糖类抗原19-9单抗制备及DAS-ELISA的建立 被引量：3

1

作者 王云龙 翟晋豫 +4 位作者 王继创 程蕾 李玉林 葛新杰 毛烈 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1088-1092,共5页

目的：为制备糖类抗原19-9（Carbohydrate antigen 19-9，CA19-9）特异性单克隆抗体。方法：以免疫后小鼠血清效价及其IC50值确定融合用小鼠，融合、筛选获得阳性杂交瘤细胞株。制备、收集并纯化腹水抗体，紫外分光光度法测定抗体浓度... 目的：为制备糖类抗原19-9（Carbohydrate antigen 19-9，CA19-9）特异性单克隆抗体。方法：以免疫后小鼠血清效价及其IC50值确定融合用小鼠，融合、筛选获得阳性杂交瘤细胞株。制备、收集并纯化腹水抗体，紫外分光光度法测定抗体浓度；辣根过氧化物酶标记抗体后，筛选配对抗体建立DAS-ELISA检测方法，并与国外检测试剂盒进行对比验证检测性能。结果：细胞融合后获得3株单抗细胞株（ZJY1-2C8、ZJY2-7F10、ZJY3-1G9），筛选确定ZJY3-1G9作为包被抗体、ZJY2-7F10作为酶标抗体，成功建立DAS-ELISA检测方法，最低检测限为26.4 U/ml。线性范围为30～300 U/ml。通过检测病患血清33份，证实与国外试剂盒检测的相关系数r＝0.9504。结论：所制备的单抗可用于CA19-9试剂盒的研制。 展开更多

关键词 CA19—9 单克隆抗体 das—elisa

暂未订购

百合无症病毒的RT-PCR和IC-RT-PCR检测 被引量：43

2

作者 王继华 瞿素萍 +2 位作者 孔宝华 陆琳 余朝秀 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第2期148-150,173,共4页

应用DAS-ELISA,RT-PCR和IC-RT-PCR技术检测百合无症病毒(LSV)。结果表明:RT-PCR和IC-RT-PCR分别可从2ng和200ng百合叶片组织中检测出LSV,分别是DAS-ELISA敏感度的1000倍和10倍。百合鳞茎的不同取样部位对PCR检测结果的影响较大,RT-PCR... 应用DAS-ELISA,RT-PCR和IC-RT-PCR技术检测百合无症病毒(LSV)。结果表明:RT-PCR和IC-RT-PCR分别可从2ng和200ng百合叶片组织中检测出LSV,分别是DAS-ELISA敏感度的1000倍和10倍。百合鳞茎的不同取样部位对PCR检测结果的影响较大,RT-PCR难以从鳞片和根部检测出病毒,但IC-RT-PCR可以检测出病毒。 展开更多

关键词 百合 无症病毒 RT-PCR IC-RT-PCR das—elisa 检测技术 切花

在线阅读 下载PDF 职称材料

云南澳洲坚果苗木感染番茄斑萎病毒属病毒初报 被引量：17

3

作者 方琦 丁铭 +7 位作者 董家红 尹跃艳 张磊 苏晓霞 李婷婷 张丽珍 彭潞波 张仲凯 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期350-354,共5页

在云南省临沧市永德县海拔约800m的澳洲坚果(Macadamia sp.)种苗繁育基地发现叶片褪绿、黄化、叶脉间呈现近似圆形或不规则褐色枯斑的植株。为了确认植株病因,采集典型病株,应用电子显微镜负染色法、超薄切片和DAS-ELISA进行检测,在澳... 在云南省临沧市永德县海拔约800m的澳洲坚果(Macadamia sp.)种苗繁育基地发现叶片褪绿、黄化、叶脉间呈现近似圆形或不规则褐色枯斑的植株。为了确认植株病因,采集典型病株,应用电子显微镜负染色法、超薄切片和DAS-ELISA进行检测,在澳洲坚果苗木病叶分离物Maca-LC的粗汁液和病叶超薄切片中均观察到有类似番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒粒体。该病毒粒子为球形,直径80～85nm。进一步应用DAS-ELISA方法鉴定,病叶与Tospovirus的西瓜银色斑驳病毒(Watermelon silver mottle virus,WSMoV)/花生芽坏死病毒(Groundnut bud necrosisvirus,GBNV)复合抗血清呈阳性反应。通过病症典型症状、病毒形态学观察及血清学方法检测表明,侵染云南澳洲坚果种苗的病毒分离物Maca-LC为番茄斑萎病毒属Tospovirus病毒。 展开更多

关键词 澳洲坚果 番茄斑萎病毒属 超薄切片 das—elisa

原文传递

广东兰花两种主要病毒的检测 被引量：9

4

作者 吴竹妍 黎园 +4 位作者 何晓盈 童诗涵 孙辉 向梅梅 饶雪琴 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期14-16,F0002,共4页

采用双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)对44个兰花病样分别检测建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV),结果显示,有59.1%的兰花检出CyMV,36.4%的兰花检出ORSV,22.7%的兰花复合... 采用双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)对44个兰花病样分别检测建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV),结果显示,有59.1%的兰花检出CyMV,36.4%的兰花检出ORSV,22.7%的兰花复合感染了CyMV和ORSV。采用一步逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对24个兰花病样进行检测,结果有83.3%的兰花检出CyMV,75%的兰花检出ORSV,66.7%的兰花复合感染了CyMV和ORSV,可见RT-PCR检测灵敏度高于ELISA。 展开更多

关键词 兰花 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 das—elisa 一步法RT—PCR 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

品种与季节和日龄对仔猪血清中IgG含量的影响 被引量：4

5

作者 邱小田 张芸 +2 位作者 刘培琼 刘杨 张勤 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2006年第5期13-15,共3页

为了探索品种、季节和日龄对仔猪血清中IgG含量的影响,将280头试验猪按不同品种/类群(久仰香猪、剑白香猪和长白猪)、不同季节和不同日龄(0、4、7、14、21、28日龄)采样、然后用双抗体夹心ELISA法(DAS-ELISA)测定其血清中IgG含量。结果... 为了探索品种、季节和日龄对仔猪血清中IgG含量的影响,将280头试验猪按不同品种/类群(久仰香猪、剑白香猪和长白猪)、不同季节和不同日龄(0、4、7、14、21、28日龄)采样、然后用双抗体夹心ELISA法(DAS-ELISA)测定其血清中IgG含量。结果表明:剑白香猪IgG含量比久仰香猪和长白猪高,差异显著(P<0.05);冬季仔猪IgG含量比其他季节高,差异极显著(P<0.01),春季与夏、秋季差异显著(P<0.05);仔猪IgG含量随日龄而增加,但从21日龄开始下降。 展开更多

关键词 畜牧学 IGG das—elisa 血清 仔猪

在线阅读 下载PDF 职称材料

系统侵染的番茄植株中黄瓜花叶病毒的时序变化 被引量：5

6

作者 傅天珍 高永生 陈集双 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期359-365,共7页

采用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）和DAS—ELISA方法，研究了22—26℃温室条件下番茄幼苗中黄瓜花叶病毒CNA株系（CMV—CNA）各基因组RNA组分及其外壳蛋白（CP）含量的动态变化，同时结合同期感病植株症状发展和病情指数，分析并探讨CMV... 采用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）和DAS—ELISA方法，研究了22—26℃温室条件下番茄幼苗中黄瓜花叶病毒CNA株系（CMV—CNA）各基因组RNA组分及其外壳蛋白（CP）含量的动态变化，同时结合同期感病植株症状发展和病情指数，分析并探讨CMV各基因组RNA、CP以及病症显示程度之间的时间效应及其相关性。以18SrRNA为内参照，FQ-PCR相对定量分析结果显示：接种后5—30d，CMV三分体基因组RNA在系统侵染的番茄组织中负荷量变化趋势大体一致，但是不同时期含量差异显著，均经历对数增长期、稳定期和回落期。其中，以RNA2负荷量变化情况最为平缓。DAS—ELISA检测结果显示：CP含量随接种时间延长而持续升高，但其对数增长趋势相对滞后于基因组RNA。番茄幼苗发病症状与CMV基因组RNA及CP负荷量的变化趋势大体一致，但症状表现时间相对滞后。CMV—CNA株系在番茄幼苗中以基因组RNA、CP以及病症显示先后次序出现高峰期，显示病毒基因组RNA及其CP在植物组织内负荷量的变化与植株症状表现并不同步。其动态变化规律将为研究CMV侵染机制，病毒与寄主互作及防病控病提供量化依据。 展开更多

关键词 黄瓜花叶病毒 番茄 含量变化 FQ—PCR das—elisa

在线阅读 下载PDF 职称材料

李属坏死环斑病毒(PNRSV)新疆巴旦木分离物外壳蛋白基因(CP)片断的克隆与序列分析 被引量：4

7

作者 殷智婷 韩剑 +3 位作者 周国辉 张祥林 罗明 潘亚南 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期740-746,共7页

【目的】为了查明新疆巴旦木果树病原病毒的种类,为病毒的分子检测提供基础。【方法】采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA),从巴旦木果树叶片中检测到李属坏死环斑病毒(PNRSV)。以阳性样品的总RNA为模板进行PNRSV外壳蛋白基因(CP)R... 【目的】为了查明新疆巴旦木果树病原病毒的种类,为病毒的分子检测提供基础。【方法】采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA),从巴旦木果树叶片中检测到李属坏死环斑病毒(PNRSV)。以阳性样品的总RNA为模板进行PNRSV外壳蛋白基因(CP)RT-PCR扩增,对预期430 bp大小的4个扩增产物进行克隆、测序和序列分析。【结果】结果表明,PNRSV新疆巴旦木分离物CP基因的核苷酸和氨基酸序列与世界各地已报道的分离物具有较高的同源性,分别为80.0%～97.2%和80.1%～94.1%,其中与阿根廷分离物AY217的同源性最高;而与同属03亚组的苹果花叶病毒(ApMV)同源性较低,仅为52.9%～55.4%和45.6%～48.6%。新疆PNRSV各分离物之间CP基因高度同源。序列比对与系统发生树的分析显示,PNRSV新疆巴旦木分离物的株系属于GroupⅠ组。【结论】确定了PNRSV为侵染新疆巴旦木果树的病原病毒。这是PNRSV在新疆发现的首次报道。 展开更多

关键词 巴旦木 李属坏死环斑病毒(PNRSV) 双抗体夹心酶联免疫吸附法(das—elisa) RT—PCR CP基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

甘肃葡萄扇叶病毒和卷叶病毒的检测 被引量：3

8

作者 谭雪莲 马静芳 曹孜义 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第1期65-68,共4页

采用 DAS-ELISA 检测方法对甘肃地区的葡萄主要品种进行扇叶病毒和卷叶病毒的调查和测定。结果表明,这两种病毒病在甘肃地区的主要葡萄产区均有发生。兰州地区和一些老的葡萄产区葡萄带病毒病较严重。通过对比植株下部枝条的幼叶、幼茎... 采用 DAS-ELISA 检测方法对甘肃地区的葡萄主要品种进行扇叶病毒和卷叶病毒的调查和测定。结果表明,这两种病毒病在甘肃地区的主要葡萄产区均有发生。兰州地区和一些老的葡萄产区葡萄带病毒病较严重。通过对比植株下部枝条的幼叶、幼茎、老叶和老茎病原的检测结果,说明植株下部幼嫩组织是卷叶病毒最适的检测部位。 展开更多

关键词 葡萄 扇叶病毒 卷叶病毒 das—elisa

在线阅读 下载PDF 职称材料

小西葫芦黄花叶病毒石河子分离物的分子变异 被引量：3

9

作者 王志江 杨海燕 +1 位作者 向本春 郑银英 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2015年第6期677-682,共6页

为了研究小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)石河子分离物的分子变异情况,本研究采用ELISA及一步法RT-PCR对2010-2014年采自石河子地区的30个葫芦科植物样品进行ZYMV检测,从阳性样品中通过一步法RT-PCR克隆其ZYMV... 为了研究小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)石河子分离物的分子变异情况,本研究采用ELISA及一步法RT-PCR对2010-2014年采自石河子地区的30个葫芦科植物样品进行ZYMV检测,从阳性样品中通过一步法RT-PCR克隆其ZYMV分离物的CP基因,经PCR-SSCP分析,将带型一致的ZYMV分离物进行归类,每种类型中选取1个代表性的分离物进行CP基因测序,分析其核苷酸及推导的氨基酸序列的差异。结果显示:2种检测方法的检出率分别为63.33%和83.33%;根据ZYMV CP基因SSCP带型,将21个分离物分为5种不同的类型;其5个代表性分离物的CP核苷酸序列相似性为93.0%-99.8%,在系统进化树中位于2个不同的亚组;氨基酸序列的相似性为96.1%-99.6%,变异主要集中在N端的前41个氨基酸。这表明ZYMV石河子分离物间存在一定程度的分子变异。 展开更多

关键词 小西葫芦黄花叶病毒 das—elisa PCR—SSCP 分子变异

在线阅读 下载PDF 职称材料

龙山卷丹百合无症病毒的检测 被引量：4

10

作者 蒋辉 源朝政 陈海霞 《天津农业科学》 CAS 2014年第5期27-30,共4页

以龙山卷丹百合的病叶作为试材,采用DAS-ELISAS检测法对样品进行百合无症病毒的检测,检出率为58.3%;提取总RNA为模板,通过RT-PCR扩增其外壳蛋白基因,大小为287 bp,和预期条带大小一致。经Blast比对发现,该基因片段与Genbank上发表的LSV... 以龙山卷丹百合的病叶作为试材,采用DAS-ELISAS检测法对样品进行百合无症病毒的检测,检出率为58.3%;提取总RNA为模板,通过RT-PCR扩增其外壳蛋白基因,大小为287 bp,和预期条带大小一致。经Blast比对发现,该基因片段与Genbank上发表的LSV CP基因序列同源性达92%以上。 展开更多

关键词 卷丹百合 RT-PCR das—elisa 百合无症病毒

在线阅读 下载PDF 职称材料

进境玫瑰鲜切花李属坏死环斑病毒的检测鉴定

11

作者 于子翔 宋绍祎 +4 位作者 徐之雯 杨翠云 胡培龙 徐飞 于翠 《植物检疫》 北大核心 2017年第2期34-37,共4页

近期上海口岸连续多次从进境的玫瑰鲜切花中检出我国检疫性有害生物李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV),通过DAS-ELISA、RT-PCR、SYBR Green I实时荧光RT-PCR和序列分析等4种方法分别检测和复验该病毒,结果均为阳... 近期上海口岸连续多次从进境的玫瑰鲜切花中检出我国检疫性有害生物李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV),通过DAS-ELISA、RT-PCR、SYBR Green I实时荧光RT-PCR和序列分析等4种方法分别检测和复验该病毒,结果均为阳性,由此确定从进境玫瑰鲜切花中检出了PNRSV。同时本文分别检测玫瑰叶片、花瓣、茎干和花萼,结果均带有PNRSV,确定该病毒系统侵染玫瑰。 展开更多

关键词 李属坏死环斑病毒 das—elisa RT.PCR SYBR Green I实时荧光RT—PCR

原文传递

由美国进境生菜种子上番茄斑萎病毒的检测鉴定 被引量：10

12

作者 冯黎霞 武目涛 +1 位作者 于翠 吴兴海 《中国植保导刊》 北大核心 2017年第1期9-12,共4页

采用DAS-ELISA检测方法,从美国进境的生菜种子中筛选出携带有番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的疑似阳性样品,通过建立的RT-PCR方法对酶联免疫吸附测定阳性样品进行复核鉴定,并进一步测序。测序结果与GenBank中已有的番... 采用DAS-ELISA检测方法,从美国进境的生菜种子中筛选出携带有番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的疑似阳性样品,通过建立的RT-PCR方法对酶联免疫吸附测定阳性样品进行复核鉴定,并进一步测序。测序结果与GenBank中已有的番茄斑萎病毒分离物KT160282、AY744474、GU369726、KP330470的序列同源性达到96%。结果表明,TSWV可通过种子携带入境。 展开更多

关键词 生菜种子 番茄斑萎病毒 das—elisa RT—PCR

原文传递