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Bt Cry毒素广谱检测的胶体金侧流免疫层析试纸 研究 与设计
1
作者 金嘉凤 沈建兴 +8 位作者 沈成 陈蔚 孙吉 徐重新 谢雅晶 张霄 朱庆 刘媛 刘贤金 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第10期2057-2067,共11页
Bt Cry毒素是转基因农产品及其产地环境安全监管的重要对象。为实现转基因农产品的Bt Cry毒素快速检测,本研究基于抗体的胶体金侧流免疫层析法,以前期制备获得的具备Bt Cry毒素广谱识别能力的单克隆抗体为检测抗体,将其标记胶体金形成... Bt Cry毒素是转基因农产品及其产地环境安全监管的重要对象。为实现转基因农产品的Bt Cry毒素快速检测,本研究基于抗体的胶体金侧流免疫层析法,以前期制备获得的具备Bt Cry毒素广谱识别能力的单克隆抗体为检测抗体,将其标记胶体金形成金标探针;同时分别以前期制备获得的具备Bt Cry毒素广谱识别能力的多克隆抗体为检测线(T线)上的捕获抗体、以商品化的羊抗鼠二抗为质控线(C线)上的质控抗体,进而依托硝化纤维膜等组件构建形成胶体金免疫层析检测试纸,并对其检测性能进行试验。结果表明,本研究构建设计的胶体金免疫层析检测试纸对Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1Ah、Cry1B、Cry1C和Cry1F的最低肉眼检测线分别为0.5μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、0.5μg/mL和0.5μg/mL,说明本研究研发的检测试纸可用于Bt Cry毒素的广谱快速检测,具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 Bt cry毒素 检测试纸 侧流免疫层析 抗体 广谱检测
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苏云金芽胞杆菌LM1212菌株cry基因启动子的活性分析
2
作者 程丹丹 张睿彬 +2 位作者 冮丽丽 彭琦 宋福平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期626-641,共16页
【背景】前期发现一株具有独特分化表型的苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)LM1212,该菌株共有14种杀虫基因,组成了10个转录单元。利用源自菌株LM1212的晶体产生细胞调控因子(crystal producing cell regulator,CpcR)以及其可... 【背景】前期发现一株具有独特分化表型的苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)LM1212,该菌株共有14种杀虫基因,组成了10个转录单元。利用源自菌株LM1212的晶体产生细胞调控因子(crystal producing cell regulator,CpcR)以及其可以激活的cry35-like基因启动子,已在典型Bt菌株HD73中成功构建了非芽胞杀虫蛋白表达体系。【目的】比较菌株LM1212的不同杀虫基因启动子的转录活性,明确可被转录因子CpcR激活的且转录活性较高的启动子,以此为基础优化非芽胞杀虫蛋白表达体系。【方法】将10个启动子区域分别与lacZ报告基因融合构建在pHT304-18Z载体上,得到了10个重组质粒;然后将cpcR基因及其启动子(PcpcR-cpcR)分别反向构建在选取的启动子区域与lacZ报告基因的上游,得到可以表达CpcR且与上述构建相对应的10个重组质粒,将这些重组质粒分别转入不含CpcR的菌株HD73,即获得20个可用于测定β-半乳糖苷酶活性的重组菌株。通过光学显微镜观察和SDS-PAGE检测明确杀虫蛋白表达的情况。【结果】在菌株HD73中,β-半乳糖苷酶活性检测结果显示,启动子P1、P3、P4、P5、P6、P7和P8转录均可被转录因子CpcR激活,启动子P10的转录受到转录因子CpcR抑制。在CpcR存在时,P7、P8启动子的转录活性相对较高。利用转录因子CpcR和P7、P8启动子成功表达了对草地贪夜蛾有较高杀虫活性的Vip3Aa11蛋白。【结论】筛选到的高转录活性的启动子可用于优化非芽胞杀虫蛋白表达体系,从而构建新型工程菌,为草地贪夜蛾的生物防治提供新思路。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 cry基因启动子 转录活性 草地贪夜蛾
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苏云金芽孢杆菌Cry毒素共性结构短肽串联表达及功能分析
3
作者 金嘉凤 沈成 +4 位作者 孟萌 陈蔚 徐重新 刘媛 刘贤金 《河南农业科学》 北大核心 2024年第1期96-104,共9页
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Cry毒素是一类具有抗虫功能的微生物蛋白。将前期基于Bt Cry毒素家族氨基酸序列及结构信息设计获得的呈现Cry毒素共性结构的3个短肽,拼接成为具有免疫原性的长链多肽(Bt Cry-GXJG-11),以期研... 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Cry毒素是一类具有抗虫功能的微生物蛋白。将前期基于Bt Cry毒素家族氨基酸序列及结构信息设计获得的呈现Cry毒素共性结构的3个短肽,拼接成为具有免疫原性的长链多肽(Bt Cry-GXJG-11),以期研发Bt Cry毒素杀虫功能的模拟物及制备Bt Cry毒素检测用广谱抗体的免疫原。分子建模预测结果显示,Bt Cry-GXJG-11与Bt Cry毒素靶标害虫棉铃虫(Helicoverpa armigera)钙黏蛋白受体(HaCad-TBR)存在互作效应,并初步明确了两者互作的关键氨基酸位点为244TYR。经原核表达,获得了质量浓度为0.5 mg/mL的Bt Cry-GXJG-11纯蛋白,测得其与HaCad-TBR的亲和力常数(KD)为2.151×10^(-7)mol/L。室内生测试验表明,Bt Cry-GXJG-11对棉铃虫具有一定杀虫活性,校正死亡率为27.5%;且以其免疫的小鼠血清能同时识别6种Bt Cry毒素(Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1Ah、Cry1B、Cry1C、Cry1F)。 展开更多
关键词 Bt cry毒素 共性结构 分子互作 杀虫活性 广谱抗体 棉铃虫
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蓝光受体CRY2化身“暗黑舞者” 被引量：2
4
作者 景艳军 林荣呈 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期878-882,共5页
隐花色素(CRY)是调节植物光反应的蓝光受体。CRY在黑暗中以无活性的单体形式存在,吸收光子后构象变化并发生寡聚化,同时改变了其与互作蛋白间的亲和力,进而调控光反应蛋白的转录或稳定性以调节植物的生长发育。最近的一项研究发现了CRY... 隐花色素(CRY)是调节植物光反应的蓝光受体。CRY在黑暗中以无活性的单体形式存在,吸收光子后构象变化并发生寡聚化,同时改变了其与互作蛋白间的亲和力,进而调控光反应蛋白的转录或稳定性以调节植物的生长发育。最近的一项研究发现了CRY2的一个精巧作用机制,CRY不仅可被蓝光“激活”,还可被黑暗信号“激活”,从而构建起光信号和暗信号依赖的光受体信号转导更节能的模式。他们发现CRY2即便在黑暗中也能抑制根尖分生组织中的细胞分裂,调控根的伸长,并控制大量基因的表达。FL1和FL3与细胞分裂基因的染色质结合以促进其转录。需要说明的是,只有黑暗中的CRY2单体可与FL1/FL3相互作用,从而抑制后者促进根伸长的功能,蓝光则解除该抑制作用。这一发现重塑了人们对光受体的认识,为理解植物感知和响应不同信号以调节生长和适应性提供了全新的视角,对深入理解基因的功能极具启发意义。 展开更多
关键词 crys(cryptochromes) 蓝光受体 拟南芥 FL1/FL3(FORKED-LIKE 1/3) 根伸长 细胞分裂
原文传递
高粱隐花色素CRY基因家族鉴定与表达分析
5
作者 果永超 王志芳 +7 位作者 焦志银 王金萍 石燕楠 牛敬田 王新玉 刘皓然 张静 吕芃 《河北农业科学》 2024年第5期68-78,89,共12页
为了研究植物隐花色素基因(CRY)在高粱生长发育、胁迫响应中所起的作用,首先,利用全基因组BLAST对高粱基因组进行分析挖掘潜在CRY同源基因,进一步利用在线网站ExPASy和TBtools软件对其理化性质、基因结构、进化关系、基因共线性、启动... 为了研究植物隐花色素基因(CRY)在高粱生长发育、胁迫响应中所起的作用,首先,利用全基因组BLAST对高粱基因组进行分析挖掘潜在CRY同源基因,进一步利用在线网站ExPASy和TBtools软件对其理化性质、基因结构、进化关系、基因共线性、启动子顺式调控元件进行分析;同时,采用高粱公共转录组数据库及qRT-PCR对其组织表达模式和在不同环境胁迫下的响应模式进行研究。结果表明:通过基因家族鉴定,得到9个SbCRYs家族成员,分布在5条染色体上,命名为SbCRY1—SbCRY9。该基因家族氨基酸长度为447~710个,蛋白质分子质量为48.29~110.13 kD,等电点为5.53~9.44。进化分析结果显示,该家族与拟南芥、水稻、谷子、玉米的CRY成员一起可被分为6个亚家族。SbCRYs成员之间仅存在1对同源基因对,而与水稻、谷子、玉米之间分别存在8、9、11对同源基因对。通过对SbCRYs基因启动子区进行分析,发现存在着激素和环境胁迫响应元件,且这些基因存在明显的组织表达特异性。高粱CRY家族成员能够不同程度地受到高温胁迫、盐胁迫、干旱胁迫和蚜虫侵害的诱导表达,其中SbCRY2、SbCRY3和SbCRY4参与了盐和干旱胁迫的响应,SbCRY2、SbCRY3、SbCRY4、SbCRY6、SbCRY7和SbCRY9参与了高粱蚜虫胁迫的响应。这些结果揭示了高粱SbCRYs基因在不同组织中可能的功能以及对非生物胁迫的响应。 展开更多
关键词 高粱 cry基因 进化分析 组织特异表达 胁迫响应
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转基因高粱Cry1Ab蛋白含量的比较研究 被引量：3
6
作者 张明洲 陈宗伦 +2 位作者 方美明 崔海瑞 夏英武 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期391-394,共4页
通过农杆菌介导法将杀虫晶体蛋白基因cry1Ab导入高粱恢复系115中,共获得13个独立的转基因株系,26株转基因植株,转化率为5.1%;GUS活性、PCR、Southern和Western杂交分析表明,此基因已整合进高粱基因组并得到正确表达。利用ELISA试剂盒测... 通过农杆菌介导法将杀虫晶体蛋白基因cry1Ab导入高粱恢复系115中,共获得13个独立的转基因株系,26株转基因植株,转化率为5.1%;GUS活性、PCR、Southern和Western杂交分析表明,此基因已整合进高粱基因组并得到正确表达。利用ELISA试剂盒测定Cry1Ab蛋白含量,结果表明,不同转基因植株的Cry1Ab蛋白含量有明显差异,最高可达0.850μg/g,占可溶性蛋白的0.016%,还有一些转基因植株中不能表达;同一转基因植株的不同组织中表达量有明显差异,其顺序为:叶>颖壳>籽粒>根>茎;不同部位的叶片也有差异,其顺序为:中部叶>基部叶>新叶。 展开更多
关键词 转基因高粱 cry1Ab蛋白 cry1AB基因 农杆菌
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红树林沉积物Bt菌株的分离与cry基因型的鉴定 被引量：7
7
作者 林毅 方光伟 《生态毒理学报》 CAS CSCD 2010年第6期889-893,共5页
从收集自泉州洛江红树林保护区的400个沉积物土壤样品中,分离到18株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt).利用PCR-RFLP体系对Bt菌株杀虫晶体蛋白的基因型进行了鉴定,发现15株Bt含有cry1基因,4株含有cry2基因,有3株分别含有cry7、... 从收集自泉州洛江红树林保护区的400个沉积物土壤样品中,分离到18株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt).利用PCR-RFLP体系对Bt菌株杀虫晶体蛋白的基因型进行了鉴定,发现15株Bt含有cry1基因,4株含有cry2基因,有3株分别含有cry7、cry8、cry9基因.克隆了一个新型的cry2Ab基因,其编码蛋白与现有Cry2Ab型杀虫晶体蛋白的最高同源性为95%. 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 红树林沉积物 cry基因鉴定 cry2AB
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对甜菜夜蛾高杀虫毒力苏云金杆菌菌株的筛选及cry2Ah5的克隆表达 被引量：2
8
作者 张雅昆 赵丹 +3 位作者 郭巍 王伟 陆秀君 李瑞军 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期414-420,共7页
利用生物活性测定方法从本实验室已分离保存的Bt菌株中筛选出了5株对甜菜夜蛾具有较高杀虫毒力的菌株。该5株Bt菌株对甜菜夜蛾初孵幼虫的LC50值为0.556～0.914 mg/mL胞晶混合物,其中GS3菌株杀虫活性最高,LC50值为0.556 mg/mL胞晶混合物... 利用生物活性测定方法从本实验室已分离保存的Bt菌株中筛选出了5株对甜菜夜蛾具有较高杀虫毒力的菌株。该5株Bt菌株对甜菜夜蛾初孵幼虫的LC50值为0.556～0.914 mg/mL胞晶混合物,其中GS3菌株杀虫活性最高,LC50值为0.556 mg/mL胞晶混合物;包含晶体形态主要是球形、大菱形、小菱形等;所含基因类型主要是cry1Aa、cry1Ab、cry1La、cry1Ia、cry1Ib、cry2Ab、cry2Ad、cry2Ah、cry7Ab、cry9Ba等;5株菌株均表达约60 kD和130～150 kD蛋白,其中2株还表达较弱的80 kD蛋白。从GS3菌株中克隆得到一种新的cry2A基因,Gen Bank登录号为KT692984,由Bt基因国际命名委员会命名为cry2Ah5。该基因开放阅读框为1899 bp,编码632个氨基酸,编码蛋白分子量为70.8 kD,等电点p I为8.18,与其他Cry2Ah蛋白序列相似性为97%～99%。该基因在大肠杆菌BL21（DE3）中表达约70 kD蛋白,与预测分子量相符。本研究筛选得到5株对甜菜夜蛾具有较高杀虫毒力的Bt菌株,克隆表达了一种新的cry2A基因cry2Ah5,为甜菜夜蛾的生物防治提供了新的菌株及基因资源。 展开更多
关键词 苏云金杆菌 甜菜夜蛾 cry基因 cry2Ah5
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黑线仓鼠Cry1、Cry2克隆及生物信息学分析 被引量：2
9
作者 朱涵毅 薛慧良 +1 位作者 徐金会 吴明 《曲阜师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2019年第4期74-82,共9页
隐花色素(Cryptochromes,包括Cry1和Cry2)编码黄素腺嘌呤二核苷酸结合蛋白,是昼夜节律核心振荡器复合物的关键组分,是各种生理功能的重要调节因子.本实验以黑线仓鼠(Cricetulus barabensis)为材料,通过设计特异性引物,RT-PCR技术克隆得... 隐花色素(Cryptochromes,包括Cry1和Cry2)编码黄素腺嘌呤二核苷酸结合蛋白,是昼夜节律核心振荡器复合物的关键组分,是各种生理功能的重要调节因子.本实验以黑线仓鼠(Cricetulus barabensis)为材料,通过设计特异性引物,RT-PCR技术克隆得到黑线仓鼠Cry1 cDNA序列1822 bp(GeneBank登录号:MK796241)、Cry2 cDNA序列1945 bp(GeneBank登录号:MK796242).运用生物信息学对Cry1、Cry2核酸序列以及蛋白质序列进行分析,构建系统进化树,结果表明:测得的Cry1 cDNA包括一个完整的开放阅读框1764 bp,部分5′端非翻译区和部分3′非翻译区,编码587个氨基酸,A+T含量略高于G+C含量;测得的Cry2的cDNA包括一个完整的开放阅读框1794 bp,部分5′端非翻译区和部分3′非翻译区,编码597个氨基酸,G+C含量远高于A+T含量,提示其Tm值较高,热稳定性强.CRY1、CRY2理论蛋白分子量为66469.86 Da、67427.08 Da,等电点(pI)为8.40、8.82,均为不稳定蛋白.CRY1、CRY2蛋白跨膜区和疏水性分析和信号肽分析等均表明,整体疏水性不强,为亲水性蛋白;没有信号肽,不属于分泌蛋白,与其作为转录抑制因子相符合.功能结构域预测表明,二者均含有两个高度保守的功能结构域:DNA光解酶及FAD结合域.同源性比对及系统进化树分析显示,黑线仓鼠与中国仓鼠亲缘关系最近,与灵长类目及鸡形目亲缘关系较远,这与传统的分类物种分类方式相一致,证实本实验测得的Cry1、Cry2基因序列正确,体现了Cry1、Cry2进化的保守性.本实验为探究昼夜节律基因Cry1、Cry2在动物繁殖调控中的作用奠定了基础,具有重要的理论意义. 展开更多
关键词 黑线仓鼠 cry1 cry2 克隆 生物信息学
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苏云金芽孢杆菌沉默基因cry2Ab3在大肠杆菌中表达及杀虫活性研究 被引量：10
10
作者 陈中义 李长友 +2 位作者 刘加宝 张杰 黄大昉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期561-566,共6页
对苏云金芽孢杆菌C0 0 2菌株cry2Ab基因阳性克隆pHT3 1 5 2Ab进行亚克隆和序列测定 ,在CenBank注册后经国际Bt杀虫蛋白基因委员会正式命名为cry2Ab3。序列分析表明该基因含有芽孢杆菌特异的RBS序列 ,但没有功能性启动子 ,为沉默基因。... 对苏云金芽孢杆菌C0 0 2菌株cry2Ab基因阳性克隆pHT3 1 5 2Ab进行亚克隆和序列测定 ,在CenBank注册后经国际Bt杀虫蛋白基因委员会正式命名为cry2Ab3。序列分析表明该基因含有芽孢杆菌特异的RBS序列 ,但没有功能性启动子 ,为沉默基因。根据大肠杆菌T7表达载体pET 2 1b克隆位点和cry2Ab3开放阅读框架 (ORF)两端序列 ,设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3 ,高保真PCR扩增获得cry2Ab3完整ORF ,经酶切、连接构建了重组表达质粒pET 2Ab3。表达质粒导入大肠杆菌BL2 1 (DE3 ) ,IPTG诱导后 ,SDS PAGE电泳证实了cry2Ab3的表达。生物测定显示诱导培养物对棉铃虫初孵幼虫和小菜蛾二龄幼虫具有杀虫活性 ,能明显抑制二化螟二龄幼虫生长 ,但对甜菜夜蛾和玉米螟没有明显活性。进一步提取Cry2Ab3蛋白 ,生测结果表明其对棉铃虫LC50 为 3 2 5 5 μg g。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 沉默基因 cry2Ab3 大肠杆菌 表达 杀虫活性
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我国不同森林立地带土壤中苏云金芽孢杆菌cry基因资源研究 被引量：6
11
作者 张永安 宋福平 +2 位作者 戴莲韵 张杰 李长友 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2003年第1期19-25,共7页
利用PCR RFLP鉴定体系和SDS PAGE表达蛋白的分析方法,分析了来自我国不同森林立地带(寒温带、中温带、暖温带、北亚热带、中亚热带、南亚热带、高原亚热带、热带)自然保护区森林土壤中分离的72株苏云金芽孢杆菌的cry1、cry2、cry3、cry4... 利用PCR RFLP鉴定体系和SDS PAGE表达蛋白的分析方法,分析了来自我国不同森林立地带(寒温带、中温带、暖温带、北亚热带、中亚热带、南亚热带、高原亚热带、热带)自然保护区森林土壤中分离的72株苏云金芽孢杆菌的cry1、cry2、cry3、cry4、cry5、cry8、cry9、cry10、cry11、cry1I杀虫晶体蛋白基因类型,表达蛋白和杀虫活性的生物测定。研究表明:同时含有cry1、cry2、cry1I3类基因的有21株菌,6株菌含有cry1、cry2类基因,4株菌含有cry1和cry1I基因,只含有cry1基因的有1株,cry2基因的4株,36株菌不含所鉴定的10类基因。同时证明:绝大多数含有cry1基因的菌株表达了130kD蛋白,含有cry2基因的菌株表达了60kD的蛋白。对不同农、林害虫棉铃虫、杨扇舟蛾、舞毒蛾、马尾松毛虫、黄粉甲、榆兰叶甲、落叶松叶蜂等幼虫的杀虫活性进行了生物测定。进一步证明了苏云金芽孢杆菌cry基因,表达蛋白及杀虫活性三者的相关性。为生产和科研提供了生物治虫、抗虫育种新的苏云金芽孢杆菌cry基因资源。 展开更多
关键词 森林立地带 土壤 苏云金芽孢杆菌 杀虫晶体蛋白 cry 基因 杀虫剂 杀虫活性
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PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究 被引量：8
12
作者 陈中义 吴限 +3 位作者 张杰 宋福平 管宇 黄大昉 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期398-402,共5页
Bt菌株C0 0 2对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力 ,PCR RFLP鉴定含有cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知杀虫蛋白基因cryX等 ,其中cry1Ca位于染色体DNA 6～ 9kb的EcoRI片段。染色体和质粒DNA分别经EcoRI完全酶切和Sau3AI部分酶切、电泳回收 6... Bt菌株C0 0 2对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力 ,PCR RFLP鉴定含有cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知杀虫蛋白基因cryX等 ,其中cry1Ca位于染色体DNA 6～ 9kb的EcoRI片段。染色体和质粒DNA分别经EcoRI完全酶切和Sau3AI部分酶切、电泳回收 6～ 9kb片段。E .coli Bt穿梭载体pHT315分别与目的DNA连接、转化大肠杆菌感受态细胞后获得了相应的DNA文库。约 5 0个转化子合为一个转化子池 ,采用PCR RFLP方法快速检测 ,分别从约 2 0 0 0质粒DNA文库转化子和 4 0 0个染色体文库转化子中筛选获得了cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知基因cryX的阳性克隆 ,相应命名为pHT 1Aa、pHT 1Ca、pHT 2Ab和pHT X。限制酶切分析表明 ,含有cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab基因的克隆片段均含有相应基因的保守物理图谱。进一步将这些质粒分别导入Bt无晶体突变株CryB-,SDS PAGE分析表明 ,只有cry1Ca表达了约 130ku杀虫晶体蛋白。初步杀虫生测结果显示 ,cry1Ca对甜菜夜蛾具有高毒力 ,7d校正死亡率为 10 0 %。 展开更多
关键词 甜菜夜蛾 苏云金芽孢杆菌 微生物杀虫剂 DNA文库 cry基因 基因克隆 PCR-RFLP 农业害虫 杀虫活性 基因分离
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苏云金芽孢杆菌cry基因芯片检测方法的研究 被引量：10
13
作者 刘旭光 宋福平 +3 位作者 文思远 王升启 黄大昉 张杰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期987-992,共6页
建立了一种不经PCR扩增而直接应用寡核苷酸芯片从苏云金芽孢杆菌总DNA中检测cry基因的方法。对探针长度、浓度、总DNA含量、标记方法以及灵敏度等条件进行了研究。结果表明,用高浓度Klenow酶随机标记高浓度的总DNA与寡核苷酸探针(40～50... 建立了一种不经PCR扩增而直接应用寡核苷酸芯片从苏云金芽孢杆菌总DNA中检测cry基因的方法。对探针长度、浓度、总DNA含量、标记方法以及灵敏度等条件进行了研究。结果表明,用高浓度Klenow酶随机标记高浓度的总DNA与寡核苷酸探针(40～50mer、40μmol·L-1)杂交可用于检测Bt菌株中含有的cry基因;不同长度探针之间对杂交信号的影响存在显著性差异(P<0.01),而不同浓度的探针之间没有显著性差异。此方法的其它条件为杂交温度42℃、时间3h;检测的样品总DNA的灵敏度约为2.5μg;标记产物杂交用量(0.625～20μg)的对数值与信号值的对数值之间存在明显的线性关系(r2=0.985～0.989)。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry基因 基因芯片 检测方法 杀虫晶体蛋白 生物防治
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中国苏云金芽孢杆菌的分布与cry基因的多样性 被引量：11
14
作者 王津红 吴卫辉 +1 位作者 陈月华 任改新 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期50-55,共6页
采集全中国 2 7个省、自治区及 4个直辖市昆虫孳生地粉尘、土壤等样品 1 0 80份 ,在其中的40 6份中分离到苏云金芽孢杆菌 965株。镜检可观察到大菱形、小菱形、方形、长方形、圆形、椭圆形、镶嵌形和不规则形等 8种主要形态的伴孢晶体 ... 采集全中国 2 7个省、自治区及 4个直辖市昆虫孳生地粉尘、土壤等样品 1 0 80份 ,在其中的40 6份中分离到苏云金芽孢杆菌 965株。镜检可观察到大菱形、小菱形、方形、长方形、圆形、椭圆形、镶嵌形和不规则形等 8种主要形态的伴孢晶体 ;采用cryⅠ、cryⅡ、cryⅢ、cryⅣ和cryⅤ基因的通用引物对 2 2 1株Bt分离株进行的PCR检测结果表明 :各类基因的含量依次为cryⅠ >cryⅡ >cryⅤ>cryⅢ基因 ,分别占被检菌株的 75 6%、 67 9%、 58 4%和 1 4 5% ,没有检测到cryⅣ基因 ,共得到1 0种基因组合类型。对其中含有cryⅠ基因的菌株分别以cryIAc、cryIC和cryIE基因的特异性引物进行PCR检测 ,得到 2 0株同时含有cryIAc、cryIC、cryⅡ和cryⅤ优良基因组合的Bt分离株 ,其中菌株Bt 1 5A3对棉铃虫、甜菜夜蛾及小菜蛾均表现出高毒力 ,具有生产开发潜力。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 伴孢晶体形态 PCR cry基因 多样性
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转Bt-cry1 Ab玉米花粉对异色瓢虫生长发育及体内三种代谢酶活性的影响 被引量：14
15
作者 张永军 孙毅 +3 位作者 袁海滨 吴孔明 彭于发 郭予元 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期898-902,共5页
用转Bt-cry1 Ab基因玉米花粉饲喂异色瓢虫,初步研究了转基因玉米花粉对瓢虫的影响。结果显示,异色瓢虫取食混有适量蚜虫的转Bt-cry1 Ab基因玉米花粉时与取食混有适量蚜虫的非转基因亲本玉米花粉时相比,各虫态发育历期没有显著差异;取食... 用转Bt-cry1 Ab基因玉米花粉饲喂异色瓢虫,初步研究了转基因玉米花粉对瓢虫的影响。结果显示,异色瓢虫取食混有适量蚜虫的转Bt-cry1 Ab基因玉米花粉时与取食混有适量蚜虫的非转基因亲本玉米花粉时相比,各虫态发育历期没有显著差异;取食转Bt-cry1 Ab基因玉米花粉对异色瓢虫的体重增加无明显影响。多数龄期内取食转基因玉米花粉的异色瓢虫体内的α-乙酸萘酯酶活性、乙酰胆碱酯酶活性以及谷光甘肽-S-转移酶活性与对照组相比没有显著差异。用酶联免疫(ELISA)方法在取食转Bt-cry1Ab基因玉米花粉的瓢虫体内未检测到Bt杀虫蛋白。转Bt-cry1Ab玉米花粉对异色瓢虫生长发育没有显著负面影响,初步证明Bt玉米MON810花粉对异色瓢虫是安全的。 展开更多
关键词 转Bt-cry1Ab基因玉米 花粉 异色瓢虫 生长发育 代谢解毒酶 酶活性
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苏云金芽孢杆菌cry基因研究进展 被引量：24
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作者 李雪雁 李照会 许维岸 《昆虫知识》 CSCD 北大核心 2003年第1期9-13,共5页
从cry基因的分类、cry基因与转座因子的关系、cry基因的表达调控以及cry基因的作用机理等 4个方面综述了cry基因的研究进展 ,并简要展望了其研究和应用前景。
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry基因 研究进展 杀虫晶体蛋白 基因表达
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苏云金杆菌Bt-59菌株Cry/Cyt毒素蛋白鉴定及杀虫活性 被引量：7
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作者 韩光杰 徐灵环 +5 位作者 李传明 刘琴 彭琦 徐彬 宋福平 徐健 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期458-464,共7页
苏云金杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp. israelensis,Bti)是防治蚊幼虫的重要病原细菌,不同菌株间毒素蛋白种类和分布不尽相同。本研究利用苏云金杆菌以色列亚种Bt-59菌株的全基因组数据,对潜在的毒素基因种类、分布及菌... 苏云金杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp. israelensis,Bti)是防治蚊幼虫的重要病原细菌,不同菌株间毒素蛋白种类和分布不尽相同。本研究利用苏云金杆菌以色列亚种Bt-59菌株的全基因组数据,对潜在的毒素基因种类、分布及菌株杀虫活性进行了分析。结果表明,Bt-59菌株除了含有Bti标准菌株主要毒素基因外,还含有Cry4-like基因,且Cry10Aa和Cyt1Ca基因在质粒4上发生了易位。质粒5上的Cry60Aa和Cry60Ba基因编码的毒素蛋白含有ETXMTX2结构域,并与苏云金杆菌jegathesan亚种的同源蛋白一致性为100%。Cyt1Ca蛋白除了含有Bacthurtoxin结构域外,还含有2个串联的RicinBlectin2结构域。菌株Bt-59对蚊幼虫具有较高的杀虫活性,对白纹伊蚊Aedes albopictus和淡色库蚊Culex pipiens pallens的LC50分别为1.239μL/L和0.341μL/L。研究结果明确了菌株Bt-59毒素蛋白的种类和特征,为菌株遗传改良提供理论基础。 展开更多
关键词 苏云金杆菌 cry蛋白 Cyt蛋白 蚊子 生物防治
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苏云金芽孢杆菌cry基因在大肠杆菌中表达产物和生物活性 被引量：4
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作者 韩岚岚 宋福平 +3 位作者 李长友 张杰 赵奎军 黄大昉 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期5-9,共5页
研究了几种Btcry基因于大肠杆菌 (Escherichiacoli)中表达产物在pH 10 0的 5 0mmol/L碳酸钠和 2 0mmol/L乙醇胺溶解液中的溶解性 ,发现同样的Cry蛋白在碳酸钠中的溶解度大于乙醇胺。通过胰蛋白酶消化 ,明确Cry1Ca7、Cry1Ia8酶解产物为 ... 研究了几种Btcry基因于大肠杆菌 (Escherichiacoli)中表达产物在pH 10 0的 5 0mmol/L碳酸钠和 2 0mmol/L乙醇胺溶解液中的溶解性 ,发现同样的Cry蛋白在碳酸钠中的溶解度大于乙醇胺。通过胰蛋白酶消化 ,明确Cry1Ca7、Cry1Ia8酶解产物为 38kD多肽 ;Cry1Ie1、Cry1Cb2、Cry2Ab4酶解产物为 4 1kD多肽 ;Cry1Ac酶解产物为 6 0kD多肽。采用FPLC层析方法对 6种原毒素及其酶解后得到的毒素多肽进行了分离纯化 ,比较了原毒素和毒素的杀虫活性的差异。其结果表明 ,Cry1Ac的原毒素和毒素对棉铃虫初孵幼虫的校正死亡率均为 10 0 % ,Cry2Ab4的原毒素的毒力高于其酶解毒素。 展开更多
关键词 大肠杆菌 表达产物 生物活性 苏云金芽孢杆菌 cry基因 原毒素 毒素 杀虫活性 基因表达 微生物杀虫剂
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银腺杨转Cry I Ac和API双价抗虫基因的研究 被引量：10
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作者 李科友 樊军锋 +2 位作者 赵忠 李玲 朱海兰 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2007年第5期699-704,共6页
在建立以银腺杨（84K）叶片为外植体的再生系统基础上，通过农杆菌介导法把CryⅠ4c和API双价抗虫基因导人银腺杨（84K）基因组中。转化杨树叶片，在含有卡那霉素的培养基上诱导不定芽和诱导生根，获得了400株卡那霉素抗性转化再生植株... 在建立以银腺杨（84K）叶片为外植体的再生系统基础上，通过农杆菌介导法把CryⅠ4c和API双价抗虫基因导人银腺杨（84K）基因组中。转化杨树叶片，在含有卡那霉素的培养基上诱导不定芽和诱导生根，获得了400株卡那霉素抗性转化再生植株。抗性植株经PCR检测，有70株呈阳性。通过Southern杂交和ELISA检测进一步证明CryⅠ4c和API双价抗虫基因已整合到银腺杨（84K）基因组中，拷贝数1～2个，并得到了表达。转化植株用杨扇舟蛾幼虫进行饲虫试验，结果表明昆虫幼虫的死亡率高达60．0％～80．0％。同时，存活幼虫的生长发育也受到了明显抑制。本研究结果为杨树抗虫育种提供了新的种质资源。 展开更多
关键词 银腺杨(84K) cryⅠ 4c和API基因 转化 抗虫性
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利用花粉管通道法将抗虫基因(cryV)转入大豆的研究 被引量：8
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作者 武小霞 刘伟婷 +3 位作者 刘琦 李静 马永 李文滨 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期565-568,574,共5页
利用花粉管通道法,在大豆的盛花期将外源抗虫基因(cry V)转入到大豆中,转化成活率达43.88%,成荚率达33.6%。将收获的的种子种植在大豆所温室中,通过卡那霉素筛选、PCR鉴定,Southern-blot检测和RT-PCR检测,共检测出5株阳性植株,确定外源... 利用花粉管通道法,在大豆的盛花期将外源抗虫基因(cry V)转入到大豆中,转化成活率达43.88%,成荚率达33.6%。将收获的的种子种植在大豆所温室中,通过卡那霉素筛选、PCR鉴定,Southern-blot检测和RT-PCR检测,共检测出5株阳性植株,确定外源抗虫基因(cry V)已转入到大豆中,转化率达1.8‰。 展开更多
关键词 大豆 抗虫基因(cry V) 花粉管通道法
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