目的探讨环状RNA(CircRNA)-CDR1as靶向miR-7-5p/DNA聚合酶ε亚基4(POLE4)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞恶性生物学行为的影响。方法收集2023年1月-2024年6月于儋州市人民医院接受手术的30例NSCLC患者的肿瘤组织和癌旁组织,检测CircRNA-CDR...目的探讨环状RNA(CircRNA)-CDR1as靶向miR-7-5p/DNA聚合酶ε亚基4(POLE4)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞恶性生物学行为的影响。方法收集2023年1月-2024年6月于儋州市人民医院接受手术的30例NSCLC患者的肿瘤组织和癌旁组织,检测CircRNA-CDR1as、miR-7-5p、POLE4在肿瘤组织、癌旁组织及NSCLC细胞(A549、PC9、NCI-H1299、NCI-H1650)、正常肺上皮细胞(BEAS-2B)中的表达水平;将A549细胞分为对照组、sh-CircRNA-CDR1as组、阴性对照(sh-NC)组、sh-CircRNA-CDR1as+miR-7-5p抑制剂(in-miR-7-5p)组、sh-CircRNACDR1as+miR抑制剂(in-miR-NC)组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、程序性死亡配体-1(PD-L1)、抗BCL2相关x蛋白(BAX)、POLE4、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;实时荧光定量PCR检测CircRNA-CDR1as、miR-7-5p、POLE4基因表达;并验证miR-7-5p与CircRNA-CDR1as或POLE4靶向关系。结果肿瘤组织中CircRNACDR1as、POLE4表达水平较癌旁组织显著升高,miR-7-5p表达水平较癌旁组织显著降低,差异均有统计学意义(t=16.877、21.546、16.383,P均<0.05);A549、PC9、NCI-H1299、NCI-H1650细胞中CircRNA-CDR1as、POLE4表达水平较BEAS-2B细胞显著升高,miR-7-5p表达水平较BEAS-2B细胞显著降低,差异均有统计学意义(F=32.878、33.836、64.688,P均<0.05)。与对照组、sh-NC组比较,sh-CircRNA-CDR1as组细胞凋亡、BAX表达、miR-7-5p表达显著增加,细胞24和48 h OD450值、PCNA表达、侵袭、迁移及MMP-9、PD-L1表达、CircRNA-CDR1as、POLE4蛋白及mRNA表达显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);与sh-CircRNA-CDR1as+in-miR-NC组比较,sh-CircRNA-CDR1as+in-miR-7-5p组细胞凋亡、BAX表达、miR-7-5p表达显著降低,细胞24和48 h OD450值、PCNA表达、侵袭、迁移及MMP-9、PD-L1表达、POLE4蛋白及mRNA表达显著增加,差异均有统计学意义(P均<0.05);各组细胞凋亡、BAX、miR-7-5p表达、细胞24和48 h OD450值、PCNA表达、侵袭、迁移、MMP-9、PD-L1、CircRNA-CDR1as、POLE4蛋白及mRNA表达比较差异均有统计学意义(F=149.200、95.529、33.807、29.678、28.905、71.011、43.873、50.978、59.597、46.174、103.372、54.760、45.096,P均<0.05)。CircRNA-CDR1as-WT、POLE4-WT分别与miR-7-5p或miR-NC共转染,两组间荧光素酶活性差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论干扰CircRNA-CDR1as靶向miR-7-5p/POLE4可对NSCLC细胞恶性生物学行为发挥抑制作用。展开更多
目的探索酮还原酶家族1成员C3(aldo-keto reductase family 1 member C3,AKR1C3)对乳腺癌恶性细胞生物学行为的干预作用及对程序性细胞死亡蛋白/程序性死亡-配体1(programmed cell death protein1/programmed death-ligand1,PD-1/PD-L)...目的探索酮还原酶家族1成员C3(aldo-keto reductase family 1 member C3,AKR1C3)对乳腺癌恶性细胞生物学行为的干预作用及对程序性细胞死亡蛋白/程序性死亡-配体1(programmed cell death protein1/programmed death-ligand1,PD-1/PD-L)通路的影响。方法把MCF-7人乳腺癌细胞中NC组和AKR1C3组分别转染空质粒和AKR1C3质粒,采用MTT法检测转染后24 h、48 h、72 h细胞活力;采用流式细胞技术测定各组细胞的存活率以及早期、晚期凋亡比例;通过Transwell实验对各组细胞的迁移和侵袭能力进行检测;通过Western blot检测各组细胞PD-1、PD-L1、蛋白激酶B(protein kinase b,AKT)蛋白表达水平。使用C57BL/6小鼠构建荷瘤模型,将采用人乳腺癌MCF-7细胞转染NC质粒和AKR1C3质粒进行细胞荷瘤,每3 d测量瘤体积,持续21 d,绘制两组小鼠肿瘤生长曲线,并于实验终点测量肿瘤质量。结果相较于NC组,AKR1C3组细胞活力降低(P<0.05),并且具有时间依赖效应(P<0.05),迁移和侵袭能力降低(P<0.05),早期凋亡和晚期凋亡比例升高(P<0.05),PD-1、PD-L1、AKT蛋白表达水平降低(P<0.05)。动物实验表明,AKR1C3组小鼠肿瘤体积降低,肿瘤质量下降(P<0.05)。结论AKR1C3可以抑制人乳腺癌细胞恶性生物学行为,抑制PD-1/PDL1信号通路蛋白表达。展开更多
文摘目的探讨环状RNA(CircRNA)-CDR1as靶向miR-7-5p/DNA聚合酶ε亚基4(POLE4)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞恶性生物学行为的影响。方法收集2023年1月-2024年6月于儋州市人民医院接受手术的30例NSCLC患者的肿瘤组织和癌旁组织,检测CircRNA-CDR1as、miR-7-5p、POLE4在肿瘤组织、癌旁组织及NSCLC细胞(A549、PC9、NCI-H1299、NCI-H1650)、正常肺上皮细胞(BEAS-2B)中的表达水平;将A549细胞分为对照组、sh-CircRNA-CDR1as组、阴性对照(sh-NC)组、sh-CircRNA-CDR1as+miR-7-5p抑制剂(in-miR-7-5p)组、sh-CircRNACDR1as+miR抑制剂(in-miR-NC)组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、程序性死亡配体-1(PD-L1)、抗BCL2相关x蛋白(BAX)、POLE4、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;实时荧光定量PCR检测CircRNA-CDR1as、miR-7-5p、POLE4基因表达;并验证miR-7-5p与CircRNA-CDR1as或POLE4靶向关系。结果肿瘤组织中CircRNACDR1as、POLE4表达水平较癌旁组织显著升高,miR-7-5p表达水平较癌旁组织显著降低,差异均有统计学意义(t=16.877、21.546、16.383,P均<0.05);A549、PC9、NCI-H1299、NCI-H1650细胞中CircRNA-CDR1as、POLE4表达水平较BEAS-2B细胞显著升高,miR-7-5p表达水平较BEAS-2B细胞显著降低,差异均有统计学意义(F=32.878、33.836、64.688,P均<0.05)。与对照组、sh-NC组比较,sh-CircRNA-CDR1as组细胞凋亡、BAX表达、miR-7-5p表达显著增加,细胞24和48 h OD450值、PCNA表达、侵袭、迁移及MMP-9、PD-L1表达、CircRNA-CDR1as、POLE4蛋白及mRNA表达显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);与sh-CircRNA-CDR1as+in-miR-NC组比较,sh-CircRNA-CDR1as+in-miR-7-5p组细胞凋亡、BAX表达、miR-7-5p表达显著降低,细胞24和48 h OD450值、PCNA表达、侵袭、迁移及MMP-9、PD-L1表达、POLE4蛋白及mRNA表达显著增加,差异均有统计学意义(P均<0.05);各组细胞凋亡、BAX、miR-7-5p表达、细胞24和48 h OD450值、PCNA表达、侵袭、迁移、MMP-9、PD-L1、CircRNA-CDR1as、POLE4蛋白及mRNA表达比较差异均有统计学意义(F=149.200、95.529、33.807、29.678、28.905、71.011、43.873、50.978、59.597、46.174、103.372、54.760、45.096,P均<0.05)。CircRNA-CDR1as-WT、POLE4-WT分别与miR-7-5p或miR-NC共转染,两组间荧光素酶活性差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论干扰CircRNA-CDR1as靶向miR-7-5p/POLE4可对NSCLC细胞恶性生物学行为发挥抑制作用。
