像超家族成员——肌钙蛋白C的研究进展 被引量:7
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作者 陈剑清 张耀洲 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期375-380,共6页
EF手图像超家族蛋白泛指一类含有由螺旋区-泡区-螺旋区构成的EF手图像模体的蛋白。这类蛋白通常都具有金属离子结合能力或者形成二聚体的能力。肌钙蛋白C是一种EF手图像蛋白,它具有钙离子结合能力,可以与肌钙蛋白I、肌钙蛋白T形成复合... EF手图像超家族蛋白泛指一类含有由螺旋区-泡区-螺旋区构成的EF手图像模体的蛋白。这类蛋白通常都具有金属离子结合能力或者形成二聚体的能力。肌钙蛋白C是一种EF手图像蛋白,它具有钙离子结合能力,可以与肌钙蛋白I、肌钙蛋白T形成复合物调节肌肉收缩。目前,国内外对肌钙蛋白C的研究多数集中在脊椎动物上,而对无脊椎动物的研究较少。主要从EF手图像超家族的特性及其家族成员——肌钙蛋白C的分类、结构及功能等方面进行了阐述,并结合笔者自身的研究方向,简要介绍了家蚕肌钙蛋白C的研究情况及前景。 展开更多
关键词 EF手图像 肌钙蛋白C Ca^2+调节 肌肉收缩 家蚕
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LETM1蛋白在三阴性乳腺癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系 被引量:6
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作者 吕金燕 王刚 +2 位作者 王若雨 朱金明 姜佳宁 《癌症进展》 2018年第11期1404-1407,共4页
目的探讨亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)在三阴性乳腺癌(TNBC)组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法选取100例TNBC患者的TNBC组织标本,另选取同期100例导管原位癌患者的导管内原位癌组织标本及其癌旁正常组织标本... 目的探讨亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)在三阴性乳腺癌(TNBC)组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法选取100例TNBC患者的TNBC组织标本,另选取同期100例导管原位癌患者的导管内原位癌组织标本及其癌旁正常组织标本。采用免疫组织化学法检测各组织中LETM1蛋白的表达情况,分析LETM1蛋白表达与TNBC患者临床特征及预后的关系。结果 TNBC组织中LETM1蛋白的阳性表达率高于导管内原位癌组织和癌旁正常组织(P﹤0.05),导管内原位癌组织中LETM1蛋白的阳性表达率高于癌旁正常组织(P﹤0.05)。组织学分级为Ⅱ~Ⅲ级、临床分期为Ⅲ期、有淋巴结转移的TNBC患者的LETM1蛋白中等-强阳性表达率均高于组织学分级为Ⅰ级、临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05);不同年龄、绝经状态、肿瘤直径和p53表达情况的TNBC患者的LETM1蛋白中等-强阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。单因素分析结果显示,年龄≥50岁、绝经后、组织学分级为Ⅱ~Ⅲ级、有淋巴结转移、LETM1蛋白表达为中等-强阳性的TNBC患者的中位总生存时间(OS)均短于年龄﹤50岁、绝经前、组织学分级为Ⅰ级、无淋巴结转移、LETM1蛋白表达为阴性+弱阳性的TNBC患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素分析结果显示,淋巴结转移和LETM1蛋白强阳性表达是影响TNBC患者OS的独立危险因素(P﹤0.05)。结论LETM1蛋白可作为临床上判断TNBC恶性程度的指标,是影响TNBC患者预后的独立危险因素,可作为TNBC预后预测的指标,有望成为TNBC潜在的生物学指标及治疗靶点。 展开更多
关键词 亮氨酸拉链ef-hand结构域跨膜蛋白1 TNBC 临床特征 预后
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NICU医务人员手卫生依从性的干预效果分析 被引量:11
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作者 任军红 贾会学 +3 位作者 姚希 蒙景雯 刘京博 李六亿 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第20期4989-4991,共3页
目的了解新生儿重症监护病房(NICU)医务人员手卫生依从性,通过采取干预措施提高NICU医务人员手卫生依从性。方法按照WHO手卫生调查方法,每月进行手卫生依从性调查,调查后及时反馈与培训等干预措施。结果医务人员总体手卫生依从率为88.0%... 目的了解新生儿重症监护病房(NICU)医务人员手卫生依从性,通过采取干预措施提高NICU医务人员手卫生依从性。方法按照WHO手卫生调查方法,每月进行手卫生依从性调查,调查后及时反馈与培训等干预措施。结果医务人员总体手卫生依从率为88.0%,不同类型医务人员手卫生依从率存在差异,其中护工、卫生员最高为100.0%,医师最低为78.9%;不同指征中以进行清洁或无菌操作前最高为91.4%,接触患者周围环境及物品后最低为82.7%;随着一系列干预措施的实施与推进,医务人员手卫生依从性基线调查为70.8%,干预后保持在>80.0%,最高达96.7%。结论采取及时反馈、强化培训是提高医务人员手卫生依从率的重要措施。 展开更多
关键词 新生儿重症监护病房 手卫生 依从率 干预效果
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Psoriasin(S 100A7)蛋白的结构与功能 被引量:3
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作者 王英 赵晓航 《癌症进展》 2003年第1期10-13,共4页
Psoriasin(S100A7)是一种分子量为22.9 kD的同源二聚体蛋白,属于S100蛋白家族成员。通过与钙离子结合,参与细胞内外重要的生命活动。其基因定位于染色体1q21.2-q22。Psoriasin(S100A7)蛋白最初是从银屑病异常增生的角化细胞中分离得到的... Psoriasin(S100A7)是一种分子量为22.9 kD的同源二聚体蛋白,属于S100蛋白家族成员。通过与钙离子结合,参与细胞内外重要的生命活动。其基因定位于染色体1q21.2-q22。Psoriasin(S100A7)蛋白最初是从银屑病异常增生的角化细胞中分离得到的,故称为Psoriasin,即银屑素。Psoriasin在异常增生的角化细胞、膀胱鳞状细胞癌和原位及浸润乳腺癌中表达上调。Psoriasin这种分泌和表达特征有可能作为膀胱鳞状细胞癌和乳腺癌等恶性肿瘤的候选标志物。 展开更多
关键词 Psoriasin(S100A7) S100蛋白家族 钙结合蛋白 EF-手相
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